مثلي الفأر نموذج من سرطان القولون والمستقيم

Summary

ويمكن استخدام اثنين من التقنيات لإنشاء هذا النموذج : حقن الخلايا السرطانية تعليق في الحائط الأعور أو زرع قطعة من ورم تحت الجلد على الأعور. هذا النموذج هو مفيد لدراسة التطور الطبيعي لسرطان القولون والمستقيم واختبار عوامل علاجية جديدة ضد سرطان القولون والمستقيم.

Abstract

الورم تحت الجلد التقليدية النموذج هو أقل من مثالية لدراسة سرطان القولون والمستقيم. نماذج الماوس مثلي من سرطان القولون والمستقيم ، والتي تتميز الخلايا السرطانية المتزايدة في مواقعها الطبيعية ، وتكرار الأمراض التي تصيب البشر مع الدقة العالية. ويمكن استخدام اثنين من التقنيات لإنشاء هذا النموذج. كلا تقنيات متشابهة وتتطلب تخدير الماوس والبطن عن التعرض للالأعور. أسلوب واحد ينطوي على حقن الخلايا السرطانية تعليق القولون الأعور في الحائط. first تزرع الخلايا السرطانية في الثقافة ، وعندما تحصد subconfluent وأعد تعليق خلية واحدة. يتم حقن كمية صغيرة من الخلايا ببطء لتجنب تسرب. تقنية أخرى تتضمن زرع قطعة من ورم تحت الجلد على الأعور. والموت الرحيم والفأر مع وجود ورم في السابق تحت الجلد والقولون والمستقيم هو إزالة الورم باستخدام تقنية معقمة. يتم تقسيم قطعة الورم إلى أجزاء صغيرة لزرعها لآخر الماوس. قبل الزرع ، معطوب طفيفة الأعوري الجدار لتسهيل تسلل خلية الورم. والوقت لتطوير أورام الكبد الأولية والانبثاث تختلف تبعا للتقنية ، خط الخلية ، وأنواع الماوس المستخدمة. هذا نموذج الفأر مثلي مفيد لدراسة تطور طبيعي لسرطان القولون والمستقيم واختبار وكلاء علاجية جديدة ضد سرطان القولون والمستقيم.

Protocol

أولا تحضير خلية

1. تزرع خلايا سرطان القولون والمستقيم في الثقافة وحصادها عندما subconfluent.
2. ويتم إعداد تعليق خلية واحدة في الفوسفات مخزنة المالحة ويحرص على الجليد.

II. ورم التحضير

1. والموت الرحيم والفأر مع وجود ورم القولون والمستقيم في السابق تحت الجلد.
2. إزالة ورم تحت الجلد باستخدام تقنية معقمة وتنقسم الى قطع 2-3 ملم
3. وتحفظ القطع ورم في الفوسفات مخزنة المالحة على الجليد.

III. إعداد الماوس

ملاحظة : في مختبرنا استخدام استنشاق نحن isoflurane لتخدير الماوس ، بدلا من ذلك ، يمكن للمرء أن استخدام حقن المخدر لتحقيق التأثير نفسه

1. ويتم تقييم عمق التخدير باستخدام قرصة أخمص قدميه. وينبغي أن يكون هناك أي انسحاب منعكس مع قرصة أخمص قدميه.
2. يمكن إعطاء المضادات الحيوية عند هذه النقطة.
3. يتوضع بشكل صحيح الماوس تخدير ، والذي كان يحلق في السابق.
4. وهيأهم البطن بمحلول betadine.
5. ورايات البطن وموقع الجراحة بطريقة عقيمة.

رابعا. البطن

1. وقدم نيك صغير في الجلد
2. وأدرك عضلات جدار البطن ورفعوا
3. ودخلت في تجويف البطن ويتم استخدام شفرة واحدة من مقص لدفع محتويات داخل البطن بعيدا
4. ويمتد الشق إلى 2-3 سم

خامسا التعرض للالأعور

1. يتم التعرف على الأعور مع حقيبتها المنتهية المكفوفين وexteriorized
2. غير معزولة عن بقية الأعور من الماوس باستخدام قبل قطع ، شاش معقم
3. وتستخدم المياه المالحة الدافئة للحفاظ على رطوبة الأعور

سادسا. حقن الخلايا في جدار الأعوري

1. ويستخدم 27 أو إبرة G أدق لحقن وحدة تخزين 50 ميكرولتر من الخلايا في جدار الأعوري
2. تتم إزالة الإبرة
3. ويتم تفتيش في موقع الحقن لضمان عدم تسرب
4. يتم إرجاع الأعور إلى تجويف البطن

سابعا. زرع ورم على الأعور

ملاحظة : بالإضافة إلى حقن الخلايا في جدار الأعور ، وهو نهج بديل يتمثل في زرع ورم على الأعور

1. يتم وضع الرقم 8 غرزة على الأعور باستخدام 6-0 أو 7-0 خياطة الحجم
2. معطوب طفيفة الجدار الأعوري
3. ثم ، يتم وضع قطعة ورم
4. يرتبط بانخفاض غرزة
5. يتم إرجاع الأعور إلى تجويف البطن

ثامنا. اختتام الماوس جدار البطن والاسترداد

1. إغلاق جدار البطن باستخدام الماوس ثلاث غرز توقف باستخدام 3-0 أو 4-0 خياطة الحجم
2. بدلا من ذلك ، يمكن للمرء استخدام غرزة بسيطة تشغيل
3. يمكن أن تعطى المسكنات بعد الجراحة وبلعة السوائل في هذه النقطة
4. ولا يسمح للماوس على التعافي من التخدير.

ملاحظة : مع التخدير استنشاق هذا يستغرق عادة 30 ثانية

تاسعا. النتائج -- الورم الرئيسي والانبثاث الكبد

الورم الرئيسي -- تظهر في الموقع (أ) والدليل على اتساع الأوعية الدموية مع (B) ؛ على تلطيخ H & E ، والأورام والغازية محليا (C)

الانبثاث الكبد -- أظهرت السابقين فيفو (D)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

على الرغم من أن نماذج الماوس ورم تحت الجلد من السهل إنشاء ورصد ، فمن الواضح أن هذا النموذج لا يمكن نسخ الموقع الأصلي التشريحية لسرطان القولون والمستقيم. بسبب الاختلاف في المكروية ، وقد تبين أن خلايا سرطان القولون والمستقيم النامي تحت الجلد لتغيير النمط الظاهري ، وتقريبا دائما ت...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cell culture media and components			will vary depending on cell line used
Phosphate Buffered Saline	BioWhittaker	17-512F	also sold by a number of other vendors
15 mL centrifuge tubes, polypropylene	Corning	430790
6 well plates with lid	BD Biosciences	353046
Iris forceps, straight, serrated tips	World Precision Instruments, Inc.	15914	best to have a pair of these instruments
Iris dissecting scissors, straight, sharp	World Precision Instruments, Inc.	14393
Needle Holder (regular)	World Precision Instruments, Inc.	14109
Needle Holder (Castroviejo)	World Precision Instruments, Inc.	14137
Cidex Plus	World Precision Instruments, Inc.	7364	instruments should be autoclaved periodically, but may also be sterilized by soaking in Cidex
6-0 or 7-0 suture			for cecum; courtesy of Department of Surgery, UCSF
3-0 or 4-0 suture			for abd wall; courtesy of Department of Surgery, UCSF
Anesthetic machine / Isoflurane	J.A. Baulch and Associates	3206	also sold by a number of other vendors
Heating Pad, disposable, 6" x 6"	Prism Technologies	20419
Tape, orange, 13 mm x 13 m	Fisher Scientific	15901F	for restraining anesthetized mouse
Pro-Cord/Cordless Trimmer	Oster Professional Products	78997-010	for shaving mouse fur
Betadine	Fisher Scientific	19-027132	may also be purchased at any medical supply store
2 x 2 gauze, 3-ply	Johnson & Johnson	7635	may also be purchased at any medical supply store
Sterile Field, Barrier, 16" x 29"	Johnson & Johnson	0905	may also be purchased at any medical supply store
Cotton tipped applicators, 6"	Fisher Scientific	14-960-3Q	may also be purchased at any medical supply store
Syringe, 10 cc, Luer lock tip	BD Biosciences	309604
Syringe, 1 cc, tuberculin, slip tip	BD Biosciences	309602
27 1/2 G needle	BD Biosciences	305109
30 G needle	BD Biosciences	305106