JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

ونحن تصف تطور نموذج كروي، ثلاثي الأبعاد في المختبر التي تمكننا من اختبار المعيار الحالي لنظم العلاج التجريبي للرأس والعنق الخلايا الحرشفية في خطوط الخلايا، تهدف إلى تقييم العلاج قابلية والمقاومة على الخلايا الأولية من العينات البشرية في المستقبل.

Abstract

خيارات العلاج الحالية للرأس المتكررة والمتقدمة والرقبة الخلايا الحرشفية (HNSCC) أرفق الإشعاع والكيماوي-الإشعاع النهج مع أو بدون عملية جراحية. في حين نظم العلاج الكيميائي على أساس البلاتين حاليا تمثل معيار الذهب من حيث الفعالية، وترد في الغالبية العظمى من الحالات، نظم العلاج الكيميائي الجديدة، إلا وهي العلاج المناعي آخذة في الظهور. ومع ذلك، معدلات الاستجابة والعلاج آليات المقاومة لنظام العلاج الكيماوي أما يصعب التنبؤ وتظل مفهومة غير كاف. اختلافات واسعة من آليات المقاومة الكيماوي والإشعاع معروفة حتى الآن. تصف هذه الدراسة وضع مقايسة موحدة، والفائق في المختبر لتقييم الاستجابة HNSCC الخلية خط لمختلف الأنظمة العلاجية العلاج، ونأمل في الخلايا الأولية من المرضى الفردية كأداة مستقبل للورم شخصية العلاج. المقايسة صمم لإدماجها في خوارزمية مقياس مراقبة الجودة للمرضى هنسكك في مركز الرعاية الثالثية بنا؛ ومع ذلك، سيكون هذا موضوع دراسات المستقبلية. الجدوى التقنية تبدو واعدة للخلايا الأولية من ورم الخزعات من المرضى الفعلية. ثم يتم نقل العينات إلى المختبر. يتم فصل خزعات ميكانيكيا متبوعاً بالهضم الأنزيمي. ثم تستزرع خلايا في قنينات الثقافة خلية التصاق منخفضة للغاية التي تروج لتشكيل تكتلات خلية ثلاثية الأبعاد، على شكل كروي استنساخه وموحدة وعفوية. ثم الماغنيسيوم على استعداد للتعرض للإشعاع الكيماوي البروتوكولات وبروتوكولات العلاج المناعي حسب الحاجة. حجم الخلية النهائية على البقاء وكروي مؤشرات قابلية العلاج ويمكن استخلاص ذلك في الاعتبار في المستقبل لتقييم استجابة المرضى العلاج المحتمل. هذا النموذج يمكن أن يكون أداة قيمة وفعالة من حيث التكلفة نحو شخصية علاج سرطان الرأس والرقبة.

Introduction

الرأس والعنق الخلايا الحرشفية (HNSCC) هو سادس أكثر أنواع السرطان شيوعاً في جميع أنحاء العالم مع حدوث ارتفاع المرضية المرتبطة بالإصابة المخاطية فيروس الورم الحليمي البشري (فيروس الورم الحليمي البشري)، إلى جانب غالبية الحالات الناجمة عن إفراط النيكوتين والكحول الاستهلاك 1،2. بينما عادة علاجها جيدا مع الاستئصال الجراحي، عادة جنبا إلى جنب مع تشريح العقدة الليمفاوية عنق الرحم، أورام أصغر ومراحل ما قبل الغازية علاج هنسكك مرحلة متقدمة والمتكررة لا تزال صعبة بسبب غزو الورم العدوانية مع انتشار المنتشر والمقاومة للإشعاع والعلاج الكيميائي البروتوكولات3،4،،من56،،من78. تشير الدراسات الأخيرة إلى تقلب عالية من النمط الظاهري الخلوية، وتوصيف الفرعية المتمثلة في تعميم ونشر ورم الخلايا قد بدأت للتو9،10. اعتقاد سابق من ورم صلبة وموحدة قد الجماهيري المزمع تنقيحها في ضوء الدراسات التي أجريت مؤخرا في الماضي سنوات11،،من1213،14. النهج الحالي لتوصيف الورم وتحديد الطفرات الرئيسية يمكن تحديد عدد الجينات التي يبدو أنها مرتبطة بمقاومة العلاج، لكنه يظل نهجاً باهظة التكلفة. وعلاوة على ذلك، لا تسمح معرفة التركيب الوراثي تنبؤ موثوق بها من النمط الظاهري وردها العلاج بالضرورة.

وهناك بعض التقدم في تحسين البقاء على قيد الحياة عموما وخالية من الأمراض للمرض مرحلة متقدمة والمتكررة. للنيكوتين-فضلا عن سرطان المرتبطة بالفيروس، أرفق خيارات العلاج الحالية إلى جانب الجراحة الإشعاعية العدوانية ونظم العلاج الكيميائي على أساس البلاتين. وكانت هناك آثار بالنسبة لمعدلات استجابة مختلفة بين سرطان فيروس الورم الحليمي البشري-السلبية والإيجابية؛ ولكن هذا لم يؤدي إلى تغيير وجه عام المبادئ التوجيهية للعلاج. المقاومة تجاه الإشعاع والعلاج الكيميائي هو ظاهرة واسعة انتشار في جميع مراحل الورم ويوجد للبلاتين--على أساس العلاج الكيميائي كذلك أما بالنسبة للعلاج المستهدفة (مكافحة-EGFR؛ مستقبلات عامل نمو البشرة) ومؤخرا بدأت تظهر نقطة تفتيش تثبيط15. يأتي الإشعاع غير فعالة والعلاج الكيميائي بتكلفة عالية كبيرة الاعتلال المرضى من حيث خطر انخفاض وظيفة الكلي أو القلب بينها عسر البلع وجفاف الفم والتهاب الغشاء المخاطي. التنبؤ باستجابة العلاج قبل قرار مفهوم العلاج العام لكل مريض على حدة ويبدو أن الهدف الحاسم، ومنع مفاهيم العلاج لا لزوم لها، والآثار الجانبية والتكاليف.

لقد سعينا إلى إقامة نموذج لاختبار قابلية المعالجة الفردية للمريض نحو الحالية الكيماوي-الإشعاع القياسية التي يمكن إدماجها في الخوارزمية علاج الأورام العادية ومراقبة الجودة من وجهة نظر تقنية دائمة. وكان الهدف الأقصى لاستخدام النموذج دون استخدام خطوط الخلايا المتغيرة بشكل كبير والذين تتراوح أعمارهم بين، كما أنها تمثل ضعف الخلايا السرطانية البشرية الفعلية دون تغيرها وعدم التجانس كما نعلم الآن، أثناء إنشاء بروتوكول جرى في مختلف خطوط الخلايا. أن تكون مستقلة فقط من خطوط الخلايا المتوفرة تجارياً، نحن مؤخرا بنجاح إنشاء خط خلية وسيطة تسمى "البيكا" من الخلايا هنسكك الأولية من عينات الأورام البشرية مع علامات الخلوية يحافظ على الممرات السطحية والمحدودة 16. ينبغي خط الخلية "بيكا هذا" بمثابة تمهيدا لوضع نموذج على الطريق إلى ثم في وقت لاحق عقب محاكمات مع الخلايا السرطانية البشرية الطازجة من ورم الخزعات. وقد ثبت أن الخلايا في خلية ثلاثية الأبعاد تتفاعل الثقافات بشكل مختلف وأكثر في فيفو-تود إدارة عقاقير مضادة للسرطان من تلك التي تنمو في مونولاييرس17،،من1819،20 ،21، أساسا بسبب الحفاظ على الهجرة والتمايز الفرعية خصائص معينة خلية فرعية22،،من2324. هنا، يمكننا وصف البروتوكول لنموذج ثلاثي الأبعاد على أساس كروي من خطوط الخلايا الوسيطة والخلايا الأولية الخلايا الحرشفية البشرية وطرق كيفية دمج هذا نموذج في علاج سرطان الرأس والرقبة الجراح والأورام ( الشكل 1).

Protocol

جميع الدراسات التي تظهر في هذه المخطوطة، هي استخدام عينات من الأورام البشرية، محمية تحت وفي موافقة مع القرارات السابقة من الطب من ماينز/جامعة "ميونيخ، الأخلاقيات الطبية على مركز" اللجنة. المرضى قد أعطت الموافقة عن علم وفقا للمبادئ التوجيهية القانونية الوطنية الموافقة على الاستخدام العلمي للفائض من المواد البيولوجية التي تم الحصول عليها أثناء علاجهم. وقد أجريت بحوث امتثالا لجميع المبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان.

1-أخذ خزعة ورم من الرأس والخلايا الحرشفية هيك

  1. أداء العام (بروبوفول و/أو سيفوفلوراني، عامل استرخاء العضلات) أو تسلل المحلية (التراكايين 2%، أدرينالين)/سطح التخدير (xylocaine) في كرسي فحص غرفة العمليات أو الحنجرة. تصور كتلة ورم في الفم أجزاء تجويف/البلعوم/الحنجرة/أخرى من الجهاز الهضمي والجهاز التنفسي العلوي مع تشغيل أدوات موحدة، وإذا لزم الأمر، تحت المجهر.
  2. أخذ خزعة ورم طازجة من محيط الآفة السرطانية بأدوات غير حادة أو قطع. تجنب مركز الآفة سبب نخر الوفيرة في هذا المجال. وضع الأنسجة التي تم الحصول عليها في حاوية معقمة بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.
  3. بعد الخزعة، إجراء الأرقاء حسب الحاجة، على سبيل المثال-، مع جهاز تخثر القطبين أو أحادي القطب بالإضافة إلى استخدام المواد فاسوكونستريكتيفي.
  4. إحضار خزعة الورم يعتزم استخدامها لإجراء التجارب على ثقافة الخلية مباشرة إلى المسالك المختبر مجاورة. إرسال الخزعات الورم الأخرى إلى الطبيب الشرعي كالمعتاد استبعاد السرطان.
  5. تأكد من أن فني مختبر على استعداد لتجهيز العينة مباشرة.

2-تجهيز العينة الورم

  1. ضع العينة الورم على سطح مناسب والعقيمة وقطع عليه تماما مع استخدام واحد مشرط معقم أربا بأقل قدر ممكن.
    تنبيه: تأكد من موثق توثيقاً جيدا الحالة الأمراض المعدية والمنقولة عن طريق الدم والفني في اهتمام المؤسسات المعيارية بروتوكولات لمنع إبرة عصا أو إصابة القطع مع يحتمل أن تكون واقية من المواد المريض بروتوكولات لمتابعة بعد الإصابة المحتملة.
  2. بعد فصل الميكانيكية كافية من الأنسجة الأولية، وضع الأنسجة في قنينة تحتوي على كولاجيناز أنا/ثانيا واحتضانها ح 1 في 37 درجة مئوية. منخل من خلال 70 ميكرومتر صقر خلية مصفاة وتغسل التعليق مع حل هانكس "متوازن الملح" (حبس).
  3. بعد فصل ناجحة والغسيل اللاحقة، ضع تعليق يحتوي على 1-2 × 106 خلايا في T75 خلية ثقافة قوارير (75 سم2) ليصل إلى كونفلوينسي الفرعية في 5% CO2 ودرجة الحرارة 37 درجة مئوية. هذه الخطوة قد يستغرق مدة تصل إلى 10 أيام.
    1. استخدام keratinocyte خاصة الثقافة المتوسطة تتألف مما يلي: 125 مل دولبيكو تعديل النسور المتوسطة (دميم)، 250 مل من Keratinocyte تكمل المتوسطة (المتوسطة يكمل تتألف من 500 مل من المتوسطة سادس Keratinocyte، 15 ملغ للأبقار الغدة النخامية استخراج (بب)، 2.5 مل من البنسلين/ستربتوميسين، 150 نانوغرام المؤتلف طلائي النمو العامل البشري (لو)، ميليلتر 516 من 300 مم كاكل2، مزيج الأسهم لتكون معدّة مسبقاً)، 125 مل مزيج المغذيات F12، 10 ملغ بب (0.75 مل)، 75 نانوغرام الماشوب البشري لو (2 ميليلتر) ، 3.75 مل مم 200 لتر-Alanyl-لجلوتامين-ديبيبتيدي (جدول المواد).

3. بذر الخلايا في لوحات الثقافة خلية التصاق منخفضة للغاية

  1. تأكيد نمو الخلايا السرطانية تحت مجهر. عد الخلايا في الثقافة (الابتدائي أو خلية ثقافة) والبذور 5,000 الورم الرئيسي الخلايا أو الخلايا 1,000 2,000 خط الخلية المتوسطة/خط الخلية آخر في 200-300 ميليلتر من الوسائط (الخطوة 3.2.) داخل صفيحة التصاق منخفضة للغاية مع محدب، جولة القيعان (96-أيضا).
  2. الثقافة الخلايا في 5% CO2 في 37 درجة مئوية وفي أجزاء متساوية دميم ومجرى الهواء الخلايا الظهارية المتوسطة (بيجم)، 10% مصل بقرى الجنين، 1% البنسلين/ستربتوميسين، بيروفات صوديوم 1%، والأحماض الأمينية غير الأساسية 1%، 1% لالجلوتامين (الخطوة 2.3.). إذا كانت تستخدم خطوط الخلايا، وسائل الإعلام على أساس دميم غير كافية.
    1. إجراء تغييرات في وسائل الإعلام كل يوم. تولي اهتماما لا لنضح كروي مع ماصة أثناء تغييرات الوسائط. الثقافة الماغنيسيوم حتى مستوى النمو كما هو التوصل إلى المشروحة في 3.3 (حوالي 7-10 أيام).
  3. تأكيد تشكيل كروي عفوية تحت المجهر التي تبحث عن التكتلات خلية ثلاثية الأبعاد، على شكل كروي. استبعاد الآبار مع عدم انتظام و/أو تشكيل كروي متعددة من إجراء مزيد من التحقيقات.
    ملاحظة: الماغنيسيوم يجب أن تكون مرئية بالعين المجردة، أيضا، تيسير مواصلة تجهيزها والوسائط التغييرات كما هو موضح أدناه.

4-تعريض الماغنيسيوم لعلاج الورم المتعدد الوسائط القياسية أو التجريبية

  1. اختيار نظام علاج المطلوب. تصميم مجموعات كبيرة بما فيه الكفاية أن تسمح بإجراء مقارنات لعلاجات الماغنيسيوم غير المعالجة أو الماغنيسيوم تلقي نظم العلاج الجزئي فقط، على سبيل المثال. الإشعاع وحدها. حجم المجموعات التحكم يعتمد على تصميم المجموعة التجريبية ولا يمكن أن يعرف عالمياً.
  2. تبادل وسائل الإعلام إلى وسائل الإعلام مع إضافات، ووسائط الإعلام معنى بتشريعات و/أو الأجسام المضادة عند التركيزات المطلوبة. إضافة سيسبلاتين في تركيزات 2.5/5/10 ميكرومتر أو 5-فلوروراسيل (5FU) في 30 ميكرومتر.
    ملاحظة: لتجارب إنتاجية عالية أو عدد أحجام/كبير مجموعة كبيرة من الفئات، يمكن للمرء استخدام روبوت الآلي بيبيتينج كما نحن كذلك إنشاء في التجارب.
  3. وبدلاً من ذلك، تشع لوحات ثقافة الخلية مع الماغنيسيوم في 2 غراي استخدام مرفق إشعاع مناسبة.
    تنبيه: احترام بروتوكولات للمؤسسة فيما يتعلق بالوقاية تعرض للإشعاع الضار للموظفين. يعمل فقط مع الفنيين المعينين والمدربين وفقا للمبادئ التوجيهية للحماية الإشعاعية. إذا رغبت في ذلك، إضافة تشريعات كما هو موضح تحت 4.2. بعد ذلك.
  4. احتضان الخلايا ل 24 ساعة في ظروف الثقافة هو موضح سابقا (37 درجة مئوية، والخطوة 3، 2).
  5. بعد الحضانة، لا تزال ثقافة الخلية على الأقل 6 أيام مع التغييرات وسائل الإعلام كل يوم.

5-تقييم حجم كروي ومدى انتشار الهاتف الخلوي للقراءة بالانزيم

  1. قياس حجم كروي من حيث المساحة بعد وثائق الصور الرقمية في يوم 6 (يوم 10، يوم 16) مع برامج رسم (المعلمة 1).
  2. بعد الطرد المركزي في 520 ز x 2.5 دقيقة اللوحة، إزالة المادة طافية. تغسل في الخلايا التي تحتوي على كمية كافية من 1 × برنامج تلفزيوني وأجهزة الطرد المركزي اللوحة مرة أخرى كما هو موضح، يليه إزالة المادة طافية (PBS).
  3. إضافة 100 ميليلتر من الخلية الانزيمية مفرزة الحل لكل قنينة للسماح الماغنيسيوم حل. احتضان لوحة ل 8 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
  4. البحث عن حل ناجح كروي تحت المجهر. إضافة 100 ميليلتر من دميم. الطرد المركزي اللوحة في ز 520 x 2.5 دقيقة إزالة المادة طافية وتعليق الخلايا في 100 ميليلتر من دميم.
  5. القيام مقايسة انتشار اللونية متاحة تجارياً، في مقايسة WST-8 مثال على كل قنينة وفقا لإرشادات الشركة المصنعة25. وقرأ المقايسة في قارئ المرتبط بالانزيم المرتبط بالانزيم (ELISA) (المعلمة 2).

النتائج

كنا قادرين على تكاثر توليد الماغنيسيوم من تعليق خلية مفردة، أولاً من خطوط الخلايا المختلفة بما في ذلك خط الخلية بيكا الملكية، في وقت لاحق من الخلايا السرطانية البشرية الأساسية المستمدة من خزعات ورم جديدة كما هو موضح في هاجمان وآخرون . 26-نحن تقييم اثنين ?...

Discussion

كنا قادرين على وضع بروتوكول لإنشاء الماغنيسيوم استنساخه من خلية المعلقات، لكلا خطوط الخلايا، وفي التجارب الأولية، والخلايا السرطانية البشرية الأساسية. أولاً نحن تقييم اثنين من الأساليب المذكورة سابقا، وحددت العلا-الأسلوب، أسلوب حيث يتم استخدام ألواح الثقافة مع الأسطح التصاق منخفضة لل?...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

وكان تمويل هذا المشروع بمنحه من جامعة ميونيخ (مشروع FöFoLe--رقم: 789-781).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Dulbeccos modified Eagles medium (DMEM)Biochrom, Berlin, GermanyF 0425
Fetal bovine serumGibco Life Technologies, Paisley, UK10500-064
penicillin/streptomycinBiochrom, Berlin, GermanyA2212
sodium pyruvateBiochrom, Berlin, GermanyL0473
non-essential amino acidsBiochrom, Berlin, GermanyK0293
L-GlutamineBiochrom, Berlin, GermanyK0293
LiberaseRoche Life Sciences, Basel, Switzerland5401127001
GravityPLUS 3D Culture and Assay PlatformInSphero, Schlieren, SwitzerlandPB-CS 06-001
GravityTRAP plateInSphero, Schlieren, SwitzerlandPB-CS-01-001
Ultra-low attachment (ULA) culture platesCorning, Corning, NY, USA4520
airway epithelial cell growth mediumPromocell, Heidelberg, GermanyC-21060
amphotericin BBiochrom, Berlin, GermanyA 2612
airway epithelial cell growth medium supplement mixPromocell, Heidelberg, GermanyC39165
WST-8 testPromocell, Heidelberg, GermanyPC PK-CA705-CK04
Keratinocyte SFMedium + L-Glutamine 500mLInvitrogen#17005-034
Bovine Pituitary Extract (BPE), 25mgInvitrogen#37000015
Recombinant human Epithelial Growth Factor 2.5 µgInvitrogen#37000015
DMEM High GlucoseInvitrogen#21068-028
Penicillin Streptomycin 10000U/mL Penicillin/ 10000µg/mL StreptomycinInvitrogen#15140-122
F12 Nutrient MixInvitrogen#21765-029
Glutamax (200 mM L-Alanyl-L-Glutamin-Dipeptide in NaCl)Invitrogen#35050087
HBSS (Ca, Mg)Life Technologies#14025-092(no phenol red)
1x TrypLE Expres EnzymeInvitrogen#12604-013(no phenol red)
Accutase (enzymatic cell detachment solution)Innovative cell technologiesCat# AT104
70 µm Falcon cell strainerBD Biosciences, USA#352350

References

  1. Hunter, K. D., Parkinson, E. K., Harrison, P. R. Profiling early head and neck cancer. Nat Rev Cancer. 5 (2), 127-135 (2005).
  2. Jerjes, W., et al. The effect of tobacco and alcohol and their reduction/cessation on mortality in oral cancer patients: short communication. Head Neck Oncol. 4, 6 (2012).
  3. Chen, H. H. W., Kuo, M. T. Improving radiotherapy in cancer treatment: Promises and challenges. Oncotarget. 8 (37), 62742-62758 (2017).
  4. Boeckx, C., et al. Anti-epidermal growth factor receptor therapy in head and neck squamous cell carcinoma: focus on potential molecular mechanisms of drug resistance. Oncologist. 18 (7), 850-864 (2013).
  5. Brand, T. M., Iida, M., Wheeler, D. L. Molecular mechanisms of resistance to the EGFR monoclonal antibody cetuximab. Cancer Biol Ther. 11 (9), 777-792 (2011).
  6. Seidl, D., Schild, S. E., Wollenberg, B., Hakim, S. G., Rades, D. Prognostic Factors in Patients Irradiated for Recurrent Head-and-Neck Cancer. Anticancer Res. 36 (12), 6547-6550 (2016).
  7. Shirai, K., et al. Clinical Outcomes of Definitive and Postoperative Radiotherapy for Stage I-IVB Hypopharyngeal Cancer. Anticancer Res. 36 (12), 6571-6578 (2016).
  8. Theile, D., et al. Evaluation of drug transporters' significance for multidrug resistance in head and neck squamous cell carcinoma. Head Neck. 33 (7), 959-968 (2011).
  9. Slade, M. J., et al. Comparison of bone marrow, disseminated tumour cells and blood-circulating tumour cells in breast cancer patients after primary treatment. Brit J Cancer. 100 (1), 160-166 (2009).
  10. Mockelmann, N., Laban, S., Pantel, K., Knecht, R. Circulating tumor cells in head and neck cancer: clinical impact in diagnosis and follow-up. Eur Arch Otorhinolaryngol. 271 (1), 15-21 (2014).
  11. Gerlinger, M., et al. Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing. N Engl J Med. 366 (10), 883-892 (2012).
  12. Ledgerwood, L. G., et al. The degree of intratumor mutational heterogeneity varies by primary tumor sub-site. Oncotarget. 7 (19), 27185-27198 (2016).
  13. Loyo, M., et al. Lessons learned from next-generation sequencing in head and neck cancer. Head Neck. 35 (3), 454-463 (2013).
  14. Morris, L. G., et al. The Molecular Landscape of Recurrent and Metastatic Head and Neck Cancers: Insights From a Precision Oncology Sequencing Platform. JAMA Oncol. , (2016).
  15. Bauml, J. M., Cohen, R. B., Aggarwal, C. Immunotherapy for head and neck cancer: latest developments and clinical potential. Ther Adv Med Oncol. 8 (3), 168-175 (2016).
  16. Mack, B., et al. Rapid and non-enzymatic in vitro retrieval of tumour cells from surgical specimens. PLoS One. 8 (1), e55540 (2013).
  17. Ham, S. L., Joshi, R., Thakuri, P. S., Tavana, H. Liquid-based three-dimensional tumor models for cancer research and drug discovery. Exp Biol Med (Maywood). 241 (9), 939-954 (2016).
  18. Kelm, J. M., Timmins, N. E., Brown, C. J., Fussenegger, M., Nielsen, L. K. Method for generation of homogeneous multicellular tumor spheroids applicable to a wide variety of cell types. Biotechnol Bioeng. 83 (2), 173-180 (2003).
  19. Kunz-Schughart, L. A., Freyer, J. P., Hofstaedter, F., Ebner, R. The use of 3-D cultures for high-throughput screening: the multicellular spheroid model. J Biomol Screen. 9 (4), 273-285 (2004).
  20. Lin, R. Z., Chang, H. Y. Recent advances in three-dimensional multicellular spheroid culture for biomedical research. Biotechnol J. 3 (9-10), 1172-1184 (2008).
  21. Weiswald, L. B., Bellet, D., Dangles-Marie, V. Spherical cancer models in tumor biology. Neoplasia. 17 (1), 1-15 (2015).
  22. Cancer Genome Atlas, N. Comprehensive genomic characterization of head and neck squamous cell carcinomas. Nature. 517 (7536), 576-582 (2015).
  23. Duarte, S., et al. Isolation of head and neck squamous carcinoma cancer stem-like cells in a syngeneic mouse model and analysis of hypoxia effect. Oncol Rep. 28 (3), 1057-1062 (2012).
  24. Reid, P. A., Wilson, P., Li, Y., Marcu, L. G., Bezak, E. Current understanding of cancer stem cells: Review of their radiobiology and role in head and neck cancers. Head Neck. 39 (9), 1920-1932 (2017).
  25. Cossu, F., et al. Structural Insight into Inhibitor of Apoptosis Proteins Recognition by a Potent Divalent Smac-Mimetic. PLoS ONE. 7 (11), e49527 (2012).
  26. Hagemann, J., et al. Spheroid-based 3D Cell Cultures Enable Personalized Therapy Testing and Drug Discovery in Head and Neck Cancer. Anticancer Res. 37 (5), 2201-2210 (2017).
  27. Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies?. PLoS Med. 7 (3), e1000245 (2010).
  28. Wilding, J. L., Bodmer, W. F. Cancer cell lines for drug discovery and development. Cancer Res. 74 (9), 2377-2384 (2014).
  29. Chitcholtan, K., Asselin, E., Parent, S., Sykes, P. H., Evans, J. J. Differences in growth properties of endometrial cancer in three dimensional (3D) culture and 2D cell monolayer. Exp Cell Res. 319 (1), 75-87 (2013).
  30. Longati, P., et al. 3D pancreatic carcinoma spheroids induce a matrix-rich, chemoresistant phenotype offering a better model for drug testing. BMC Cancer. 13, 95 (2013).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

134 3D

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved