A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
المشبك hyperinsulinemic سوي سكر الدم ، هي "المعيار الذهبي" لتقييم عمل الانسولين. هي التي غرست الأنسولين بمعدل ثابت تحفيز امتصاص الجلوكوز. كمية الجلوكوز الخارجية التي غرست لمواجهة هذا الانخفاض هو دليل على حساسية الانسولين. هنا يتم تنفيذ الإجراء على الفئران ، واعية غير المقيد.
السكري من النوع 2 (T2D) يتزايد تزايدا سريعا في الانتشار. تميزت إما عدم كفاية إنتاج الأنسولين أو عدم القدرة على الاستفادة من الأنسولين المنتج ، والنتائج T2D في ارتفاع مستويات السكر في الدم. "الذهب القياسية" في تقييم الحساسية للانسولين هو المشبك سوي سكر الدم ، أو hyperinsulinemic المشبك الانسولين. في هذا الإجراء ، هي التي غرست الأنسولين بمعدل ثابت أدى إلى انخفاض في مستوى السكر في الدم. للحفاظ على مستوى السكر في الدم عند مستوى ثابت ، هي التي غرست الجلوكوز الخارجية (D50) إلى الدورة الدموية الوريدية. كمية الجلوكوز التي غرست في الحفاظ على التوازن يدل على حساسية الانسولين. هنا ، نظهر الإجراء المشبك الأساسية في مقسطر مزمنة ، الفئران ، غير المقيد واعية. هذا النموذج يسمح جمع الدم مع التشديد على الحد الأدنى من الحيوان. بعد التخدير ، يتم إجراء شق خط الوسط واليسار مقسطر الشريان السباتي المشترك وحبل الوريد الصحيح. يتم مسح إدخال القسطرة مع heparinized المالحة ، ثم exteriorized والمضمون. مسموح للحيوانات لاسترداد 4-5 أيام قبل التجارب ، مع زيادة الوزن مراقبتها يوميا. تستخدم فقط تلك الحيوانات تستعيد الوزن الذي لمستويات ما قبل الجراحة لإجراء التجارب. في يوم من التجربة ، وصام الفئران وتوصيلها الى المضخات التي تحتوي على الانسولين وD50. ويتم تقييم الجلوكوز من خط الأساس الشرايين ويستخدم معيارا في كافة مراحل التجربة (سوائية سكر الدم). بعد هذا ، هي التي غرست الأنسولين بمعدل ثابت إلى الدورة الدموية الوريدية. لتتناسب مع انخفاض في نسبة السكر في الدم ، هي التي غرست D50. إذا كان معدل ضخ D50 أكبر من معدل امتصاص ، وارتفاع في نسبة الجلوكوز تحدث. وبالمثل ، إذا كان معدل غير كافية لامتصاص الغلوكوز تطابق كامل الجسم ، وسوف يحدث انخفاض. المعايرة من الجلوكوز تستمر حتى يتم تحقيق قراءات الجلوكوز مستقرة. وتسجل مستويات الغلوكوز ومعدلات ضخ الجلوكوز خلال هذه الفترة استقرارا والإبلاغ عنها. النتائج توفر فهرس كامل الجسم حساسية الانسولين. ويمكن صقل هذه التقنية لتلبية متطلبات محددة التجريبية. وتعزز ذلك عن طريق استخدام استشفاف المشعة التي يمكن تحديد الأنسجة للأنسولين محددة حفزت امتصاص الغلوكوز وكذلك دوران كامل الجسم الجلوكوز.
ج : القسطرة الجراحية للتداول الشرياني والوريدي
الجزء 1 : الشرياني والوريدي إعداد قسطرة
الجزء 2 : إعداد الجراحية
الجزء 3 : جراحة
باء : رعاية ما بعد الجراحة
الجزء 1 : رعاية ما بعد الجراحة العاجلة والرصد
الجزء 2 : الحفاظ على الإنفتاح قسطرة
C : Hyperinsulinemic - المشبك سوي سكر الدم
الجزء 1 : تعيين المشبك المتابعة والتحضير
الجزء 2 : البروتوكول التجريبي
D : Hyperinsulinemic سوي سكر الدم ، نتائج المشبك (الأنسولين)
عندما يقوم بشكل صحيح ، فإن الإجراء المشبك يقيم الانسولين حالة مستقرة حساسية الفئران. في تقديم البيانات التي تم الحصول عليها من المشبك ، فمن الضروري لتوثيق مستويات الغلوكوز ومعدلات ضخ الجلوكوز. مستويات السكر مستقرة أكثر من دوام وجود الحد الأدنى من 30min (الشكل 3) تدل على حالة مستقرة. يعتبر الجلوكوز مستقرة إلا إذا حافظت كلها السكر في الدم ضمن 1MM ~. معدلات ضخ الجلوكوز تظهر مستويات الجلوكوز الخارجية اللازمة للحفاظ على سكر الدم. حيثما كان ذلك ممكنا ، ينبغي أن تظهر هذه الأرقام بمثابة دوام بدلا من قيمة واحدة في المتوسط (الشكل 4).
غيرها من التدابير الموصى بها ليكون المبلغ عنها الانسولين البلازما والهيماتوكريت. وقد تم تصميم كل من الصيام وفرضت مستويات الانسولين الانسولين تأكيد أن تدار بنجاح ، وسيتم الكشف عن أي اختلافات في مستويات بين مجموعات العلاج (الشكل 5). واقترح اجراءات الحصول على الهيماتوكريت في الأساس وعند الانتهاء من الانسولين المشبك (الشكل 6). هذا هو لضمان مستويات الهيماتوكريت لا تقع أكثر من 5 ٪ خلال التجربة والتغيرات المصاحبة في حجم تدفق الدم والتخلص من النفوذ لا الجلوكوز.
الشكل 1. انشاء التجريبية. الشكل 1 يبين المنفلتة ، الجرذان واعية أثناء إجراء المشبك. القسطرة تسمح اخذ عينات من الدم والحقن الوريدية دون التعامل مع الحيوان. مضخات إلى اليسار تحتوي على الانسولين والجلوكوز.
الشكل 3. غلوكوز البلازما النتائج المتوقعة من هذا الإجراء المشبك. عندما يتم "فرضت" الحيوان ، والسكر في الدم مستقرة نسبيا عبر الزمن والمجموعات التجريبية.
الشكل 4. الممثل معدلات ضخ الجلوكوز الإجراء المشبك. كمية الجلوكوز الخارجية اللازمة للحفاظ على سوائية سكر الدم يختلف. ويتضح هذا مع التحكم (تشاو فدان) وارتفاع الدهون تغذية (مقاومة الإنسولين) الحيوانات. ارتفاع الدهون الحيوانية يتغذى يتطلب قدرا أقل من السكر للحفاظ على سكر الدم غرست ، في المقام الأول لأنه غير حساس لغرست الانسولين.
الشكل 5. الممثل الانسولين البلازما في الفئران. ينبغي للأنسولين البلازما خلال المشبك الأنسولين تكون أعلى من صام ، والانسولين البلازما خط الأساس. هذا يضمن كانت تدار بشكل صحيح الانسولين للحيوان خلال المشبك الانسولين.
الشكل 6. الإبلاغ الهيماتوكريت. ويجب الحصول على الهيماتوكريت خط الأساس والهيماتوكريت بعد التجربة والإبلاغ عنها. هذا يضمن مستويات الهيماتوكريت لا تقع أكثر من 5 ٪ من مستويات خط الأساس الناتجة عن الإفراط في أخذ عينات من الدم الشرياني.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
وضعت في البداية للتحقيق في حساسية الانسولين في البشر ، وقد تم الآن إجراء المشبك تتكيف مع الأنواع الأخرى بما فيها الجرذان والفئران المختبرية. النماذج الحيوانية التحقيق في مقاومة الانسولين يقدم مساعدات كبيرة في فهم الفيزيولوجيا المرضية للحساسية والأمراض المرتبطة ال...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
وأيد هذه الدراسة من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة وCanada.JS الجينوم يحمل جوائز الدعم من الراتب للأبحاث الطبية Foundationfor التراث ألبرتا ، والقلب والسكتة الدماغية من مؤسسة Canadaand جمعية السكري الكندية. شكر خاص للدكتور ديفيد واسرمان Bracy ضربة موفقة لتدريس هذا الإجراء إلى المختبر شيرر.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات (اختياري) |
أنابيب البولي ايثيلين Intramedic (PE - 50) | فيشر العلمية | 14-170 - 12B | الداخلية قطرها 0،58 ملم (0.023 ") × القطر الخارجي من 0.965 ملم (0.038") |
داو كورننغ أنابيب المختبر Silastic | فيشر العلمية | 11-189 - 15C | الداخلية قطرها 0،76 ملم (0.030 ") × القطر الخارجي لل1.65mm (0.065") |
Tygon الأنابيب الطبية S - 50 - HL | جهاز هارفارد | PY2 72-1251 | الداخلية قطرها 3.2mm (0.125 ") × القطر الخارجي لل4.7mm (0.1875") |
وكتايت سوبر الغراء | ولعب الكبرى | 32237 | هلام التحكم |
بليد الجراحية المعقمة | VWR | BD371610 | |
منحني مايكرو الملقط تشريح | جورج تيمان وشركاه | 160-20 | × 2 |
مايكرو مستقيم الملقط تشريح | جورج تيمان وشركاه | 160-15 | × 2 |
منحني المرقأة | جورج تيمان وشركاه | 105-1135 | × 2 |
مستقيم المرقأة | جورج تيمان وشركاه | 105-1130 | × 2 |
تلميح الحرس مرقئ | روبنز الآلات ، وشركة | 15.09-2-004 | |
مقص جراحة المستقيم | جورج تيمان وشركاه | 105-402 | |
VENOJECT نموذج متعدد Luer محول | Terumo المنتجات الطبية | 810127A | قياس 21 ، 1 بوصة |
قسطرة العقيمة Introducer | بيكتون ديكنسون | 406999 | |
14 عيار الإبرة بلانت | بيكتون ديكنسون | 511310 | قياس 14 ، 2 بوصة |
خياطة جراحية معقمة | جونسون آند جونسون المنتجات الطبية | 1679H | الحرير ، وحجم 3-0 |
غير المعقمة الخياطة الجراحية | Angiotech صيدلة ، وشركة | SP116 | الحرير ، وحجم 4-0 |
القطن مسحات | VWR | 10806-005 | |
الوسادات شاش 4ply | VWR | CA43845 - 062 | |
كليبرز الحيوانية الصغيرة لاسلكي | جهاز هارفارد | 729063 | |
Isoflurane | منتجات شركة الهالوكربون | IPN - 45 | |
مخدر السلة | بنسون للصناعات الطبية ، وشركة | ||
70 ٪ إيثانول | فيشر العلمية | HC - 1000 | |
Betadine محلول مطهر | غرب مركز توزيع المخدرات المحدودة. | 105267 | |
نموذج 11 زائد مضخة الحقنة | جهاز هارفارد | 702208 | |
المقرنات أنابيب الفولاذ المقاوم للصدأ | جهاز هارفارد | 72-4434 | قياس 23 ، 0.3 بوصة |
غير القابل للصدأ الأنابيب الفولاذية المقابس | جهاز هارفارد | 72-4436 | قياس 23 ، و 0.5 بوصة |
الفولاذ المقاوم للصدأ إبر بلانت | Instech المختبرات ، وشركة | LS22 | قياس 22 |
60 درجة Y - موصلات | قطع صغيرة | STCY - 22-05 | قياس 22 |
CritSpin الصغرى ، الهيماتوكريت جهاز طرد مركزي | قزحية تصنيع نموذج | CS12 | |
مصغرة الطرد المركزي | فيشر العلمية | 05-090-100 | |
أنابيب الطرد المركزي الصغرى | VWR | 53550-778 | |
50ml أنابيب البولي بروبلين الطرد المركزي | VWR | 89004-364 | |
1ml تلميح زلة الحقن البلاستيكية | بيكتون ديكنسون | 309602 | |
3ml تلميح Luerlok الحقن البلاستيكية | بيكتون ديكنسون | 309585 | |
حقن الهيبارين مضاد التخثر | غرب مركز توزيع المخدرات المحدودة. | 102824 | الصانع : شركة فارما LEO اضرب. 1000 وحدة دولية |
EDTA الحل | Promega كورب | V4231 | 0.5 متر ، ودرجة الحموضة 8.0 |
ملحي | غرب مركز توزيع المخدرات المحدودة. | ABB7983154 | الصانع : هوسبيرا كلوريد الصوديوم 0.9 ٪ |
50 ٪ سكر العنب | Vetoquinol | 8DEX012D | |
Humulin - R | ايلي ليللي | مرحبا - 210 | 100U/ml |
حقن الانسولين 1ml | بيكتون ديكنسون | 309311 | |
* أمراض الدم Fisherbrand ختم مانع التسرب | فيشر العلمية | 02-678 | |
* Fisherbrand Microhematocrit أنابيب شعرية | فيشر العلمية | 22-362-574 | |
لمسة واحدة شرائط اختبار الترا | ايفسكان ، وشركة | AW - 085 314H | |
لمسة واحدة الجلوكوز في الدم متر الترا | ايفسكان ، وشركة | AW - 085 314B | |
Pentobarbitol الصوديوم | Ceva سانتي Animale | 1715 138 | اضرب. 54.7mg/ml |
الروتين مختبر وصفها | VWR | 89097-932 | |
الشريط الأزرق مختبر الوسم | VWR | 89097-936 | |
ميزان | فيشر العلمية | 01-913-88 | |
دوامة | VWR | 58815-234 | |
مؤقت | VWR | 62344-641 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved