تقنية لربط تعديل الشريان التاجي في الفئران

Summary

العملية الجراحية المستخدمة للحث على احتشاء عضلة القلب التجريبية في الفئران يبدأ بضع الصدر الأيسر بين الثالث والرابع في الأضلاع أجل رؤية سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى. وligated التاجي الأيسر الشريان، يتم إغلاق الصدر ويسمح الماوس لاسترداد تلقائيا.

Abstract

احتشاء عضلة القلب (MI) هو واحد من أهم أسباب الوفيات في البشر ^1-3. من أجل تحسين معدلات الاعتلال والوفيات في المرضى الذين يعانون من MI نحتاج معرفة أفضل حول الفيزيولوجيا المرضية لنقص تروية عضلة القلب. قد تكون هذه المعرفة قيمة لتحديد أهداف علاجية جديدة لعلاج القلب والأوعية الدموية مبتكرة ^4. نموذج تجريبي MI في الفئران هو شعبية متزايدة الحيوانات الصغيرة في مجال البحوث قبل السريرية نموذج التي يسببها MI عن طريق ربط دائمة أو مؤقتة من الشريان التاجي الأيسر (LCA) ^5. في هذا الفيديو، ونحن تصف طريقة خطوة بخطوة لكيفية حمل MI التجريبية في الفئران.

الحيوان للتخدير الأولى مع 2٪ isoflurane. ومدخل أنبوب الماوس ثم فاقدا للوعي وصله بجهاز التنفس الصناعي للتهوية اصطناعية. وحلق الصدر الأيسر ويتم شق 1،5 سم على طول خط منتصف الإبط في الجلد. العضلة الصدرية الكبرى اليسار هو بصراحة dissociated حتى تتعرض الأضلاع. يتم سحبها طبقات العضلات جانبا وثابتة مع مبعاد-جفن. بعد هذه الاستعدادات، يتم تنفيذ بضع الصدر بين الأضلاع اليسرى الثالث والرابع من أجل رؤية سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى. وligated ثم الجزء القريب من الشريان LCA مع خياطة ethilon 7-0 الذي يدفع عادة حجم احتشاء ~ 40٪ من البطين الأيسر. في النهاية، يتم إغلاق الصدر والحيوانات تسكين بعد العملية الجراحية تلقي (Temgesic، 0.3 مل mg/50، والملكية الفكرية). يتم الاحتفاظ الحيوانات في قفص دافئ حتى الشفاء التلقائي.

Protocol

1. بروتوكول النص

1. قبل الشروع في عملية جراحية، تخدير ماوس الذكور (C57BL / 6) وهذا هو 6 أسابيع من العمر أو أكثر عن طريق الاستنشاق من 2-5٪ isoflurane. أداء قليل أخمص القدمين للتأكد من أن الحيوان هو تخدير بما فيه الكفاية.
2. يتم وضع الماوس على ظهرها وعيه على وسادة دافئة للحفاظ على درجة حرارة ثابتة للC. ° 37 وحلق الصدر بركي على الجانب الأيسر.
3. تأمين الماوس لجهاز التنبيب مع دائرة isoflurane شغلها. إدخال أنبوب من 0.2 القطر الداخلي في القصبة الهوائية الماوس من خلال الفم، ثم ضع الماوس المنببين على مساحة جراحي العقيم (37 ° C بواسطة وحدة تحكم بدرجة الحرارة) وتوصيل أنبوب القصبة الهوائية لجهاز التنفس الصناعي (معدل 120 في دقيقة، ضغط من 4-6 MMH ₂ O)؛ تطهير المنطقة مع betadine والايثانول 75٪.
4. تطبيق مرهم للعين للعيون الفأر. وضع معيار أقطاب ECG على الكفوف وتوصيل الماوس إلى مسجل ECG.
5. استخدام مقص العقيمة لجعل شق الطول 1،5 على طول خط منتصف الإبط. وتستخدم بدلا من المقص مشرط لتجنب إصابة الأنسجة الكامنة في الفئران. ثم، استخدم مقص سفينة حادة معلومات سرية لتشريح العضلات وسحب بركي من جدار الصدر.
6. إجراء بضع الصدر بين الأضلاع اليسرى الثالث والرابع لتصور سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى
7. سحب المزيد من الجدار الصدري باستخدام مبعاد مناسبة من أجل تحسين التصور وسهولة الوصول إليها. إزالة التأمور ملقط مسنن باستخدام مقص حادة وذات الرؤوس.
8. Ligate التاجي الأيسر الشريان عن طريق وضع إبرة (المرفقة مع خياطة ethilon 7-0) تحت الشريان مع عصابة من عضلة القلب بين ضمد والشريان. يتم التحقق من وانسداد الشريان التاجي ناجحة من نقص الحراك / تعذر الحركة للجدار البطين الأيسر الأمامي والتعديلات على تسجيل ECG (مثل ارتفاع الجزء ST، QRS broadeniنانوغرام)
9. إغلاق الصدر بوضع اثنين غرز (6-0 ethilon خياطة) على الأضلاع الثالث والرابع.
10. استخدام 5-0 خياطة ethilon لإغلاق الجلد.
11. لتسكين بعد العملية، إدارة حقنة واحدة داخل الصفاق من البوبرينورفين (0.05 مغ / كغ). فإن الحيوانات استرداد تلقائيا خلال 2-5 دقيقة بعد وقف التخدير isoflurane. وأخيرا، ضع الماوس في قفص دافئة وتوفير 0.6 ملغ / مل من البوبرينورفين في مياه الشرب (تراكب النص: 0.6 ملغ / مل في مياه الشرب) لمنع استغاثة بعد الجراحة. يرصد عن كثب الماوس لال 24 ساعة الأولى بعد الجراحة.
12. يتم تنفيذ تخطيط صدى القلب لتقييم وظائف القلب بعد 3 أيام احتشاء عضلة القلب. يتم التحقق الداخلي الناجحة التي قام بها تعذر الحركة في جدار البطين الأيسر الأمامي (انظر الفيديو المرفق في النتائج). في نهاية التجربة، سيتم جمعها وتخزينها قلب في 80oC لاستكمال التحقيقات. أي التعبير الجيني.

النتائج

صك	وصف وظيفة
معلومات سرية حادة مقص	تستخدم لقطع الجلد، وعضلات الصدر وربي، وخياطة الجروح
العين مبعاد	تستخدم للكشف عن رأي الجراحية
كليلة معلومات سرية ملقط	تستخدم لفهم الجلد والعضلات

...

Discussion

العملية الجراحية لربط المخصص كما هو موضح في هذا التقرير هو وسيلة يمكن الاعتماد عليها وقابلة للتكرار لتحريض MI التجريبية في الفئران ^{3 و 6.} وربط المخصص للوفقا لهذا البروتوكول يدفع نقص تروية عضلة القلب عادة الانخراط ~ 40٪ من البطين الأيسر ^3. هذا يدفع تغييرات مهم?...