JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Isolation of lymph node stromal cells is a multistep procedure including enzymatic digestion and mechanical disaggregation to obtain fibroblastic reticular cells, lymphatic and blood endothelial cells. In the described procedure, a short digestion is combined with automated mechanical disaggregation to minimize surface marker degradation of viable lymph node stromal cells.

Abstract

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and differentiation of lymphocytes. Various stromal cell subsets have been identified by the expression of the adhesion molecule CD31 and glycoprotein podoplanin (gp38), T zone reticular cells or fibroblastic reticular cells, lymphatic endothelial cells, blood endothelial cells and FRC-like pericytes within the double negative cell population. For all populations different functions are described including, separation and lining of different compartments, attraction of and interaction with different cell types, filtration of the draining fluidics and contraction of the lymphatic vessels. In the last years, different groups have described an additional role of stromal cells in orchestrating and regulating cytotoxic T cell responses potentially dangerous for the host.

Lymph nodes are complex structures with many different cell types and therefore require a appropriate procedure for isolation of the desired cell populations. Currently, protocols for the isolation of lymph node stromal cells rely on enzymatic digestion with varying incubation times; however, stromal cells and their surface molecules are sensitive to these enzymes, which results in loss of surface marker expression and cell death. Here a short enzymatic digestion protocol combined with automated mechanical disruption to obtain viable single cells suspension of lymph node stromal cells maintaining their surface molecule expression is proposed.

Introduction

الغدد الليمفاوية هي مقصورات المتخصصة حيث بدأت الاستجابات المناعية التكيفية ضد المستضدات الذاتية والخارجية ومنسقة. الإجراء المقدمة هنا يصف الهضم الأنزيمي قصيرة جنبا إلى جنب مع pipetting لالميكانيكي الآلي للحصول على العقدة اللمفاوية وحيدة الخلية تعليق والوصول إلى خلايا انسجة العقدة الليمفاوية قابلة للحياة التي تحافظ على التعبير السطح العديد من الجزيئات.

الخلايا اللحمية العقدة الليمفاوية تشكل سقالة من العقدة الليمفاوية والوفاء ثلاث وظائف رئيسية: أولا أنها تصفية سوائل الجسم لأخذ عينات المستضدات، ومسببات الأمراض والعوامل المسببة للأمراض المرتبطة نمط الجزيئية الخاصة بهم (PAMPs)، وكذلك السيتوكينات والخطر المرتبطة نمط الجزيئية (DAMPs) الحاضر في الجسم. ثانيا، جذب وإرشاد مستضد تقديم الخلايا (APC) والخلايا الليمفاوية للتفاعل والشروع في الاستجابات المناعية التكيفية. وثالثا، لأنها توفر بيئة الهيكلية للتوازن وتمايز الخلايا الليمفاوية 1-3. أثناء التهاب خلايا العقدة الليمفاوية انسجة تنتج عوامل النمو، السيتوكينات وكيموكينات، والتكيف مع تورم وبالتالي تنظيم التفاعل بين الخلايا الجذعية (DCS)، تي وخلايا ب. تزامن الاستجابات المناعية ممكن فقط بسبب بنية الهيكلية المعقدة التي شكلتها مختلف السكان الخلية اللحمية.

خلايا انسجة العقدة الليمفاوية هي خلايا CD45 السلبية ويمكن تمييزها عن طريق التعبير عن CD31 أو gp38 في خلايا ليفية والبطانية 1 -6. Gp38 + CD31 - يحدد خلايا T منطقة شبكي (TRC، والتي تعرف أيضا باسم FRC: خلايا الشبكية ليفية)، gp38 + CD31 + الخلايا الليمفاوية يعرف البطانية (كرا)، gp38 - CD31 + يحدد الخلايا البطانية في الدم (BEC). علاوة على ذلك، توصيف المجموعات السكانية الفرعية وكشف وجود خلايا انسجة العقدة الليمفاوية الأخرى. في الواقع، واتسم عدد صغير من السكان خلية تشبه خلية حوطية داخلgp38 - CD31 - السكان 7. لذا، والتكيف من إجراء العزل هو مفيد لتحديد وتوصيف خصائص وظيفية مختلفة من خلايا انسجة العقدة الليمفاوية.

قبل وضع العقدة الليمفاوية خلايا انسجة الهضم البروتوكولات دراسة خلايا انسجة العقدة الليمفاوية اقتصر على الرصدات في الموقع باستخدام قسم الأنسجة والفحص المجهري. ومع ذلك، أظهرت الدراسات البنيوية والوظيفية الخصائص المهمة للخلايا انسجة العقدة الليمفاوية. وترتبط خلايا انسجة العقدة الليمفاوية مع podoplanin، والكولاجين والمصفوفة خارج الخلية (ECM) البروتينات لتشكيل بنية معقدة 3 الأبعاد يسمى نظام القناة الذي ينقل الليمفاوية وما يرتبط بها منخفضة الكتلة الجزيئية البروتينات من الجيوب تحت المحفظة من العقدة الليمفاوية إلى البطانية عالية الأوردة في منطقة خلايا T 8. البلدان النامية على اتصال وثيق مع خلايا سدى ويمكن ملاحظة جاحظ في يخدع أنبوبيهيكل duit لأخذ عينات السوائل وكشف المستضدات 8. وبوساطة تفاعل خلايا انسجة العقدة الليمفاوية (TRCS وموظفين المدنيين المحليين) مع البلدان النامية من خلال الإفراج وعرض كيموكينات CCL21 و CCL19 9،10. يتم الاعتراف CCL19 وCCL21 بواسطة مستقبلات CCR7 تسهيل البلدان النامية والخلايا T للهجرة إلى منطقة العقدة الليمفاوية الخلية T 4،11. على الرغم من استخدام كيموكينات مماثلة، وخلايا T البلدان النامية ولها طرق الهجرة المختلفة في الغدد الليمفاوية 12. في وقت لاحق، وذلك باستخدام الهضم الأنزيمي من العقدة الليمفاوية وعزل الخلايا اللحمية العقدة الليمفاوية نقية، وأجريت دراسات وظيفية على دور مختلف خلايا العقدة الليمفاوية اللحمية وقدرتها على التفاعل مع البلدان النامية وخلايا T / B 6،13. أولا، الحديث المتبادل بين IFN-γ إنتاج خلايا T المستجيب والخلايا اللحمية العقدة الليمفاوية الحث على إنتاج أكسيد النيتريك المستقلب تبين أن يثبط استجابات الخلايا T والانتشار في أجهزة اللمفاوية الثانوية 14-16. ثانيا، الليمفاوية نوقد تم الإبلاغ عن خلايا انسجة صدى لدعم التفريق بين مجموعات فرعية DC التنظيمية عبر إنتاج IL-10 17، والسذاجة لتعديل توازن الخلايا التائية عبر إنتاج IL-7 6،18. ثالثا، TLR التعبير في خلايا انسجة العقدة الليمفاوية تشير إلى أن خلايا انسجة عرضة للإشارة مشتقة من عدوى أو الجزيئات الذاتية صدر خلال إصابة الأنسجة. والواقع أن علاج الخلايا اللحمية العقدة الليمفاوية مع يجند من TLR3 بولي (I: C) يؤدي الى upregulation متواضع من التوافق النسيجي الرئيسي التعبير الدرجة الأولى ومعقدة upregulation المشترك المثبطة جزيء PD-L1، ولكن ليس من الجزيئات costimulatory، مما أدى إلى تغييرات جذرية في الأنسجة الطرفية مستضدات التعبير 19. وقد أظهرت عدة مجموعات خلايا انسجة العقدة الليمفاوية التعبير عن مستضدات الأنسجة الطرفية وتحفز التسامح من ذاتية التفاعل خلايا T 19،21-27. لذا، فهم التفاعلات بين الخلايا اللحمية العقدة الليمفاوية وغيرها من إعادة المهاجرة وسوف المنشقة خلايا العقدة اللمفاوية يساعد على إيجاد الجزيئات المستهدفة الجديدة للسماح تفعيل أو قمع الاستجابات المناعية أثناء الالتهاب. ولذلك، هناك حاجة إلى تنفيذ الفصل الأنزيمية نشرت من العقدة الليمفاوية.

البروتوكولات نشرت سابقا استخدام تركيبات مختلفة من القائم كولاجيناز الأنزيمية الهضم مع انخفاض الضغط الميكانيكي 6،19،20. ومع ذلك، حضانات طويلة مع إنزيمات الهضم أو مزيج مختلف من انزيم الهضم قد تتحلل مختلف الجزيئات السطحية اللازمة لتحليل حالة التنشيط وتحديد خلايا انسجة العقدة الليمفاوية جديدة. اعتمادا على نوع من التحليل الخلايا اللحمية، وبروتوكول وصلة أو بروتوكول فليتشر قد يكون أكثر ملاءمة. في الإجراء وصفها، يتم الجمع بين الهضم الأنزيمي أقصر قليلا مع تصنيف الميكانيكي الآلي للحد من تدهور سطح علامة قابلة للحياة الخلايا الليمفاوية من عقدة اللحمية. يتيح هذا الإجراء العزلة استنساخه للغاية وتمييز من العقدة الليمفاوية السكان الخلية اللحمية مع تقلب منخفض وأكثر من 95٪ جدوى. الخلايا اللحمية العقدة الليمفاوية المعزولة حديثا يمكن استخدامها مباشرة للتعبير عن علامة السطح، وتحليل البروتين، والدراسات النسخي، وكذلك إنشاء خطوط خلايا انسجة لإجراء المقايسات الفنية في المختبر.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

في هذا المنشور الفيديو والبروتوكول، وأجريت كافة الإجراءات الحيوانية وفقا لبروتوكول الحيوانية التي وافقت عليها السلطة كانتون بازل شتات، سويسرا.

1. إعداد العقد الليمفاوية والهضم

  1. الماء قبل الحرارة في كوب إلى 37 درجة مئوية على النمام المغناطيسي مع لوحة التدفئة.
  2. إعداد المتوسطة الأساسية على النحو التالي: DMEM المتوسطة (دون البيروفات) تستكمل مع FCS 2٪، 1.2 مم CaCl 2 و القلم / بكتيريا (100 وحدة من البنسلين، 100 ميكروغرام من الستربتومايسين).
  3. تعقيم جميع الأدوات تشريح قبل الاستخدام.
  4. الموت ببطء الفئران العقدة الليمفاوية المانحة في CO 2 الخنق وجو معقم و مطهر تشريح الغدد الليمفاوية. لا تشريح الدهون المحيطة بها. ملاحظة: تم تحسين هذا البروتوكول للالطرفية عقدة تجفيف الجلد الليمفاوية (الاربية، العضدية، الإبطين).
  5. وضع الغدد الليمفاوية في طبق بتري معقمة تحتوي على 2 مل الجليد المتوسطة الأساسي البارد.
  6. تعطيل كاليفورنيا العقدة الليمفاويةpsule باستخدام اثنين من الإبر 25 G ثابتة على 1 مل حقنة.
  7. نقل الأنسجة العقدة الليمفاوية تعطلت في 5 مل البولي بروبلين أنبوب الجولة القاع تحتوي على 750 ميكرولتر المتوسطة الأساسي تستكمل مع 1 ملغ / مل كولاجيناز الرابع و 40 ميكروغرام / مل الدناز I.
  8. إضافة واحد النمام المغناطيسي معقمة في كل أنبوب.
  9. مكان أنبوب في الدورق مع 37 ° C مسخن الماء ويقلب الأنابيب بمعدل بطيء (1 الجولة / ثانية) لمدة 30 دقيقة.
  10. إزالة أنبوب من النمام المغناطيسي مع لوحة التدفئة وترك شظايا العقدة الليمفاوية تسوية.
  11. إزالة بعناية طاف المخصب في "خلية غير اللحمية". ملاحظة: إذا كان تحليل T، B، والخلايا الجذعية وCD45 - gp38 - CD31 - ومن المتوقع، حفظ "الخلايا غير اللحمية" الكسر.
  12. غسل الأنسجة المتبقية العقدة الليمفاوية مرة واحدة مع 750 ميكرولتر المتوسطة الأساسي. ملاحظة: هذه الخطوة غير ضرورية إلا إذا كان يعمل مع الفئران محصنة الحكومية المختصة.
  13. السماح شظايا العقدة الليمفاوية تسوية.
  14. إزالةغير اللحمية جزء العائمة الخلية.
  15. أضف إلى شظايا العقدة الليمفاوية 750 ميكرولتر المتوسطة الأساسي تستكمل مع 3.5 ملغ / مل كولاجيناز D و 40 ميكروغرام / مل الدناز I.
  16. مكان أنبوب مرة أخرى في الكأس الذي يحتوي على 37 ° C مسخن الماء.
  17. هضم الأنسجة الليمفاوية عقدة لمدة 5 دقائق مع التحريك ببطء.
  18. تفصيل الأنسجة الليمفاوية شظايا عقدة من قبل pipetting والاختلاط 700 ميكرولتر لمدة 10 دورات في السرعة القصوى باستخدام ماصة الأقنية الآلي. ملاحظة: هذه الأنسجة الليمفاوية يعطل عقدة لتحسين الهضم.
  19. وضع أنبوب مرة أخرى في الكأس مع 37 درجة مئوية الماء مسخن.
  20. هضم الأنسجة شظايا العقدة الليمفاوية لمدة 10 دقيقة مع التحريك ببطء.
  21. تفصيل الأنسجة الليمفاوية شظايا عقدة من قبل pipetting وخلط لمدة 99 دورات في السرعة القصوى باستخدام ماصة الأقنية الآلي.
  22. إضافة 7.5 ميكرولتر من 0.5 M EDTA لضمان الحفاظ على تعليق خلية واحدة.
  23. تفصيل شظايا الأنسجة العقدة الليمفاوية بواسطة الأنابيبtting وخلط لمدة 99 دورات في السرعة القصوى باستخدام ماصة الأقنية الآلي.
  24. إضافة 750 ميكرولتر المتوسطة الأساسي وتمر الخلايا من خلال شبكة من النايلون 70 ميكرون.
  25. الطرد المركزي تعليق خلية 5 دقائق عند 1،500 x ج، 4 درجات مئوية.
  26. ويمكن الآن أن تستخدم خلايا انسجة لمزيد من التحليل.

2. تلون الخلايا الليمفاوية عقدة اللحمية

  1. استخدام مزيج من مكافحة CD45، ومكافحة podoplanin (gp38)، والأجسام المضادة لمكافحة CD31 التعرف على الخلايا TRC، بكا، BEC وDN بنجاح.
  2. احتضان هضمها العقدة الليمفاوية الأنسجة مع لايف / تعقب الميت، ومكافحة CD45-FITC (1: 200)، ومكافحة gp38-PE (1: 200)، ومكافحة CD31-APC (1: 200) في 100 ميكرولتر HBSS تحتوي على 2 FCS٪ لمدة 20 دقيقة على الأقل، 4 درجات مئوية، في الظلام.
  3. غسل الخلايا بإضافة 500 لتر من HBSS تحتوي على 2٪ FCS
  4. الطرد المركزي تعليق خلية 3 دقيقة في 1500 x ج، 4 درجات مئوية.
  5. إعادة تعليق في 100 ميكرولتر من HBSS تحتوي على 2٪ FCS.
  6. تشغيل الخلايا الملون في تدفق عداد الكريات تجهيز المنطقةإد مع البصريات التالية: مصدر الإثارة مع ما يصل الى ثلاثة أجهزة الليزر: الأزرق (488 نانومتر، وتبريد الهواء، و 20 ميغاواط الحالة الصلبة)، الحمراء (633 نانومتر، 17 ميغاواط الحنة)، والبنفسجي (405 نانومتر، 30 ميغاواط الحالة الصلبة) .
  7. بوابة CD45 - خلايا لاستبعاد الخلايا المكونة للدم.
  8. singlets بوابة (FSC-W) والخلايا الحية (لايف / تعقب الميت) لاستبعاد الحلل والخلايا الميتة.
  9. مؤامرة gp38 مقابل CD31 لتصور TRC (gp38 + CD31 -)، كرا (gp38 + CD31 +)، BEC (gp38 - CD31 +) وDN (gp38 - CD31 -) الخلايا (انظر الشكل 1).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

هذا البروتوكول هو بروتوكول الهضم تعديل نشرتها رابط وآخرون، 2007 6 مع أقصر وقت الهضم (45 دقيقة كحد أقصى) بسبب التقسيم الميكانيكية مع ماصة الأقنية الآلي. بالإضافة إلى ذلك، هذا الإجراء هو أكثر توحيدا، ويقلل من تدهور علامات على سطح خلايا انسجة مختلفة العقدة الليم?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

دراسة خلايا انسجة العقدة الليمفاوية أصبحت في الآونة الأخيرة التركيز على البحوث نظرا لتطوير بروتوكولين الهضم نشرت 6،13. كلا البروتوكولين كافية للحصول على الخلايا الليمفاوية واحد العقدة انسجة ولكنها تختلف في استخدام إنزيمات الهضم ووقت الهضم. منذ خلايا انسجة وعل...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

The authors declare they have no competing financial interests.

Acknowledgements

The authors thank Sanjiv Luther and colleagues for helpful discussions in establishing the current lymph node digestion protocol. This work was supported by SNF grants PPOOA-_119204 and PPOOP3_144918 to S.W.R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMLifeTechnologies-Gibco41965-039
FCSFinal concentration 2%
CaCl2Sigma499609Final concentration 1.2 mM
Collagenase IVWorthington Biochemical Corporation>160 units per mg dry weight, use at final concentration of 1 mg/ml
Collagenase DRoche11088882001use at 3.5 mg/ml
DNAse IRoche 11284932001use at 40 µg/ml
Stiring magnetsFAUST5 mm long-2 mm ø
Polystyrene round bottom tubes 5 mlFalcon-BD Bioscience
Magnetic stirrer with heating functionIKA-RCT-standard9720250
Petri dishes 100 mm, sterileTPP6223201
25 G needlesTerumo
anti mouse CD45 AbBiolegendClone 30-F11
anti mouse CD11c AbBiolegendClone N418
anti mouse Podoplanin AbBiolegendClone 8.1.1
anti mouse CD31 AbBiolegendClone MEC13.3

Eppendorf Xplorer plus, Multichannel		Eppendorf4861 000.821/8301.250 µl max. volume
anti mouse CD140aBiolegendClone APA5
anti mouse CD80BiolegendClone 16-10A1
anti mouse CD40BiolegendClone 1C10
anti mouse I-AbBiolegendClone AF6-120.1
anti mouse CD274 (PD-L1)BiolegendClone 10F.9G2
LIVE/DEAD Fixable Near-IR Dead Cell stain kitInvitrogenL10119

References

  1. Mueller, S. N., Ahmed, R. Lymphoid stroma in the initiation and control of immune responses. Immunological reviews. 224, 284-294 (2008).
  2. Roozendaal, R., Mebius, R. E. Stromal Cell - Immune Cell Interactions. Annual Review of Immunology. 29 (1), 23-43 (2011).
  3. Turley, S. J., Fletcher, A. L., Elpek, K. G. The stromal and haematopoietic antigen-presenting cells that reside in secondary lymphoid organs. Nature Reviews Immunology. 10 (12), (2010).
  4. Bajénoff, M., et al. Stromal cell networks regulate lymphocyte entry, migration, and territoriality in lymph nodes. Immunity. 25 (6), 989-1001 (2006).
  5. Katakai, T., Hara, T., Sugai, M., Gonda, H., Shimizu, A. Lymph node fibroblastic reticular cells construct the stromal reticulum via contact with lymphocytes. The Journal of experimental medicine. 200 (6), 783-795 (2004).
  6. Link, A., et al. Fibroblastic reticular cells in lymph nodes regulate the homeostasis of naive T cells. Nature Immunology. 8 (11), 1255-1265 (2007).
  7. Malhotra, D., et al. Transcriptional profiling of stroma from inflamed and resting lymph nodes defines immunological hallmarks. Nature Immunology. 13 (5), 499-510 (2012).
  8. Gretz, J. E., Norbury, C. C., Anderson, A. O., Proudfoot, A. E., Shaw, S. Lymph-borne chemokines and other low molecular weight molecules reach high endothelial venules via specialized conduits while a functional barrier limits access to the lymphocyte microenvironments in lymph node cortex. The Journal of experimental medicine. 192 (10), 1425-1440 (2000).
  9. Sixt, M., et al. The conduit system transports soluble antigens from the afferent lymph to resident dendritic cells in the T cell area of the lymph node. Immunity. 22 (1), 19-29 (2005).
  10. MartIn-Fontecha, A., et al. Regulation of dendritic cell migration to the draining lymph node: impact on T lymphocyte traffic and priming. The Journal of experimental medicine. 198 (4), 615-621 (2003).
  11. Luther, S. A., Tang, H. L., Hyman, P. L., Farr, A. G., Cyster, J. G. Coexpression of the chemokines ELC and SLC by T zone stromal cells and deletion of the ELC gene in the plt/plt mouse. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (23), 12694-12699 (2000).
  12. Braun, A., et al. Afferent lymph-derived T cells and DCs use different chemokine receptor CCR7-dependent routes for entry into the lymph node and intranodal migration. Nature Immunology. 12 (9), 879-887 (2011).
  13. Fletcher, A. L., et al. Reproducible isolation of lymph node stromal cells reveals site-dependent differences in fibroblastic reticular cells. Frontiers in immunology. 2, 35(2011).
  14. Lukacs-Kornek, V., et al. Regulated release of nitric oxide by nonhematopoietic stroma controls expansion of the activated T cell pool in lymph nodes. Nature Immunology. 12 (11), 1096-1104 (2011).
  15. Siegert, S., et al. Fibroblastic reticular cells from lymph nodes attenuate T cell expansion by producing nitric oxide. PLoS ONE. 6 (11), e27618(2011).
  16. Khan, O., Headley, M., Gerard, A., Wei, W., Liu, L., Krummel, M. F. Regulation of T cell priming by lymphoid stroma. PLoS ONE. 6 (11), e26138(2011).
  17. Svensson, M., Maroof, A., Ato, M., Kaye, P. M. Stromal cells direct local differentiation of regulatory dendritic cells. Immunity. 21 (6), 805-816 (2004).
  18. Onder, L., et al. Endothelial cell-specific lymphotoxin-β receptor signaling is critical for lymph node and high endothelial venule formation. The Journal of experimental medicine. 210 (3), 465-473 (2013).
  19. Fletcher, A. L., et al. Lymph node fibroblastic reticular cells directly present peripheral tissue antigen under steady-state and inflammatory conditions. The Journal of experimental medicine. 207 (4), 689-697 (2010).
  20. Fletcher, A. L., Malhotra, D., Turley, S. J. Lymph node stroma broaden the peripheral tolerance paradigm. Trends in Immunology. 32 (1), 12-18 (2011).
  21. Cohen, J. N., et al. Lymph node-resident lymphatic endothelial cells mediate peripheral tolerance via Aire-independent direct antigen presentation. Journal of Experimental Medicine. 207 (4), 681-688 (2010).
  22. Lee, J. -W., et al. Peripheral antigen display by lymph node stroma promotes T cell tolerance to intestinal self. Nat Immunol. 8, 181-190 (2006).
  23. Nichols, L. A., et al. Deletional self-tolerance to a melanocyte/melanoma antigen derived from tyrosinase is mediated by a radio-resistant cell in peripheral and mesenteric lymph nodes. J Immunol. 179, 993-1003 (2007).
  24. Gardner, J. M., et al. Deletional tolerance mediated by extrathymic Aire-expressing cells. Science. 321, 843-847 (2008).
  25. Gardner, J. M., et al. Extrathymic Aire-expressing cells are a distinct bone marrow-derived population that induce functional inactivation of CD4+ T cells. Immunity. 39, 560-572 (2013).
  26. Magnusson, F. C., et al. Direct presentation of antigen by lymph node stromal cells protects against CD8 T-cell-mediated intestinal autoimmunity. Gastroenterology. 134, 1028-1037 (2008).
  27. Tewalt, E. F., et al. Lymphatic endothelial cells induce tolerance via PD-L1 and lack of costimulation leading to high-level PD-1 expression on CD8 T cells. Blood. 120 (24), 4772-4782 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

90

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved