و"حيدة الخلية والروتيفر طريقة الاستزراع متعدد الأنواع" كاملة ومحدثة للتربية اسماك الزرد الأولى تغذية

Summary

Larval zebrafish are adapted to feed on zooplankton. It is possible to capitalize on this natural feature in the laboratory by growing first feeding fish together in the same system with live saltwater rotifers. This "polyculture" strategy promotes high growth and survival with minimal labor and disturbance to the larvae.

Abstract

The zebrafish (Danio rerio) is a model organism of increasing importance in many fields of science. One of the most demanding technical aspects of culture of this species in the laboratory is rearing first-feeding larvae to the juvenile stage with high rates of growth and survival. The central management challenge of this developmental period revolves around delivering highly nutritious feed items to the fish on a nearly continuous basis without compromising water quality. Because larval zebrafish are well-adapted to feed on small zooplankton in the water column, live prey items such as brachionid rotifers, Artemia, and Paramecium are widely recognized as the feeds of choice, at least until the fish reach the juvenile stage and are able to efficiently feed on processed diets. This protocol describes a method whereby newly hatched zebrafish larvae are cultured together with live saltwater rotifers (Brachionus plicatilis) in the same system. This polyculture approach provides fish with an "on-demand", nutrient-rich live food source without producing chemical waste at levels that would otherwise limit performance. Importantly, because the system harnesses both the natural high productivity of the rotifers and the behavioral preferences of the fish, the labor involved with maintenance is low. The following protocol details an updated, step-by-step procedure that incorporates rotifer production (scalable to any desired level) for use in a polyculture of zebrafish larvae and rotifers that promotes maximal performance during the first 5 days of exogenous feeding.

Introduction

الزرد (دانيو rerio) هو حيوان مختبر البارز تستخدم في عدد متزايد من التخصصات العلمية، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على الوراثة التنموية، وعلم السموم، والسلوك وتربية الأحياء المائية، البيولوجيا التجديدي، ونمذجة العديد من الاضطرابات الإنسان ^1-5. على الرغم من أن الأنواع من السهل نسبيا للحفاظ في المختبر، وهناك عدد من التحديات الإدارية المرتبطة ثقافتهم ^6. وأبرز هذه هي تربية اليرقات، خاصة عندما الأسماك لأول مرة تبدأ في وقت لاحق لتغذية التضخم المثانة الغاز ^7. تحت الظروف العادية، التي تسيطر عليها، وهذا الحدث التنموي يحدث في ~ 5 أيام بعد الإخصاب (إدارة الشرطة الاتحادية)، مع 3 التالية - 5 أيام من النمو يجري حاسما بشكل خاص ^7. الصعوبات الفنية المركزية خلال هذه المرحلة في الاستجابة على نحو كاف لمطالب الغذائية من اليرقات التغذية الأولى - يجب أن البنود تغذية تكون بحجم مناسب، digestible، جذابة، ومتاحة على أساس مستمر تقريبا، دون خلق النفايات المفرطة في خزانات زراعة. تاريخيا قد تحقق هذا عادة من خلال تقديم العديد من كميات صغيرة من الأعلاف للأسماك في صهاريج، جنبا إلى جنب مع روتين ^8،9 صرف المياه. في حين أن هذه الأساليب هي إلى حد ناجحة، فهي غير فعالة، تتطلب مدخلات العمل عالية، والعودة المتغير الوحيد ومعدلات محدودة للنمو والبقاء على قيد الحياة ^10.

في الطبيعة، اليرقات الزرد إطعام يفترض على وفرة صغيرة الحاضر العوالق الحيوانية في عمود الماء ^11. لهذا السبب، بروتوكولات تربية اليرقات التي تتضمن لقطات حية مثل المتناعلة، الدوارات، والأرتيميا وعادة ما تكون الأكثر فعالية ^7. في عام 2010، أظهر أفضل والمشاركين فيها أنه كان من الممكن أن تنمو اليرقات الزرد في ثابت، والمياه المالحة مع المياه المالحة الدوارات لمدة 5 أيام الأولى من التغذية الخارجية ^(12). هذا النهج الذي تسخيروفاق إنتاجية عالية الطبيعية الثقافات حيدة الخلية والروتيفر لتوفير وافرة، فريسة ذات قيمة غذائية عالية دون تلويث المياه، والمحاصيل معدلات عالية جدا من نمو اليرقات والبقاء على قيد الحياة مع مدخلات العمل منخفضة ^12،13. في السنوات الأخيرة، تبنت عددا متزايدا من المختبرات حول العالم أشكال مختلفة من هذا البروتوكول، والعديد من زراعة الآن الدوارات بطريقة مستمرة لدعم نظم الحضانة ^14.

على مدى السنوات القليلة الماضية، تم تنقيح طرق لكلا حيدة الخلية والروتيفر / متعدد الأنواع الزرد والإنتاج حيدة الخلية والروتيفر وتحسينها لتصبح أكثر توحيدا وقابلة بسهولة. توفر هذه المقالة خطوة بخطوة تعليمات ل1) إنتاج حيدة الخلية والروتيفر المستمر والقوي و2) إنشاء حيدة الخلية والروتيفر / الزرد نظام متعدد الأنواع المستخدمة لدعم النمو القوي من الأسماك لمدة 5 أيام الأولى من التغذية الخارجية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. حيدة الخلية والروتيفر الثقافة

1. المكونات الأساسية لنظام الثقافة باستخدام سفينة 100 L الثقافة
   1. جمع كل المكونات لإعداد ثقافة حيدة الخلية والروتيفر. يتكون الإعداد الثقافة حيدة الخلية والروتيفر سفينة الثقافة (CV) لزراعة الدوارات. سفينة مشابهة للحفاظ على الدوارات feedout (سفينة الثقافة feedout، FCV)؛ جرة ذهابا والقاع الفقس (تغذية الخزان، FR) لتخزين الخليط تغذية الطحالب (AFM)؛ إمدادات الهواء (AS) لتهوية CV، FCV وFR؛ مضخة تحوي جهاز توقيت القياس (PMT) للسيطرة على تسليم تغذية الطحالب في السيرة الذاتية وFCV. ومرشح خيط الجسيمات (الاتحاد البرتغالي) أن يجلس داخل السيرة الذاتية.
      وهناك قائمة كاملة من اللوازم والمكونات في قائمة المواد: ملاحظة.
2. ترتيب
   1. رفع السيرة الذاتية وFCV على الوقوف أو الجدول بحيث الثقافات يمكن حصادها بسهولة عن طريق استنزاف المناسب إلى جمع تابعainer (الشكل 1). استخدام مرنة أنابيب العرض الجوي لتوصيل AS على طول الأنبوب جامدة في كل سفينة الثقافة. تأكد من أن أنابيب طويلة بما فيه الكفاية لإيصال الهواء إلى أسفل CV أو FCV.
   2. استخدام خط الهواء ذات السعة الصغيرة لتوصيل AS على طول الأنبوب جامدة الذي يمتد إلى أسفل FR الذي يحتوي على AFM. تثبيت صمام في كل سطر الهواء لتنظيم تدفق الهواء. ربط FR إلى PMT مع تسليم تغذية الأنابيب، وتشغيل أنابيب من PMT في حفرة حفرها إلى جانب CV / FCV، بالقرب من أعلى الشكل 1.
3. أبدء
   1. ملء وعاء الثقافة إلى 90٪ من حجم المتاحة مع التناضح العكسي المياه (RO). إذا RO غير متوفر، واستخدام المياه البلدية النظيفة، وإزالة الكلور. ومع ذلك، ينبغي إجراء تقييم للمخاطر الأمن الحيوي لضمان عدم الكائنات الحية المسببة للأمراض قد تكون موجودة في المياه مصدر. ملاحظة: يمكن إجراء مثل هذا التحليلمن قبل أي مختبر المياه المؤهلين.
   2. جرعة الثقافة السفينة المياه مع الملح الحوض للوصول إلى الملوحة من 15 غرام / L. ضبط تدفق الهواء في الإناء بحيث تحافظ على "الغليان"، وبعد ذلك ببطء إضافة يقاس مقدار الملح في وعاء الثقافة حتى يذوب تماما من قبل التهوية. تواصل تهوية الماء ل> 1 ساعة للتأكد من الاوكسيجين بشكل كامل.
   3. جعل الخليط تغذية الطحالب. 3 L نظيفة، إزالة الكلور النقي (0 جزء في المليون) المياه إضافة 100 غرام من NaHCO ₃ و 100 غرام من الأمونيا التعادل (hydroxymethylsulfonate الصوديوم). يوفر هذا كاشف الماضي فائدة إضافية تتمثل في القضاء على أي الكلور المتبقي من ماء الصنبور أو التبييض بقايا من تعقيم المعدات الثقافة. فمن الأهمية بمكان لضمان أن هذه المركبات يتم حله بشكل كامل. ثم يضاف 1 لتر من التركيز الطحالب (الكتلة الحيوية الوزن الجاف ~ 15٪). يضاف خليط العلف إلى FR وتخزينها في 4 درجات مئوية.
   4. إضافة الثقافة بداية من 5-10٬000٬000 الدوارات Brachionus plicatilis إلى السيرة الذاتية تحتوي على 15 غرام الهوائية / لتر ماء الملوحة. إذا كان قد تم برود الدوارات أثناء الشحن أو التخزين، ينبغي أن تكون تدريجيا (خلال 30 دقيقة أو أكثر) تأقلم لدرجة حرارة الماء في وعاء الثقافة (25-27 درجة مئوية).
   5. بدوره على PMT والبدء في ضخ تغذية الطحالب في سفينة الثقافة حيدة الخلية والروتيفر. باستخدام ميزة الموقت للPMT، تعيين معدل الولادة من خليط العلف الطحالب بحيث ~ 1.6 مل من الطحالب خليط العلف يتم تسليمها لكل مليون الدوارات في الثقافة، في اليوم الواحد. توزيع الوجبات في أجزاء صغيرة على فترات منتظمة على مدى فترة 24 ساعة. وأكثر تواترا الرضاعة، كلما كان ذلك أفضل.
   6. معايرة معدل تسليم المضخة عن طريق تحويل يدويا على PMT لفترة محددة (على سبيل المثال، 1 دقيقة) وجمع الطحالب أنه يضخ خلال هذه الفترة إلى الاسطوانة أو الكأس. على سبيل المثال، إذا كان جرعات PMT 5 مل من الطحالب في 1 دقيقة، ثم معدل الجرعة ستكون5 مل الطحالب / دقيقة.
   7. حساب معدل التغذية اليومي المطلوبة بضرب عدد من الدوارات الحالية، في الملايين، بنسبة 1.6 مل. على سبيل المثال، فإن ثقافة حيدة الخلية والروتيفر مع حجم السكان من 100 مليون الدوارات تتطلب ~ 160 مل من العلف يوميا (100 × 1.6 مل).
   8. تعيين PMT إلى إعطاء جرعات من مجموع الاحتياجات العلف اليومي على فترات منتظمة طوال فترة 24 ساعة. على سبيل المثال، يمكن أن يتم تسليمها الولادة من إجمالي كمية العلف اليومي من 160 مل في أجزاء مرة واحدة كل ساعة 3 خلال فترة 24 ساعة باستخدام مجموعة PMT مع معدل ضخ جرعات من 5 مل / دقيقة لمدة 4 دقائق، 8 مرات يوميا (5 مل / دقيقة × 4 دقيقة = 20 مل × 8 = 160 مل الرضاعة).
   9. السماح للثقافة أن تنمو حتى يولد السكان المطلوب، وعادة 48-72 ساعة، قبل الحصاد. في 24 ساعة بعد بدء، إضافة مرشحات الجسيمات الخيط إلى سفينة الثقافة والبدء الصيانة العادية.
4. صيانة
   ملاحظة: الثقافة تعمل على أساس مستمر ويتطلب routinالصيانة الإلكترونية التي ينبغي من الناحية المثالية أن يؤديها في نفس الوقت كل يوم، في التسلسل التالي.
   1. ملء FCV إلى 90٪ من حجم المتاحة مع نظيفة، إزالة الكلور المياه العذبة، مداوي مع 10 جم / لتر أملاح الحوض. تأكد من أن الماء هو تمتزج جيدا، وأن كل من الملح يذوب تماما. ضبط تدفق الهواء في الإناء بحيث تحافظ على "الغليان". قياس الملوحة مع الإنكسار والتأكد من أن الملوحة 10 غرام / L. فمن الأهمية بمكان لتحقيق هذا الهدف ولا تزيد على ذلك.
   2. أخذ عينات من الدوارات في السيرة الذاتية: تأكد من أن الثقافة هي جيدة الامتزاج، ثم جمع 3 عينات من 2-3 مل لكل منهما باستخدام ماصة نقل أو autopipettor، من مناطق مختلفة من الثقافة. الجمع بين هذه العينات في أنبوب أو قارورة من حجم مناسب (على سبيل المثال، 10 مل).
   3. نقل 1-2 مل من العينة مجتمعة على طبق بتري بحيث يمكن تصور تحت المجهر تشريح. تحقق من جودة الثقافة (السباحة سلوكالدوارات، وجود البيض منفصلة، ​​وتلويث البروتوزوا).
   4. لشل حركة الدوارات في العينة مجتمعة المتبقية عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من 50٪ Lugols محلول اليود إلى العينة. في غضون ثوان بعد إضافة Lugols، ومراقبة الدوارات لوقف السباحة. الآن، عد بسهولة الدوارات.
      ملاحظة: الإيثانول ومواد التبييض المخفف، أو الخل يمكن استخدامها في مكان Lugols. الخل (2 قطرات / 10 مل) لديها مزايا كونه غير خطرة، لا تفقد قوتها في التخزين كما التبييض واليود حلول يمكن، وعدم جعل العقد الدوارات، لذلك تبقى الهالة من أهداب و "القدم" الموسعة و الحيوانات تبدو أكثر طبيعية.
   5. تأكد من أن العينة المختلطة جيدا (والدوارات يجمد يستقر بسرعة)، ثم سرعان ما أخذ مل عينة فرعية ~ 2 في الماصة البلاستيكية والاستغناء 1 مل في شريحة العد سيدجويك-رافتر (20 × 50 1 ملم الساحات) (الشكل 2 ). باستخدام تشريح أو مركب المجهر، والاعتماد على الدوارات سليمة ورعدد املجموع البيض تعلق على هذه الدوارات (الشكل 2). عد أكبر قدر من ناحية الشريحة عند الضرورة إلى الاعتماد ~ 100 الدوارات. حساب عدد من الدوارات لكل مل، وسجل ذلك في جدول بيانات أو دفتر.
   6. الحصاد ~ 30٪ من حجم الدوارات في السيرة الذاتية: إزالة العرض الجوي وتصفية الخيط، فتح الصمام ببطء في الجزء السفلي من السيرة الذاتية، والسماح لتدفق المياه إلى أحد هواة جمع العوالق مع شاشة شبكة 53 ميكرون. جمع المياه المتدفقة من الجزء السفلي من جامع بعد تصفية في دلو أو نزيف. استخدام لطيف لتدفق معتدلة لتجنب إتلاف الدوارات. لا تسمح الدوارات حتى يجف على الشاشة.
   7. لأسباب الثبات، فإنه من المستحسن أن إنشاء FCV مع عدد قياسي من الدوارات كل يوم. لذلك، بناء على CV الكثافة حيدة الخلية والروتيفر والحصاد حجم المعروفة، وضبط حجم إجمالي FCV لتحقيق الكثافة النهائية متناسقة (على سبيل المثال، 1500 الدوارات / مل). إضافة روتي تحصدFERS إلى FCV: بلطف نقل الدوارات من الشاشة جمع باستخدام زجاجة غسل مملوء بالماء والملح نظيفة (10-15 جم / لتر). عكس الشاشة على FCV وغسل الدوارات في FCV مع تيار لطيف من المياه المالحة. بدء PMT لتقديم الأعلاف (~ 1.57 مل لكل مليون الدوارات في اليوم) إلى FCV.
   8. فرك داخل كامل من السيرة الذاتية مع نظيفة، لينة فرشاة النايلون أو وسادة فرك.
   9. جعل مزيج جديد من 15 جم / لتر ماء عن طريق إضافة كمية مناسبة من الملح لقياس كمية المياه RO نظيفة في دلو 5 غالون ليحل محل حجم المياه المفقودة لموسم الحصاد. إضافة الملح إلى الماء في دلو ويحرك بقوة حتى يذوب تماما، ثم تضاف إلى السيرة الذاتية.
   10. استخدام رذاذ الضغط العالي في بالوعة، وشطف تصفية الخيط حتى أنها خالية من الحطام، ومن ثم إعادته إلى السيرة الذاتية.
   11. ضبط معدلات التغذية من الطحالب تسليمها إلى السيرة الذاتية عن طريق تغيير مدة كل حدث الجرعات، وفقا لتعداد اليومي من الدوارات / مل.استخدام العمليات الحسابية المقدمة في خطوة 1.3.8، أعلاه لتحديد كمية مناسبة من العلف ليتم تسليمها.
   12. وبعد نحو 24 ساعة، وتكرار هذه العملية. تبدأ من خلال حصاد الدوارات المتبقية في FCV (أنه لا توجد حاجة لليوم السابق) بنفس الطريقة كما هو موضح أعلاه (الخطوات 1.4.2 - 1.4.10). التركيز عليها في 2 لتر من المياه العذبة، نظيفة إزالة الكلور (5 ز / L الملح). ويمكن تخزينها في 4 ° C باعتبارها إمدادات النسخ الاحتياطي، أو تستخدم لتغذية مراحل لاحقة من الأسماك، وراء ما يوصف في هذا البروتوكول.
       ملاحظة: هذا البروتوكول يسمح ما يصل إلى 2-3 أيام من خفض صيانة الثقافة (مع التغذية التلقائية العادية)، وذلك لأن الدوارات في السيرة الذاتية يمكن أن يتسامح مع إغفال المحاصيل دون عواقب وخيمة.

2. الاستزراع متعدد الأنواع

1. التثبيت
   1. جمع الأجنة الزرد عن حدث التبويض عن طريق سكب أجنة ولدت من خلال الشاي مصفاة ثم الشطف بلطف مع الجبهة الاسلامية للانقاذ معقمةح الماء (أو أي مصدر آخر غير الملوثة من حل مكيفة بشكل مناسب، على سبيل المثال، المتوسط ​​الجنين، E3، وما إلى ذلك) من زجاجة غسل في أطباق بتري.
   2. احتضان الأجنة في 25-28 درجة مئوية في أطباق بتري في مناطق ذات كثافة من 40-50 الأجنة في طبق لمدة 5 أيام.
   3. تبدأ المرحلة متعدد الأنواع في يوم 5 بعد الإخصاب، أو عندما يزيد عن 90٪ من اليرقات والسباحة بنشاط في عمود الماء.
2. تلقيح
   1. إضافة 500 مل من ثقافة حيدة الخلية والروتيفر مباشرة من FCV إلى خزان الحضانة 3.5 L؛ إدراج المياه ثقافة حيدة الخلية والروتيفر يوفر تغذية الطحالب التي تحافظ على المحتوى الغذائي من خلال الدوارات متعدد الأنواع.
   2. صب بلطف اليرقات من طبق بتري واحد في خزان الحضانة. ضمان عدم وجود اليرقات لا تزال في الطبق.
   3. إضافة 500 مل من المياه النظيفة والأسماك مكيفة من نظام إعادة تدوير أو مصدر للمياه مخصص لخزان للوصول إلى الحجم النهائي من 1 L والصورة النهائيةalinity من 5 ز / L.
      ملاحظة: هذه الملوحة أمر بالغ الأهمية لبقاء اليرقات الزرد وسوف تتأثر سلبا إذا الملوحة> 7 ز / ​​L والبقاء على قيد الحياة حيدة الخلية والروتيفر ستتأثر سلبا إذا الملوحة <2 ز / L.
3. مرحلة الاستزراع متعدد الأنواع
   ملاحظة: يجب أن تستمر المرحلة متعدد الأنواع لمدة تصل إلى 4 أيام بعد التلقيح (أي ما مجموعه 5 أيام، الموافق 5-9 أيام بعد الإخصاب).
   1. مراقبة الخزان متعدد الأنواع مرة واحدة يوميا على الأقل خلال هذه الفترة لضمان الدوارات والأسماك موجودة ومتنامية. تأكد من أن الدوارات واضحة في جميع أنحاء عمود الماء. تأكد من أن لfishs واضحة أيضا في عمود الماء، والسباحة بين الدوارات.
   2. بدء تدفق المياه الطبيعي عن طريق الخزان. وضع الشاشة أو يربك عبر منفذ استنزاف لضمان أن اليرقات لا يخرجوا من الخزان.
      ملاحظة: في نهاية هذه المرحلة، فإن الأسماك تكون كبيرة بما يكفي لاستهلاك المواد فريسة أكبر مثل الأرتيمياتغذية بنود البعد يرقية أو معالجتها في نطاق حجم 75-125 ميكرون.
      ملاحظة: تم قياس ديناميات السكان حيدة الخلية والروتيفر في خزان متعدد الأنواع تمثيلي عن طريق اخذ عينات / عد الدوارات من الخزان بنفس الطريقة كما هو موضح في الخطوات 1.4.2 - 1.4.5. وقد تم ذلك مرة واحدة يوميا من بداية مرحلة الاستزراع متعدد الأنواع حتى تم الانتهاء منه.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

النظام الثقافة حيدة الخلية والروتيفر المستمر الموصوفة هنا هو دينامية، وأنه من الطبيعي لأعداد حيدة الخلية والروتيفر لتتقلب إلى حد صغير مع مرور الوقت إذا كان هناك اختلافات في معدلات التغذية والحصاد اليومي. سكان الدوارات في واحدة من الثقافات العاملة...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

التنفيذ الناجح لأسلوب متعدد الأنواع حيدة الخلية والروتيفر لتغذية أوائل الزرد اليرقات يتطلب بروتوكولات فعالة لمهمتين: إنشاء وصيانة نظام الثقافة حيدة الخلية والروتيفر المستمر لتغذية الأسماك، وزراعة تغذية أول اليرقات الزرد جنبا إلى جنب مع الدوارات في الدبابة نفسها. ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rotifer Culture Infrastructure
100 L Culture Vessel	Aquaneering	Custom	Polycarbonate culture vessel, conical bottomed, with drain valve
5 Gallon Culture Bucket Kit	Reed Mariculture	CCS Starter Kit	Small volume culture vessel for small facilities
Rigid Clear Tubing 1/2" O.D., 36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Rigid clear tubing for air delivery
Mesh tube	Pentair Aquatic Ecosystems	RT444X	Mesh tube support for floss filter
Rotifer Floss	Reed Mariculture	Rotifer floss 12” x 42”	Particulate waste trap
Peristaltic Metering Timer Pump, 5 GPD	Grainger	38M003	Metering pump with timer for dosing feed to rotifers
Peristaltic Metering Timer Pump, 1-100 mL/hr (for smaller-scale culture)	Coral Vue	SKU: IC-LQD-DSR	Metering pump with timer for dosing feed to rotifers
Silicone Tubing	Cole Parmer		Tubing for algae delivery to rotifer vessel
Rigid Clear Tubing " O.D.,36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Rigid clear tubing for air delivery to algae paste
Rigid Clear Tubing O.D., 36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Rigid clear tubing for algae delivery
Rotifers
Live Rotifers Brachionus plicatilis Type L	Reed Mariculture	Type L 5 million	Rotifer stock culture for system startup
Rotifer Feed
Sodium hydroxymethylsulfonate	Reed Mariculture	ClorAm-X® 1lb tub	Ammonia reducer for algae feed mix
Sodium Bicarbonate	Fisher Scientific	S25533B	pH buffer for algae feed mix
Microalgae concentrate	Reed Mariculture	Rotigrow Plus® 1 liter bag	Nutritionally optimized rotifer feed
RG Complete	Reed Mariculture	RG Complete 6 oz bottle	All in one microalgae based feed for small scale cultures
Water Preparation
Reef Crystals Reef Salt	That Fish Place	198210	Salt for making culture water (NOTE: this item is an example only; any contaminant free salt formulations may be used).
Refractometer	Pentair Aquatic Ecosystems	SR6	measuring salinity
Rotifer Culture Equipment
Plankton Collectors 12" Dia, 53 microns	Pentair Aquatic Ecosystems	BBPC20	Mesh screen for collecting rotifers
Scrub Pads	Pentair Aquatic Ecosystems	SCR-58	Scrub pad for cleaning inside of culturing vessels
Scrub Brush
Bucket	Grainger Supply	43Y530	Graduated bucket for mixing culture water
Hatching Jar	Pentair Aquatic Ecosystems	J30	Storage of algae feed mix
Lugol’s Solution, Dilute	Fisher Scientific	S99481	Agent used to immobilize live rotifers for counting
Sedgewick-Rafter plankton counting slide with grid	Pentair Aquatic Eco-Systems	M415	Counting rotifers
Miscelleneous
Tea Strainer	Kitchenworks	971972	Used for collecting zebrafish embryos after spawning