JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يشمل البروتوكول الحالي منهجية للفرز والتنظيف لمطابقة سن السكان من ايليجانس كاينورهابديتيس. فإنه يستخدم بسيطة وغير مكلفة، وكفاءة أداة مصنوعة خصيصا للحصول على عدد كبير من سكان تجريبية من الديدان الخيطية للبحوث.

Abstract

ايليجانس كاينورهابديتيس (C. ايليجانس) كائن نموذج راسخة المستخدمة عبر مجموعة من البحوث الطبية الحيوية والأساسية. داخل مجتمع البحوث السلكية، هناك حاجة لطريقة الفعالة والميسورة التكلفة للحفاظ على السكان الكبيرة، وتطابق العمر من C. ايليجانس. وهنا، نقدم منهجية لفرز ميكانيكيا وتنظيف C. ايليجانس. أن هدفنا توفير عملية فعالة من حيث التكلفة، وفعالة وسريعة وبسيطة للحصول على الحيوانات من أحجام موحدة ومراحل الحياة لاستخدامها في التجارب. تستخدم هذه الأداة، غربال كاينورهابديتيس ، نظام غطاء مبنية خصيصا بالمواضيع على المشترك مختبر مخروطية أنابيب ويفرز C. ايليجانس استناداً إلى حجم الجسم. نحن أيضا إثبات أن غربال كاينورهابديتيس ينقل فعالية الحيوانات من لوحة ثقافة واحدة إلى آخر السماح للفرز السريع، مزامنة، وتنظيف دون التأثير على علامات للصحة، بما في ذلك الحركة والإجهاد إيندوسيبلي الصحافيين الجينات. هذه الأداة موجوداً والمبتكرة خيار سريعة وفعالة، وغير مجهدة للحفاظ على السكان C. ايليجانس .

Introduction

الدودة السلكية، ايليجانس كاينورهابديتيس، كائن نموذج رئيس وزراء. بالإضافة إلى الطابع مباشرة والتي تسيطر عليها لزراعتها في المختبر، الجينوم أكمله هو التسلسل1 ويعرف مصير الإنمائية لكل خلية2. بسبب هذه الميزات، C. ايليجانس كائن نموذج مستخدمة على نطاق واسع للدراسات الوراثية. ومع ذلك، جنبا إلى جنب مع هذه الخصائص المفيدة تأتي بعض التحديات للباحثين. سبب وقتهم الجيل السريع، C. ايليجانس السكان يمكن أن تنفد بسرعة الغذاء و/أو تصبح مختلطة السكان مع أجيال متعددة ويقدم مراحل النمو في وقت واحد. وهكذا، تتطلب تجارب أجريت على وسائط النمو السلكية الصلبة (NGM) الباحثين لنقل الحيوانات فعلياً إلى لوحات جديدة قبل أن يستنفد المصدر الغذائي الجرثومي ووضع اليرقات الجديدة. هذا يمكن أن يكون مملا كما نقل متكررة من الحيوانات مطلوب لمنع السكان تجريبية من أن تصبح مختلطة مع الأجيال ذرية. لا يزال، تتطلب بعض التجارب كلا أعدادا كبيرة من الحيوانات والنقاط الزمنية الممتدة (مثلاً، استخراج الحمض النووي الريبي أو في مرحلة البلوغ). وهذا يضاعف التحديات المتمثلة في الحفاظ على عدد سكان متزامنة بدقة ونقل إعداد كبيرة من الحيوانات.

الأساليب الحالية لنقل C. ايليجانس مثقف في NGM الانتقاء أو غسل الحيوانات من لوحة للوحة؛ علاج كيميائيا الحيوانات (مثلاً، مع الحمض النووي النسخ المتماثل مثبط فلوروديوكسيوريديني أو فودر)؛ أو استخدام التدفق الخلوي لفرز الحيوانات في لوحات متعددة جيدا. الانتقاء ينطوي على استخدام أداة اليد، المصنوع من سلك البلاتين رقيقة أو جفن، أما يدوياً نقل الفرد أو3،الحيوانات متعددة4. هذا الأسلوب هو دقيقة ولكن يتطلب المهارة والوقت وهو القيد للدراسات التي تشمل أعدادا كبيرة من الحيوانات. اختيار مايو أيضا أن تكون ضررا جسديا والمجهدة للحيوانات التي يحتمل أن إخضاع الأفراد لكميات غير طبيعية وغير متناسقة من اضطراب وقوة. ينطوي غسيل الشطف طبق ثقافة مع حل المخزن مؤقت ونقل الحل مع الحيوانات عبر الزجاج ماصة باستور إلى لوحة ثقافة جديدة. هذا الأسلوب هو سريعة وفعالة ولكن ليست دقيقة كما يتم نقل متعددة الأجيال والمراحل التنموية للحيوانات بكميات كبيرة. ويمكن حل العلاجات الكيميائية، مثل فودر، في تثقيف وسائل الإعلام لمنع إنتاج ذرية من خلال منع أي تكرار الحمض النووي، ومن ثم، وضع البيض وإنتاج مشيج. وبينما فعالة، يجب أن يكون تطبيق هذا الأسلوب بعد نضوج الإنمائية فيما يتعلق بعدم عرقلة العمليات الإنمائية العادية، وهذا يعني أنه لا يزال هناك شرط لنقل الحيوانات قبل الإدارة3. هذا الأسلوب أيضا تأثيرات متعددة الخلوية مما يشير إلى مسارات، وأسفر عن تأثيرات ملحوظة على الحيوانات مع تقدمهم في السن (مثلاً، بتمديد عمر أو تغيير بروتيوستاسيس) اعتماداً على سلالة C. ايليجانس تستخدم5، 6،،من78،،من910. التدفق الخلوي أساليب الفرز ونقل الفردية C. ايليجانس من لوحة متعددة جيدا واحد إلى آخر11تلقائياً. بينما يكون هذا الأسلوب فعالة وكفؤة جداً، التدفق الخلوي معدات باهظة باهظة الثمن وغير متاحة للعديد من الباحثين. هو بديل لنقل الحيوانات استخدام نماذج المسخ التي تعتبر حساسة، مثل فر-15 و فيم-1، التي أصبحت عقيمة مع ضبط درجة الحرارة12درجة الحرارة. بينما استخدام الحيوانات المسخ مفيد في بعض الحالات، هذه السلالات المحددة تنمو بشكل أبطأ من الحيوانات البرية من نوع وأنهم يعتمدون المجين غيرت، بوصفه ممثلي الفقراء للديدان الشيخوخة أو صحية. وبالإضافة إلى ذلك، يؤدي أيضا إلى الاعتماد على درجة حرارة تحول إلى الحث على العقم في غياب بيئة ثابتة، والتغيرات في درجات الحرارة قد ثبت سهولة التأثير على الجينات تعبيرات13،14، 15-المجموعات البحثية قد نشرت سابقا تقنيات تصف استخدام شبكة لتصفية C. ايليجانس بحجم16. ومع ذلك، كنا غير قادر على العثور على عمل السابقة اختبار أية تغييرات في النتائج الصحية العامة التي قد تكون مرتبطة باستخدام عوامل التصفية هذه.

ومن ثم، هناك حاجة داخل مجتمع البحوث C. ايليجانس طريقة معقولة، فعالة وسريعة ودقيقة لنقل إعداد كبيرة من الحيوانات بين لوحات الثقافة ل. وقد وضعنا قطعة محسنة، يمكن الوصول إليها من المعدات (تسمى غربال كاينورهابديتيس ) وبروتوكول المقترنة لتصنيع وعملية تلبي احتياجات مجتمع البحوث C. ايليجانس . هنا، نشاطر تصميم منخل كاينورهابديتيس وطرق استخدامها، ونظهر أن استخدامها لا تؤثر صحة المشترك أو أي من علامات الإجهاد عند مقارنتها بمعيار الانتقاء اليدوي وعلاج مع شائعة، فودر الكيميائية المقيدة للخصوبة.

Protocol

1- كاينورهابديتيس غربال البناء والاستخدام

  1. بروتوكول الإنشاء
    1. الحصول على أغطية 2 من أنابيب مخروطية 50 مل (الشكل 1A).
    2. إزالة منطقة مركز داخل الشفة الداخلية للجفن (عندما ينظر إليها من الأسفل، الشكل 1B) استخدام موقد بنسن وتحقيق معدنية ساخنة أو لحام حديد أو صعدت الحفر بت.
      ملاحظة: استخدام الحرارة لقطع الغطاء البلاستيك الأفضل لنصل لأن هناك مخاطر أقل للإصابة.
    3. تنظيف والرمال حواف قطع وأعلى السطح مع ملف منحنية أو دوارة طحن الأداة (مثلاً، Dremel). انظر الشكل 1.
    4. قص دائرة شبكة شعيرات إلى القطر المناسب (الشكل 1). ولهذا، تتبع غطاء على ورقة مش نايلون حيدة وقص فقط داخل الخط الذي رسمته.
    5. قطع الأخاديد/مائلة إلى السطح العلوي للأغطية لتعزيز التصاق الجفن اثنين عندما يتم تطبيق الغراء للبلاستيك (الشكل 1E).
    6. تنظيف الأغطية مع الإيثانول والسماح لهم الجافة.
    7. تطبيق الغراء cyanoacrylate على السطح العلوي لكل الأغطية، الحفاظ على الحافة الخارجية.
      ملاحظة: الغراء قليلاً يقطع شوطا طويلاً.
    8. إرساء شبكة شعيرات، وفقا الجدول 1، غطاء لاصق واحد (الشكل 1F). ضع غطاء الثاني مقلوب على رأس الشبكة؛ يجب أن يكون كلا الأغطية على قمم معا. اضغط بحزم معا (الشكل 1). تأكد من أن الشبكة مشدود.
      ملاحظة: كإجراء وقائي، استخدام الملقط لوضع الشبكة على الأغطية.
    9. مرة واحدة وقد جفت الطبقة الأولى من الغراء، تنطبق على عصابة من الغراء cyanoacrylate حول الفجوة الخارجي بين الأغطية. أن تكون سخية كما يضيف سلامة هذا ويمنع أي تقشير بعيداً أو تسرب.
    10. قم بتسمية عامل التصفية مع حجم المسام مش مش حيدة.
      ملاحظة: هنا، يمكننا استخدام اثنين من أحجام المسام مش – 20 ميكرون و 50 ميكرون.
  2. استخدام بروتوكول
    1. قبل الرطب المنخل.
      1. "الماصة؛" من المحلول الملحي، مثل M9 [5 غ من كلوريد الصوديوم، ز 6 غ2هبو4، ز 3 خ2ص4، 1 لتر من النقاوة ح2س، و 1 مل من مجسو4 (م 1)]17، من خلال مركز غربال حتى أشكال المعالجة تجميعية ، يتكثف، وتقطر قبالة مركز تصفية السفلي (الشكل 2A). اختيارياً، تطبيق مسح خالية من الوبر (مثلاً، كيمويبي) إلى الأسفل إلى الشكل أو نشر معالجة رطوبة تجميعية على الشبكة.
      2. ضع المنخل عبر أنبوب مخروطي 50 مل. تسمية الأنبوب ك 'أنبوب النفايات' (الشكل 2).
    2. أغسل عدد سكانها C. ايليجانس قبالة صفيحة أجار.
      1. أغسل اللوحة مع المخزن المؤقت M9 ومكان المتوسطة المحتوية على دودة على ظهر المركب مش حيدة 1 مل في وقت واحد (الشكل 2). تأكد من أن تعمل في مركز الشبكة. تغسل جميع الديدان من اللوحة.
        ملاحظة: عادة، 3 مل M9 لوحة 60 ملم غير كافية.
      2. لتقليل عدد الديدان التي فقدت في بيبيتينج، استخدام زجاج ماصة باستور لنقل الديدان قبالة اللوحة وعلى مركز شبكة (كرر حسب الحاجة).
      3. شطف عامل التصفية مع المخزن المؤقت M9 من الأعلى. مرة أخرى، تأكد من تعمل في مركز الشبكة، وشطف جميع الديدان في هذا المجال. تغسل عدة مرات حسب الضرورة لضمان أن جميع البكتيريا والديدان الصغيرة قد مروا عبر الشبكة.
    3. حصاد الحيوانات مطابقة حجم من المنخل.
      1. إرفاق أنبوب مخروطي 50 مل جديدة إلى الجزء العلوي من غربال، مع الديدان الكبار من الخطوة 1.2.2.3 تواجه داخل الأنبوب مجموعة جديدة (الشكل 2D).
      2. إزالة الأنبوب الأول (أنبوب النفايات) واقلب بسرعة منخل وأنبوب جديد للحيلولة دون ترحيل الحبرية (الشكل 2E).
        ملاحظة: إذا كان غير مطلوب العقم، استخدام مسح خالية من الوبر (مثلاً، كيمويبي) للسائل فتيلة من أسفل الشبكة قبل التقليب.
      3. شطف مش مع M9 في أنبوب 50 مل جديدة من ظهر المركب الجديد (الشكل 2 واو). مرة أخرى، تعمل في مركز الشبكة والمحافظة على معالجة تجميعية على الجزء السفلي الشبكة.
      4. السماح للديدان تسوية أو تدور لهم بلطف إلى أسفل (مثل< 16 x g) لحوالي 1 دقيقة (الشكل 2).
      5. نضح الحل المخزن المؤقت من بيليه الديدان، ومن الناحية المثالية وصولاً إلى > 0.5 مل، أو إزالة السوائل قدر ممكن دون الإخلال بيليه.
      6. "الماصة؛" الديدان استخدام زجاج ماصة باستور على صفيحة NGM والسماح لهم الجافة. الفضاء قطرات متعددة بها على لوحة جديدة حيث أن تجف أسرع (ح الشكل 2).
    4. تنظيف المنخل.
      1. شطف المنخل بلطف ودقة مع الماء الإيثانول والتناضح العكسي. اتركها تجف.
      2. تخزينها في حاوية نظيفة للاستخدام في المستقبل إلى أجل غير مسمى.
      3. تجاهل ذلك عندما تطور الشبكة مظهر "تبلد".

2. التحقق من كاينورهابديتيس منخل أسلوب الفرز

  1. الصيانة العامة
    1. لكل التجارب، الديدان الثقافة على "ديدان أسطوانية وسائط النمو" قياسي17 (1 لتر NGM يتكون من 2.5 g ببتون، ز 17 من أجار، 3 غرام من كلوريد الصوديوم، مل 975 مزدوجة المقطر المياه، 1 مل 5 ملغ/مل الكولسترول، 1 مل كاكل م 12 ، 1 مل 1 م MgSO4، 25 مل من خبو 1 M4، و 0.5 مل من ستربتوميسين 100 مغ/مل) في 25 درجة مئوية.
  2. إدارة العلاج التجريبي
    1. مقارنة مجموعات العلاج الثلاثة: بيك، فلوروديوكسيوريديني (فودر) وغربال كاينورهابديتيس .
      1. لمجموعة العلاج فودر، إضافة 100 مغ/مل فودر NGM وسائط الإعلام إلى تركيز نهائي من 100 ميكرومتر منع أي إنتاج ذرية، ونقل الديدان كل يوم إلى لوحة NGM طازجة لتجنب نضوب الغذاء.
      2. لاختيار مجموعة، حدد ونقل الديدان يدوياً باستخدام حلقة البلاتين.
      3. لمجموعة العلاج غربال كاينورهابديتيس ، اتبع الخطوة 1.2 و "الماصة؛" الديدان على صفيحة NGM.
  3. كاينورهابديتيس غربال نسبة العائد
    1. لقياس مدى فعالية المنخل في الفرز C. ايليجانس، تنمو السن متزامن N2 الحيوانات لليوم الأول من مرحلة البلوغ عند 25 درجة مئوية (أي48 ساعة بعد وضع البيض) وثم نقلها بانتقاء منهم إلى لوحات NGM الطازجة (N إجمالي = 50 أو N = 100 الحيوانات الواحدة ترى مجموعة أتمينت).
    2. بعد 24 ساعة انتعاش، ونقل السكان إلى لوحات NGM جديدة مع غربال كاينورهابديتيس عقب ما ورد أعلاه البروتوكول (راجع الخطوة 1، 2)، وحساب عدد الحيوانات المنقولة بنجاح.
    3. حساب نسبة العائد بنسبة عدد الحيوانات المنقولة بالمقارنة مع عدد الانطلاق في البداية نقل مضروبة في 100 (%).
  4. فحوصات هيلثسبان
    ملاحظة: نقاط المعلمات هيلثسبان من الفئة حركية ومعدل ضخ البلعوم، وسواء الأمامي والخلفي لمس لطيف الاستجابة في أيام 2 و 4، 6، و 8 لسن البلوغ لمزامنة العمر الحيوانات N2 الإبقاء على 25 درجة مئوية.
    1. تتبع حركية
      1. تعيين عشرات حركية استناداً إلى نظام يستند إلى الفئة (الفئات A، B و C) اتباع أساليب هيرندون et al. 18-مقارنة آثار ثلاث مجموعات تجريبية باستخدام نموذج إحصاءات ترتيبية سوقي في برمجيات التحليل الإحصائي.
        ملاحظة: نقل أفراد الفئة أ عفويا في نمط عادي جيبية. أفراد الفئة ب التحرك في الحركات غير الجيبية ملحوظا، وقد تتطلب الحث على تشجيع حركة. أفراد الفئة C تحريك الرأس و/أو ذيل استجابة للحث ولكن غير قادر على الانتقال عبر أجار.
    2. معدل ضخ البلعوم
      1. عد حركة طاحونة لمبة البلعوم المحطة الطرفية للحيوان بصريا تحت ستيريوميكروسكوبي 600 X التكبير النهائي لمدة 1 دقيقة.
      2. إجراء تحليل إحصائي مع ANOVA أحادي اتجاه مع α = 0.05 والاختبارات بعد بونفيروني مع α = 0.05.
    3. استجابة اللمس
      1. تسجيل استجابة لمس لطيف وقارن بين المجموعات الثلاث في المعاملة. إجراء فحوصات استناداً إلى الأساليب الموصوفة كاليكستو et al. 19.
      2. سجل الأمامي والخلفي لمس استجابة بلطف الجرة انتقاء جفن عمودياً عبر الذيل أو الرأس (5 س والتناوب الرأس والذيل) من الحيوانات.
      3. نقاط أي حركة في الاتجاه المعاكس من السكتة الدماغية كالنقطة 1 على مقياس من 0 إلى 5 الأمامي والخلفي استجابة.
      4. إجراء التحليل الإحصائي مع ANOVA أحادي اتجاه مع α = 0.05 والاختبارات بعد بونفيروني مع α = 0.05.
  5. فحص الخصوبة
    1. لتحديد استخدام غربال كاينورهابديتيس للتأثير على الإنجاب، تنمو السن متزامن N2 الحيوانات لليوم الثاني من مرحلة البلوغ عند 25 درجة مئوية.
    2. ح 60 بعد وضع البيض، نقل الحيوانات إلى لوحات NGM جديدة مع اختيار البلاتين أو غربال كاينورهابديتيس وإعطائهم ح 4 لاسترداد (الجاف لوحات ينخل لمدة 20 – 30 دقيقة).
    3. بعد الاسترداد، منفردة لوحة الحيوانات عبر جفن بيك إلى لوحات NGM، منحهم 24 ساعة لوضع البيض، وإزالة الحيوانات. السماح الذرية في كل لوحة لوضع تحت الظروف العادية عند 25 درجة مئوية لآخر 24 ساعة.
      ملاحظة: انتقاء جفن جفن الإنسان المضمونة إلى نهاية ماصة باستور مع طلاء الأظافر وتعقيمها مع الإيثانول.
    4. حساب عدد أفراد الجيل F1 قابلة للحياة. إجراء تحليل إحصائي باستخدام اختبار T مع α = 0.05.
      ملاحظة: تعتبر ذرية قابلة للحياة أن البيض هاتش بنجاح والبدء في تنميتها من خلال دورات منتظمة في اليرقات.
  6. مراسل الفلورسنت الإجهاد استجابة فحوصات
    1. أداء ثلاثة فحوصات مراسل الفلورية استخداماً للكشف عن علامات محتملة للإجهاد: إزفاء DAF-16::GFP في النواة الخلايا في20سلالة [TJ356-zIs356 (pDAF-16::DAF-16-التجارة والنقل؛ ورول-6)]؛ تعبير hsp-16.2 [TJ375-gpIs1 (hsp-16.2p::GFP)]21؛ والهيئة العامة للسدود-3 تعبير [CF1553-muIs84([pAD76]sod-3p::GFP+rol-6[su1006])]22.
    2. لكل فحص، ثقافة الحيوانات العمر متزامن من المجموعات الثلاث في المعاملة عند 20 درجة مئوية ودراستها في اليوم الثالث من مرحلة البلوغ: استخدام عنصر تحكم سلبية (على أساس يومي، نقل مجموعة من الحيوانات يدوياً مع اختيار البلاتين)، عنصر تحكم إيجابية (على أساس يومي ، نقل مجموعة من الحيوانات يدوياً باختيار البلاتين بالإضافة إلى الضغوطات المنشأة)، وغربال كاينورهابديتيس (يمر غربال الحيوانات والسماح لهم باستعادة لمدة 30 دقيقة على NGM قبل التصوير).
    3. في مقايسة DAF-16::GFP، صدمة الحرارة الحيوانات التحكم الإيجابي في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة قبل التصوير20. للمقايسة hsp-16.2، صدمة الحرارة الحيوانات السيطرة الإيجابية لمدة 90 دقيقة، ح 20 قبل التصوير21. للمقايسة 3 الهيئة العامة للسدود، معاملة الحيوانات السيطرة الإيجابية مع بركات 100 مم ح 4 قبل التصوير22.
    4. حصاد الديدان فورا مع اختيار جفن ويشن منها إلى ساترة مع ميكروليتر 1 حل الفاعل 407 بولوكسامير 36% لشل الديدان.
    5. ساندويتش الديدان المحملة مع ساترة آخر. جبل كوفيرسليبس اثنين إلى شريحة مجهرية الزجاج القياسية وصورة الديدان باستخدام 8 X تكبير على مقلوب مجهر فلوري (بالنسبة تكبير العام 80 X) ومن تعرض مستمر مع عامل تصفية فيتك.
    6. للكشف عن أي فروق بين المجموعات الثلاث في مقايسة DAF-16::GFP، تصنيف الحيوانات استناداً إلى موقع المراسل DAF-16::GFP (النووية إذا المراسل ذوبانها إلى نويات، سيتوسوليك إذا كان المراسل الموجود في سيتوسول، وإذا كان الوسيط مراسل الموقع في كل من نوى وسيتوسول).
    7. مقارنة النتائج باستخدام نموذج إحصائية سوقيات ترتيبي في برمجيات التحليل الإحصائي. Hsp-16.2 وفحوصات التعبير 3 الهيئة العامة للسدود، استخدام ANOVA اتجاه واحد مع α = 0.05 واختبارات الوظائف المخصصة توكي مع α = 0.05 مقارنة مجموع الأسفار من منطقة الرأس.

النتائج

غربال كاينورهابديتيس يتكون من 2 الأغطية اللولبية، تأمين منطقة المنسوجة النايلون حيدة مش أصغر من قطر الجسم سن الإنمائية المرجوة، تستخدم لاستخراج يعيش السكان من الكائنات باستخدام تقنية غسيل بسيطة. وهو يعلق على الأنابيب المخروطية القياسية ويستخدم الشاشة مش ميكانيكي?...

Discussion

وهنا، قدمنا تصميم واستخدام غربال كاينورهابديتيس ميسرة وفعالة كأداة للفرز والحفاظ على C. ايليجانس. هذه الأداة ومزايا عدة لانتقاء الحيوانات الفردية، غسل السكان والعلاجات الكيميائية (مثلاً، فودر)، وأساليب أكثر تكلفة من الحيوانات فصل يدوياً. أولاً، منخل كاينورهابديتيس ك?...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن. الكتاب يعلن أنه أجرى البحث في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن أن يفسر تضارب المصالح محتملة.

Acknowledgements

الكتاب يود أن يشكر هيذر كوري لمساهمتها الأولية في تصميم الدراسة، والدكتور سواراب ميترا لبلده استعراض نقدي للمخطوطة. ونود أيضا أن نشكر الدكتور مايكل باء هاريس على التعليقات، والتحسينات والمساعدة في إعداد البيان العملي لهذه المنهجية. وقدمت السلالات كاينورهابديتيس مركز علم الوراثة، والذي يموله مكتب المعاهد الوطنية للصحة "برامج الهياكل الأساسية للبحوث" (P40 OD010440). وأيد البحث عنها في هذا المنشور بالمعهد الوطني للعلوم الطبية العامة "معاهد الصحة الوطنية في" إطار جائزة أرقام UL1GM118991 أو TL4GM118992 أو RL5GM118990 وجائزة التنمية المؤسسية (فكرة) من المعهد الوطني للعامة الطبية العلوم من "معاهد الصحة الوطنية في" إطار المنحة رقم 5P20GM103395-15. المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية "المعاهد الوطنية للصحة". تعميم الوصول إلى الخدمات هو AA/EO صاحب العمل والمؤسسة التعليمية، ويحظر التمييز غير المشروع ضد أي فرد: www.alaska.edu/titleIXcompliance/nondiscrimination.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Safety glassesUlineS-21076
Protective heat resistant gloveGraingerItem # 3AT17 Mfr. Model # 3AT17 Catalog Page # 1703
50 mL conical tubeFalcon14-432-22
Synthetic Nylon meshDynamic
Aqua-Supply Ltd		NTX20 and NTX50
Cyanoacrylate glueScotch Super Glue LiquidSAD114
PliersVampliersVMPVT-001-8
Dremmel tool with circular fileLowe'sItem # 525945 Model # 100-LG
FUDRSigmaF0503
M9 chemicals ( NaCl, Na2HPO4, KH2PO4, MgSO4) Sigma S7653, RES20908-A7, 1551139, M7506
NGM plate chemicals (Bactopeptone, Agar, KH2PO4, K2HPO4, CaCl2,Cholesterol, Streptomycin)BD Biosciences (bactopeptone) , Lab express (agar), Sigma ( rest)BD bioscience 211677, Lab Express 1001,  Sigma 1551139, 1551128, C1016, C8667, S6501
Pluronic F-127SigmaP2443
Paraquat dichloride hydrateSigma36541
Inverted fluorescence microscopeOlympusFSX100

References

  1. C elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).
  2. Herman, M. A. Hermaphrodite cell-fate specification. WormBook. , 1-16 (2006).
  3. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
  4. Chalfie, M., Hart, A. C., Rankin, C. H., Goodman, M. B. Assaying mechanosensation. WormBook. , (2014).
  5. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Deletion of the Mitochondrial Superoxide Dismutase sod-2 Extends Lifespan in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5 (2), e1000361 (2009).
  6. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. FUdR causes a twofold increase in the lifespan of the mitochondrial mutant gas-1. Mechanisms of Ageing Development. 132 (10), 519-521 (2011).
  7. Gandhi, S., Santelli, J., Mitchell, D. H., Stiles, J. W., Sanadi, D. R. A simple method for maintaining large, aging populations of Caenorhabditis elegans. Mechanisms of Ageing Development. 12 (2), 137-150 (1980).
  8. Aitlhadj, L., Stürzenbaum, S. R. The use of FUdR can cause prolonged longevity in mutant nematodes. Mechanisms of Ageing and Development. 131 (5), 364-365 (2010).
  9. Davies, S. K., Leroi, A. M., Bundy, J. G. Fluorodeoxyuridine affects the identification of metabolic responses to daf-2 status in Caenorhabditis elegans. Mechanisms of Ageing Development. 133 (1), 46-49 (2012).
  10. Feldman, N., Kosolapov, L., Ben-Zvi, A. Fluorodeoxyuridine improves Caenorhabditis elegans proteostasis independent of reproduction onset. PLoS One. 9 (1), e85964 (2014).
  11. Pulak, R. Techniques for analysis, sorting, and dispensing of C. elegans on the COPAS flow-sorting system. Methods Molecular Biology. 351, 275-286 (2006).
  12. Argon, Y., Ward, S. Caenorhabditis elegans fertilization-defective mutants with abnormal sperm. Genetics. 96 (2), 413-433 (1980).
  13. Lee, S. J., Kenyon, C. Regulation of the longevity response to temperature by thermosensory neurons in Caenorhabditis elegans. Current Biology. 19 (9), 715-722 (2009).
  14. Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mechanisms of Ageing Development. 6 (6), 413-429 (1977).
  15. Zhang, B., et al. Environmental Temperature Differentially Modulates C. elegans Longevity through a Thermosensitive TRP Channel. Cell Reports. 11 (9), 1414-1424 (2015).
  16. Michaelson, L. C. C. elegans: A Practical Approach. Ian A. Hope (ed.). Oxford University Press, Oxford. 1999. Pp. 281. ISBN 0 19 963738 5. Heredity. 85 (1), 97-100 (2000).
  17. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).
  18. Herndon, L. A., et al. Stochastic and genetic factors influence tissue-specific decline in ageing C. elegans. Nature. 419 (6909), 808-814 (2002).
  19. Calixto, A., Chelur, D., Topalidou, I., Chen, X., Chalfie, M. Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1. Nature Methods. 7 (7), 554-559 (2010).
  20. Henderson, S. T., Johnson, T. E. daf-16 integrates developmental and environmental inputs to mediate aging in the nematode Caenorhabditis elegans. Current Biology. 11 (24), 1975-1980 (2001).
  21. Rea, S. L., Wu, D., Cypser, J. R., Vaupel, J. W., Johnson, T. E. A stress-sensitive reporter predicts longevity in isogenic populations of Caenorhabditis elegans. Nature Genetics. 37 (8), 894-898 (2005).
  22. Libina, N., Berman, J. R., Kenyon, C. Tissue-specific activities of C. elegans DAF-16 in the regulation of lifespan. Cell. 115 (4), 489-502 (2003).
  23. Keith, S. A., Amrit, F. R., Ratnappan, R., Ghazi, A. The C. elegans healthspan and stress-resistance assay toolkit. Methods. 68 (3), 476-486 (2014).
  24. Scerbak, C., Vayndorf, E. M., Hernandez, A., McGill, C., Taylor, B. E. Mechanosensory neuron aging: Differential trajectories with lifespan-extending alaskan berry and fungal treatments in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Aging Neuroscience. 8, 173 (2016).
  25. Vayndorf, E. M., et al. Morphological remodeling of C. elegans neurons during aging is modified by compromised protein homeostasis. npj Aging and Mechanisms of Disease. 2, 16001 (2016).
  26. Murakami, S., Johnson, T. E. A genetic pathway conferring life extension and resistance to UV stress in Caenorhabditis elegans. Genetics. 143 (3), 1207-1218 (1996).
  27. Abbas, S., Wink, M. Green Tea Extract Induces the Resistance of Caenorhabditis elegans against Oxidative Stress. Antioxidants (Basel). 3 (1), 129-143 (2014).
  28. Yanase, S., Hartman, P. S., Ito, A., Ishii, N. Oxidative stress pretreatment increases the X-radiation resistance of the nematode Caenorhabditis elegans. Mutation Research. 426 (1), 31-39 (1999).
  29. Chung, K., Crane, M. M., Lu, H. Automated on-chip rapid microscopy, phenotyping and sorting of C. elegans. Nature Methods. 5 (7), 637-643 (2008).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

137

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved