JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

ويصف هذا البروتوكول قيمة الطاقة المزدوجة الأشعة المقطعية والحيوانات الأليفة/CT تصوير أساليب تقييم الورم التصوير وكفاءة. يوضح هذا المقال طرق البحث والنتائج التي حصل عليها الطاقة المزدوجة الأشعة المقطعية والحيوانات الأليفة/CT لتقييم تنظيم الجينات والعلاج المستهدف من ورم خبيث البريتوني سرطان المعدة.

Abstract

وما زال سرطان المعدة الرابعة في معدل الإصابة بالسرطان في جميع أنحاء العالم مع البقاء على قيد الحياة خمس سنوات من فقط 20% إلى 30%. ورم خبيث البريتوني هو النوع الأكثر شيوعاً من ورم خبيث التي تصاحب سرطان المعدة أونريسيكتابلي وهو محدد نهائي للتشخيص. الوقاية من والسيطرة التنمية من ورم خبيث البريتوني يمكن أن تلعب دوراً في المساعدة على إطالة أمد بقاء مرضى سرطان المعدة. تقنية تصوير غير الغازية والكفاءة سوف تساعدنا على تحديد عملية الغزو وورم خبيث من ورم خبيث البريتوني ورصد التغيرات في العقيدات الورم استجابة للعلاج. وهذا سيمكننا من الحصول على وصف دقيق لعملية التنمية والآليات الجزيئية لسرطان المعدة. لقد قمنا مؤخرا بوصف التجربة باستخدام منصات التصوير المقطعي (PET/CT) "التصوير المقطعي" (دكت) والتصوير المقطعي بالبوزيترون/يحسب الطاقة المزدوجة للكشف ورصد المعدة ورم خبيث في نماذج الفئران عارية. وقد أظهرنا أن الرصد المستمر الأسبوعية مع دكت والحيوانات الأليفة/الأشعة المقطعية يمكن تحديد التغيرات الدينامية في ورم خبيث البريتوني. SFRP1-أوفيريكسبريشن في نماذج الفئران سرطان المعدة أظهرت إيجابية الأداء الإشعاعية وامتصاص فدج أعلى وزيادة تعزيز، وسيارات الدفع الرباعيماكس (امتصاص موحدة القيمة) من العقيدات أظهرت وجود اتجاه تغيير واضح في استجابة للعلاج المستهدفة للمانع TGF-β1. في هذا المقال، وصف إجراءات التصوير غير الغازية مفصلة لإجراء بحوث أكثر تعقيداً في ورم خبيث البريتوني سرطان المعدة باستخدام نماذج حيوانية، وقدمت نتائج التصوير الممثل. باستخدام تقنيات التصوير غير الغازية ينبغي أن تمكننا من فهم آليات tumorigenesis أفضل ورصد نمو الورم، وتقييم أثر التدخلات العلاجية لسرطان المعدة.

Introduction

سرطان المعدة (GC) لا يزال خبيثة الرابعة الأكثر شيوعاً وسبب الرائدة في الثانية معدل وفيات السرطان في جميع أنحاء العالم1. على الرغم من الدقة في التشخيص والعلاج من الإصابة بسرطان المعدة قد تحسنت كثيرا، ورم خبيث البريتوني هو النقطة الأكثر أساسية لتشخيص سرطان المعدة أو تكرار وهو محدد نهائي للوفاة بعد العمل الجراحي2. من المقبول عموما أن نشر البريتوني وضع تهدد الحياة من ورم خبيث، حيث يصبح المرض لا يمكن السيطرة عليها، وتشخيص المريض ضعف حالما يتم إنشاء نشر البريتوني. ولذلك، الكشف وتقييم التأثير العلاجي لسرطان المعدة ورم خبيث البريتوني حاسم بالنسبة للممارسة السريرية.

تزايد حالات الإصابة والوفيات من سرطان المعدة قد حفزت الباحثين لتحديد آلياته الجزيئية. التعبير عالية من الجينات مثل البروتين يفرز المتصلة فريزليد 1 (sFRP1) يمكن أن تؤدي إلى تنشيط المسار إشارة في المراحل المبكرة من سرطان المعدة، وتعزيز عملية النمو والانتشار، والتمايز، والمبرمج ورم3 , 4 , 5 , 6 , 7-sFRP1-أوفيريكسبريشن الخلايا وأظهرت زيادة في التعبير عن TGFβ والغايات النهائية، ووساطة TGFβ EMT8. وقد أثبتت الدراسات السابقة أن مستوى TGF-β1 يرتبط بورم خبيث البريتوني وتنم مراحل الإصابة بسرطان المعدة. لقد قمنا بوصف التغيرات في انتشار الخلايا السرطان ينظم sFRP1 overexpression وتثبيط TGF-β1، والنماذج الحيوانية المعمول لورم خبيث البريتوني لإظهار أداء تصوير الورم تحت آثار تنظيم الجينات.

نماذج حيوانية لسرطان المعدة أدوات لا غنى عنها لإجراء بحوث التنمية الورم وتجريب استراتيجيات علاجية مختلفة دون الحاجة إلى التضحية بالحيوانات. نماذج حيوانية مفيدة في دراسة آليات تشكيل الأورام وخلايا المنشأ وتحديد وجود الخلايا الجذعية السرطانية، ودراسة مختلف استراتيجيات علاجية الرواية. ولذلك، يمكن أن توفر تقنية غير الغازية في الوقت الحقيقي وصف دقيق لتطور أورام المعدة وورم واستجابة للعلاجات، والتي يمكن تحديد وضع العقيدات خبيث البريتوني في الفئران عارية ورصد التغيرات في ورم في الاستجابة لمختلف التدخلات العلاجية والتجريبية.

في الوقت الراهن، متعددة للكشف عن "الأشعة المقطعية" (MDCT) يلعب دوراً هاما في تنظيم تنم سرطانات المعدة ومفيد للتنبؤ ريسيكتابيليتي الورم تأهيلي9. ومع ذلك، الدراسات الإشعاعية للمرضى الذين يعانون من سرطان المعدة ثبت الأشيع أساسا تستند مورفولوجيا. تصوير دكت يمتد المعلمات لتعكس المعلومات الفنية بتوفير الصور أحادية اللون، وقد تكون مفيدة لتحسين ن انطلاق الدقة لسرطان المعدة. وعلاوة على ذلك، ستمكن هذه التقنية الحصول على الصور تحلل المواد التي قد تكون مفيدة للتفريق بين سرطان المعدة متباينة وغير متمايزة، وبين العقد الليمفاوية المنتشر وغير المنتشر10 . مع إدخال دكت، أضيفت أيضا الجانب التصوير الوظيفي للأشعة المقطعية للتطبيقات السريرية، والمساهمة في عمليات تقييم الفعالية العلاجية وتوقع التكهنات المريض11،،من1213. PET/CT تقنية تصوير مفيدة لكشف والتدريج من سرطان المعدة ويمكن تكرار الورم تقييم الفعالية14. انتشار الخلايا السرطانية والأوعية كلاهما يعتبر ضروريا في تطوير ورم يمكن كشفها15، أظهرت العقيدات الورم أداء إيجابي مع أعلى سيارات الدفع الرباعيكحد أقصى على "أساس" الحيوانات الأليفة/قيراط عن تفضيلها للهوائي تحلل، 18وفدج، النظير الغلوكوز، واستغلت الراسم واعدة في تشخيص الأورام الخبيثة، جنبا إلى جنب مع الحيوانات الأليفة/ط م16. هذا الأسلوب يعتمد على استهلاك السكر السريع لانسجة الورم وقد تطبيقات سريرية واسعة النطاق، بما في ذلك المساعدة في اكتشاف والتدريج، وتقييم لتشخيص الأورام، فضلا عن رصد استجابة للأورام للعلاج17 , 18-كأساليب غير الغازية، ودكت والحيوانات الأليفة/الأشعة المقطعية التي استخدمت لتشخيص الأورام الخبيثة وتقييم استجابة الورم للعلاجات المختلفة.

مجموعتنا وقد تم استخدام هذا الأسلوب التصوير غير الغازية مع الماسحات الضوئية دكت والحيوانات الأليفة/CT لكشف ورصد عملية نمو الورم وورم خبيث في المعيشة الفئران19. وبحثنا في تصوير النتائج الناجمة عن sFRP1-أوفيريكسبريشن في سرطان المعدة الخلايا في فيفو استخدام الفئران عارية، ودكت PET/CT، ووصف العلاج التغييرات من سيارات الدفع الرباعيماكس قيمة عقب استهداف المانع TGF-β1 لتأكيد تطوير العقيدات ورم في الصفاق بعد تحريض الجينات، وأيضا دراسة التغيرات في العقيدات ورم في الاستجابة لعلاجات تجريبية. في هذه الورقة، نقدم الإجراءات المفصلة للنمذجة المعدة ورم خبيث البريتوني في الفئران، والكشف عنها ورصدها مع دكت والحيوانات الأليفة/قيراط

Protocol

هذا العمل قد أنجز يتفق بشكل صارم مع المعايير المحددة في المبادئ التوجيهية للرعاية والاستخدام لمختبر الحيوانات من جامعة شنغهاي للاتصالات ووافقت عليه المختبر "لجنة الأخلاقيات الحيوان من مستشفى رويجين".

1-المعدة سرطان خبيث البريتوني نموذج الحيوان

  1. تقسيم خط خلية سرطان المعدة بشرية SGC-7901 متمايزة معتدلة إلى جماعة SGC-7901/sFRP1 وجماعة SGC-7901/ناقل. الثقافة هما مجموعات من الخلايا بشكل منفصل في 1640 RPMI تستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين و 100 وحدة/مل ستربتوميسين و 100 ميكروغرام/مل البنسلين عند 37 درجة مئوية في جو هوميديفيد مع شركة 5%2.
  2. استخدام 4-6 أسابيع-القديمة athymic الإناث بالب/ج الفئران عارية مع أوزان الجسم من 25 إلى 30 زاي مكان الحيوانات تحت شروط معينة خالية من العوامل الممرضة في مرفق لحيوان.
  3. تقسيم الفئران عشوائياً إلى مجموعة أوفيريكسبريشن sFPR1 ومجموعة sFPR1 تحميل فارغة.
    ملاحظة: كل مجموعة كانت الفئران عارية عشرة؛ وقسمت الفئران العشرين عشوائياً إلى مجموعة العلاج TGF-β1 ومجموعة مراقبة TGF-β1، مع الفئران عارية تصل إلى 5 في قفص الحيوان.
  4. إنشاء مجموعة نماذج xenograft خبيث البريتوني sFPR1-أوفيريكسبريشن بإدارة 150 ميليلتر (2 × 106 خلايا/مل) معلقات الخلايا SGC-7901/sFRP1 عن طريق تجويف البطن؛ خلايا SGC-7901/ناقل تدار بإنشاء مجموعة التحميل فارغة.
    ملاحظة: استخدم هيموسيتوميتير عد الأسلوب لتحديد تركيز خلايا20.
  5. إنشاء مجموعة نماذج xenograft خبيث البريتوني بإدارة 150 ميليلتر (2 × 106 خلايا/مل) معلقات الخلايا SGC-7901 عبر تجويف البطن. إدارة العلاج المستهدف للمانع TGF-β1 SB431542 بعد فترة أسبوعين للنمو عن طريق الحقن داخل بجرعة 100 ميليلتر/10 جرام من وزن الجسم يوميا للفئران في المجموعة المعالجة.
    1. إدارة المحلول الملحي العادي في نفس الجرعة للفئران في مجموعة التحكم.
  6. أداء دكت والحيوانات الأليفة/ط م المسح يوم 1 قبل العلاج و 1، 7 أيام، 14 يوما، وفترة 21 يوما بعد العلاج.

2-دكت لنموذج الحيوان خبيث البريتوني

ملاحظة: قد تحقق الحيوان تصوير التجربة على الطاقة المزدوجة الماسح الضوئي CT (انظر الجدول للمواد). لقد أنشأنا البروتوكول دكت التصوير ذات الصلة وفقا للدراسات السابقة.

  1. الإعداد دكت التصوير البروتوكول
    1. على الكمبيوتر وحدة تحكم التصوير، حدد الرمز "إدارة بروتوكول" لإدخال الواجهة التالية، ثم انقر فوق الخيار "إدارة بروتوكول" لعرض شاشة إدارة البروتوكول.
    2. في واجهة 'البروتوكول المستخدم'، حدد منطقة البطن لإدخال قائمة البروتوكولات البطن.
    3. انقر فوق مساحة فارغة في قوائم البروتوكول وحدد الزر "جديد" لكتابة اسم بروتوكول جديد: "الحيوان دكت المسح الضوئي". اضغط على مفتاح "Enter" في لوحة المفاتيح وحدد الزر "الكشاف" في إطار منبثق، انقر فوق "موافق" لإعداد هذه السلسلة الكشفية (المجموعة الأولى).
    4. حدد وضع "س" عن 'انتوميكل نقطة مرجعية' و "رئيس أول موقف ضعيف" 'اتجاه المريض'. انقر على الخيار "نقل السيارات"، وحدد موقع محطة العمل حيث سيتم تحميل سلسلة الصورة. اسم "المرحلة الكشفية" في "سلسلة الوصف".
    5. في شاشة '"تحرير طريقة العرض"'، تأكد من تعيين معلمات التفحص ذات الصلة كالتالي: "موقع ابدأ" وخيارات "نهاية الموقع" ترد في "S50" و "I50" على التوالي، "وادي الملوك" في "100"، "ما" في "80"، "90 درجة" "موقف الكشفية الجانبية"، "0°" لموقف الكشفية وكالة اسوشييتد برس " "، و" WW/WL الكشفية "في" 400/40 ".
    6. التالي، إنشاء السلسلة الثانية للمسح غير محسنة. انقر فوق "إنشاء سلسلة جديدة"، في إطار منبثق لتحديد الرموز "المحوري" و "إنشاء بعد".
    7. اسم السلسلة ك "-المرحلة جيم" في "سلسلة الوصف" وتشغيل "إظهار المترجم" في. في واجهة نوع المسح، حدد نوع المسح الضوئي "حلزوني"، و 0.5 s منذ فترة "التناوب"، انقر فوق الخيار "سرعة كثيف" لتعيين المعلمات (كاشف تغطية 40 مم، "سمك حلزونية" 0.625 مم، والنبرة والسرعة في 0.516:1/20.62، "وقت التناوب" في 0.5 s) في نافذة منبثقة انقر فوق "mA" نافذة، الفاصل الزمني في 0.625 مم، "الحلمة الهزال" في 0، حدد "الجسم صغيرة" سفوف، كيلوفولت في 100، ثم اكتب 600 لدليل ما.
    8. انقر فوق رمز "معلمات ريكون" وفتح إطار منبثق "ريكون الخيار". حدد "بالإضافة إلى" في وضع ريكون؛ انقر فوق الرمز "شريحة" لتحديد وضع "ss50 شريحة 50%" في 'شاشة الإعداد عسير'. تعيين المعلمات المتبقية كما يلي: دفوف في 25 سم، R/L و A/P مركز 0 سم، نوع ريكون حدد "ستند"، "حجم المصفوفة" في 512.
    9. إنشاء سلسلة الفحص الثالث لتعزيز المسح بتكرار الخطوة 2.1.8، تسميته ب "+ QC ج مرحلة" تشغيل "إظهار المترجم"؛ المجموعة الأولى هي إعداد سلسلة المرحلة الشرياني.
    10. في واجهة 'مسح نوع'، انقر فوق "GSI (التصوير الطيفي بالأحجار الكريمة)" وحدد نوع المسح "حلزوني"، وحدد البروتوكول "GSI-52" في إطار '"البطن GSI مسبق التحديد"'. مجموعة بدء تشغيل الموقع وإنهاء الموقع وفقا للمسح الضوئي غير محسنة.
      1. انقر فوق رمز "معلمات ريكون" وفتح إطار منبثق "ريكون الخيار". في "وضع ريكون"، انقر حدد "بالإضافة إلى" وفي 'GSI الخيار' "مراقبة الجودة"؛ المعلمات المتبقية هي نفسها كما في الخطوة 2.1.8.
    11. انقر فوق رمز "R2" وحدد "نعم" في علامة التبويب "ريكون تمكين" حدد "سمك" في 0.625 واكتب 0.625 "الفاصل الزمني". فتح الإطار المنبثق "الخيار ريكون"، في "وضع ريكون" حدد "إضافة إلى"؛ GSI خيارات، انقر فوق "مونو" وتعيين كيلو إلى 70 كيلو إلكترون فولط؛ في إطار الإعداد عسير، حدد "GS40 40%" وضع للإعداد GSI عسير. يتم تعيين المعلمات المتبقية مع الخطوة 2.1.8. اسم هذه الخطوة ك "+ ج 70keV المرحلة".
    12. انقر فوق رمز "R3" وحدد "نعم" في علامة التبويب "ريكون تمكين" تعيين "سمك" عند 1.25 ونوع 0.625 "الفاصل". فتح الإطار المنبثق "الخيار ريكون"، في "وضع ريكون" حدد "بلاس" و "الذكاء المحسن"؛ في خيارات GSI، انقر فوق "مونو"، تعيين في كيلو إلى 70 كيلو إلكترون فولط، وانقر فوق "ملف بيانات GSI"؛ ضمان الإعداد عسير GSI وفقا للخطوة 13. يتم تعيين المعلمات المتبقية كما هو الحال في الخطوة 2.1.8. اسم هذا الأمر بوصفه "+ ج مرحلة أحادية".
    13. انقر فوق "إضافة مجموعة" لإنشاء اثنين مسح مجموعات تمثل مرحلة المدخل والتأخير، على التوالي. تأكد من أن تتسق النطاقات "بدء تشغيل موقع" و "موقع نهاية" لكل مرحلة من مراحل الفحص والمعلمات المتبقية هي نفس المرحلة الشرياني. اكتب وقت التأخير في "إعداد مجموعة": المجموعة الأولى (المرحلة الشرياني) 0 ق، المجموعة الثانية (مرحلة المدخل) في 8 s، والمجموعة الثالثة (المرحلة تأخير) في 16 ثانية.
    14. انقر فوق خيار "قبول" لإنقاذ البروتوكول بعد الانتهاء من كافة الإعدادات.
  2. عملية التصوير دكت
    1. حدد الفئران عارية عشوائياً من العلاج والسيطرة على المجموعات قبل كل عملية مسح. ضع الحيوانات المختارة في أقفاص جديدة ووضع علامة عليها بشكل منفصل.
    2. سريع للفئران ح 4 مع المياه ولكن دون طعام أو الأسرة.
    3. إزالة الفئران التجريبية من مركز التجارب الحيوانية ح 1 قبل المسح الضوئي، وتأكد من الفئران وتوضع في بيئة دافئة جديدة حتى تبدأ عملية الفحص.
    4. تخدير جميع الفئران التجريبية مع حقن داخل 2.5% بينتوباربيتال الصوديوم (1.0 مل/كغ من وزن الجسم) قبل دكت مسح التصوير، وتأكيد عمق التخدير عن طريق المعاكسة قرصه أخمص القدمين. استخدام مرهم على العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
      ملاحظة: تأكد من أن رأس كل الماوس عارية في موقف أقل عند الحقن المخدرات، وبالتالي تقليل الضرر إلى الأجهزة الداخلية. تولي اهتماما للحقن وعمق الحقن. ضع غيض المحاقن بزاوية 45 درجة إلى الداخل من اليمين/اليسار أسفل البطن، وضمان أن يكون عمق إبرة أن يتم تجنب حقن في الأمعاء والأجهزة الأخرى.
    5. انقر فوق رمز "المريض الجديد"، وإدخال المعلومات الأساسية حول الماوس بما فيه معرف واسم المريض. في 'البروتوكول المستخدم'، انقر فوق "بروتوكول البطن" وحدد البروتوكول "مسح دكت الحيوان" لإدخال واجهة العملية.
    6. بمجرد فعل التخدير، نقل كل الماوس على منصة حيوان لاعبا أساسيا في موقف ضعيف، وإصلاح ذيله مع الشريط للتأكد من أنه لن ينحني. تعقيم الذيل مع الكحول لحقن عامل التباين اللاحقة الذيل الوريد.
    7. نقل سرير الأشعة المقطعية حيث يكون الليزر خط تحديد المواقع الخارجية على أسفل البطن للحيوان. انقر فوق الزر "إعادة تعيين" عند الانتهاء من تحديد المواقع.
      ملاحظة: يضمن وضع خطوط تحديد المواقع الخارجية على أسفل البطن للحيوان أن الحيوانات توجد قدر الإمكان على الجزء الخارجي الجهاز للإدارة عامل التباين سهلة الوريد الذيل.
    8. انقر فوق رمز "تأكيد" واتبع وامض ترتيب الأزرار الموجودة على لوحة المفاتيح لإكمال الكشفية المسح الضوئي. حدد سلسلة "المقبل" رمز بعد الكشفية المسح الضوئي اكتمال، وأدخل الواجهة للمسح غير محسنة.
    9. في الشاشة الأيسر، وتعيين "بدء تشغيل موقع" و "نهاية موقع" على الكشفية وجهات النظر لتعريف نطاق المسح الضوئي. الحفاظ على نفس النطاق في 'الكشفية الجانبي' و 'AP الكشفية' وتغطية حجم الجسم بأكمله للحيوان.
    10. انقر فوق رمز "تأكيد" واتبع وامض ترتيب الأزرار الموجودة على لوحة المفاتيح لإكمال الكشفية المسح الضوئي.
    11. حقن كل الماوس مع إيوباميدول في جرعة من 0.2 مل/100 غرام عن طريق الوريد الذيل.
      ملاحظة: لقد اخترنا إدارة متوسطة التباين يدوياً، والإبقاء على معدل الحقن مستقرة قدر الإمكان. أنها تفضي إلى القبض على تعزيز المبكر للورم أثناء التصوير.
    12. انقر فوق "المجموعة المقبلة" لإجراء المسح المحسنة. تعيين "بدء تشغيل موقع" و "نهاية الموقع" وفقا للمسح الضوئي غير محسنة. انقر فوق رمز "تأكيد" واتبع وامض ترتيب الأزرار الموجودة على لوحة المفاتيح لإكمال مسح تعزيز دينامية والمرحلة إينكلودينجارتيريال، ومرحلة المدخل، والمرحلة المتأخرة.
      ملاحظة: انقر فوق رمز "تأكيد" فورا لبدء المسح الضوئي بعد أن يتم حقن عامل تباين. هذه أساسية وحاسمة بالنسبة للمسح الضوئي المحسنة لضمان أفضل صورة المرحلة الشرياني يتم التقاطها. ومع ذلك، بعض تأخير الوقت بعد النقر فوق رمز "تأكيد" يمكن التأكد من أن الموظفين التجريبية قد سحبت بأمان من غرفة الفحص.
    13. انقر فوق "إنهاء الامتحان" للخروج من واجهة المسح بعد اكتمال المسح الضوئي؛ سيتم تحميل سلسلة الصورة تلقائياً إلى محطة العمل.
    14. وضع الحيوان في أقفاص فارغة بعد الانتهاء من المسح الضوئي مع جميع الفئران، ومراقبة لهم حتى قد وعيه. لا تترك حيوان غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية. ثم نقل في الفئران إلى غرفة نظيفة حيوان.
  3. وظيفة دكت التصوير التحليل
    1. حدد موقع سلسلة الفئران في ووركستاتيونينتيرفيس دكت (انظر الجدول للمواد) وحدد "+ ج أحادي المرحلة" قوائم سلسلة. فتح "عارض حجم GSI" وحدد البروتوكول "GSI ت ت العامة" من واجهة 'GSI مدير البروتوكول'.
    2. انقر فوق التعليق النشط "نوع العرض" في الزاوية العلوية اليسرى من زوايا الصورة وحدد اتجاه "الاكليلية" من القائمة المنسدلة.
    3. لصورة المعاينة، انقر فوق التعليق التوضيحي النشطة "المجلد 1" في الزاوية العلوية اليمنى وحدد مجلدات "مونو" من القائمة المنسدلة. وبالمثل، في آخر صورة المعاينة، حدد المجلدات "اليود (المياه)". انقر فوق واضغط زر الماوس الأيسر واسحب الصورة من منفذ العرض "اليود (المياه)" إلى "أحادية" وخانة "مزيج الآراء" للحصول على الصور الملونة التي تنصهر فيها.
    4. انقر واسحب من وسط الأيقونة "الصورة التمرير" لمراقبة الصور. حفظ الصور التي تظهر نتائج إيجابية كالصور الملونة التي تنصهر فيها.

3-PET/CT لنموذج الحيوان خبيث البريتوني

ملاحظة: انظر جدول المواد لتصوير الحيوانات الأليفة/الأشعة المقطعية المستخدمة. لقد أنشأنا المتصلة الحيوانات الأليفة/الأشعة المقطعية التصوير البروتوكول وفقا لهذه المادة21.

  1. إعداد بروتوكول تصوير مايكرو-PET/CT
    1. لكل-جهاز الأشعة المقطعية، تعيين الحالي في 500 µA، الجهد في 80 كيلو فولت ووقت التعرض على 200 مرض التصلب العصبي المتعدد الخطوات 240 للتناوب 240°. للأشعة السينية للكشف عن، حدد القرار "تكبير النظام منخفضة" مع حقل التصوير المحوري 78 مم ووضع سرير واحد. استخدام الأسلوب "التعمير مخروط الشعاع المشترك" وحدد الخيار "إعادة الإعمار في الوقت الحقيقي"، بحيث يمكن الاتصال الكمبيوتر المضيف مع الكمبيوتر إعادة الإعمار مكرسة الوقت الحقيقي (كوبرا) لبدء المهمة.
    2. للحيوانات الأليفة اقتناء، في خيار "الحصول على الوقت" تعيين "وقت المسح الضوئي الثابتة" إلى 600 ثانية (10 دقائق). تعيين "دراسة النظائر" إلى "مستوى الطاقة" إلى 350-650 كيلو إلكترون فولط و F-18.
    3. لإنتاج الحيوانات الأليفة الرسم البياني، تعيين الإطار "ديناميكية" ك "أسود" للبيانات العملية كإطار واحد طوال مدة تحقيق مسح ثابت. تعيين نوع الرسم البياني ل "3D" وحدد الخيار "أي تصويب مبعثر".
    4. لإعادة إعمار الحيوانات الأليفة، إعادة بناء الصور باستخدام خوارزمية OSEM3D تليها خريطة أو مخطط لحمل22 المقدمة من وركستاتيونسوفتواري PET/CT (انظر الجدول للمواد).
  2. التحضير قبل التصوير PET/CT
    1. سريع للفئران التي خضعت لتجارب دكت ح 4 ونقل الفئران في أقفاص الحيوانات جديدة و 30 دقيقة قبل التصوير.
    2. وزن الفئران وسجل وزنهم.
    3. اتباع إجراءات السلامة للمعهد لحيازة وحمل حزمة تحتوي على مواد مشعة (ذاكرة الوصول العشوائي). استخدم كدرع واقية لتنفيذ 18وفدج (5 mCi)، وقياس النشاط الإشعاعي من مجموع 18وفدج مع معايرة جرعات.
    4. تمييع ال 18وفدج مع المحلول الملحي العادي للنشاط الإشعاعي المناسبة لحقن الفئران.
      ملاحظة: يجب أن يكون النشاط المخفف من 18وفدج المتوفرة في 100-200 µCi/100 ميليلتر لكل الماوس.
      1. رسم 200 ميليلتر 18الحل وفدج في محقن 1 مل. قياس النشاط الإشعاعي للمحاقن كله مع معايرة جرعة وتسجيل الوقت إعداد 18وفدج.
    5. حقن كل الماوس مع 200 ميليلتر 18وفدج الحل عن طريق الحقن الوريدي الذيل وتسجيل الوقت حقن 18وفدج. بعد حقن جميع الفئران، قياس الإشعاع المتبقي من المحاقن مع معايرة الجرعة فورا وتسجيل الوقت الذي أخذ القياسات بعد انتهاء الحقن.
    6. حساب النشاط حقن 18وفدج لكل الماوس بواسطة الصيغة التالية: حقن النشاط (µCi) = نشاط في حقنه قبل الحقن-النشاط في المحاقن بعد الحقن.
  3. عملية التصوير PET/CT
    1. وضع الحيوان في دائرة التعريفي لتخدير؛ تخدير الماوس استخدام المستنشق 3% إيسوفلوراني في الأوكسجين بعد انتهاء حقن 18وفدج.
      ملاحظة: اتبع جميع المبادئ التوجيهية للرفق بالحيوان المناسب للعملية؛ الدفء في الفئران باستخدام لوح التدفئة. استخدام مرهم العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
    2. بمجرد فعل التخدير، حرك الماوس على السرير الصغير-ط م المسح الضوئي مع المحافظة على التخدير المستمر والاحترار. ضع رأس الماوس داخل قناع وجه مخروط أن يسلم باستمرار Isoflurane (2 في المائة) في الأوكسجين بمعدل تدفق 2 لتر/دقيقة مكان الماوس في موقف ضعيف لضمان الموقف يتسق مع ذلك في فحص دكت.
    3. نقل الحيوانات إلى مدخل PET/CT الماسح الضوئي، انقر فوق رمز "الليزر" من شريط أدوات عارض، واستخدام واجهة التحكم لوحة اللمس لتحريك السرير حيث يقع بطن الماوس في وسط الحيوانات الأليفة والتصوير المقطعي الحقل من الرأي (FOV) أثناء المسح الضوئي. في الإطار "محاذاة الليزر"، حدد "نوع المسح الضوئي أولاً" كما "المقطعية"، و "الحيوانات الأليفة اقتناء المدرجة في سير العمل" كالخيار.
    4. فتح إطار "عرض الكشفية" واكتساب رؤية الكشفية الأشعة السينية. ضبط موضع السرير الحيوان بحيث يقع مركز ميدان يرى الأشعة المقطعية في مركز الهيئة الماوس.
    5. حدد البروتوكول الذي أنشئ سابقا (في الخطوة 3، 1). إدخال عدد الفئران تصويرها (تباعا) في الإطار المنبثق، ثم انقر فوق الخيار "برنامج الإعداد"، ثم أدخل الوزن. ثم انقر فوق الخيار "برنامج الإعداد" مرة أخرى واتبع الإرشادات التي تظهر في نافذة منبثقة لإكمال الإعداد.
    6. انقر فوق رمز "بدء تشغيل سير العمل" لبدء المسح الضوئي.
    7. تقييم جودة الصور المقطعية والحيوانات الأليفة المكتسبة بعد الانتهاء من جميع عمليات التفحص. نقل البيانات من خلال الشبكة لوظيفة التصوير التحليل لمزيد من الدراسة.
      ملاحظة: ضبط عرض النافذة ومستوى الإطار من الصورة للتأكد من أنه يتم عرض على النقيض من الأجهزة بشكل صحيح. التحقق من حل الأجهزة في الصور للتأكد من جودة التصوير.
    8. إزالة الحيوان من التصوير وفورا euthanize بخلع عنق الرحم. استخدام نظام التصوير للحيوان القادمة تباعا.
  4. وظيفة PET/CT تصوير التحليل
    1. فتح برنامج محطة PET/CT، استيراد بيانات سلسلة الصور المقطعية والحيوانات الأليفة إلى البرنامج. في الإطار "التسجيل"، انقر فوق الخيار "التحليل العام" لتسجيل الصور المقطعية والحيوانات الأليفة معا، واختيار نموذج "سكاي" ضمن إطار "استعراض" لإظهار محاذاة مثالية بين الصور المقطعية والحيوانات الأليفة.
    2. تحديد العقيدات البريتوني مع المراجع المقدمة من الصور المشاركة المسجلة في إطار "المنطقة للفائدة (ROI) التحديد الكمي".
    3. في الإطار "المنطقة للفائدة (ROI) التحديد الكمي"، رسم دوروا مع أدوات أكثر الصور تنصهر وتحرير حجم وشكل من العائد على الاستثمار، سجل قيمةماكس سيارات الدفع الرباعي، ثم الإخراج وحفظ الصور المدمجة المحددة.

النتائج

وأجريت على الفئران عارية بعد أسبوعين حقن خط الخلية دكت والحيوانات الأليفة/ط م المسح الضوئي. الصور GSI أسفرت عن نتائج ممتازة لعرض ورم خبيث تحت الجلد بعد كفاف البطن لمجموعة أوفيريكسبريشن sFRP1، وورم خبيث مع تعزيز الطرفية ما أكده مقياس ألوان الصورة (الشكل 1أ...

Discussion

نماذج حيوانية قد استخدمت على نطاق واسع في دراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء الإصابة بسرطان المعدة، وأن التجربة مع مختلف الاستراتيجيات العلاجية23،،من2425. في هذه الدراسة، التي وصفناها بروتوكول مفصل لسرطان المعدة ورم خبيث البريتوني الفئ?...

Disclosures

الكتاب قد لا يوجد تضارب في إعلان.

Acknowledgements

هذا العمل كان يدعمها تشرف (رقم U1532107)، ومشروع "شانغهاي جياو تونغ جامعة الهندسة الطبية" (رقم YG2014MS53). الكتاب تود الاعتراف بأنها لي وشين يان لتعليقات مفيدة وجهود الدعم التقني لتطوير دكت والحيوانات الأليفة/الأشعة المقطعية التصوير أسلوب.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
IohexolBEJING BEILU PHARMACEUTICAL CO,LTDNMPN:H20053800non-ionic contrast medium for DECT scan
normal salineHUNAN KELUN PHARMACEUTICAL CO,LTDNMPN:H43020455placebo of control group
BALB/c nude mice SLAC LABORATORY ANIMALBALB/cASlac-nuanimal model
SGC-7901  cellsLibrary of typical culture of Chinese academy of sciencesTCHu 46gastric cancer cell 
SB431542SelleckNo.S1067TGF-β1 inhibitor
GE Discovery CT750 HDGE Healthcaredual-energy spectral CT scanner 
AW Volumeshare5GE Healthcaredual-energy spectral CT workstation
Siemens Inveon micro-PET/CTSiemens Preclinical Solutionpositron emission tomography/
computed tomography scanner 
Inveon Acquisition WorkplaceSiemens Preclinical SolutionPET-CT workstation

References

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int J Cancer. 136 (5), 359-386 (2015).
  2. Kobayashi, D., Kodera, Y. Intraperitoneal chemotherapy for gastric cancer with peritoneal metastasis. Gastric Cancer. 20, 111-121 (2017).
  3. Gu, W., Li, X., Wang, J. miR-139 regulates the proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma through the WNT/TCF-4 pathway. Oncol Rep. 31 (1), 397-404 (2014).
  4. Sugai, T., et al. Molecular analysis of gastric differentiated-type intramucosal and submucosal cancers. Int J Cancer. 127 (11), 2500-2509 (2010).
  5. Shi, Y., He, B., You, L., Jablons, D. M. Roles of secreted frizzled-related proteins in cancer. Acta Pharmacol Sin. 28 (9), 1499-1504 (2007).
  6. Amin, N., Vincan, E. The Wnt signaling pathways and cell adhesion. Front Biosci (Landmark Ed). 17, 784-804 (2012).
  7. Jones, S. E., Jomary, C. Secreted Frizzled-related proteins: searching for relationships and patterns. Bioessays. 24 (9), 811-820 (2002).
  8. Qu, Y., et al. High levels of secreted frizzled-related protein 1 correlate with poor prognosis and promote tumourigenesis in gastric cancer. Eur J Cancer. 49 (17), 3718-3728 (2013).
  9. Pan, Z., et al. Determining gastric cancer resectability by dynamic MDCT. Eur Radiol. 20 (3), 613-620 (2010).
  10. Pan, Z., et al. Gastric cancer staging with dual energy spectral CT imaging. PLoS One. 8 (2), 53651 (2013).
  11. Kim, M. J., Hong, J. H., Park, E. S., Byun, J. H. Gastric metastasis from primary lung adenocarcinoma mimicking primary gastric cancer. World J Gastrointest Oncol. 7 (3), 12-16 (2015).
  12. Maeda, H., Kobayashi, M., Sakamoto, J. Evaluation and treatment of malignant ascites secondary to gastric cancer. World J Gastroenterol. 21 (39), 10936-10947 (2015).
  13. Bensinger, S. J., Christofk, H. R. New aspects of the Warburg effect in cancer cell biology. Semin Cell Dev Biol. 23 (4), 352-361 (2012).
  14. Smyth, E., et al. A prospective evaluation of the utility of 2-deoxy-2-[(18) F]fluoro-D-glucose positron emission tomography and computed tomography in staging locally advanced gastric cancer. Cancer. 118 (22), 5481-5488 (2012).
  15. Oka, S., Uramoto, H., Shimokawa, H., Iwanami, T., Tanaka, F. The expression of Ki-67, but not proliferating cell nuclear antigen, predicts poor disease free survival in patients with adenocarcinoma of the lung. Anticancer Res. 31 (12), 4277-4282 (2011).
  16. Zhao, C. H., Bu, X. M., Zhang, N. Hypermethylation and aberrant expression of Wnt antagonist secreted frizzled-related protein 1 in gastric cancer. World J Gastroenterol. 13 (15), 2214-2217 (2007).
  17. Cheson, B. D. Role of functional imaging in the management of lymphoma. J Clin Oncol. 29 (14), 1844-1854 (2011).
  18. Fuster, D., et al. Preoperative staging of large primary breast cancer with [18F]fluorodeoxyglucose positron emission tomography/computed tomography compared with conventional imaging procedures. J Clin Oncol. 26 (29), 4746-4751 (2008).
  19. Lin, H., et al. Secreted frizzled-related protein 1 overexpression in gastric cancer: Relationship with radiological findings of dual-energy spectral CT and PET-CT. Scientific Reports. 7, 42020 (2017).
  20. Cadena-Herrera, D., et al. Validation of three viable-cell counting methods: Manual, semi-automated, andautomated. Biotechnol Rep (Amst). 7, 9-16 (2015).
  21. Wang, X., Minze, L. J., Shi, Z. Z. Functional imaging of brown fat in mice with 18F-FDG micro-PET/CT. J Vis Exp. (69), (2012).
  22. Grootjans, W., et al. Performance of 3DOSEM and MAP algorithms for reconstructing low count SPECT acquisitions. Z Med Phys. 26 (4), 311-322 (2016).
  23. Chang, H. R., et al. Improving gastric cancer preclinical studies using diverse in vitro and in vivo model systems. BMC Cancer. 16, 200 (2016).
  24. Chang, H. R., et al. HNF4alpha is a therapeutic target that links AMPK to WNT signalling in early-stage gastric cancer. Gut. 65 (1), 19-32 (2016).
  25. Zheng, H. C., et al. BTG1 expression correlates with pathogenesis, aggressive behaviors and prognosis of gastric cancer: a potential target for gene therapy. Oncotarget. 6 (23), 19685-19705 (2015).
  26. Yamada, A., Oguchi, K., Fukushima, M., Imai, Y., Kadoya, M. Evaluation of 2-deoxy-2-[18F]fluoro-D-glucose positron emission tomography in gastric carcinoma: relation to histological subtypes depth of tumor invasion, and glucose transporter-1 expression. Ann Nucl Med. 20 (9), 597-604 (2006).
  27. Hirose, Y., et al. Relationship between 2-deoxy-2-[(18)F]-fluoro-d-glucose uptake and clinicopathological factors in patients with diffuse large B-cell lymphoma. Leuk Lymphoma. 55 (3), 520-525 (2014).
  28. Tchou, J., et al. Degree of tumor FDG uptake correlates with proliferation index in triple negative breast cancer. Mol Imaging Biol. 12 (6), 657-662 (2010).
  29. Coleman, R. E., et al. Concurrent PET/CT with an integrated imaging system: intersociety dialogue from the Joint Working Group of the American College of Radiology the Society of Nuclear Medicine, and the Society of Computed Body Tomography and Magnetic Resonance. J Am Coll Radiol. 2 (7), 568-584 (2005).
  30. Brepoels, L., et al. Effect of corticosteroids on 18F-FDG uptake in tumor lesions after chemotherapy. J Nucl Med. 48 (3), 390-397 (2007).
  31. Spaepen, K., et al. [18)F]FDG PET monitoring of tumour response to chemotherapy: does [(18)F]FDG uptake correlate with the viable tumour cell fraction. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 30 (5), 682-688 (2003).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

131 CT PET CT

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved