JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

A method to establish an in vitro model of blood-brain barrier based on a co-culture of rat brain microvascular endothelial cells and astrocytes is described and validated. This system proved to be a valid tool to study the effect of nanoformulation on the trans-barrier permeation of fluorescent molecules.

Abstract

Brain microvascular endothelial cells, supported by pericytes and astrocytes endfeet, are responsible for the low permeation of large hydrosoluble drugs through the blood-brain barrier (BBB), causing difficulties for effective pharmacological therapies. In recent years, different strategies for promoting brain targeting have aimed to improve drug delivery and activity at this site, including innovative nanosystems for drug delivery across the BBB. In this context, an in vitro approach based on a simplified cellular model of the BBB provides a useful tool to investigate the effect of nanoformulations on the trans-BBB permeation of molecules. This study describes the development of a double-layer BBB, consisting of co-cultured commercially available primary rat brain microvascular endothelial cells and astrocytes. A multiparametric approach for the validation of the model, based on the measurement of the transendothelial electrical resistance and the apparent permeability of a high molecular weight dextran, is also described. As proof of concept for the employment of this BBB model to study the effect of different nanoformulations on the translocation of fluorescent molecules across the barrier, we describe the use of fluorescein isothiocyanate (FITC), loaded into ferritin nanoparticles. The ability of ferritins to improve the trans-BBB permeation of FITC was demonstrated by flux measurements and confocal microscopy analyses. The results suggest this is a useful system for validating nanosystems for delivery of drugs across the BBB.

Introduction

المقاومة من الجهاز العصبي المركزي (CNS) الأمراض (أي السرطان والصرع والاكتئاب وانفصام الشخصية وما يرتبط بها من فيروس نقص المناعة البشرية اضطراب عصبي) إلى العلاجات الدوائية ويرجع ذلك إلى آليات مختلفة مختلفة، بما في ذلك تخلل المخدرات شاقة عبر حاجز الدم في الدماغ (BBB) . بي بي بي هي الحدود التي تعزل أنسجة الدماغ من المواد في الدم. ضمن هذا الحاجز، وطبقة من خلايا الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ البطانية (BMECs)، بدعم من pericytes وendfeet النجمية، هي المسؤولة عن الانتقائية العالية من BBB إلى تلك العقاقير ذواب بالماء ذات وزن جزيئي أعلى من 400 دا 1. يرتبط آلية أخرى مقاومة ذات الصلة بالمخدرات وجود على BMECs من الناقلين هروب رأس المال المخدرات (P-بروتين سكري والمقاومة للأدوية المتعددة البروتينات)، التي تتعاون للحد من انتشار المخدرات في الجهاز العصبي المركزي وتسهيل قذف بهم من الدماغ 2.

في العقد الماضيوقد تم وضع عدد كبير من نهج تقنية النانو لمواجهة التحدي السريرية والبيولوجية لإيصال المخدرات عبر BBB 3-6. في هذا السياق، nanospheres الفيرتين (FNN) تمثل حلا مبتكرا تماما واعد. FNN هي 12 نانومتر المجالات من 24 الفيريتين الذاتي تجميع (الجبهة الوطنية) أحادية، والتي يتم ترتيبها في هيكل كروي مجوف من 8 القطر الداخلي نانومتر. مفارز الفيرتين يمكن تفكيكها في درجة الحموضة الحمضية وتجميعها في شكل أزياء الذاكرة من خلال جلب الرقم الهيدروجيني إلى الحياد، والسماح مختلف الجزيئات العضوية إلى المغلفة. لذلك، FNN تمثل نموذجا للاهتمام لتطوير متعددة الوظائف تسليم المخدرات الأنظمة 7،8. وعلاوة على ذلك، قد FNN التفاعل مع BMECs بفضل الاعتراف معين من ترانسفيرين مستقبلات (معدل الخصوبة الاجمالي) 1، وهو ما يعبر عنه على الغشاء اللمعية من هذه الخلايا 9.

حتى الآن، وقد وضعت مختلف نماذج في المختبر من BBB في أورديr لتوضيح العابرة للBBB نفاذية لمختلف انواع المخدرات، سمية تجاه BBB، أو تفاعل الجزيئات مع الناقلين هروب رأس المال. في الواقع، تعتبر هذه النماذج صالحة في المختبر النهج لفحص السريع من الجزيئات النشطة قبل الشروع في الدراسات المجراة. وتتألف هذه النماذج من طبقة واحدة من البطانية BMECs أو المشارك مثقف BMECs والخلايا النجمية (أكثر نادرا pericytes)، تم الحصول عليها من الحيوانات (الجرذان والفئران والخنازير والأبقار) أو خطوط الخلايا البشرية 10،11،12. وTransEndothelial المقاومة الكهربائية (طير) والنفاذية واضحة (P التطبيق) من استشفاف مع الوزن الجزيئي محددة تمثل معلمتين الحرجة التي تستخدم لتحديد نوعية النموذج في المختبر. نحن هنا وصف العمل لفي المختبر نموذج BBB، استنادا إلى ثقافة مشتركة من الفئران BMECs (RBMECs) والفئران الخلايا النجمية القشرية (تقييمات النتائج والكفاءات) لدراسة تخلل العابر للBBB من قفص نانوي الفيرتين التغليف isothi فلوريسئينocyanate (FITC).

Protocol

1. إنشاء نموذج BBB

ملاحظة: لإنشاء نموذج BBB نقترح استخدام RBMECs الأولية المتاحة تجاريا وتقييمات النتائج والكفاءات. يجب تنفيذ جميع الخطوات مع الكواشف والمستهلكات العقيمة، والتعامل معها في غطاء تدفق الصفحي.

  1. زراعة الخلايا
    1. معطف قوارير زراعة الخلايا مع بولي-L-ليسين 100 ميكروغرام / مل (1 ساعة على RT) أو فبرونيكتين 50 ميكروغرام / مل (1 ساعة على 37 درجة مئوية) لتعزيز مرفق من تقييمات النتائج والكفاءات أو RBMECs، على التوالي. ثم، ذوبان الجليد 1 × 10 6 تقييمات النتائج والكفاءات و5 × 10 5 RBMECs في البطانية المتوسطة الخلية، على أن تستكمل مع 5٪ مصل بقري جنيني، 1٪ تكملة نمو الخلايا البطانية و 1٪ البنسلين / الستربتومايسين (SECM). تقييمات النتائج والكفاءات البذور في قارورة T175 في 20 مل SECM وRBMECs في قارورة T75 في 10 مل SECM.
      ملاحظة: يجب أن يتم تعديل ذوبان الجليد والممرات البذر من تقييمات النتائج والكفاءات وRBMECs، من حيث كثافة الخلايا والوقت في الثقافة، وفقا لعدد من الظروف التجريبية لفحصها مع النموذج BBB. قبل بدايةجي مع 1 قارورة من 1 × 10 6 تقييمات النتائج والكفاءات و1 قنينة من 5 × 10 5 RBMECs، فمن الممكن الحصول على ما يصل إلى 20 إدراج BBB الحاملة.
    2. الحفاظ على الخلايا عند 37 درجة مئوية و CO 2 في الغلاف الجوي مرطب لحوالي 6 أيام 5٪ إلى حوالي 80٪ التقاء لتقييمات النتائج والكفاءات وأكثر من 90٪ التقاء لRBMECs. فصل الخلايا باستخدام حل التربسين-EDTA (التربسين 1: 250) لمدة 5 دقائق (1 مل التربسين لقوارير T75 و 2 مل لقوارير T175). وقف النشاط التربسين مع SECM (2: 1)، تعليق خلية الطرد المركزي في 750 × ز لمدة 5 دقائق و resuspend الكريات في 60 مل SECM.
    3. تقسيم RBMECs إلى 3 قوارير T175 والثقافة في SECM لمدة 3 أيام أخرى قبل البذر على إدراج. عد عدد من يعيشون تقييمات النتائج والكفاءات، من خلال مراقبة تعليق خلية المخفف 1: 1 مع الأزرق التريبان تحت المجهر الضوئي في غرفة Burker.
  2. البذر الخلية على إدراجات
    1. علاج جانب واحد من البولي إثيلين (PET) غشاء transpar 6 متعددة أيضاإدراج والأنف والحنجرة مع بولي-L-ليسين 100 ميكروغرام / مل وعلى الجانب الآخر مع فبرونيكتين 50 ميكروغرام / مل، للسماح الحجز على تقييمات النتائج والكفاءات وBMECs. التعامل مع إدراج مع ملاقط من أجل تجنب الاتصال مع غشاء PET.
      1. وضع تدرج في لوحة 6 جيدا وإضافة محلول فبرونيكتين (الحد الأدنى 500 ميكرولتر) في مجلس الشيوخ. بعد 1 ساعة من الحضانة عند 37 درجة مئوية، وإزالة حل فبرونيكتين، واتخاذ إدراج قبالة لوحة متعددة جيدا ووضعها رأسا على عقب على الجزء السفلي من 150 سم طبق 2 بيتري، والذي يستخدم هنا كدعم معقم لل المغلفة بالفعل إدراج.
      2. إضافة بلطف 800 ميكرولتر من بولي-L-يسين على الجانب السفلي من إدراج (كما هو موضح في الشكل 1A، يشار إلى تقييمات النتائج والكفاءات البذر)، والحفاظ على حل على إدراج لمدة 1 ساعة على RT.
      3. نضح الحل والسماح للإدراج الجافة في RT مدة 15-30 دقيقة. يدرج هي الآن جاهزة للزرع الخلايا، ولكن يمكن أيضا أن يتم تخزينها في لوحة متعددة جيدا لعدةأيام في 4 درجات مئوية، وذلك قبل الشروع في البناء BBB.
        ملاحظة: تذكر أن تحافظ على الأقل 3 إدراج المغلفة خالية من الخلايا، لاستخدامها الضوابط للتحقق من صحة إنشاء BBB من قبل FD40 قياسات التدفق.
    2. تقييمات النتائج والكفاءات البذور (35000 / سم 2) على الجانب السفلي من إدراج المغلفة بولي-L-ليسين، من خلال إسقاط 800 ميكرولتر من تعليق على الخلية رأسا على عقب إدراج (الشكل 1A). ترك تعليق RCA على إدراج لمدة 4 ساعة على RT، من أجل السماح للمرفق كفاءة الخلايا لغشاء.
    3. نضح الحل المتبقية، ضع تدرج في الآبار التي تحتوي على 2 مل من SECM والحفاظ على لوحة متعددة جيدا عند 37 درجة مئوية وCO 2 5٪ في جو مرطب، وتغيير SECM كل أيام 2.
    4. بعد 3 أيام، عندما المغلفة تقييمات النتائج والكفاءات الوجه السفلي للإدراج، RBMECs البذور على الجانب العلوي من إدراج، باتباع الخطوات التالية:
      1. فصل RBMECs من قوارير T175 وعدمجموع الخلايا الحية، كما ورد في خطوات 1.1.2 و 1.1.3.
      2. RBMECs البذور (60000 / سم 2) على السطح العلوي للإدراج في SECM (1000 ميكرولتر) (الشكل 1B)، وترك 3 إدراج مع الخلايا النجمية فقط، لاستخدامها طير الخلفية. وضع لوحة متعددة جيدا في ظروف ثقافة القياسية. الحفاظ على نظام للثقافة لمدة 3 أيام على الأقل، وتغيير SECM في الغرفة الداخلية وانخفاض كل أيام 2.

2. التحقق من صحة BBB

  1. قياس طير
    1. في يوم 3 الثالثة وثقافة مشتركة، والتحقق من طير عن طريق إدراج إدراج BBB الحاملة الى غرفة المناسبة (التي لديها سقف واذا كان كل من غرفة وغطاء تحتوي على زوج من الجهد الاستشعار عن بعد والأقطاب الكهربائية الحالية)، مليئة 4 مل من SECM. اتصال الظهارية فولت الأنسجة / جهاز قياس المقاومة.
    2. جنبا إلى جنب مع القياسات طير الخلية BBB-أنظمة، تسجيل القيم طير من 3 إدراج تحمل تقييمات النتائج والكفاءات عشرفي سوف تطرح من القيم التي تم الحصول عليها مع BBBS. ضرب القيم طير الناجم عن سطح إدراج (4.2 سم 2) من أجل التعبير عن النتائج على النحو Ω س سم 2.
    3. من يوم 3 الثالثة وثقافة مشتركة، وقياس طير كل يوم. ملاحظة: بعد فترة أولية حيث يزيد من طير، وينبغي أن تظل القيم المسجلة مستقر لمدة سنتين على الأقل أيام متتالية (عادة ما بين ال 5 واليوم ال 7 من شارك في الثقافة). في هذه النقطة BBB مستعدة للخطوة الثانية من التحقق من صحة (القسم 2.2) و / أو التجارب العابرة للBBB.
      ملاحظة: الإجراء هو موضح في القسم 2.1 لا يمكن أن يؤديها على نفس BBB-نظم المكرسة ل(القسم 3) التجارب نفاذية التالية. تعمل تحت ظروف معقمة.
  2. عبر BBB الجريان من FITC-ديكستران 40 (FD40)
    1. قياس تدفق FD40 من الأعلى إلى مجلس النواب من النماذج BBB مقارنة بما كان عليه في 3 إدراج فارغة(راجع الملاحظة من القسم 1.2.1) وفقا للخطوات التالية:
      1. إضافة 1 ملغ / مل FD40 (المخفف في SECM) في حجرة العليا من BBBS، وبعد 1 و 2 و 3 ساعة سحب 200 ميكرولتر SECM من مجلس النواب وقياس كثافة مضان من قبل spectrofluorimeter (λ السابق 488 نانومتر، λ م 515 نانومتر، شق 5).
      2. الحصول على قيم SECM خلفية fluorescenceby قياس 500 ميكرولتر من المتوسطة البكر باستخدام نفس المعايير التحليلية. طرح مضان الخلفية SECM من كل القيم مضان FD40.
      3. تحديد مقدار FD40 تعم من خلال المقارنة بين القيم مضان لوحظ مع منحنى المعايرة المنتجة مع تركيزات المعروفة (أي 0.312، 0.625، 1.25، 2.5 ميكروغرام / مل) من التتبع الفلورسنت المذاب في 500 ميكرولتر من SECM.
      4. حساب معامل نفاذية واضح (P التطبيق) من قيم التدفق يعني فقا لما يلي:
        P التطبيق = J / AC
        حيث J هو تدفق جزيء (الشامات / ثانية)، A هي مساحة تخلل (سم 2) وC هو تركيز جزيء في المقصورة العليا (الشامات / سم 3).
        ملاحظة: ثلاثة أو أكثر من BBB-النظم التي وصلت قيم طير مناسبة، يجب أن يخصص حصرا لهذا الإجراء التحقق من صحة، وينبغي ألا تستخدم للتجارب نفاذية التالية (القسم 3). العقم ليس إلزاميا.

3. تخلل من Ferritins تحميل FITC (FNN) عبر BBB

ملاحظة: البديل المؤتلف من الفيريتين الإنسان (الجبهة الوطنية)، التي تنتج في القولونية وتجميعها في قفص نانوي (FNN) لتغليف جزيئات الفلورسنت مختلفة، متاح من NanoBioLab الأستاذ بروسبيري (جامعة ميلانو بيكوكا، إيطاليا). يتم تحميل FNN مع FITC، وفقا لبروتوكول سبق وصفها 13 و تركيزات كل من الجبهة الوطنية والجزيئات تحميل وdetermin بدقةأد.

  1. عبر BBB الجريان من FITC وFITC-FNN
    1. قياس تدفق FITC-FNN من الأعلى إلى مجلس النواب من نماذج BBB التحقق من صحة (عادة في 5 تشرين - يوم ال 7 من شارك في ثقافة)، مقارنة بما كان عليه الصبغة حرة بعد 7 و 24 ساعة من الحضانة، وفقا ل الخطوات التالية:
      1. إضافة FITC-FNN (50 ميكروغرام / مل FNN، 1.1 ميكرومتر FITC) أو مبلغا مساويا لحرية FITC في مجلس الشيوخ لا يقل عن 6 أنظمة BBB لكل صياغة، من أجل سحب 2 مل من محلول SECM من مجلس النواب من على الأقل 3 إدراج بعد 7 ساعات، ومن مجلس النواب من 3 إدراج أخرى بعد 24 ساعة.
      2. قياس كثافة مضان من 500 ميكرولتر من العينات التي تم جمعها spectrofluorimeter (λ السابق 488 نانومتر، λ م 515 نانومتر، شق 5).
      3. الحصول على مضان خلفية SECM عن طريق قياس 500 ميكرولتر من المتوسط ​​باستخدام نفس المعايير التحليلية. طرح مضان الخلفية SECMمن كل القيم مضان FITC أو FITC-FNN.
      4. تحديد تركيز تعم FITC أو FITC-FNN بمقارنة القيم مضان الحصول عليها مع اثنين من منحنيات المعايرة المختلفة المنتجة مع تركيزات المعروفة (أي 6.87، 13.75، 27.5، 55 نانومتر) من الصبغة مجانا أو nanoformulated المذاب في 500 SECM ميكرولتر.
  2. FITC-FNN التعريب في RBMECs
    1. إزالة SECM من الغرفة العليا من أنظمة BBB، وغسل إدراج مع برنامج تلفزيوني وإصلاح RBMECs على اثنين على الأقل إدراج لكل المجموعة التجريبية وذلك بإضافة 500 ميكرولتر بارافورمالدهيد (4٪ في الفوسفات عازلة المالحة PBS) في المقصورة العليا لل10 دقيقة في RT.
    2. غسل إدراج ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني لإزالة امتصاص العرق المتبقي.
      ملاحظة: من هذه النقطة، والعقم ليس من الضروري.
    3. قطع قطع مناسبة للغشاء PET، والمضي قدما في immunodecoration من الخلايا وفقا للخطوات التالية:
      1. Permeabiليز RBMECs مع 0.1٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة. إجراء خطوة حجب لمدة 1 ساعة على RT مع محلول يحتوي على 2٪ ألبومين المصل البقري (BSA)، 2٪ مصل الماعز في برنامج تلفزيوني. احتضان هذه العينات مع مضاد للعامل فون ويل براند (VWF) في 1:20 التخفيف، لمدة 2 ساعة على RT.
      2. بعد غسل ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني، وتعريض الخلايا لمدة 2 ساعة على RT لجيش صرب البوسنة 2٪ و 2٪ من محلول المصل الماعز يحتوي على الأجسام المضادة الثانوية مناسبة في التخفيف 1: 300 وذلك للكشف عن مكافحة VWR، ودابي في 1: 1500 تخفيف للكشف نوى.
    4. تركيب قطع إدراج على الشرائح المجهر باستخدام تصاعد antifade حل (قطرة واحدة في إدراج جزء)، ثم أغلق عينة مع انزلاق الغطاء. تحليل بواسطة المجهر متحد البؤر باستخدام عدسة الغمر النفط في 40X التكبير، 1.5 التكبير و1،024 X 1024 بيكسل.

النتائج

خلال إنشاء نموذج BBB، مرفق الخلية والنمو على إدراج يمكن رصدها باستخدام المجهر الخفيفة وذلك بفضل طبيعة شفافة من الأغشية PET. تقييمات النتائج والكفاءات، المصنف في مناطق ذات كثافة من 35،000 خلية / سم 2، ونعلق بكفاءة إلى الجانب السفلي من إدراج بعد 4 ساعا...

Discussion

الأسلوب في المختبر الموصوفة هنا يمثل نهجا التحقق من المفيد دراسة تقديم العابر للBBB من جزيئات الفلورسنت على nanoformulation مع النانوية. هنا نستخدم FNN، وهو ما يمثل مرشح جيد لدراسة النبات من الجزيئات البضائع عبر BBB. يعتبر FNN وnanovector الذهب العابرة للBBB تسليم المخدرات / وكلاء ?...

Disclosures

The authors declare that they have no competing financial interests.

Acknowledgements

The authors acknowledge Assessorato alla Sanità, Regione Lombardia and Sacco Hospital (NanoMeDia Project) for research funding.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Rat Brain Microvascular Endothelial Cells InnoprotP10308isolated from Sprague Dawley rat brain tissue, cryopreserved at passage one and delivered frozen
Cortical Astrocytes InnoprotP10202isolated from 2 days rat brain tissue, cryopreserved at passage one and delivered frozen.
Endothelial Cell Medium kitInnoprotP60104ECM (500 ml) and fetal bovin serum (25 ml), endothelial cell growth supplement (5 ml) and penicillin/streptomycin (5 ml). Warm in 37 °C water bath before use and protect from light
Trypsin-EDTA without Phenol RedEuroCloneECM0920DWarm in 37 °C water bath before use
Fluorescein isothiocyanate-dextran 40,000SigmaFD40Sprotect from light
paraformaldehyde Sigma158127diluition in chemical hood
Dulbecco's phosphate buffer saline w/o Ca and MgEuroCloneECB4004L
Triton X-100SigmaT8787
bovine serum albumin SigmaA7906
goat serum EuroCloneECS0200D
mouse monoclonal anti-Von Willebrand FactorDakoM0616
AlexaFluor 546-conjugated antibody against mouse IgGsThermoFischer ScientificA-11003protect from light
DAPI (4’ ,6-diamidino-2-phenylindole) ThermoFischer ScientificD1306protect from light
ProLong Gold Antifade MountantThermoFischer ScientificP36934
Poly-L-lysine HydrobromideSigmaP1274the same solution can be used several times
fibronectin from bovine plasma SigmaF1141the same solution can be used several times
Polyethylene terephthalate (PET) insertsFalconF3090Transparent Polyethylene terephthalate (PET) membranes; surface area: 4.2 cm2; pore size 0.4 µm/surface area
T75 Primo TC flaskEuroCloneET7076
T175 Primo TC flaskEuroCloneET7181
EVOM2 Epithelial Tissue Volt/Ohmmeter   World Precision Instruments GermanyEVOM2
Endohm- 24SNAP cupWorld Precision Instruments GermanyENDOHM-24SNAP
Light/fluorescence microscope with cameraLeica MicrosystemsDM IL LED Fluo/ ICC50 W Camera Module inverted microscope for live cells with camera 
Confocal MicroscopeLeica MicrosystemsTCS SPE
SpectrofluorimeterJascoFP-8000

References

  1. Banks, W. A. Characteristics of compounds that cross the blood-brain barrier. BMC Neurol. 9 (1), 3 (2009).
  2. Löscher, W., Potschka, H. Drug resistance in brain disease and the role of efflux transporters. Nat Rev Neurosci. 6, 591-602 (2005).
  3. Xu, G., Mahajan, S., Roy, I., Yong, K. -. T. Theranostic quantum dots for crossing blood-brain barrier in vitro and providing therapy of HIV-associated encephalopathy. Front Pharmacol. 15 (4), 140 (2013).
  4. Masserini, M. Nanoparticles for Brain Drug Delivery. ISRN Biochem. , (2013).
  5. Sagar, V., Pilakka-Kanthikeel, S., Pottathil, R., Saxena, S. K., Nair, M. Towards nanomedicines for neuroAIDS. Rev. Med. Virol. 24 (2), 103-124 (2014).
  6. Kreuter, J. Drug delivery to the central nervous system by polymeric nanoparticles: What do we know. Adv. Drug Deliver. Rev. 71, 2-14 (2014).
  7. Arosio, P., Ingrassia, R., Cavadini, P. Ferritins: a family of molecules for iron storage, antioxidation and more. Biochim. Biophys. Acta. 1790 (7), 589-599 (2009).
  8. Jääskeläinen, A., Soukka, T., Lamminmäki, U., Korpimäki, T., Virta, M. Development of a denaturation/renaturation-based production process for ferritin nanoparticles. Biotechnol. Bioeng. 102 (4), 1012-1024 (2009).
  9. Jefferies, W. A., Brandon, M. R., Hunt, S. V., Williams, A. F., Gatter, K. C., Mason, D. Y. Transferrin receptor on endothelium of brain capillaries. Nature. 312, 162-163 (1984).
  10. Deli, M. A., Abraham, C. S., Kataoka, Y., Niwa, M. Permeability studies on in vitro blood-brain barrier models: physiology, pathology, and pharmacology. Cell. Mol. Neurobiol. 25 (1), 59-127 (2005).
  11. Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier. Acta Neurobiol. Exp. (Wars). 71, 113-128 (2011).
  12. Wilhelm, I., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier for the study of drug delivery to the brain. Mol Pharm. 11 (7), 1949-1963 (2014).
  13. Bellini, M., et al. Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in Cancer Cells. J. Control. Release. 196, 184-196 (2014).
  14. Fiandra, L., et al. Nanoformulation of antiretroviral drugs enhances their penetration across the blood brain barrier in mice. Nanomedicine. 11 (6), 1387-1397 (2015).
  15. Molino, Y., Jabès, F., Lacassagne, E., Gaudin, N., Khrestchatisky, M. Setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (BBB): a focus on BBB impermeability and receptor-mediated transport. J. Vis. Exp. , e51278 (2014).
  16. Perrière, N., et al. A functional in vitro model of rat blood-brain barrier for molecular analysis of efflux transporters. Brain Res. 1150, 1-13 (2007).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

114 BBB

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved