عنوان تغليف الخلية عن طريق الرذاذ

Summary

Abstract

Protocol

NIH3T3 الخلايا التحضير :

ألف لخلايا الطرد

1. يعرض للتريبسين الخلايا ، ثم تمييع 01:01 الخلية مع وسائل الاعلام ، ونقل من القارورة إلى T75 أنبوب 15 مل فالكون
2. تدور باستمرار إلى الخلايا بواسطة الطرد المركزي بيليه ، نضح طاف وغسل الخلايا مع DPBS
3. تدور أسفل الخلايا في بيليه مرة أخرى ، ونضح طاف
4. Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام
5. تحديد كثافة الخلية مع عدادة الكريات (~ 200 X 10 ⁴ خلايا / مل في القارورة T75)
6. الطرد المركزي حل الخلية ، نضح طاف ، وresuspend في كمية مناسبة من وسائل الإعلام لتركيزات مختلفة الخلية

باء طرد الخليوي

1. قبل استخدام الخلايا دوامة لطرد
2. نقل 200 ميكرولتر من محلول الخلية إلى حقنة
3. تعيين وضع المناسبة على مولد النبض
   1. لإخراج واحدة قطرات قطرات متعددة (رشقات نارية) ، تعيين مولد النبض إلى "هاء BUR" واسطة
   2. لطرد قطرات متواصلة ، مجموعة المولدات النبض إلى وضع "القاعدة"
4. تغيير إعدادات إشارة
   1. تعيين مستوى ارتفاع وانخفاض مستوى الناتج الجهد : HIL إلى 5 والخامس LOL إلى 0 الخامس وتأكد من أن "LIM" على الصمام
   2. تعيين إشارة إلى نبضة مربعة
   3. تغيير مقدار الوقت اللولبي صمام مفتوح لطرد قطرات عن طريق تغيير قيمة عن "دور المرأة في التنمية" أو تغيير دورة العمل ("واجب")
   4. تغير وتيرة طرد عن طريق تغيير قيمة "لكل"
   5. تغيير عدد من قطرات في انفجار طرد عن طريق تغيير قيمة "بور"
5. إخراج حل الخلية على الركيزة التي أعدت للتصوير مع المجهر

جيم يلطخ

1. تشكل محلول الصبغة مع 0.5 ميكرولتر calcein - AM و 2 لكل ميكرولتر homodimer إيثيديوم مل من DPBS
2. تزج الركيزة أعد في محلول الصبغة
3. السماح لاحتضان عينة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية قبل التصوير

التجربة التحقق من صحة

1. على مجهر الكسوف نيكون U TE - 2000 نيون
   1. بقعة البرامج المتقدمة (التشخيص ، المؤتمر الوطني العراقي)
   2. أعيش / الفحص الميت

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture