الجمع بين الفحص المجهري نيون إينترافيتال (إيففم) مع النماذج الوراثية لدراسة ديناميات Engraftment الخلايا المكونة للدم لمنافذ نخاع العظام

Lin Wang; Malgorzata M. Kamocka; Amy Zollman; Nadia Carlesso

doi:10.3791/54253

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Method Article

الجمع بين الفحص المجهري نيون إينترافيتال (إيففم) مع النماذج الوراثية لدراسة ديناميات Engraftment الخلايا المكونة للدم لمنافذ نخاع العظام

DOI:

10.3791/54253

⸱

March 21st, 2017

Lin Wang*¹, Malgorzata M. Kamocka*², Amy Zollman³, Nadia Carlesso³

¹Wells Center for Pediatric Research, Department of Pediatrics, Indiana University School of Medicine, ²Indiana Center for Biological Microscopy, Department of Medicine, Indiana University School of Medicine, ³Department of Pediatrics, Indiana University School of Medicine

* These authors contributed equally

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Summary

يتم تطبيق مجهرية الأسفار إينترافيتال (إيففم) كالفاريوم في تركيبة مع الوراثية نماذج حيوانية لدراسة صاروخ موجه وانجرافتمينت من الخلايا المكونة للدم في نخاع العظم (بي أم) منافذ.

Abstract

أدلة متزايدة تشير إلى أن هيماتوبويسيس طبيعية وينظم العظة ميكرونفيرونمينتال متميزة في بي أم، التي تشمل منافذ الخلوية المتخصصة تحوير الوظائف الحيوية من الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSC)¹^،². وفي الواقع، صورة أكثر تفصيلاً عن المكروية المكونة للدم يظهر الآن، التي تشكل بطانة العظم وعلى منافذ غشائي الوحدات الوظيفية لتنظيم HSC العادي وعلى ذرية³^،⁴^،⁵. وأظهرت الدراسات الجديدة أهمية ارتشاح الخلايا، adipocytes والخلايا العصبية في الحفاظ على وتنظم HSC الدالة⁶^،^،من⁷⁸. وعلاوة على ذلك، هناك أدلة على أن الخلايا من الأنساب المختلفة، أي من الخلايا النقوي واللمفاوية، والمنزل، ويقيمون في منافذ محددة داخل المكروية BM. تعيين كامل المكروية BM وركابها غير قيد التقدم.

السلالات المحورة وراثيا الماوس يعبر عن النسب المحددة علامات مضيئة أو الفئران المهندسة وراثيا إلى الافتقار إلى جزيئات المحدد في خلايا معينة من مكانة BM متوفرة الآن. المغلوب والنسب تتبع النماذج، في تركيبة مع النهج زرع الأعضاء، وتوفير الفرصة لصقل المعارف بشأن دور محدد "المتخصصة" الخلايا لتعريف السكان المكونة للدم، مثل HSC، ب-الخلايا، خلايا تي، الخلايا النقوي و خلايا محمر. يمكن أن تكون هذه الاستراتيجية potentiated كذلك بدمج استخدام اثنين-فوتون الفحص المجهري كالفاريوم. بتوفير في فيفو تصوير عالية الدقة والتقديم ثلاثية الأبعاد من كالفاريوم بي أم، ونحن الآن تحديد دقة موقع حيث الرئيسية في بي أم في المجموعات الفرعية المكونة للدم محددة وتقييم حركية توسعها على مر الزمن. هنا، يتم استخدام ليز-بروتينات فلورية خضراء الفئران المحورة وراثيا (تمييز الخلايا النقوي)⁹ ورببج الفئران المغلوب (ينقصها الإشارات الشق الكنسي)¹⁰ في تركيبة مع إيففم لتحديد engraftment الخلايا النقوي إلى المكروية BM معيبة درجة.

Introduction

مجهر الأسفار مولتيفوتون إينترافيتال (إيففم) هو تقنية تصوير قوية تسمح لعاليه الدقة في الوقت الحقيقي، والتصوير من الأنسجة بعمق يصل إلى 1 مم، اعتماداً على الأنسجة. عندما يطبق على كالفاريوم الماوس، يسمح بمراقبة سلوك الخلايا المكونة للدم داخل BM بطريقة غير الغازية يصل إلى 60-100 ميكرومتر¹¹. يتم استخدام هذا النهج هنا لتحديد حركية engraftment المتكفل النقوي العادي في الفئران المغلوب BM رببج تفتقر إلى إشارات الشق الكنسي.

العمل مؤخرا من مجموعتنا أثبتت أن عيب المتعارف عليه الشق إشارات يؤدي المكروية BM ل مرض مثل ميلوبروليفيراتيفي¹². حصل فقدان الإشارات الشق شرطية حذف مجال رببج، عامل النسخ الحرجة المصب الش....