غير الغازية التصوير من المبيضات المنتشر في يرقات اسماك الزرد

Summary

والتطوير السريع، وصغر حجمها والشفافية من الزرد هي مزايا هائلة لدراسة سيطرة المناعة الفطرية للعدوى ^1-4. هنا علينا أن نبرهن تقنيات لاصابة يرقات اسماك الزرد باستخدام العوامل المسببة للأمراض الفطرية المبيضات البيض من جانب microinjection، المنهجية المتبعة في الآونة الأخيرة لتوريط بلعمية النشاط أوكسيديز NADPH في السيطرة على إزدواج الشكل الفطرية ⁵.

Abstract

المبيضات نشر الناجمة عن المبيضات البيض الممرض هي مشكلة هامة سريريا في المستشفى الأفراد ويترافق مع معدل وفيات 1 تعزى 30 إلى 40٪ ^6. ويتم التحكم عادة المبيضات الأجهزة عن طريق المناعة الفطرية، والأفراد ذوي العيوب الوراثية في الخلايا المناعية الفطرية مكونات مثل NADPH أوكسيديز بلعمية هم اكثر عرضة لالمبيضات ^7-9. ولا يعرف سوى القليل جدا عن القوى المحركة للC. وقد أنشأت المبيضة البيضاء التفاعل مع الخلايا المناعية الفطرية في الجسم الحي. واسعة في الدراسات المختبرية التي من خارج جيم المضيفة المبيضة البيضاء تنبت داخل الضامة، ويتم تدمير بسرعة من قبل العدلات ^10-14. الدراسات في المختبر، على الرغم من المفيد، لا يمكن أن ألخص المجمع في بيئة الجسم الحي، والذي يتضمن الساعة التي تعتمد على ديناميات مستويات خلوى، التجهيزات المصفوفة خارج الخلية، والاتصالات بين الخلايا ^{10، 15-18} اليرقة الزرد توفر مجموعة الفقاريات وتنوعا فريدا لدراسة العدوى. عن ال 30 يوما الأولى من يرقات اسماك الزرد تنمية لديها دفاعات المناعة الفطرية فقط ^{2، 19-21،} وتبسيط دراسة الأمراض مثل داء المبيضات نشر التي تعتمد اعتمادا كبيرا على الحصانة الفطرية. حجم صغير والشفافية من يرقات اسماك الزرد تمكين التصوير ديناميات العدوى على المستوى الخلوي لكل من المضيف والممرض. ويمكن استخدام اليرقات المعدلة وراثيا مع الاستشعاع خلايا المناعة الفطرية للتعرف على أنواع معينة الخلايا المشاركة في عدوى ^22-24. ويمكن استخدام تعديل المضادة للإحساس [أليغنوكليوتيد] (Morpholinos) لاسقاط المكونات المناعية المختلفة مثل NADPH أوكسيديز بلعمية ودراسة التغيرات في الاستجابة لfungaل إصابة ^5. بالإضافة إلى المزايا الأخلاقية والعملية لاستخدام أقل الفقاريات الصغيرة، ويرقات اسماك الزرد توفر إمكانية فريدة من نوعها لصورة معركة ضارية بين الممرض والمضيف على حد سواء وintravitally في اللون.

وقد استخدم الزرد إلى عدوى نموذج لعدد من البكتيريا المسببة للأمراض البشرية، وقامت بدور فعال في تقدم كبير في فهمنا للعدوى المتفطرات ^{3 و 25.} ومع ذلك، إلا في الآونة الأخيرة أن العوامل الممرضة أكبر من ذلك بكثير مثل الفطريات قد استخدمت لنقل العدوى يرقة ^{5، 23، 26،} وحتى الآن لم يكن هناك وصفا تفصيليا للمنهجية البصرية عدوى. هنا نقدم تقنيات لدينا microinjection بطين الدماغ المؤخر من الزرد ²⁵ متزمت، بما في ذلك التعديلات التي نبذلها لالبروتوكولات السابقة. النتائج التي توصلنا إليها باستخدام نموذج الزرد اليرقات للعدوى فطرية تختلف من الدراسات في المختبر، وتعزيز الحاجة لدراسة intera المضيف الممرضction في البيئة المعقدة للمضيف بدلا من نظام مبسط للطبق بيتري ^5.

Protocol

تم تنفيذ جميع البروتوكولات رعاية الزرد والتجارب تحت رعاية الحيوان المؤسسية واللجنة الاستخدام (IACUC) بروتوكول A2009-11-01.

1. Morpholino وصحون حقن اليرقات

تجريبية مدتها: * (10-15 دقيقة)

درجة الصعوبة: *

1. لحقن البيض، ويعد حل الاغاروز 2٪ في ماء معقم والميكروويف. عندما يبرد المحلول صب بعض من ذلك في طبق بيتري عميق إضافية (فيشر العلمية) حتى يصبح كامل ونصف. بارد على الجليد، وتأكد من لوحة غير مستوى.
2. مرة واحدة في صحن قد بردت، صب طبقة 15 مليلتر أعلى الاغاروز 2٪. رش حقنة بيضة مخدد قالب من البلاستيك (التكيفية أدوات العلوم) مع الماء المعقم من زجاجة رذاذ. بعناية وضع الجانب الأخدود العفن الى اسفل الاغاروز الساخنة. عندما الاغاروز قد بردت، واستخدام ملعقة معدنية مسطحة (VWR العلمية) لفصل القالب من الآغاوارتفع. إزالة ببطء الشبكة من الاغاروز. أطباق التفاف حقن الجنين في Parafilm (VWR العلمية)، ومخزن مقلوب في 4 درجة مئوية.
3. لحقن يرقات الأسماك، ويعد حل الاغاروز 2٪ كما هو موضح. صب الحل في طبق بيتري حجم قياسي (VWR العلمية) وتوضع جانبا حتى يتصلب. أطباق التفاف حقن اليرقات في Parafilm وتخزين معكوسة في 4 درجة مئوية.

2. الفطرية الثقافة التحضير

تجريبية المدة: ** (30 دقيقة)

درجة الصعوبة: **

1. إعداد خلاصة الخميرة، ببتون، سكر العنب (YPD) لوحات أجار: 10 جم / لتر خلاصة الخميرة، و 20 غرام / لتر ببتون، 20 الدكستروز جم / لتر، و 20 غرام / لتر في أجار والتعقيم. لتحضير السائل YPD 10 جم / لتر خلاصة الخميرة، و 20 البيبتون غ / ليتر، 20 الدكستروز جم / لتر ودقيقة الأوتوكلاف 20-30 في 121 درجة مئوية.
2. قبل يومين من التهابات الأسماك إعداد لوحة من خط المجمدةأسهم الثقافات المبيضات البيض على أجار YPD للحصول على المستعمرات واحد.
3. احتضان عند 37 درجة مئوية خلال الليل.
4. وضع 5 مل مرق YPD إلى 16 × 150 ملم أنابيب ثقافة (VWR العلمي).
5. قبل يوم من العدوى الأسماك اختيار 1 مستعمرة صغيرة على أجار YPD مع وتد خشبي (VWR العلمي). وضع العصا في أنبوب ثقافة وعباب في جميع أنحاء لاعادة تعليق مستعمرة في السائل YPD.
6. تنمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية على طبل الثقافة أسطوانة TC-7 النسيج مجهز عجلة أنبوب اختبار قياس 14 بوصة (نيو برونزويك العلمي).
7. في اليوم التالي، وتدور باستمرار 1 مل من ثقافة في ز 14000x لمدة 1 دقيقة في أنبوب مل 1.7 (Axygen). إزالة طاف وresuspend لبيليه في السائل المتبقي من vortexing (VWR العلمي).
8. إضافة 1 مل 1X الفوسفات مخزنة المالحة (VWR العلمية) والدوران كما هو موضح سابقا.
9. تكرار غسل PBS 3 مرات.
10. تمييع 1:100 التخفيف في برنامج تلفزيوني 1X (10 ميكرولتر من المبيضة البيضاء جيم المغسول إلى 990 ف 1X ميكرولترBS).
11. الاعتماد على عدادة الكريات (VWR العلمي).
12. تمييع إلى 10 ⁷ خلية / مل.

3. الزرد العدوى

تجريبية المدة: **** (1-3 ساعات)

درجة الصعوبة: ****

1. جمع الأجنة وفقا للمادة (5) ومخزن في الماء البيض، و 60 ملغم / لتر أملاح المحيط الفورية (فيشر العلمية) في ماء منزوع الأيونات العقيمة.
2. باستخدام مجهر تشريح مثل SZ61 أوليمبوس (أوليمبوس)، الأجنة dechorionate يوم عدوى. استخدم دومون Dumoxel ملاقط (VWR العلمي) لسحب المشيماء ²⁷ بصرف النظر مثل فتح كيس من رقائق، أو كزة برفق ملاقط مغلقة في الموقف في المشيماء ثم فتح ببطء لهم. وينبغي للأسماك البوب ​​الحق في الخروج من المشيماء.
3. دوامة اضافية طبق بيتري عميق مع غطاء للتحرك على السمك في وسط الطبق. نقل الأسماك إلى غطاء الطبق. إزالة البيض والمياهاستبدال مع وسائل الاعلام الجديدة. إضافة إلى الأسماك وسائل الاعلام.
4. دافئ أطباق حقن اليرقات في حاضنة عند 28 درجة مئوية. إعداد tricaine سلفونات الميثان (غرب الكيميائية شركة) في التخفيف 200 ميكروغرام / مل لالتخدير الأسماك.
5. عد الى العدد المرغوب فيه من اليرقات للعدوى (20-50 الأسماك). وضع الأسماك في الميثان tricaine حل سلفونات وانتظر دقيقة 1-2 حتى يتوقف عن الحركة.
6. تشغيل وحدة MPPI-3 حقن (الآلات العلمية التطبيقية). تأكد من أن مفتاح ضغط على "نبض" و "مدة النبضة" تم تعيين إلى 9 مع 3 PSI لوحدة احداهما. فتح صمام في خزان النتروجين حتى الضغط على وحدة حقن يقرأ 30 PSI.
7. تحميل micropipette سحبت ²⁸ مع 5 ميكرولتر من المبيضات البيض vortexed بتركيز 1x10 ⁷ خلية / مل. وضع micropipette في حامل micropipette (الآلات العلمية التطبيقية). ملء فارغة إضافية طبق بيتري العميق مع المياه. نقل micropipette حتى غيض أناق في الرأي مجرد لمس سطح المياه عبر مجهر تشريح واستخدام دومون Dumoxel ملاقط (VWR العلمية) على قصاصة الإبرة نحو 3mm من غيض من ماصة وانسحبت.
8. اضغط على مفتاح القدم (الآلات العلمية التطبيقية) للتحقق من تم قص إبرة. يجب أن تشاهد سائل تفريق إذا كانت ناجحة. وينبغي أن القطر من بلعة السائل يكون هناك اكبر من القطر من تلميذ من يرقة متزمت الزرد ²⁵ (0.21 ملم، مما أسفر عن نطاق 4.9 NL في الحجم). ضبط الضغط وفقا لذلك إذا وبلعة السائل كبيرة جدا أو صغيرة جدا.
9. تخدير السمك في سلفونات الميثان tricaine (200 ميكروغرام / مل). مرة واحدة قد توقفت السمكة تتحرك، ودوامة الطبق مع غطاء على وحتى الأسماك في المركز. جمع 50 الأسماك باستخدام ماصة نقل (فيشر العلمية). اضغط على جانب من ماصة لتسوية الأسماك نحو الحافة. ماصة بلطف السمك على طبق الاغاروز اليرقات باستخدام وسائل أقل قدر ممكن.
10. خط السمك مع قضيب زجاج أملس (الحرص على عدم سحق منهم!). كما نضح السوائل قدر ممكن من خارج الصحن. استخدام KimWipe إلى ذبالة بعيدا أي رطوبة.
11. وضع طبق السمك مع الاغاروز اليرقات تحت المجهر حتى تحصل على عرض جيد من السمك وإبرة لفي نفس الوقت. تحريك الإبرة زجاج نحو السمك. التكبير في الأسماك على حد سواء وإبرة كما قمت بوضع إبرة نحو السمك. تحرك بعناية الإبرة الزجاج في الحويصلة الأذنية ^{27، 29} (الأذن) من السمك أولا. عليك أن تعرف ذات مرة كنت قد انتقلت الإبرة في الأسماك لأنه عندما دفع التبديل القدم (الأدوات العلمية التطبيقية)، والبطين الدماغ المؤخر سوف ترفع قليلا.
12. اضغط على مفتاح القدم (الآلات العلمية التطبيقية) ومشاهدة السائل داخل الدماغ المؤخر تفريق السمك بطين ^27. سحب الإبرة من السمك والانتقال إلى الأسماك القادمة. كرر الإجراء حتى يكون لديك حقن كل من الاسماك على لوحة. إزالة أي دالأسماك EAD وحقن بدائل للحفاظ على العدد الصحيح (50 الأسماك). لكل مجموعة من 50 سمكة حقن يجب أن يكون مستعدا إبرة microinjection جديد، أو جيم لل المبيضة البيضاء يستقر في الجزء السفلي من إبرة ويسد عليه، أو رميات من تركيز حقن.
13. يغسل السمك الخروج من طبق من الصيد في صحن والرش البيض الماء على الأسماك في بيئة نظيفة من خارج صحن بيتري العميقة التي تحتوي على 60 مل البيض في المياه. من المهم عدم ترك الأسماك على الاغاروز لمدة أطول من 15-20 دقيقة أو أنها سوف تجف وتموت.
14. كرر كامل عملية الحقن حتى الانتهاء. ولا ننسى برنامج تلفزيوني وغير ممرضة تحقن الضوابط.
15. عند الانتهاء، والحفاظ على الأسماك عند 28 درجة مئوية.
16. إغلاق صمام خزان النيتروجين. نقل التبديل وحدة حقن من "نبض" و "مستمرة" لتخفيف الضغط في خط دبابة، يجب أن الضغط ينخفض ​​إلى الصفر عند هذه النقطة. تبديل وحدة حقن مرة أخرى إلى "نبض". إيقاف تشغيل وحدة حقن وتنظيف منطقة العمل.

4. اعداد السمك للتصوير

تجريبية المدة: ** (30 دقيقة)

درجة الصعوبة: **

1. إعداد tricaine حل سلفونات الميثان كما كان من قبل (200 ميكروغرام / مل). الخروج من الأسماك المصابة، وتحويلها إلى tricaine.
2. إعداد 47.9 مل 0.4٪ منخفضة ذوبان الاغاروز (VWR العلمي) في مياه البيض. تسخين حل بواسطة الميكروويف. بارد إلى 37 درجة مئوية وإضافة سلفونات الميثان tricaine (200 ميكروغرام / مل) إلى خليط
3. مرة واحدة يجمد السمك في سلفونات الميثان tricaine، ماصة الأسماك الفردية في طبق بيتري (VWR العلمية) التي تحتوي على 0.4٪ انخفاض ذوبان الاغاروز (VWR العلمي).
4. المقبل، نقل الأسماك من الاغاروز ذوبان منخفضة في الآبار الفردية للزجاج صحن القاع (ماتيك شركة) للتصوير. كما استخدم القليل الاغاروز ذوبان أدنى مستوى ممكن وبالتالي فإن الأسماك شقة تقع في الجزء السفلي من صحن. فقط استخدام ما يكفي من tricaine-الاغاروز لملء فيالدوائر المجموع من الزجاج طبق أسفل.

5. التعديلات ذات الصلة إلى [جوف] بروتوكولات

بال micropipettes لMicroinjection

تجريبية مدتها: * (10-15 دقيقة)

درجة الصعوبة: *

1. سحب قضبان الزجاج المجوف BF120-69-10 (آلات سوتر) باستخدام المشتعلة براون Micropipette بولير نموذج P-97 (سوتر الصكوك) وفقا ليوان وآخرون. ^30. اختيار برنامج رقم 7 مع الحرارة الشروط التالية = 470، السرعة = 120، الوقت = 200. الإبرة الناتج هو 8 ملم من شطبة إلى طرف، ويثقب مرة في 3 مم فوق طرف لديه يبلغ قطرها حوالي 10 ميكرومتر.
2. تحميل micropipette الزجاج في أقواس. حدد "سحب". فإن خيوط التدفئة تسخين الإبر وفقا لمعايير البرنامج وقضيب الزجاج سيفصل في اثنين بال micropipettes انسحبت. بال micropipettes مخزن في صندوق تخزين ماصة (Suttالصكوك إيه).

مجموعة جنين، حقن Morpholino والصيانة

مدة تجريبية: *** (1-2 ساعات)

درجة الصعوبة: ***

3. جمع الأجنة وفقا لأساليب روزن وآخرون. ^31. استخدام منخل البلاستيك (التركيبات من Knutsford) لجمع بيض التفريخ من الدبابة (الموائل المائية). عقد غربال رأسا على عقب على طبق بيتري عميق اضافية وشطف بالماء خزان لجمع البيض.
4. لإعداد morpholino، إضافة الماء المعقم ميكرولتر 300 إلى 300 من nanomoles morpholino (GeneTools، ذ م م). هذا يعطي الأوراق المالية العاملة من 1.0 ملم.
5. التحقق من تركيز morpholino باستخدام Nanodrop (الحرارية العلمية). حدد "الحمض النووي وتغيير نوع العينة إلى" الآخر الطول الموجي و "إلى 265. أدخل مستمر عن طريق ضرب الوزن الجزيئي للmorpholino بحلول عام 1000 مقسوما على absorptivitذ معامل المدرجة في الممتلكات morpholino ورقة بنسبة ضئيلة.
6. فارغة في nanodrop مع 2 ميكرولتر حمض الهيدروكلوريك N 0.1. تمييع 5 ميكرولتر من الحل morpholino إلى 95 ميكرولتر من حمض الهيدروكلوريك N 0.1 (20x والتخفيف). ضع 2 ميكروليتر من التخفيف على قاعدة التمثال nanodrop والتدبير فوق. مضاعفة تركيز من قبل عامل تخفيف (20). هذا يعطي تركيز عمل morpholino. لحساب تركيز millimolar تقسيم تركيز حصل عليها الوزن الجزيئي للmorpholino.
7. تعد الأوراق المالية العاملة في morpholino العازلة Danieau (58 مم كلوريد الصوديوم، 0.7 مم بوكل، 0.4 ملم MgSO _4، 0.6 ملم الكالسيوم (لا _{3) 2،} HEPES ملي 5.0، 7.6 درجة الحموضة) والفينول الحمراء 0.01٪ (VWR العلمي).
8. للعمل حقن morpholino اتباع بروتوكول وفقا لروزن وآخرون ^(31). ويوان وآخرون. ^30. شطف الأطباق حقن morpholino مع الماء الدافئ والبيض في 28 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. إزالة المياه من أطباق الحقن والتشكيلة 1-Cأجنة مرحلة ELL في أخاديد الطبق حقن (أعدت من القسم 1) مع ماصة نقل. وسوف تعقد كل لوحة ما يقرب من 250 بيضة. حقن 1-2 أجنة مرحلة الخلية مع morpholino. وسوف البيض تبقى في مرحلة واحدة خلية لمدة 15 ²⁷ دقيقة.
9. شطف البيض مع حقن المياه عند الانتهاء من البيض (منزوع الأيونات الماء المعقم مع 60 ملغم / لتر أملاح المحيط فورية)، وتجري في 60 مل ماء البيض في أطباق بتري خارج عميق. يمكن إعادة استخدامها أطباق حقن Morpholino. التشطيف مع الماء البيض عند الانتهاء وتخزين معكوسة في 4 درجة مئوية.
10. لتخزين الأجنة إضافة 60 مل البيض المياه إلى الطبق. عد الى 110 الأجنة مع ماصة نقل إلى فصل إضافي أطباق بتري عميق مع 60 مل من البيض في المياه. إضافة الميثيلين الأزرق 0.00003٪ لمنع نمو الجراثيم واحتضان الأجنة عند 28 درجة مئوية.
11. لتسريع تنمية أجنة من الحفاظ على أطباق الجنين في 33 درجة مئوية لمدة 24 ساعة وفقا للمرحلة وآخرون كيميل ^(27).، مما يسمح للأجنة لتطوير لرئيسزاوية الجذع من 75 درجة (زم 25 مرحلة ^27).
12. للعمل عدوى اليرقات إبقاء الأجنة في 28 درجة مئوية بعد عن طريق الحقن مع جيم المبيضة البيضاء.
13. كل يوم استبدال أطباق جنين مع 60 مل من المياه العذبة البيض.

التصوير

تجريبية مدتها: ***** (1-5 ساعات)

درجة الصعوبة: ***

14. اعداد الاسماك في الاغاروز ذوبان منخفضة (وفقا للمادة 4.2) مع tricaine في أطباق زجاجية التصوير أسفل (ماتيك شركة) كما هو موضح سابقا. وضع طبق على تاسعا-81 أوليمبوس (أوليمبوس) مرحلة مجهر مقلوب. جلب الأسماك إلى التركيز تحت التكبير 4X تحت المقابل تدخل الفرق (DIC) ضوء. يمكن التقاط الصور في 20X، 4X، وتكبير 40X في مدينة دبي للإنترنت، TRITC (ميثيل ثيوسيانات رودامين)، وFITC (فلوريسئين الفصيلة) إعدادات التصفية
15. استخدام التاسع-81 أوليمبوس المجهر المقلوب مع FV-1000 ليزر متحد البؤر المسح الضوئي وفقا للنظام وآخرون Ariga ^32. إجراء دورات في وقت تكبير 40X من خلال وضع Z-مداخن مع شرائح ميكرومتر 1-1،5 في كل ساعة من الإصابة.
16. لفترة طويلة وقت التصوير بالطبع من 2 ساعة أو أكثر، ووضع طبقة من الاغاروز ذوبان منخفض فوق السمك في طبق التصوير كل 2-3 ساعات. هذا يمنع الاغاروز من الجفاف وسحق الأسماك بينما يتم تصوير ذلك. لدورات وقت طويل مع عدد قليل من الأسماك، واستخدم في مرحلة ساخنة (Bioptechs شركة) للحفاظ على 28 درجة مئوية خلال العدوى.

6. ممثل النتائج

مثال على جيم الدماغ المؤخر البطين ناجح ويرد عدوى المبيضة البيضاء في يرقة الزرد في 5 ساعات ما بعد العدوى (HPI) و HPI 24 في (الشكل 1). بلعم تشبه الخلايا مع جيم اجتاحت وينظر الى المبيضة البيضاء في الدماغ المؤخر البطين في 5 HPI. بنسبة 24 HPI، C. المبيضة البيضاء داخل البلاعم، مثل خليةق في الأنسجة ذيل ظهري يدل على المبيضات نشرها. هذه نتيجة عدوى تعتمد بشكل كبير على حقنة دقيقة من خميرة جيم على شكل 10-15 المبيضة البيضاء إلى البطين الدماغ المؤخر. ويمكن فحص الأسماك المصابة فورا بعد الحقن ضمان ذلك.

الشكل 1 المعدلة وراثيا fli1: EGFP ^{22 و 33} يرقة المصابين المبيضات البيض CAF2-yCherry والتقط intravitally بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. (ميلان) 5 ساعات ما بعد الإصابة (A) يرقة المصابة مع EGFP في التعبير عن مثل خلايا البلاعم في موقع الإصابة (الدماغ المؤخر البطين) شريط مقياس = 100 ميكرون. (B و C) وصور تضخم أعلى من السمك ذاته، والتي تبين C. المبيضة البيضاء داخل البالعات. مقياس شريط = 100 ميكرون للباء وجيم عن 10 ميكرومتر (مدافع) 24 ساعة بعد الإصابة (D) يرقة المصابة مع المبيضات نشرها مع CAF2-yCherry C. المبيضة البيضاء داخل لجنة الهدنة العسكرية EGFProphage تشبه الخلايا في الأنسجة الذيل ظهري. شريط مقياس = 100 ميكرون. (E و F) وصور تضخم أعلى من السمك ذاته، والتي تبين C. المبيضة البيضاء في ذيل الأنسجة. شريط مقياس = 100 ميكرون.

Discussion

طريقة microinjection الزرد المقدمة هنا يختلف عن Gutzman وآخرون ^(34). في ذلك هنا علينا أن نبرهن عن طريق حقن الحويصلة الأذنية إلى البطين الدماغ المؤخر من اليرقات HPF 36-48. الأسلوب وصفنا يسمح للحقن متسق من 10-15 الخميرة إلى البطين الدماغ المؤخر مع انخفاض تلف الأنسجة. هذا البروت...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم كاشف	شركة	فهرس العدد	تعليق (اختياري)
التفريخ الدبابات	الموائل المائية	2L
1.7 مل من أنابيب	Axygen	MCT-175-C
لحظة المحيط	فيشر العلمية	S17957C
إضافي عميق أطباق بتري	فيشر العلمية	08-757-11Z
معيار أطباق بتري	VWR العلمية	25384-302
نقل ماصات	فيشر العلمية	13-711-7M
خلاصة الخميرة	VWR ScientiFIC	90000-726
الببتون مادة تنشأ عن البروتينات	VWR العلمية	90000-264
سكر العنب	فيشر العلمية	D16-1
أجار	VWR العلمية	90000-760
يمكن التخلص منها عدادة الكريات	VWR العلمية	82030-468
التخزين المؤقت فوسفات المالحة	VWR العلمية	12001-986
دومون Dumoxel الملقط	VWR العلمية	100501-806
خشبية المسامير	VWR العلمية	10805-018
KimWipes	VWR العلمية	300053-964
انخفاض تذوبالاغاروز	VWR العلمية	12001-722
الاغاروز للأطباق حقن	VWR العلمية	12002-102
المشتعلة براون Micropipette بولير	سوتر الآلات	P-97
قضبان الزجاج المجوف	سوتر الآلات	BF120-69-10	لقضبان زجاج أملس عن طريق التسخين فوق الموقد بنسن
ماصة صندوق التخزين	سوتر الآلات	BX10
MPPI-3 نظام حقن	الأجهزة العلمية التطبيقية	MPPI-3
عودة وحدة الضغط	الأجهزة العلمية التطبيقية	حدة حراسة الحدود
Micropipette حامل عدة	تطبيق صحيفةإد الأجهزة العلمية	MPIP
قدم تبديل	الأجهزة العلمية التطبيقية	FSW
Micromanipulator	الأجهزة العلمية التطبيقية	MM33
المغناطيسي قاعدة	الأجهزة العلمية التطبيقية	المغناطيسي قاعدة
Tricaine الميثان سلفونات	الغربي الكيميائية المؤتمر الوطني العراقي.	MS-222
تشريح نطاق	أوليمبوس	SZ61 أعلى SZX-ILLB2-100 قاعدة
متحد البؤر المجهر	أوليمبوس	تاسعا-81-1000 FV مع نظام المسح الضوئي ليزر متحد البؤر
TC-7 أسطوانة الثقافة طبلة نسيج مع 14 بوصة عجلة أنبوب اختبار	نيو برونزويك العلمي	TC-7
التصوير صحون	شركة ماتيك	P24G-1.0-10-F
نصائح ماصة للتحميل الإبر	إيبندورف	930001007
شبكات لوحة سكب	التكيف أدوات العلم	TU-1
المرحلة الساخنة	Bioptechs المؤتمر الوطني العراقي.	دلتا T-5
شقة أداة البسط	VWR العلمية	82027-486
البلاستيك المناخل	الأواني أون لاين Knutsford	12 سم
Parafilm	VWR العلمية	52858-000
دوامة جيني	VWR العلمية	14216-184
16 × 150 مم الثقافة أنابيب	VWR العلمية	60825-435
Nanodrop	الحرارية العلمية	ND 2000
الفينول الأحمر	VWR العلمية	97062-478
حمض الهيدروكلوريك	VWR العلمية	87003-216
كلوريد الصوديوم	VWR العلمية	BDH4534-500GP
بوكل	VWR العلمية	BDH4532-500GP
MgSO 4	VWR العلمية	BDH0246-500GP
كاليفورنيا (NO 3) 2	VWR العلمية	BDH0226-500GP
HEPES	VWR العلمية	BDH4520-500GP
Morpholinos	GeneTools، ذ م م