سامسونج بوراتيد مطاطا الهلاميات المائية كغشاء الطابق السفلي المحاكاة البيولوجية لثنائي خلية ثقافة

Summary

نماذج الثقافة بلير الحالية لا تسمح للدراسات الفنية في المختبر التي تحاكي في فيفو ميكرونفيرونمينتس. استخدام البولي إثيلين غليكول وأسلوب قولبة أكسيد الزنك، يصف هذا البروتوكول وضع الغشاء المحاكاة البيولوجية سامسونج مع تصلب الانضباطي، المسامية، وتكوين البيوكيميائية الذي يحاكي عن كثب في فيفو مصفوفات خارج الخلية.

Abstract

الغشاء هو عنصر حاسم من بليرس الخلوية التي يمكن أن تختلف في صلابة وتكوينها، والهندسة المعمارية والمساميه. الدراسات في المختبر غشائي طلائي بليرس تقليديا يعتمد على نماذج الدعم نفاذية تمكين الثقافة بلير، ولكن يدعم نفاذية محدودة في قدرتها على إجراء نسخ متماثل تنوع البشرية الطابق السفلي الأغشية. على النقيض من ذلك، نماذج المائية التي تتطلب تجميع المواد الكيميائية العالية الانضباطي والسماح لإدخال تعديلات على صلابة المواد وتكوين البيوكيميائية عن طريق إدماج الببتيدات المحاكاة البيولوجية أو البروتينات. ومع ذلك، محدودة نماذج المائية التقليدية في وظيفة لأنهم يفتقرون إلى المسام خلية خلية الاتصالات والوظيفية في المختبر دراسات الهجرة. بالإضافة إلى ذلك، نظراً لسمك الهلاميات المائية التقليدية، تم إدماج المسام التي تمتد على كامل سمك الهلاميات المائية الصعبة. في الدراسة الحالية، ونحن نستخدم الهلاميات المائية poly-(ethylene-glycol) (الربط) وأسلوب قولبة رواية أكسيد الزنك لمعالجة أوجه القصور السابقة من الهلاميات المائية المحاكاة البيولوجية. كنتيجة لذلك، فإننا نقدم المائية سامسونج، مثل الغشاء تسمح ثقافة بيلاييرس الخلوية المتلاقية على سقالة لتخصيص مع أبنية المسام متغير والخواص الميكانيكية والتركيب البيوكيميائية.

Introduction

مصفوفات خارج الخلية (ECM) يشكلون السقالات البروتين التي دعم مرفق خلية وتكون بمثابة حواجز بين أنواع الخلايا متميزة وعنصرا أساسيا في مجمع الأنسجة والأعضاء. على النقيض من النسيج الضام الخلالي، الغشاء الطابق السفلي (بي أم) هو نوع متخصصة لإدارة المحتوى في المؤسسة التي تعمل كحاجز لتقسيم المقصورات الأنسجة عن بعضها البعض. خدمات إدارة المباني سميكة حوالي 100 ميكرون، وذلك السماح للاتصالات المباشرة وغير المباشرة بين الخلايا على جانبي. اثنين من الأمثلة الشائعة من خدمات إدارة المباني هي الأوعية الدموية خدمات إدارة المباني، وجدت في الجدار ميكروفاسكولار بين بيريسيتيس وخلايا بطانية، وخدمات إدارة المباني في مجرى الهواء التي توجد بين الخلايا الظهارية وبطانية. خدمات إدارة المباني تخدم دوراً هاما في تنظيم وظيفة الخلية، مثل الخلية القطبية، والهجرة، وفي الصحة والمرض. ¹ تكوين وصلابة، والهندسة المعمارية، والمساميه لخدمات إدارة المباني تختلف نظم الجهاز لتسهيل الوظائف الفسيولوجية متميزة. على سبيل المثال، المسام BM حاسمة للحفاظ على الاتصالات خلية خلية، نشر جزيء القابلة للذوبان، والهجرة من الخلايا المناعية أثناء التهاب أو بكتيريا أثناء الإصابة. في الخطوط الجوية، تمتد المسام سمك BM، كامل مع أقطار تتراوح بين 0.75 إلى 3.86 ميكرومتر.²

وتكفل طبيعة رقيقة بي أم أنه على الرغم من أن أنواع الخلايا جسديا مفصولة عن بعضها البعض، هو الحفاظ على الاتصالات بين الخلايا عن طريق وساطة paracrine والاتصال مما يشير إلى. وهكذا، اعتمدت الباحثين لدراسة الأمراض البشرية في المختبر، على إدراج دعم نفاذية المسامية للثقافة بليرس الخلوية. ³ هذه النماذج كانت ذات أهمية حاسمة لفهم الاتصالات الخلوية التي تلعب دوراً في الصحة والمرض. ^{3 , 4 , 5 , 6 , 7} إدراج دعم نفاذية تلبية المتطلبات الأساسية لفهم كيف يشير إلى خلية خلية ينظم العمليات الفسيولوجية، مثل تجنيد الكريات البيض وتسلل البكتيرية؛ بيد إدراج قيود كبيرة وتفشل لتقليد دعم بيرميابل BM. بشرية عدم إدراج ألواح كل الميكانيكية والكيميائية الحيوية، وبنية مسامية التبسيط لا تقليد هيكل ليفي أن يخلق المسام غير النظامية النموذجية لخدمات إدارة المباني. ولذلك، هناك حاجة متزايدة لنظم الانضباطي الذي يمكن إعادة إنشاء خصائص BM الأصلية التي تؤثر على العمليات الخلوية.

هي ركائز أساس البوليمر مرشحا مثاليا لتطوير خدمات إدارة المباني لدراسة بليرس الخلوية في إطار أوثق يحاكي البيئة في فيفو المحاكاة البيولوجية. ^{8 , 9 , 10 , 11 , 12} البوليمرات ميكانيكيا الانضباطي ويمكن تعديلها كيميائيا لدمج المحاكاة البيولوجية ببتيد شظايا. ^{11 , 12 , 13} بيوينيرت بوليمر البولي إيثيلين جلايكول (شماعة) يمكن استخدامها لتشييد المباني المحاكاة البيولوجية، ومؤخرا عمل مفصلة توليف شماعة حمض ارجينين-جليكاين-الأسبارتيك (إدارات) الهلام ميكانيكيا الانضباطي مع شبكات المسامية التي تدعم نمو الخلايا وانزيمية الخلية الملتهبة. ¹⁴ على الرغم من نشر القائمة على شماعة ركائز قدم نموذج إدارة المحتوى في المؤسسة البشرية أكثر واقعية مما يدعم نفاذية، العديد من هذه النماذج سميكة جداً، مع عمق ميكرومتر تقريبا 775 يحد من القدرة على خلق الثقافات bilayer مع خلية خلية جهات الاتصال. ¹⁴

نقدم هنا، على بروتوكول لإنشاء شماعة المستندة إلى البوليمر BM تقليد أن يتغلب على العديد من أوجه قصور التكنولوجيات الثقافة bilayer الخلية الحالية. لقد قمنا بتطوير أسلوب قولبة أكسيد الزنك، وهي مادة تستخدم على نطاق واسع لتصنيع الإنتاج ميكروكريستالاين، ودمج البوليمر أثناء التوليف وكروسلينكينج، الذي يتم إزالته في وقت لاحق وانتقائية من بوليمر الأكبر الناجمة عن ذلك. هذه العملية بإنشاء شبكة مسامية عشوائي، محاكاة شبكة المسام متعرجة والمترابطة للبشرية خدمات إدارة المباني. علاوة على ذلك، يمكن تغيير التسلل عن طريق تغيير حجم وشكل من ميكروكريستالس أكسيد الزنك عن طريق تعديل stoichiometry رد فعل أثناء إنتاج الإبرة. هذه التقنية المتقدمة هنا يخلق المائية سامسونج الذي يحاكي سمك BM. البشرية "أخيرا"، الميكانيكا، والتسلل، ويمكن بسهولة تغيير تكوين هذه الثوابت مثل BM البيوكيميائية لتوليد المكروية الأكثر مشابهة لتلك المشاهدة في فيفو.

Protocol

يرجى قراءة ورقة بيانات سلامة المواد (MSDS) لجميع المواد السابقة لاستخدام واستخدام احتياطات السلامة في جميع الأوقات.

1-تجميع الإبر أكسيد الزنك

1. تحضير 250 مل من الزنك (لا₃) 0.04 متر₂* 6 ح₂س الحل عن طريق إضافة 2.9749 غرام نترات الزنك إلى 250 مل الماء.
2. إعداد 150 مل من هيدروكسيد الصوديوم م 1 بإضافة 6 جم من هيدروكسيد الصوديوم إلى 150 مل الماء.
3. قم بإعداد حمام زيت المعدني على لوح ساخن مع محرض، وتغرق قارورة 500 مل قاع جولة في حمام الزيت في درجة حرارة الغرفة.
4. إضافة 250 مل من الزنك (لا₃)₂* 6 ح₂س إلى قارورة وتبدأ إثارة رد فعل.
5. إضافة 150 مل حل هيدروكسيد الصوديوم (ترسبات بيضاء شكل بإيجاز وثم تختفي كما تواصل الحلين مزيج). إثارة ح 2 كشف.
6. الحرارة في قارورة إلى 55-60 درجة مئوية ويستمر التحريك ح 24.
7. إيقاف الحرارة ويسمح الحل لتبرد بدرجة حرارة الغرفة بينما التحريك.
8. تصفية الحل على قمع [بشنر] مع حجم مسام ميكرومتر 11 والسماح لتجف بين عشية وضحاها، وكشفت. عندما لم يعد ورقة تصفية الرطب من الحل سكب ومسحوق أبيض شكلت عبر الثقوب القمع، هي تماما المجففة الجسيمات.
9. جمع الإبر أكسيد الزنك، والتحضير للمسح الضوئي المجهر الإلكتروني (SEM) لتأكيد مورفولوجية الشبيهة بالإبر. بإيجاز، تحميل الشريط الكربون على كعب روتين دبوس وتستخدم ملعقة معدنية لتشويه الإبر أكسيد الزنك على الشريط الكربون. تفل معطف مع ايريديوم 8 مم في كثافة 22.4 غرام/سم³ ، والحصول على الصور في 10 كيلوفولت.

2-إضافة طبقة الزنك الذبيحة على شرائح المجهر ل HCl الناجمين عن الإفراج عن شماعة

1. تحضير حل خلات الزنك بتذويب 1.756 ز خلات الزنك في 200 مل ميثانول.
2. تنظيف مجهر عادي شرائح "3 × 1 بوصة مع الإيثانول 70% ومسح المتاح. تسمح للهواء الجاف لمدة 10 دقائق.
3. ضع كوب 150 ملم طبق بيتري على صفيحة ساخنة وتسخَّن إلى 150-160 درجة مئوية.
4. استخدام بيبيت زجاج مع لمبة بيبيت، عقد الشرائح الزجاجية مع الشرائح ملاقط ومعطف بتطبيق 5 قطرات خلات الزنك، تشكيل طبقة رقيقة موزعة على الشريحة. تسمح حل الزائدة بالتنقيط مرة أخرى في حل الأسهم.
5. ضع الشريحة في طبق بيتري ساخنة مسبقاً (150-160 درجة مئوية) مع الجانب المغلفة خلات الزنك مواجهة. إجازة في وميكروريف لمدة 15 دقيقة.
6. إزالة الشريحة مع ملاقط والسماح لها لتبرد بدرجة حرارة الغرفة. سوف تظهر الشريحة لتكون مغلفة بالشرائط البيضاء.
7. قم بإزالة أي الزنك الزائدة المتبقية على الشرائح باستخدام مسح المتاح لإزالة الشرائط البيضاء بارزة. ينبغي أن يكون السطح موحدة.
8. كشف الضوء على الشرائح استعدادا للأشعة فوق البنفسجية في غطاء السلامة الأحيائية ح 1 على الأقل لضمان العقم.
   تنبيه: الأشعة فوق البنفسجية الضارة على العينين وتعرض الجلد. تجنب التعرض المباشر للجلد أو العينين وإيقاف إمدادات الطاقة الكهربائية عندما لا تستخدم.

3-إعداد عوازل السيليكون

1. ورقة قطع سيليكون في المربعات أقل من 1 "س 1" (عوازل يجب أن تكون قادرة على احتوائه في طبق 6-جيدا).
2. لكمه ثقوب 8-12 ملم في وسط المربعات لكمه خزعة.
3. عوازل السيليكون اﻷوتوكﻻف لمدة 20 دقيقة في 121.0 درجة مئوية و 1.12 كغ/سم.

4-إعداد الحل شماعة و "ربط توليف هلام"

ملاحظة: الروغان البلمرة شماعة يتم على نطاق واسع استكشاف والمفصلة سابقا لدينا مختبر وغيرها. ^{8 , 10 , 11 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17}

1. الجمع بين إدارات الخلية الببتيد لاصقة مع أكريلويل-شماعة--دائرة الصحة الوطنية في بيكربونات الصوديوم 50 مم (pH 8.5) بنسبة 1:1 مولى لتمكين الروغان المحطة أمين من الببتيد مع مجموعة أكريلاتي، ردود فعل بيوكيميائية التي كانت سابقا وتتميز تؤتي أكبر من كفاءة 85%. ¹⁷
2. تحضير صور-البادئ بمخالطة 2، 2-ديميثوكسي-2-فينيلاسيتوفينوني 1-الفينيل-2-بولي بتركيز 300 ملغ/مل.
3. في فصل أنابيب 1.5 مل، تزن ما يلي: 20 ملغ من أكسيد الزنك الإبر و 12.5 مغ دا شماعة 2.5 ملغ من إدارات الوتد.
4. تعليق 20 ملغ إبر أكسيد الزنك في 270 ميليلتر من محلول FBS/برنامج تلفزيوني 10%؛ دوامة لخلط (حوالي 15 ثانية).
5. بإيجاز (< 1 s) تدور الحل في أجهزة الطرد مركزي benchtop مصغرة جلب أي المجاميع أكسيد الزنك لقاعدة للأنبوب.
6. جمع 250 ميليلتر من الجزء العلوي من حل أكسيد الزنك، لضمان أن تظل المجاميع في الجزء السفلي من الأنبوب. الجمع بين دا شماعة وإدارات شماعة لإنشاء حل الوتد مع حوالي 2.5 مم إدارات. دوامة لخلط (حوالي 15 ثانية).
7. إضافة 2 ميليلتر بولي أسيتوفينوني/n-الفينيل صور-البادئ ودوامه بإيجاز المزيج (حوالي 5 s).
8. إضافة 20 ميليلتر من الحل البوليمر على طول وسط الشرائح أكسيد الزنك المغلفة.
9. انخفاض ببطء شريحة ثانية في الأعلى، مع أكسيد الزنك طلاء الوجه لأسفل (يجب أن يكون الحل الربط بين طبقتين أكسيد الزنك المغلفة). في محاولة لمنع تشكيل أي فقاعات الهواء. نقل الشرائح أفقياً على طول المحور الرئيسي للسماح لأي فقاعات للهروب ونشر الحل على طبقة رقيقة. وتغطي معظم الشريحة مع الحل البوليمر. إنشاء تراكم طفيف مع الشريحة الأعلى لضمان أنه يمكن سحب الشرائح عن بعضها البعض في خطوات لاحقة.
10. التشعب الشرائح تحت مصباح نانومتر الأشعة فوق البنفسجية 365 (حوالي 10 ميغاواط/سم²) لمدة 15 دقيقة.

5-الإفراج عن شماعة الهلام من الشرائح الزجاجية

1. تطبيق الضغط على الشريحة الذي يخيم وسحب شريحتين أربا بوتيرة بطيئة في أمر تجنب تكسير الشرائح يدوياً. تسمح المواد الهلامية تجف لمدة 5 دقائق على الأقل، أو بين ليلة وضحاها.
2. ضع الشريحة في كوب معقم 25 مم طبق بيتري وتصب برفق حل HCl 1 م على الشريحة، باستخدام ما يكفي فقط لتغطية الشريحة (حوالي 10-20 مل). روك بلطف طبق بيتري؛ ينبغي أن تبدأ الجل لرفع إيقاف الشريحة HCl يذوب بطلاء الزنك الذبيحة والإبر. وبمجرد الهلام خالية من الشريحة، صب HCl مرة أخرى في حل الأسهم.
3. شطف الجل بصب حوالي 25 مل من س 1 برنامج تلفزيوني بلطف إلى طبق بتري حتى مغمورة بالشريحة وجل.

بعناية من أجل إيقاف برنامج تلفزيوني في حاوية نفايات.

بلطف صب حوالي 25 مل من س 1 برنامج تلفزيوني في طبق بتري حتى الجل تطفو في الحل.

استخدام الملقط، الشريحة عازل السيليكون تحت الجل بعناية ورفع الهلام على ذلك.

نقل المعزل والجل إلى طبق 6-بئر مليئة ببرنامج تلفزيوني x 1 العقيمة.

كرر هذه العملية حتى جميع المواد الهلامية قد أزيلت من الشرائح وهي نقع في برنامج تلفزيوني. الكشف عن المواد الهلامية مستعدا للأشعة فوق البنفسجية في غطاء السلامة الأحيائية ح 1 على الأقل لضمان العقم.

6. بذر خلية بيلاييرس

1. إعداد خلايا A549 للبذر. باختصار، شطف قارورة² 75 سم مع 5 مل من برنامج تلفزيوني 1 x، أضف 3 مل من 0.25% يدتا التربسين واسمحوا الجلوس لمدة 2-3 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
   1. ميكانيكيا تحرض قارورة واخماد رد فعل مع "تعديل النسر المتوسطة" 3 مل دولبيكو مع 10% الجنين البقري 1% ومصل البنسلين-ستربتوميسين، وجمع في قارورة مخروطية الشكل 15 مل. شطف مع مل 4 إضافية "تعديل النسور" إكمال دولبيكو، وجمع في نفس مخروطية الشكل. تدور الخلايا في 475 x ز لمدة 6 دقائق.
2. بينما هي الغزل الخلايا إلى الأسفل، إضافة قطره صغيرة من "تعديل النسر المتوسطة" كامل دولبيكو لكل بئر من لوحة 6-جيدا. استخدام الملقط لنقل عوازل السيليكون مع المواد الهلامية في لوحة 6-بئر جديدة، مثل أن الجل هو يستريح على قطره من وسائل الإعلام. الآن أن المواد الهلامية تنتشر في طبقة رقيقة، تحقق للتأكد من أن توجد لا ثقوب كبيرة مرئية بالعين. ينبغي أن يتم هذا قبل مباشرة خلية البذر لتجنب التجفيف وتكسير من المواد الهلامية.
3. ريسوسبيند الخلايا في "تعديل النسر المتوسطة" دولبيكو مع 10% الجنين البقري 1% ومصل البنسلين-ستربتوميسين بتركيز 6 × 10⁵ خلايا/مل. إضافة قطره تعليق خلية الحكمة إلى مركز الهلام، في محاولة للحفاظ على غضروف في المنطقة لكمات خارجاً من غشاء السيليكون. السماح للخلايا الانضمام ح 4.
4. بعد ح 4، إضافة 0.5 مل من "تعديل النسر المتوسطة" دولبيكو كاملة إلى البئر واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية للسماح للانضمام الكامل.
5. في اليوم التالي، إعداد هوفيكس لبذر الخلية.
   1. شطف قارورة² 75 سم مع 5 مل من 1 X PBS، أضف 3 مل من 0.25% يدتا التربسين واسمحوا الجلوس لمدة 2-3 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
   2. ميكانيكيا تحرض قارورة واخماد رد فعل مع 3 مل M199 وسائل الإعلام مع 20% مصل بقرى الجنين، 1% البنسلين-ستربتوميسين، وتكملة النمو 1%، وجمع إلى 15 مل مخروطية.
   3. شطف مع 4 مل M199 كاملة وسائط الإعلام، وجمع في نفس مخروطية الشكل. تدور الخلايا في 475 x ز لمدة 6 دقائق.
6. بينما هي الغزل الخلايا إلى الأسفل، إضافة قطره صغيرة من المتوسطة كاملة 199 لكل بئر في صفيحة 6-بئر جديدة. مكان عازل سيليكون جديدة في البئر مع قطره من وسائل الإعلام في مركز السيليكون.
7. استخدام الملقط، بعناية الوجه عازل سيليكون دعم هلام الوتد مع خلايا A549 على المعزل في لوحة 6-بئر جديدة.
8. ريسوسبيند هوفيكس بتركيز 6 × 10⁵ خلايا/مل وإضافة تعليق الخلية إلى وسط انخفاض جل انقلبت الحكمة، في محاولة للحفاظ على غضروف في هلام داخل المنطقة لكمات خارجاً من غشاء السيليكون. السماح للخلايا الانضمام ح 2.
9. بعد ح 2، بلطف إضافة 2 مل M199 وسائط كاملة لكل بئر.

7-الفلورة

1. بعناية قم بإزالة الوسائط من الهلام مع ماصة يدوي وإضافة ما يقرب من 500 ميليلتر من 4% بارافورمالدهيد (PFA) إلى مركز جل حيث يتم المصنف الخلايا. السماح للجلوس لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
   تنبيه: منهاج عمل بيجين مادة كيميائية سامة؛ ارتداء حماية وضمان التعامل مع القيام في سلامة بيولوجية مجلس الوزراء.
2. بعناية إزالة منهاج عمل بيجين، وإضافة ما يقرب من 500 ميليلتر من جيش صرب البوسنة 2% في برنامج تلفزيوني لكل جيل. واسمحوا الجلوس ح 1 في درجة حرارة الغرفة.
3. بعناية إزالة جيش صرب البوسنة. إعداد الأجسام المضادة الأساسي في إضعاف 1: 100 في جيش صرب البوسنة 2% في برنامج تلفزيوني، وإضافة 500 ميليلتر لكل جيل. واسمحوا الجلوس ح 1 في درجة حرارة الغرفة. شطف بلطف مع 500 ميليلتر من برنامج تلفزيوني 1 x.
   1. كرر نفس العملية مع الأجسام المضادة الثانوية. استخدام التالية الأضداد: 1) المضادة الإنسان CD144 16B1 استنساخ (VE-كادهيرين)؛ 2) المضادة الإنسان CD324 (E-كادهيرين) استنساخ 6714؛ 3) المضادة الإنسان CD31 استنساخ (بيكم-1) C-20؛ 4) مكافحة-A549؛ 5) المضادة الماوس فيتك؛ 6) المضادة الماعز 647 فلور أليكسا. أن تصور واكتين، إضافة 500 ميليلتر من فالويدين (10 ميكروغرام/مل في برنامج تلفزيوني) لمدة 20 دقيقة.
4. إزالة الأجسام المضادة الثانوية أو فالويدين بعناية وإضافة 500 ميليلتر من DAPI (0.1 ميكروغرام/مل) عن 20 دقيقة بعناية إزالة الحل DAPI ولطف إضافة 1.5 مل من س 1 برنامج تلفزيوني لكل بئر حيث تكون المواد الهلامية في التعليق.
   1. استخدام العوازل ملاقط وسيليكون، نقل جل واحد على شريحة زجاجية. تنفيذ هذا الإجراء لكل جل فورا قبل التصوير، واستبدال المواد الهلامية في حل برنامج تلفزيوني بعد التصوير.
   2. وبدلاً من ذلك، جبل الجل باستخدام وسيلة متزايدة DAPI. ختم العينات مع طلاء الأظافر جيدا، والحصول على الصور من خلال يومين لمنع تجفيف وتكسير جل. الرجوع إلى الجدول 1 لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها.

النتائج

وشكلت إدارات شماعة الهلاميات المائية ساندويتشينج الحل البوليمر بين طبقتين الذبيحة أكسيد الزنك وإنشاء قوالب المسام مع الإبر أكسيد الزنك. ثم تم إزالة مكونات الذبيحة أكسيد الزنك مع حمض الهيدروكلوريك، وتوليد الهلاميات المائية شماعة سامسونج مع المسام المستمر (ا...

Discussion

البروتوكول بالتفصيل هنا أتاح لنا أن خلق المائية شماعة الانضباطي لتكون بمثابة سقالة المحاكاة البيولوجية BM. على وجه التحديد، متفاوتة الأوزان الجزيئية شماعة، استراتيجيات الاقتران الببتيد، وهياكل ميكروكريستالاين أكسيد الزنك أو تركيزات، معامل المرونة، الخصائص الكيميائية الحيوية، وبنية م?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1M Hydrogel Chloride (HCl)	EMD	HX0603-75 2.5L	Sterile. Use in fume hood with eye protection and gloves.
1X PBS	Gibco	14040-133 500 mL	None
Zinc Nitrate Hexahydrate (Zn(NO3)2•6H2O)	Sigma-Aldrich	228737-500g	Use with eye protection and gloves.
Sodium Hydroxide (NaOH)	Macron Chemicals	278408-500g	Use with eye protection and gloves.
Zinc Acetate Dihydrate ((CH3O2)2Zn2+•2H2O)	Fisher Scientific	AC45180010 1 kg	Use with eye protection and gloves.
Methanol (CH3OH)	J.T. Baker	9070-05 4L	Use in fume hood with eye protection and gloves.
VWR Life Science Seradigm Premium Grade FBS	VWR	97068-085	Sterile filter. 5 mL FBS in 45 mL PBS
Mineral oil	CVS	PLD-B280B	None
Round bottom flask	ChemGlass		N/A
Thermometer			N/A
Stir bar			N/A
Plain precleaned microscope slides 3"x1"x1" mm thick	Thermo Scientific	420-004T	Spray with ethanol and let dry prior to use.
Glass pasteur pipets			N/A
1 mL rubber bulbs			N/A
Plastic 100 mm petri dishes			N/A
Sterile forceps			N/A
Silicone isolators			0.8 mm thick
Polydimethylsiloxane (PDMS) punches			N/A
Glass bottles			N/A
6 well plates	Cellstar	657 160	N/A
Filter Paper	Whatman	8519	N/A
Stirrer-hot plate	VWR Dya-Dual	12620-970	Use with eye protection and gloves.
2,2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone (C6H5COC(OCH3)2C6H5	Sigma-Aldrich	24650-42-8	Use with eye protection and gloves.
1-Vinyl-2-pyrrolidone (C6H9NO)	Aldrich		Use with eye protection and gloves.
Polyethylene Glycol 10,000 (H(OCH2CH2)10,000OH)	Fluka	81280-1kg	Use with eye protection and gloves.
RGDS	Life Tein	180190	Use with eye protection and gloves.
Blak-Ray long wave UV lamp	UVP	Model B 100AP	N/A
Eppendorf tubes	USA Scientific	1615-5500	N/A