توليف لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; دقق في موت الخلايا المبرمج التصوير بالرنين المغناطيسي للكشف

Summary

قد كشف في وقت مبكر من موت الخلايا المبرمج الخلية تحديد السكان المعرضين للخطر في مجموعة متنوعة من الأمراض. هنا نحن يبرهن على وجود طريقة لربط موت الخلايا المبرمج في وقت مبكر للكشف عن البروتين (Annexin V) على جزيئات النانو أكسيد الحديد المغناطيسي للكشف (SPIO). ويجوز تمديد هذه الطريقة إلى البروتينات الأخرى ذات الاهتمام لتوليد التصوير بالرنين المغناطيسي للكشف تحقيقات التصوير الجزيئي.

Abstract

موت الخلايا المبرمج الخليوي هي سمة بارزة من كثير من الأمراض، وهذا موت الخلايا المبرمج يحدث عادة قبل المظاهر السريرية للمرض واضحة للعيان. وثمة وسيلة للكشف عن موت الخلايا المبرمج في مراحله المبكرة، عكسها تحمل ما قبل السريرية 'نافذة' خلالها يمكن اتخاذ تدابير وقائية أو علاجية لحماية القلب من ضرر دائم. نقدم هنا طريقة بسيطة وقوية لتصريف الإنسان Annexin الخامس (ANX)، الذي يربط بشوق إلى الخلايا في المراحل المبكرة، عكسها من موت الخلايا المبرمج، على جزيئات حديد superparamagnetic (SPIO) أكسيد، والتي تكون بمثابة وكيل النقيض من التصوير بالرنين المغناطيسي للكشف. طريقة اقتران يبدأ أكسدة النانوية SPIO، التي يكسد مجموعات الكربوكسيل على قذيفة السكاريد من SPIO. تنقية ANX البروتين ثم يضاف في الإعداد للصوديوم بورات حل لتسهيل التفاعل التساهمية من ANX مع SPIO في منطقة عازلة الحد. خطوة تخفيض نهائي مع borohydrid الصوديوميتم تنفيذ ه لاستكمال الحد من الفقر، ومن ثم تطفئ رد الفعل. تتم إزالة ANX Unconjugated من المزيج عن طريق الترشيح microcentrifuge. يتم التحقق من حجم ونقاء المنتج ANX-SPIO التي تشتت الضوء الحيوي (DLS). هذا الأسلوب لا يتطلب بالإضافة إلى، أو تعديل، والسكاريد SPIO قذيفة، في مقابل عبر ربط طرق الحديد أكسيد اقتران الجسيمات النانوية أو البيوتين المسمى. ونتيجة لذلك، وهذه الطريقة يمثل بسيطة، ونهج القوية التي يمكن تمديدها إلى اقتران من البروتينات الأخرى ذات الاهتمام.

Protocol

مقتبس من الدراسة قبل ^1.

1. اقتران الخامس Annexin إلى SPIO

1. أكسدة جزيئات SPIO (المحيط تكنولوجيا النانو وشركة، 5 ملغ / مل) لمدة 1 ساعة على 20 درجة مئوية في الظلام في حل مع 0.15 بريودات الصوديوم M (NaIO ₄₎ (4:01 الوزن: نسبة الوزن) ^2.
2. احتضان SPIO أكسدة لمدة 12 ساعة مع تنقيته ANX البروتين (نسبة 1:1، الوزن: الوزن) في 0.15 متر بورات الصوديوم (نا ₂ B ₄ O ₇ 10H _....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

طريقة تصريف الافعال المذكورة لربط SPIO إلى الخامس Annexin تستغل جماعات أمين جانب سلسلة من Annexin والأنصاف الكربوكسيل من nanoparticle SPIO. من خلال خطوات محددة للحد من أكسدة، لا يمكن تحقيق الربط التساهمية من هذه المركبات، ويمكن أن تكون معزولة عن جسيمات متناهية الصغر الناتجة functionalized........

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم الكاشف	شركة	كتالوج #
Superparamagnetic أكسيد الحديد	المحيط تكنولوجيا النانو، وشركة	إك، 40-005
دوكسوروبيسين	سيغما	D1515-10MG
SuperMag فاصل	المحيط تكنولوجيا النانو، وشركة	N / A
Zetasizer آلة نانو DLS	مالفيرن، وشركة	N / A