A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
نحن هنا وصف بروتوكول الأساسية لوصفها الفلورسنت من عناصر مختلفة من الأنابيب القلب من اليرقة وتعليم الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن. وهذه عينات مناسبة تماما للتصوير المجهري الفلورسنت أو عبر مبائر. هذا الأسلوب يسمح التحليل البنيوي مفصلا لملامح قلوب من كائن نموذج قوية.
و
قبل أن تبدأ
تلوين تألقي
تصاعد لهارتس الكبار
معشوقة = "jove_title"> تركيب لهارتس اليرقات
ممثل النتائج
عندما أعدم بشكل صحيح ، وينبغي لجميع مكونات والأنسجة المرتبطة السفينة الظهرية تبقى سليمة ويمكن تصور بسهولة. ينبغي أن يكون الحد الأدنى مضان الخلفية. بالنسبة للبالغين ، وطبقة العضلات البطنية الطولي البقع بشكل جيد للغاية ويعطي إشارة كبيرة (الشكل 1 والشكل 2). والعضلية الدائرية الأساسية ومع ذلك ، لا تميل الى انتاج ما يشير الى كثافة كما ان من الطبقة الفوقية البطني. وmyocytes من "غرفة المخروطية" الأمامي للقلب الكبار تحتوي على كمية كبيرة من المواد مقلص ، وبالتالي ، فإن هذه المنطقة كما يبدو النسبي الأكثر قوة في التعامل مع ما تبقى من أنبوب القلب. قلب اليرقات يبين ترتيب myofibrillar المتصاعد مماثلة لتلك الخلايا العضلية ومقلص الكبار (الشكل 3).
الشكل 1 : أعلى. وتظهر صورة مجهرية الفلورية أنبوب القلب بأكمله من melanogaster ذبابة الفاكهة التي تعبر عن البالغين ، الميوسين GFP. لقد التقطت الصورة مع مجهر زايس Z1 تصوير فلوري وحدة مجهزة Apotome الانزلاق. هو المسمى هو مبين في الميوسين ، GFP الخضراء ، ملطخة أكتين مع 594 AlexaFluor phalloidin ® (الحمراء) ، وα actinin - المضادة للα - actinin الأضداد (الأزرق). علما الإجراء التحضيرية تصاريح استخراج العينات القلب مع هياكل المحفوظة جيدا. CC = المخروطية الغرفة ؛ AM العضلات alary = ؛ V = الداخلية صمام ؛ VLL = طبقة العضلات البطنية الطولية. القاع. منطقة أنبوب القلب للبالغين من خلال الجزء CC البطن 3 من القلب فقط تحت طبقة الطولي بطني يبين ترتيب myofibril المتصاعد من العضلية مقلص. الرجاء النقر هنا لنسخة أكبر من الشكل 1A ، و هنا لنسخة أكبر من الرقم 1B
الشكل 2 : مداخن مبائر الممثل للجزء الأمامي من القلب للبالغين ملطخة 594 AlexaFluor phalloidin ® (الحمراء) ، ومضاد للPericardin (الكولاجين النوع الرابع) (الأخضر) الأجسام المضادة. ويرتبط Pericardin مع القلب على طول السطح البطني ، والتي تنشأ على الأرجح من اللييفات العضلية الموجهة طوليا من طبقة العضلات البطنية. الرجاء النقر هنا لنسخة أكبر من الشكل 2.
الرقم 3 : صورة مجهرية من الفلورسنت A7 قطعة من القلب السليم ليرقة ذبابة الفاكهة مرحلة الثلاث. لقد التقطت الصورة مع مجهر زايس Z1 تصوير فلوري وحدة مجهزة Apotome الانزلاق. اتسخت يسمى الأكتين مع 594 AlexaFluor phalloidin ® (الخضراء) وα actinin - المضادة للα - actinin الأضداد (الحمراء). الرجاء النقر هنا لنسخة أكبر من الرقم 3.
هنا نقدم بروتوكول مفيدة لإعداد وتلطيخ الظهرية melanogaster ذبابة الفاكهة السفن والأنسجة المرتبطة بها عن طريق التصوير المجهري أو مبائر الفلورسنت. ونحن نقدم سردا موجزا للخطوات التي المكرر واستخداما في مختبرنا للتلوين الفعالة التي تسمح جيدا حلها في الموقع من التص...
المؤلفان بالشكر SI برنشتاين (جامعة ولاية سان دييغو) لقراءة نقدية واقتراحات مفيدة بشأن إعداد هذه المخطوطة. وأيد هذا العمل عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة لبرنشتاين SI ، SDSU ، ور بودمر ، BIMR ؛ وزمالة في مرحلة ما بعد الدكتوراه من الدول الغربية التابعة لرابطة القلب الأميركية إلى Vogler زاي وألف Cammarato.
Name | Company | Catalog Number | Comments | |
Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich | E4378 | |
Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences, Inc. | 50-00-0 | |
Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12381 | |
Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1200 | |
Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved