JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

A reference measurement procedure for the absolute quantification of Aβ1-42 in human CSF based on solid-phase extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry is described.

Abstract

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disease among the elderly and accounts for 60-80% of all cases of dementia. Currently, the diagnosis of AD is based on cognitive tests and mental state exams, but the peptide amyloid-beta (Aβ) in cerebrospinal fluid (CSF) is increasingly used in clinical trials and settings. As for most protein and peptide biomarkers, quantification is performed using antibody-based techniques, such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). However, intra- and inter-laboratory variability in these assays hamper its use as a diagnostic marker in clinical routine.

An antibody-independent Reference Measurement Procedure (RMP) was developed based on solid-phase extraction (SPE) and liquid chromatography (LC)-tandem mass spectrometry (MS/MS), where stable, isotope-labeled Aβ peptides were used as internal standards, enabling absolute quantification. A high-resolution quadrupole-orbitrap hybrid instrument was used for the measurements. The method allows for the quantification of CSF Aβ1-42 between 150-4,000 pg/mL.

Introduction

مرض الزهايمر (م) هو الشكل الأكثر شيوعا من الخرف ويصيب حوالي 35 مليون شخص في جميع أنحاء العالم 1. بصمات عصبية مرضية من مرض يعتقد على نطاق واسع تكمن في جوهر م المرضية هي التشابك الليفي العصبي بين الخلايا من hyperphosphorylated بروتين تاو 2 ولويحات خارج الخلية التي تتكون من (Aβ) الببتيد 3 المجمعة اميلويد بيتا. وتماشيا مع هذا، وقد تم مؤخرا شملت تقييم أمراض الترسبات في الجسم الحي من المؤشرات الحيوية في المعايير البحوث التشخيصية لمدة 4 م. لقياس السائل النخاعي من Aβ 1-42، هي عدة المناعية المتاحة وتستخدم في العديد من المختبرات السريرية 5. تركيز Aβ 1-42 في السائل النخاعي هو أقل ما يقرب من 50٪ في المرضى ميلادي مما كانت عليه في كبار السن الطبيعي معرفيا، مما يعكس ترسب الببتيد في لويحات رعين 6 و 7.

ويتم تحليل هذه المؤشرات الحيوية بشكل رئيسي باستخدام المناعية (أي التقنيات المعتمدة الضد)، ولكن قد تتأثر هذه المقايسات من الآثار مصفوفة 8. استخدام المناعية على منصات التكنولوجيا المختلفة وعدم وجود فحص التقييس 9، 10 يجعل إدخال العالمية تركيزات قطع الصعبة 11 و 12. ومن شأن RMP التحقق من صحة تحليلي تسمح معايرة موحدة للمنصات فحص مختلفة، مما أدى مثالي في المقارنة أفضل عبر منصات التحليلية وفي تحسين السيطرة على العوامل التي تساهم في تقلب قياس العام.

الكمي المطلق للAβ 1-42 باستخدام ضعت طريقة LC-MS / MS يتغلب على العديد من القضايا المرتبطة ميتاليك القائم على الأجسام المضادةiques. سيتم استخدام طريقة، على النحو الوارد في الشرطة العسكرية الملكية من قبل اللجنة المشتركة للتتبع في طب المختبرات (JCTLM قاعدة بيانات تحديد عدد C11RMP9)، لتحديد تركيز المطلق للAβ 1-42 في المراجع معتمد (CRM) لتنسيق CSF Aβ 1 قياسات -42 عبر تقنيات ومناهج تحليلية. وينبغي أن يكون سير العمل وصفه ذات الصلة لتطوير أساليب مرشح مرجعية لالببتيدات والبروتينات داخل مناطق أخرى من الأدوية.

Protocol

ملاحظة: هذا البروتوكول يتطلب قسامات لا يقل عن 50 ميكرولتر، مع تركيز 50 ميكروغرام / مل لكل الببتيد Aβ، في بدء المواد. يجب حل الببتيد Aβ في 20٪ الأسيتونتريل (إيه سي) و 4٪ محلول الأمونيا المركزة في الماء منزوع الأيونات (ت / ت) وتخزينها في 80 درجة مئوية.

تحذير: انظر الجدول رقم 1 لمعلومات السلامة.

1. إعداد حلول

  1. إعداد 100 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ محلول الأمونيا المركزة في الماء منزوع الأيونات (ت / ت) عن طريق تمييع 20 مل من إيه سي و 4 مل من الأمونيا المركزة (~ 25٪) في الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 100 مل مع الماء منزوع الأيونات. جعل الطازجة يوميا.
  2. تجهيز 50 مل من 5 M-غوانيدين هيدروكلوريد عن طريق إذابة 26.08 غرام من غوانيدين-هيدروكلوريد في الماء منزوع الأيونات إلى الحجم النهائي من 50 مل. متجر في 20 درجة مئوية، وجعل شهرية جديدة.
  3. إعداد 200 مل من 4٪ حامض الفوسفوريك في الماء منزوع الأيونات (ت /ت) عن طريق تمييع 9.4 مل من حمض الفوسفوريك المركز (~ 85٪) في الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 200 مل مع الماء منزوع الأيونات. تخزينها في الثلاجة وجعل أسبوعية جديدة.
  4. تجهيز 50 مل من 75٪ ACN و 10٪ من محلول الأمونيا المركز (ت / ت) في الماء منزوع الأيونات عن طريق تمييع 37.5 مل من إيه سي و 5 مل من الأمونيا المركزة (~ 25٪) في الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 50 مل مع الماء منزوع الأيونات. جعل الطازجة يوميا.
  5. ذوبان الجليد لا يقل عن 2.5 مل من السائل النخاعي البشري للمعايرة، تم الحصول عليها من التي تم تحديدها دي عينات متبقية من التحليل السريري الروتيني.
  6. تحضير السائل النخاعي الاصطناعي تحتوي على 150 ملي نا، 3.0 ملي K، 1.4 ملي الكالسيوم، و 0.8 ملي المغنيسيوم، 1.0 ملم P، و 155 ملي الكلورين في الماء منزوع الأيونات وإضافة الزلال المصل البقري إلى تركيز النهائي من 4 ملغ / مل. وهناك حاجة فقط 1 مل في التحليل، ولكن إعداد حجم كبير، قسامة عليه، وتخزينها لاستخدامها في المستقبل.

2. إعداد أجهزة القياس

  1. إعداد 0.5 مل من 4 ميكروغرام / مل 15 NAβ 1-42 الببتيد بإضافة 40 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل 15 NAβ 142-0،46 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 0.5 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  2. إعداد 2 مل من 100 نانوغرام / مل 15 NAβ 1-42 الببتيد بإضافة 50 ميكرولتر من 4 ميكروغرام / مل 15 NAβ 142 وإلى 1.95 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 2 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  3. إعداد ستة حلول تدريج (AF) عن طريق خلط كميات كل حل هو مبين في الجدول 2. استخدام 0.5، 1.5، و 2 مل أنابيب microcentrifuge. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  4. إعداد معايرة النهائية (في نسختين) في 0.5 مل أنابيب microcentrifuge بإضافة حلول المعايرة المقابلة وCSF الإنسان وفقا للجدول 3. ميكس على خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.

3. إعداد معيار الداخلية

  1. إعداد 2 مل من 0.8 ميكروغرام / مل 13 CAβ 1-42 الببتيد بإضافة 32 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل 13 CAβ 142-1،968 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 2 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  2. إعداد 5 مل من 16 نانوغرام / مل 13 CAβ 1-42 الببتيد بإضافة 0.1 مل من 0.8 ميكروغرام / مل و 4.9 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 5 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.

4. إعداد نموذج استجابة عامل

ملاحظة: عامل استجابة يتم تنفيذ (RF) تقرير لتحديد تركيز الببتيد المسمى تستخدم لمعايرة (15 NAβ 1-42). وهذا يتطلب أن تركيز الأصلي Aβ 1-42 الببتيد وقد تم تحديد باستخدام تحليل الأحماض الأمينية (AAA). وهكذا، فإن حجم وتركيز الأم قسامات الببتيد Aβ 1-42تحتاج للوفاء بمتطلبات AAA.

  1. إعداد 0.5 مل من 4 ميكروغرام / مل مواليد (تحمل اسما) Aβ 1-42 بإضافة 40 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل الأصلي Aβ 1-42 إلى 0.46 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 0.5 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  2. إعداد 2 مل 40 نانوغرام / مل مزيج من مواليد و15 NAβ 1-42 بإضافة 20 ميكرولتر من 4 ميكروغرام / مل الأصلي Aβ 1-42 و 20 ميكرولتر من 4μg / 15 مل NAβ 1-42 إلى 1.96 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ تتركز الأمونيا في أنبوب مل microcentrifuge 2. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  3. إضافة 20 ميكرولتر من مزيج 40 نانوغرام / مل إلى 0.38 مل من السائل النخاعي الاصطناعي في أنبوب مل microcentrifuge 0.5. إعداد التكرارات وخلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.

إعداد 5. عينة

ملاحظة: ذوبان الجليد في العينات المراد قياسها في درجة حرارة الغرفة على الأسطوانة.

  1. إضافة 0.18 مل من كل تدريج، عامل ردا على ذلك، وعينة غير معروفة (بما في ذلك مراقبة الجودة [QC] عينات، في حال استخدامها) إلى 1 بروتين مل 96 لوحة في آبار عميقة، وفقا لشكل 1 (يتم استخدام افتراض لوحة كاملة). تأكد من إضافة العينات في، أو بالقرب من، والجزء السفلي من الآبار.
  2. إضافة 20 ميكرولتر من معيار الداخلية إلى كل بئر (أي معايرة، والعوامل ردا على ذلك، حلقات الجودة، والمجاهيل)؛ لا بد من الافراج عن انخفاض على جانب إغلاق البئر إلى السطح من العينة دون غمر طرف ماصة.
  3. إضافة 0.2 مل من 5 M-غوانيدين هيدروكلوريد إلى كل بئر.
  4. وضع لوحة عينة على شاكر صفيحة ومزج العينات لمدة 45 دقيقة في 1100 دورة في الدقيقة. قد تختلف وتيرة الأمثل اعتمادا على الأجهزة. ضبط التردد والسعة في خلاط حتى يتسنى للحلول مختلطة تماما وتترك أي قطرات من معيار داخلي أو CSF غير مخلوط على جانب الآبار.
  5. إضافة 0.2 مل من 4٪ حامض الفوسفوريكإلى كل بئر. مزيج دوامة لفترة وجيزة.

6. الصلبة المرحلة استخراج

ملاحظة: في كل غسل، وتحميل، والخطوات شطف، وتطبيق أدنى فراغ محتمل بعد إضافة الحل وتزيد تدريجيا حسب الحاجة إلى تحميل أو أزل الحل. تعطيل فراغ بين كل تحميل وخطوة شطف.

  1. وضع علبة خزان للنفايات في ظل وضع مختلط، الموجبة لتبادل، 96-جيدا استخراج المرحلة الصلبة (SPE) لوحة في غرفة متعددة استخراج لوحة.
  2. شرط الماصة SPE بإضافة 0.2 مل من الميثانول إلى كل بئر.
  3. تتوازن الماصة بإضافة 0.2 مل من 4٪ حامض الفوسفوريك إلى كل بئر.
  4. نقل جميع العينات (حوالي 0.62 مل في كل بئر) من لوحة في آبار عميقة لوحة SPE. استخدام ماصة ثماني قنوات عند نقل عينات من لوحة في آبار عميقة لوحة SPE. ليس حاسما لنقل كميات بأكملها أو المتساوية لجميع العينات، منذ العينات تحتوي على المتدربآل المعيار الذي سوف تعوض عن الاختلافات.
  5. غسل الماصة بعد مرور العينات خلال بإضافة 0.2 مل من 4٪ حامض الفوسفوريك إلى كل بئر.
  6. بعد غسل المذيبات ومزال من المواد الماصة، استبدال علبة خزان مع لوحة جمع أو الأنابيب.
  7. أزل عينة من المواد الماصة عن طريق إضافة مرتين 50 ميكرولتر من 75٪ ACN / 10٪ الأمونيا المركزة، ونلاحظ أن هذا الحل يتطلب فراغ منخفض جدا لتمرير من خلال الماصة. تذكر أن تعطيل فراغ بين كل إضافة.
    1. اختياري: ختم لوحة جمع أو الأنابيب وتجميدها في -80 درجة مئوية. إزالة ختم من لوحة جمع أو الأنابيب قبل الانتقال إلى الخطوة 6.8.2.
    2. تجفيف eluates باستخدام فراغ الطرد المركزي (بدون تطبيق الحرارة)؛ هذا يمكن أن يستغرق من واحد إلى عدة ساعات، اعتمادا على أجهزة الطرد المركزي فراغ.
    3. ختم الحاويات وتجميدها في -80 درجة مئوية.

7. السائل Chromatography

  1. إعداد الطور المتحرك ألف (5٪ إيه سي و 0.3٪ الأمونيا المركزة في الماء منزوع الأيونات [ت / ت])، B (منزوع الأيونات الماء 4٪ و 0.1٪ الأمونيا المركزة في إيه سي [ت / ت])، وغسل إبرة (50٪ ACN و 4٪ تتركز الأمونيا في الماء منزوع الأيونات [ت / ت]).
    1. 500 مل من مرحلة الأجهزة المحمولة، إضافة 25 مل من إيه سي و 1.5 مل من الأمونيا المركز إلى الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل مع الماء منزوع الأيونات.
    2. 500 مل من المرحلة المحمول B، إضافة 500 ميكرولتر من الأمونيا المركزة و 25 مل من الماء منزوع الأيونات إلى إيه سي. ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل مع إيه سي.
    3. إعداد 250 مل من غسل إبرة بإضافة 120 مل من إيه سي و 10 مل من الأمونيا المركز إلى الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 250 مل مع الماء منزوع الأيونات.
    4. وضع مراحل المحمول ألف وباء وغسل إبرة زجاجات مفتوحة في حمام صوتنة لمدة 20 دقيقة قبل الاستخدام مع نظام LC
  2. حل كل عينة مع 25 ميكرولتر من 20٪ إيه سي و 4٪ concentraتيد محلول الأمونيا ووضعها على شاكر لمدة 20 دقيقة. أجهزة الطرد المركزي لأسفل العينات ووضعها في الاوتوماتيكى (نضع في 7 درجة مئوية).
  3. ضخ 20 ميكرولتر من العينة على 1 × 250 مم 2 البوليسترين-divinylbenzene (عكس المرحلة) عمود متجانسة حافظت على 50 درجة مئوية.
    1. استخدام التدرج LC هو مبين في الجدول رقم 4 مع معدل تدفق 0.3 مل / دقيقة. تحويل الأولين ودقيقة الخمس الماضية أن تضيع (بعد العمود) باستخدام صمام تحويل للحد من تلوث مطياف الكتلة.

تحليل 8. قداس الطيف

ملاحظة: تم استخدام هذه المعلمات لمطياف الكتلة الهجين-رباعي orbitrap مجهزة aheated مصدر تأين بالإرذاذ الإلكتروني.

  1. تعيين المعلمات لمصدر ايون وفقا للجدول 5.
  2. تعيين أداة MS لعزل الدول تهمة 4+ من الأصلي Aβ 1-42 (1،129.48 تجاريا،لتهمة نسبة [م / ض])، 15 NAβ 1-42 (1،143.00 م / ض)، و 13 CAβ 1-42 (1،179.50 م / ض) في محلل كتلة رباعي مع عرض العزلة من 2.5 م / ض.
  3. تفتيت الببتيدات المعزولة في الخلية الاصطدام مع طاقة الاصطدام تطبيع (NCE) من 17.0. قد تحتاج هذه إلى ضبطها لكل أداة، حتى من نفس النوع (وخاصة في حالة استخدام أنواع أخرى من الصكوك، مثل رباعي الثلاثي MS).
  4. تسجيل أطياف جزء مع قرار من 17.500، مع هدف السيطرة التلقائي من 2 × 10 5 الاتهامات والحد الأقصى لوقت حقن 250 مللي ثانية.

9. معالجة البيانات

  1. استخدام مبلغ من الأيونات المنتج (مع التسامح الشامل لل± 250 وحدة كتلة ملي [MMU]) في الجدول رقم 6 لحساب المناطق الكروماتوغرافي عن كل الببتيد. لاحظ أن أنواع أيون وأرقام تظهر فقط لAβ الأصلي أيونات 1-42 المنتج، لأنها هي نفسها من أجل كل 15 NAβ 1-42 و 13 CAβ 1-42.
  2. تحديد متوسط معامل استجابة العينتين عامل استجابة بتقسيم المنطقة تحت المنحنى (الذروة الكروماتوغرافي) المؤرخ 15 NAβ 1-42 مع المنطقة تحت المنحنى الأصلي Aβ 1-42.
  3. ضبط تركيز 15 NAβ 1-42 تستخدم لمعايرة بضرب مع عامل ردود الفعل المحسوبة في الخطوة 9.2.
  4. بناء منحنى المعايرة من قبل المتهم بالتآمر في نسب مساحة 15 NAβ 1-42 إلى 13 CAβ 1-42 من مجموعتي معايرة ضد الاعتقال.
  5. حساب المنحدر واعتراض من منحنى المعايرة باستخدام الانحدار الخطي.
  6. حساب نسبة مجال الأصلي Aβ 1-42 لمعيار داخلي (13 CAβ 1-42) للامم المتحدةعينة معروفة.
  7. استقراء تركيز العينات المجهولة من منحنى المعايرة باستخدام المنحدر واعتراض حصلت عليه في الخطوة 9.5.

النتائج

يتم استخدام الإعداد لوحة في الشكل رقم 1 لوحة كاملة من العينات. إذا ليتم تحليلها أقل عينات غير معروفة، وتدريج الثاني، ينبغي أن توضع مجموعات الترددات اللاسلكية، ومراقبة الجودة بعد نهاية الشوط الأول من العينات غير معروف.

Discussion

للتعرف على طريقة وصفها، بدلا من استخدام مصفوفة البديلة، استخدمنا نهج بديل تحليلها 13، 14، 15، 16، والتي تمكن المعايرة في السائل النخاعي البشري. ينطوي على نهج تحليلها البديل مختلفين معايير المسمى isotopi...

Disclosures

JP and EP reports no disclosures. HZ has served on the advisory boards of Roche Diagnostics, Eli Lilly, and Pharmasum Therapeutics. KB has served as a consultant or on the advisory boards for Fujirebio Europe, IBL International, and Roche Diagnostics. HZ and KB are co-founders of Brain Biomarker Solutions in Gothenburg AB, a GU Venture-based platform company at the University of Gothenburg.

Acknowledgements

This work was performed on behalf of the International Federation of Clinical Chemistry Working Group on CSF Proteins, which has the following composition: Kaj Blennow (Chair) and Henrik Zetterberg, Gothenburg University, Sweden; Les Shaw and Magdalena Korecka, University of Philadelphia, PA, USA; Ingrid Zegers, Institute for Reference Materials and Measurements, Geel, Belgium; Piotr Lewczuk, Universitätsklinikum Erlangen, Germany; and Rand Jenkins, PPD Bioanalytical Laboratory, Richmond, VA, USA; Randall Bateman, Washington University, MO, USA; and H Vanderstichele, Innogenetics NV, Ghent, Belgium. This work was also part of the Global Consortium for Biomarker Standardization CSF Reference Methods Working Group, which is led by Maria C. Carrillo, Ph.D., Senior Director, Medical & Scientific Relations, Alzheimer's Association. The study was supported by The Swedish Research Council (grants #14002, #521-2011-4709, and #2013-2546); the Knut and Alice Wallenberg Foundation; Demensförbundet; and Emil and Wera Cornell's, Aina Wallström and Mary-Ann Sjöblom's, Gun and Bertil Stohne's, Magnus Bergvall's, and Gamla Tjänarinnor's Foundations.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 0.5 mLEppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 1.5 mLEppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 2 mLEppendorf022431102
Eppendorf Protein LoBind microcentrifuge tubes, 5 mLEppendorf0030 108.310
Eppendorf Protein LoBind Deepwell Plates 96Eppendorf951032905
Micronic 0.75 mL polypropylene tubes, V-bottomMicronicMPW32071BC3Tubes used for collecting SPE eluate, but other collection devices can be used such as 96-well plates.
Micronic Split TPE Capcluster for 96 ind. tubesMicronicMP53026Caps for Micronic tubes.
Micronic Loborack-96 white w high cover bar codedMicronicMPW51015BC3Holder for Micronic tubes.
Biohit Optifit tips 1.2 mLSartorius791210Used to reach all the way to the bottom of the LoBind deepwell plates (96-well). Other narrow tips might work as well.
Waters Oasis MCX 96-well µElution PlateWaters186001830BA 
Waters Plate manifold reservoir trayWatersWAT058942
Waters Extraction Plate Manifold for Oasis 96-Well PlatesWaters186001831
Ammonium hydroxide solution, puriss. p.a., reag. ISO, reag. Ph. Eur., ~25% NH3 basisSigma-Aldrich30501-1L-D
Acetonitrile, Far UV HPLC Gradient grade, 2.5 LFisher ScientificA/0627/17X
ortho-Phosphoric acid 85%, ACS,ISO,Reag. Ph EurMerck Millipore1005731000
Guanidine Hydrochloride, 500 gThermo Scientific24110
Thermo Scientific Q-exactive Hybrid Quadrupole Orbitrap Mass SpectrometerThermo ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZRWith bundled Dionex Ultimate 3000 LC & autosampler.
Dionex ProSwift RP-4H Monolith Column (1.0 x 250mm)Dionex066640
Bovine Serum Albumin, lyophilized powder, suitable for (for molecular biology), Non-acetylatedSigma-AldrichB6917
Beta-Amyloid (1-42), Ultra Pure, TFArPeptideA-1002-2
15N Beta-Amyloid (1-42), Uniformly labeledrPeptideA-1102-2
13C Beta-Amyloid (1-42), Uniformly labeledrPeptideA-1106-2
Microplate shakers, TiMix 2Edmund Bühler6110 000

References

  1. Querfurth, H. W., LaFerla, F. M. Alzheimer's disease. N Engl J Med. 362 (4), 329-344 (2010).
  2. Braak, H., Braak, E. Evolution of the neuropathology of Alzheimer's disease. Acta Neurol Scand Suppl. 165, 3-12 (1996).
  3. Blennow, K., de Leon, M. J., Zetterberg, H. Alzheimer's disease. Lancet. 368 (9533), 387-403 (2006).
  4. Dubois, B., et al. Advancing research diagnostic criteria for Alzheimer's disease: the IWG-2 criteria. Lancet Neurol. 13 (6), 614-629 (2014).
  5. Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease. Nat Rev Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).
  6. Buchhave, P., et al. Cerebrospinal fluid levels of beta-amyloid 1-42, but not of tau, are fully changed already 5 to 10 years before the onset of Alzheimer dementia. Arch Gen Psychiatry. 69 (1), 98-106 (2012).
  7. Olsson, B., et al. CSF and blood biomarkers for the diagnosis of Alzheimer's disease: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Neurology. 15 (7), 673-684 (2016).
  8. Bjerke, M., et al. Confounding factors influencing amyloid Beta concentration in cerebrospinal fluid. Int J Alzheimers Dis. , (2010).
  9. Dumurgier, J., et al. Intersite variability of CSF Alzheimer's disease biomarkers in clinical setting. Alzheimers Dement. 9 (4), 406-413 (2013).
  10. Mattsson, N., et al. CSF biomarker variability in the Alzheimer's Association quality control program. Alzheimers Dement. 9 (3), 251-261 (2013).
  11. Kang, J. H., Korecka, M., Toledo, J. B., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. Clinical Utility and Analytical Challenges in Measurement of Cerebrospinal Fluid Amyloid-beta1-42 and tau Proteins as Alzheimer Disease Biomarkers. Clin Chem. 59 (6), 903-916 (2013).
  12. Mattsson, N., et al. Reference measurement procedures for Alzheimer's disease cerebrospinal fluid biomarkers: definitions and approaches with focus on amyloid beta42. Biomark Med. 6 (4), 409-417 (2012).
  13. Ahmadkhaniha, R., Shafiee, A., Rastkari, N., Kobarfard, F. Accurate quantification of endogenous androgenic steroids in cattle's meat by gas chromatography mass spectrometry using a surrogate analyte approach. Anal Chim Acta. 631 (1), 80-86 (2009).
  14. Jemal, M., Schuster, A., Whigan, D. B. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry methods for quantitation of mevalonic acid in human plasma and urine: method validation, demonstration of using a surrogate analyte, and demonstration of unacceptable matrix effect in spite of use of a stable isotope analog internal standard. Rapid Commun Mass Spectrom. 17 (15), 1723-1734 (2003).
  15. Leinenbach, A., et al. Mass spectrometry-based candidate reference measurement procedure for quantification of amyloid-beta in cerebrospinal fluid. Clin Chem. 60 (7), 987-994 (2014).
  16. Li, W., Cohen, L. H. Quantitation of endogenous analytes in biofluid without a true blank matrix. Anal Chem. 75 (21), 5854-5859 (2003).
  17. Perret-Liaudet, A., et al. Cerebrospinal fluid collection tubes: a critical issue for Alzheimer disease diagnosis. Clin Chem. 58 (4), 787-789 (2012).
  18. Lewczuk, P., et al. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52 (2), 332-334 (2006).
  19. Pannee, J., et al. Reference measurement procedure for CSF amyloid beta (Aβ)1-42 and the CSF Aβ1-42 /Aβ1-40 ratio - a cross-validation study against amyloid PET. J Neurochem. 139 (4), 651-658 (2016).
  20. Thienpont, L. M., Van Houcke, S. K. Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes. Clin Chim Acta. 411 (23-24), 2058-2061 (2010).
  21. Vesper, H. W., Thienpont, L. M. Traceability in laboratory medicine. Clin Chem. 55 (6), 1067-1075 (2009).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

121

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved