بالقطع وأسلوب عائم للأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين لتقطيع

Summary

نقدم هنا، وضع بروتوكول لتحسين البارافين تمزيقها. ويجمع هذا الأسلوب قطع والعائمة باستخدام دائرة ترموستاتي بسيطة لتجنب عملية التحويل المطلوبة بالطريقة التقليدية. نتيجة لذلك كانت إلى حد كبير تحسين الكفاءة وعدد المقاطع البارافين سليمة.

Abstract

تقطيع الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين يستخدم على نطاق واسع في علم الأنسجة وعلم الأمراض. ومع ذلك، أنها مملة. لتحسين هذا الأسلوب، وضعت العديد من الشركات التجارية أنظمة نقل قسم معقدة باستخدام الماء السائل. لتبسيط هذه التكنولوجيا، أنشأنا طريقة بسيطة باستخدام معدات محلية الصنع الذي يجمع بين قطع والعائمة داخل دائرة ترموستاتي بسيطة؛ ولذلك، أدخل المقاطع تلقائياً حمام الماء على سطح الماء. وقطعت الحصين من العقول الماوس الكبار والكليتين الماوس الكبار وادمغة الفأر الجنينية وعيون الزرد الكبار باستخدام البارافين التقليدية تمزيقها وطريقة عرضها للمقارنة. ويبين التحليل الإحصائي أن لدينا طريقة تحسين حفظ الوقت وإنتاج أعلى جودة المقاطع. وباﻹضافة إلى ذلك، البارافين تقطيع العينة كلها في فترة زمنية قصيرة من السهل لصغار المشغلين.

Introduction

من المهم دراسة الخصائص المورفولوجية في الأبحاث البيولوجية. على الرغم من أن التكنولوجيا الجديدة قد سمح الباحثين مراعاة أهدافها مباشرة من الأنسجة كاملة أو الكائنات الحية^1،2،3، قطع العينة إلى أجزاء رقيقة، متبوعاً تلطيخ، تبقى المرحلة الابتدائية الأسلوب فورنوت مورفولوجيا الأنسجة فقط ولكن أيضا البروتين تستهدف مباشرة في الأنسجة. الخفيفة الميكروسكوب يستخدم ثلاثة أنواع المقاطع: البارافين، المجمدة، وسيميثين. على الرغم من أن كريوسيكتيونينج المشتركة لحماية أنتيجينيسيتي الأنسجة، وإعداد نموذج بسيط، مورفولوجيا الأنسجة المحتفظ بها الفقراء وغير مناسب لتقطيع رقيقة^4،5. تقطيع البارافين هو الأسلوب الأكثر استخداماً لنستعرض مورفولوجيا حفظت جيدا. كما العينات المجففة تماما وجزءاً لا يتجزأ من الشمع، يمكن تخزين كتل البارافين إلى أجل غير مسمى. وباﻹضافة إلى ذلك، تقطيع البارافين تنتج مقاطع رقيقة تحسين وصول المسبار البيولوجية في مزيد من التجارب، والحد من خلية طبقة تراكب في اتجاه Z.

ومع ذلك، تمزيقها البارافين التقليدية شاقة وتتطلب مهارة المشغل. مقاطع البارافين الخضوع للتثبيت والجفاف، والتضمين، وقطع والعائمة. نقل قسم شرائط من صاحب السكين إلى حمام الماء الأهم من ذلك ضرورية ولكنها صعبة لصغار المشغلين. لا سيما في الهواء الجاف، شرائط القسم سوف تطور بسبب الكهرباء الساكنة ويصعب أن تتكشف على سطح الماء الدافئ. يوصي بتحسين قسم الجودة، يبلل سطح الأنسجة المكشوفة بين مبضع بليد يمر، وتبريد كتل الشمع بغمر لهم في الماء المثلج، أو رفع درجة الرطوبة مع مرطب قرب مبضع^6،7 . وتشمل أحدث أساليب لتحسين تمزيقها البارافين التضمين البارافين الهجين، كريوسيكتيونينج⁸، والقسم التجاري نقل نظام المساعدة⁹. على الرغم من أن هذه الأساليب تحسين جزئيا البارافين تمزيقها السرعة والجودة، أنها تجعل تمزيقها مرهقة أكثر بكثير، ونظم نقل القسم التجاري غالية الثمن.

في هذا البروتوكول، نحن لشرح كيفية إنشاء معدات بسيطة ورخيصة ومرنة خطوة خطوة، التي يمكن أن تكون مرتبطة إلى صاحب شفرة مبضع الدوارة. وتتألف هذه المعدات قناة قسم وحمام مائي وسخان مع تبديل الكشف عن درجة حرارة. بعد القطع، تتدفق إلى القناة قسم العشرات من الأقسام وأدخل حمام المياه مباشرة، وهكذا تتكشف تلقائياً. وهذا يحسن كفاءة البارافين تمزيقها ويجعل هذه التكنولوجيا أكثر ملاءمة. باستخدام هذا الأسلوب والكبار أكثر أقسام هيبوكامبال الماوس، وأقسام الكلي الماوس الكبار، (E15.5) عمرها يوما 15.5 الجنينية الماوس الدماغ المقاطع والعين الزرد الكبار المقاطع كانت تحصد في وقت أقل وبقيت سليمة أكثر شكلياً. يمكن أيضا استخدام هذا الأسلوب لعينات الأنسجة الأخرى التي تتطلب البارافين المعجل تمزيقها مع تجنب فقدان التمييز القسم.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة لجامعة نانتشانغ.

1-تجميع المعدات والاتصال مبضع

1. تصميم المعلمة كل المتطلبات (الملحق الرقم 1).
2. تقديم المعلمة لمصنع محلي لتصنيع لوحات اﻷكريليك.
3. تجميع جميع أنحاء في التسلسل: استخدام كلوروفورم لضم 7 لوحات اﻷكريليك التجارية في دبابة مع قسم حمام القناة والمياه (الشكل 1).
   تنبيه: كلوروفورم تنتج مواد سامة عندما يجتمع الضوء والأكسجين. قم بتجميع الجهاز في غطاء دخان.
4. تثبيت الكهربائية والتدفئة من خلال الثقب في المجلس اﻷكريليك #1 (الشكل 2A، رأس السهم).
5. لتثبيت وحدة التحكم بدرجة الحرارة، إنشاء حفرة صغيرة على متنها اﻷكريليك #2 استخدام مثقاب كهربائي، وتثبيت كاشف درجة الحرارة (الشكل 2A، سهم). تثبيت الحرارة رقمية على الدبابة (الشكل 2A).
   ملاحظة: ينبغي أن يكون الكشف عن درجة الحرارة داخل 1 سم تحت سطح الماء.
6. لتوفير الوصول إلى السلطة، ضبط الجهد أدناه 24 الخامس قبل تشغيل المعدات.
7. إزالة علبة النفايات قسم من مبضع.
8. ربط قناة المقاطع مع صاحب بليد مبضع مع سيليكون محايدة للتسرب (الشكل 2).
   ملاحظة: لا تشويه أي تسرب السيليكون المحايد فوق الجزء العلوي من النصل حتى أن يتم استبدال شفرة القديمة بسهولة.
9. الجاف بين عشية وضحاها للسماح كلوروفورم وسيليكون محايدة تسرب الوقت لترسيخ.
10. قم بتثبيت الشفرة لصاحب بليد. صب الماء في حوض ماء (الشكل 2). ينبغي أن تلمس سطح الماء فقط الجزء العلوي من الشفرة (الشكل 2D، رأس السهم).

2. البارافين تمزيقها

ملاحظة: غالباً ما تتراكم الحطام على الحواف العليا أو السفلي لكتلة الشمع وسطح الماء. يجب أن يتم مسح هذا الحطام بانتظام.

1. أداء البارافين التقليدية تمزيقها¹⁰.
   1. المشبك العينة جزءا لا يتجزأ من البارافين في مبضع روتاري وبليد في حامل بليد.
   2. يجب بدوره وقسم العينة.
   3. نقل الشريط البارافين مقطوع إلى حمام الماء الدافئ 38.5 درجة مئوية.
   4. اختيار متابعة المقاطع على المجهر الشريحة من سطح الماء بعد تتكشف.
   5. جاف الشرائح في فرن في 42 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
2. تحسين البارافين تمزيقها (الشكل 3)
   1. قم بتشغيل المعدات.
   2. فتح السخان مع تبديل الكشف عن درجة الحرارة وضبط درجة حرارة المستهدفة بين 38.0 درجة مئوية إلى 40.0 ° C ل 1 (ح) مقدما الماء دافئ.
   3. تعديل كتلة البارافين المكتسبة عن طريق تضمين البارافين؛ ثم وضع كتلة البارافين في المشبك كاسيت مبضع وتأمينه.
      ملاحظة: تعدل الحدود العليا والسفلي من كتلة البارافين أفقياً لمنع الشريط قسم من تشكيل قوس وأصبح غير قادر على التدفق من خلال قناة أبواب ضيقة.
   4. بسرعة نهج العينة بقطع المقاطع أكثر سمكا.
   5. ضبط لسماكة قسم مناسب (10 ميكرون للعقول الكبار الماوس والماوس الكبار الكليتين وادمغة الأجنة الماوس، 4 ميكرون لعيون الزرد). بدوره ويجب وسوف تلقائياً أدخل المقاطع قناة المقاطع وحمام.
   6. قسم العينة في جرة قطع بطيئة وموحدة (الشكل 3A).
      ملاحظة: سوف تتغير ثيثيكنيس للقسم الأول بعد أن تم إيقاف ويجب لبضع دقائق. ينبغي الاستعاضة عن ريش المتاح لدى الفروع خدوش على التوالي.
   7. دليل الأقسام في قاعة حمام لتطفو في خط (الشكل 3، 3 ج).
      ملاحظة: إذا كان رئيس القسم تتمسك بالجدار الدائرة، استخدام دليل فرشاة لإبقائها عائمة.
   8. تلتزم الأقسام على شرائح المجهر. بعد المقاطع كاملة تتكشف في حوض ماء، عدة أقسام منفصلة مع ملاقط. ثم اعتقالهما من حمام الماء على الشرائح المجهر (3D الشكل).
      ملاحظة: المقاطع ينبغي أن يتم انتقاؤها من مؤخرة حمام الماء، كما في قناة المقاطع والامامي من حمام الماء سوف لا يكون بعد أصبح جاهزاً تماما.
   9. الجاف للشرائح عن طريق وضعها في فرن 42 درجة مئوية بين عشية وضحاها. يمكن ثم تخزين الشرائح في درجة حرارة الغرفة إلى أجل غير مسمى.
3. استخدام تلوين الهيماتوكسيلين ويوزين (أنه) من أجل التقييم ل تحسين أسلوب⁸.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

طريقة تحسين زيادة عدد المقاطع البارافين سليمة. نحن اختبار هذا الأسلوب الجديد في الأنسجة هيبوكامبال الماوس الكبار والكليتين الماوس الكبار وادمغة الفأر الجنينية وعيون الزرد. تم إضافة المياه إلى الخزان، وتمت المحافظة على درجة حرارة الماء بين 38.0 درجة مئوية إلى 40.0 ° C. بعد نح...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

لتحسين البارافين قسم التشكل وإيجاد حل لمشكلة الوقت الضائع أثناء تقطيع البارافين التقليدية، أنشأنا تحسين بارافين تمزيقها الأسلوب الذي يجمع بين القطع وتتكشف. يعتمد هذا الأسلوب محسنة على المعدات البسيطة التي تضم قناة قسم وحمام مائي وسخان مع تبديل الكشف عن درجة حرارة. الشريط قسم يدخل حمام ا?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Incubator	Boekel Scientific	133000-2
Ethanol	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	64-17-5
Xylene	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	1330-20-7
Paraplast	Leica	39601006
Heated Paraffin Embedding Module	Leica
Commercial acrylic board
Trichloromethane	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	67-66-3
Tubular electric heating element(12 V 200 W)
Temperature controller(12 V 120 W)	Mingsuo	XH-W3002
Rotary microtome	Leica
Neutral silicone sealant			Link the water channel with the microtome knife holder
Voltage transformer	Dearll	S-250-12
Disposable blade	Accu-Edge	4689
Hematoxylin	Baso Diagnostics Inc.	BA-4025
Eosin	Baso Diagnostics Inc.	BA-4025
Microslide	Sail Brand	7105
Neutral balsam	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	10004160
Coverslip	Citoglas	10212424C
Microscope	Carl Zeiss
Hydrochloric acid	Xilong Chemical	7647-01-0
Water bath for paraffin sections	Leica
HistoCore Arcadia C - Cold Plate	Leica
paraffin repellent spray	Thermo Scientific	9990420