السابقين فيفو تصوير الكالسيوم الخاصة بالخلية إشارات في المشبك الثلاثية للحجاب الحاجز الماوس

Summary

نقدم هنا بروتوكولا للكالسيوم في صورة إشارات في سكان أنواع الخلايا الفردية في الوصلات العصبية العضلية مورين.

Abstract

يمكن رصد النشاط الكهربائي للخلايا في الأنسجة بالتقنيات الكهربية، ولكن هذه عادة ما يقتصر على تحليل الخلايا الفردية. نظراً لزيادة الكالسيوم داخل الخلايا (Ca^{2 +}) في سيتوسول غالباً ما تحدث بسبب النشاط الكهربائي، أو استجابة لعدد ضخم محفزات الأخرى، يمكن رصد هذه العملية بتصوير الخلايا محملة الفلورسنت المراعية للكالسيوم الأصباغ.  ومع ذلك، من الصعب صورة هذه الاستجابة في نوع خلايا فردية داخل الأنسجة كاملة لأن يتم تناول هذه الأصباغ بجميع أنواع الخلايا داخل الأنسجة. على النقيض من ذلك، مؤشرات الكالسيوم المشفرة جينياً (جيسيس) يمكن التعبير عنها حسب نوع خلية فردية وفلوريس في استجابة لزيادة من داخل الخلية Ca^{2 +}، مما سمح التصوير من Ca^{2 +} إشارات في مجموعات سكانية بأكملها من أنواع الخلايا الفردية. هنا، علينا تطبيق الاستخدام من جيسيس GCaMP3/6 على الوصلات العصبية العضلية الماوس، وخلايا شوان المشبك ثلاثية بين الخلايا العصبية الحركية، والهيكل العظمى والعضلات، والمحطة الطرفية/بيريسينابتيك. علينا أن نبدي بفائدة هذا الأسلوب في الكلاسيكية السابقين فيفو الاستعدادات الأنسجة. استخدام تقسيم بصري، نقوم بالتصوير المزدوج-الطول الموجي لدينامية Ca^{2 +} إشارات وتسمية ثابتة من الوصلات العصبية العضلية (NMJ) في نهج التي يمكن تكييفها بسهولة لرصد اثنين جيتشي الخلية المحددة أو الجهد وراثيا المرمزة المؤشرات (جيفي) في نفس الوقت. وأخيراً، نحن نناقش الإجراءات المستخدمة لالتقاط خرائط مكانية لشدة الأسفار. معا، يمكن أن تستخدم هذه التقنيات البصرية والمعدلة وراثيا والتحليلية لدراسة النشاط البيولوجي للفئات السكانية الفرعية خلية متميزة في NMJ في مجموعة متنوعة من السياقات.

Introduction

NMJ، مثل جميع نقاط الاشتباك العصبي، ويتألف من ثلاثة عناصر هي: محطة presynaptic المستمدة من خلية، خلية بوستسينابتيك العصبية/المستجيب، وخلية بيريسينابتيك الدبقية^1،2. في حين أظهرت الجوانب الأساسية لانتقال متشابك أولاً في هذا المشبك³، العديد من جوانب هذه العملية تظل مجهولة، جزئيا بسبب التعبير عن جزيئات نفس عناصر خلوية متميزة من هذا المشبك. على سبيل المثال، يتم التعبير عن مستقبلات لكل من البيورين نوكليوتيد الأدنين ATP واستيل (ACh)، الذي شارك تم إصدارها من قبل الخلايا العصبية الحركية في NMJ الفقارية، بالعضلات وخلايا شوان والخلايا العصبية الحركية، مما يعقد تفسير أي تأثير الوظيفية التي تمارس بها هذه المواد (مثلاً، الإفراج عن الإرسال أو الرد، توليد قوة العضلات)⁴. وعلاوة على ذلك، على الرغم من أن مكونات الثلاثية NMJ بسيطة مقارنة إلى، على سبيل المثال، الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي الذي غالباً ما يحمل مدخلات متعددة متشابك، عما إذا كانت الخلايا العصبية الحركية، والخلايا العضلية أو خلايا شوان تختلف في الاستجابة للمحفزات على أساس على ما مضمن عدم التجانس (مثلاً، اشتقاق الجنينية، النوع الفرعي للألياف، ومورفولوجيا) غير واضح. بغية معالجة كل مسألة من هذه المسائل، أنه سيكون من المفيد لتعقب الاستجابة للعديد من الخلايا داخل أحد العناصر متشابك، فضلا عن المسار، في الوقت نفسه، هذه استجابة في أي من عناصر منفصلة أخرى في نفس الوقت. الاستراتيجيات التقليدية باستخدام الأصباغ الكيميائية لقياس إشارات الكالسيوم لا يمكن تحقيق هذين الهدفين، لأنه هو تناول تطبيق حمام صبغة بأنواع متعددة من الخلايا بعد التطبيق للأنسجة، ويمكن استخدام صبغة إينتراسيلولارلي تحميل فقط تصور الأفواج الفردية أو الصغيرة من الخلايا. هنا، استخدام الفئران المعدلة وراثيا معربا عن جيسيس مصممة لقياس إشارات الكالسيوم خلية على حدة، جنبا إلى جنب مع تصوير محددة و أدوات البرمجيات⁵، يمكننا إثبات الأول من هذين الهدفين عموما، ومناقشة كيفية الإضافة جديد أدوات معدلة وراثيا سوف يساعد على تحقيق الثاني. سوف تكون هذه التقنية مفيدة لأي شخص مهتم في تتبع ديناميات الكالسيوم أو الخلوية الأخرى مما يشير إلى أحداث يمكن ملاحظتها من خلال أجهزة الاستشعار البصرية ترميز الجينات في السكان خلية متعددة في نفس الوقت.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

وتربية الحيوانات والتجارب أجريت وفقا "المعاهد الوطنية للصحة دليل" للرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وإياكوك في جامعة نيفادا.

1. إعداد أغشية والأعصاب فرنك من الفئران المحورة وراثيا

1. شراء الفئران المحورة وراثيا والإشعال اليغنوكليوتيد للنمط الوراثي هذه الفئران.
   ملاحظة: يتم سرد الإشعال على صفحة "المعلومات" لكل من هذه الفئران.
   1. تولد ماوس 3-6 شهرا معربا عن نسخة واحدة من اليل Cre-سائق المعدلة وراثيا/تدق في المناسبة وصفر نسخاً من اليل GCaMP3/6 شرطي مع ماوس ثانية من نفس العمر معربا عن نسخ واحد أو اثنين من الشرطية GCaMP3/ 6 اليل وصفر نسخاً من اليل سائق لجنة المساواة العرقية.
   2. النمط الوراثي الجراء ومارك تلك التي لديها لجنة المساواة العرقية والشرطي GCaMP3/6 الآليلات – هذه ستسمى من الآن فصاعدا الفئران المعدلة وراثيا مزدوج (مثلاً، Myf5-لجنة المساواة العرقية، GCaMP3 الشرطي)⁶.
      ملاحظة: سوف تستمد جميع البيانات من الفئران معربا عن نسخة واحدة من كل من لجنة المساواة العرقية والشرطي GCaMP3/6 الآليلات بهذه الطريقة،. هذا مهم خاصة عند إضافة في الفئران الأخرى متحولة (مثلاً، بالضربة القاضية) لهذه الصلبان.
2. عندما تكون الفئران المعدلة وراثيا مزدوجة للسن المناسبة (مثلاً، يوم الولادة 0 أو 5 [P0 أو P5] أو الكبار)، euthanize الفئران بقطع رأس لهم مع المقص (بالنسبة للفئران أصغر سنا من P10) أو عن طريق وضعها في دائرة لاستنشاق isoflurane — عندما تكون لم تعد تستجيب معسر الذيل مع زوج من الملقط، أنهم مستعدون للتضحية.
3. التضحية الحيوان بقطع الرأس مع زوج من مقص.
4. قسم العرض عبر الحيوان كامل أسفل الكبد وفقط فوق القلب والرئتين مع مقص iridectomy.
5. تشريح بعيداً في الكبد والقلب والرئتين، مع الحرص على الحفاظ على طول العصب فرينيك طويلة بما فيه الكفاية أن تستدرج إلى شفط كهربائي (أي، 1-2 سم).
   ملاحظة: يمكن التعرف على العصب الأيسر فرنك كقطعة بيضاء من الأنسجة التي يدخل الجزء الآنسي من الحجاب الحاجز الأيسر. يجب أن لا تكون قطع عند إزالة الرئتين. العصب حق فرنك يعمل داخل قطعة من لفافة تحتوي على الأجوف فينا متفوقة أيضا وهو أرق وأكثر بياضا من الأجوف فينا. معا، وكلاهما اختراق الحاجز الآنسي حق.
6. كذلك إزالة في القفص الصدري والعمود الفقري، باستثناء ريدج رقيقة حول الحجاب الحاجز.
7. وضع الحجاب الحاجز والأعصاب فرنك العينة في [ميكروفوج] أنابيب مع الحل كريبس في المسابقة مع 594 1 ميكروغرام/ملليلتر-αBTX لمدة 10 دقائق في الظلام.
   ملاحظة: هذا التركز من 594-αBTX تسميات مستقبلات ACh (اختتام) دون عرقلة وظيفتها (ملاحظة شخصية).

2-حفز وتسجيل من إمكانيات عمل العضلات

1. باستخدام دبابيس مينوتين، شل الحجاب الحاجز التي تعلق على طبق 6-سم المغلفة مع هلام السيليكون عازل ومليئة ~ 8 مل من اﻷوكسيجين كريبس-المسابقة الحل ووضعه على خشبة المسرح المجهر. نتخلل الحجاب الحاجز مع أكثر من حل المسابقة كريبس (8 مل/دقيقة) لمدة 30 دقيقة.
   ملاحظة: هذا رنسيس 594-αBTX غير منضم، فضلا عن اكويليبراتيس الأنسجة بعد التشريح.
2. تجعل من قطب كهربائي شفط وفقا للأساليب المتبعة⁷.
   1. 4 X التكبير، واستخدام ميكرومانيبولاتور، حرك مسرى شفط العصب فرينيك الأيسر وتطبيق الشفط بسحب ماسورة 5 مل حقنه متصلة بالانبوب متصل بالشفط الكهربائي.
      ملاحظة: عند وضع بنجاح في مسرى الشفط، مشدود العصب فرنك. تشغيل مشجعا وحفز فرينيك العصب بالتقليب اليدوي التبديل 1 x.
   2. ضمان أن الحجاب الحاجز عقود استجابة لتحفيز 1 هرتز بفحص ذلك بصريا مع الإضاءة برايتفيلد. إذا لم يكن الأمر كذلك، ضبط الجهد عن طريق تحويل مقبض الجهد تدريجيا لتحقيق نبض سوبراماكسيمال، التي يمكن التحقق منها بإجراء فحص مرئي لتقلص العضلات. إذا كان لا يزال غير مرئي، تفجير العصب مع المحاقن ومحاولة لرسم مرة أخرى عن طريق تطبيق شفط.
3. إيقاف التروية وإضافة مثبط البيلاروسية الميوسين الخاصة بالعضلات⁶ أو عن طريق بوابة الجهد الصوديوم قناة خصم μ-كونوتوكسين⁸ إلى تركيز نهائي من 100 ميكرومتر.
   1. لجعل 100 ميكرومتر البيلاروسية، "الماصة؛" 4 ميليلتر من الأسهم 200 ملم في [دمس] وبريديلوتي أنه في 1 مل من محلول كريبس في المسابقة.
   2. إزالة 1 مل من محلول كريبس في المسابقة من الطبق.
   3. إضافة البيلاروسية بريديلوتيد، إلى الطبق.
      ملاحظة: يساعد هذا بريديلوشن على منع التعريفي بغير مخفف [دمس] استجابة الفلورية غير عابرة في التعبير عن GCaMP3 الخلايا.
   4. انتظر 30 دقيقة وثم تشغيل التروية الطازج كريبس-المسابقة حل لآخر 20-30 دقيقة.
4. إعداد التسجيل الكهربائي.
   1. ضع البورسليكات زجاج فيلامينتيد مع قطر خارجي (OD) 1 مم وقطر داخلي (ID) من 0.4 مم إلى ساحبة ميكروبيبيتي ارتداء القفازات، وتشديد الأوجه المشبك في الموقف. أغلق باب ساحبة.
   2. ساحبة P-97، باستخدام برنامج الإعداد التالية: الحرارة في 900، سحب على 120، والسرعة في 75، مرة في 250، الضغط على 500، ولا حلقات إضافية.
      ملاحظة: يقاس Resistance (R) باستخدام عناصر تحكم البرمجيات من مكبر للصوت: برنامج اقتناء البيانات تؤكد المقاومة قبل حل الصيغة الخامس = الأشعة تحت الحمراء. وحدة تحكم البرمجيات يمر حالية معروفة (ط) (عادة 1 غ) عن طريق الكهربائي ويقيس التغير في الجهد (V)، وبالتالي تمكننا من حل ر.
   3. لأغشية جنينية، تأكد أن المقاومة قرب 60 MΩ، ولكبار السن أغشية، MΩ 10-20. تحميل مسرى التسجيل مع 3 م بوكل.
5. 10 X التكبير، أقل الكهربائي في العضلات، واستخدام ميكرومانيبولاتور ثاني في الجانب الآخر من المسرح كقطب محفزة.
6. باستخدام برنامج اقتناء البيانات الكهربية، انتظر حتى إمكانات غشاء يستريح يتغير من 0 إلى-65 mV أو أدناه.
7. تحفز في 1 هرتز، والتحقق من وجود إمكانية عمل العضلات بالتحقق من وجود احتمال كبير أن يسلك الانحسار متواضعة (احتمال أن ترتفع فوق 0 mV عند بدء تشغيله في-65 mV أو أدناه). لا تخلط بين قطعة أثرية التحفيز إمكانات العمل.
   ملاحظة: إمكانات أطول بشكل ملحوظ في مدة (~ 5 مللي ثانية) من التحف التحفيز.

3-تصوير للأسفار العينة

1. في 20 X التكبير، حدد موقع الفرقة اندبلت في المركز للعضلات التي تبحث عن 594-αBTX – المسماة نمجس تحت الإثارة الضوء الأخضر/الأصفر (550 نيوتن متر). قم بالتبديل إلى الإثارة الضوء الأزرق (470 nm) على صورة Ca^{2 +} الردود في العضلات أو العصبون، أو خلايا شوان.
2. إذا رغبت في ذلك، إعداد التقسيم الصورة مع مرشحات ممر الموجه وعامل تصفية واحد-حافة مزدوج اللون لتصوير ثنائي-الطول الموجي.
3. من أجل حساب الأسفار القصوى (فماكس) تعرض بواسطة أنسجة GCaMP3/6-وإذ يعرب عن، إضافة ميليلتر 12 م 3 كلوريد البوتاسيوم (بوكل) ل الأعمال التحضيرية الحجاب الحاجز⁶.
   1. القيام بتجارب مع شريط السطوع على شريط جدول بحث تعيين إلى 110 في المائة المستوى الذي يسلك الأنسجة GCaMP3/6-وإذ يعرب عن التشبع في 20 X التكبير، دون binning في الاستجابة إلى بوكل.
4. سجل في 20 لقطة في الثانية وأن لا تفوت أي الأحداث سريعة.
5. حفز مع s 1-45 من 20-40 هرتز لتحفيز العصب بإيصال قطار من النبضات استخدام الشفط الكهربائي أو إضافة يضع الدوائية بتطبيق حمام أو نضح وجمع Ca^{2 +} الردود الفلورسنت دينامية في خلية واحدة نوع فرعي جنبا إلى جنب مع إشارة NMJ ثابت 594-αBTX.
   ملاحظة: إذا كانت الأنسجة على حدة الأحمر أو استعملنا جيتشي أو جيفي الفئران تصبح متوفرة للاستخدام في NMJ، يمكن استخدامها لجمع إشارتين ديناميكية تعكس عنصرين الخلوية متميزة في NMJ.
6. عند الانتهاء من تجارب التصوير أو الكهربية لأن النتائج المرجوة قد تحققت، نتخلل المياه من خلال خطوط نضح وتمتص المياه 2 x-x 3 عن طريق الشفط الكهربائي لضمان بناء الأملاح لا.

4-التصدير وتحليل البيانات من قبل "خريطة الانحراف المعياري لكثافة الفلورية" (SD_iu16)

1. تسجيل تسلسل الصور المسجلة كرزمة TIFF 16-بت وتحميلها على نظام تحليل بيانات التصوير المطلوب للتحليل.
2. في القائمة ملف للبرنامج 8 د، حدد المكدس الصورة للفائدة ، ثم انقر فوق تحميل.
   1. بمجرد تحميل الفيديو، المسح الضوئي من خلال الوقت لتحديد مقطع يحتوي على أي نشاط الفلورسنت الخلوية.
      ملاحظة: سيتم استخدام هذه المنطقة لإنشاء نموذج خلفية.
   2. اضغط على المفتاح Shift وانقر لرسم منطقة مربع الفائدة (ROI) في منطقة حددت كمنطقة العينة الخلفية.
   3. بعد إنشاء المربع، اضغط على شريط الفضاء لتوليد مؤامرة لتغيير خلفية النشاط.
   4. انقر بالزر الأيمن التتبع وتحديد الخيار متنوعة لتقديم الخيار تفريغ عائد الاستثمار كنص لجعل التتبع كملف نص إحداثي س وص.
3. نقل مرة أخرى إلى شريط الفيديو للفائدة، تفحص مرة أخرى لتحديد المنطقة الزمنية حيث يتم حدوث نشاط المصلحة.
   1. باستخدام زر الماوس الأوسط، حدد المنطقة الزمنية في المربع الأصفر وقت.
   2. انقر بالزر الأيمن على الفيديو وحدد المكدس مكتب خدمات المشاريع ، ومن ثم خريطة Stat الخيار 5.
      ملاحظة: سيؤدي هذا إلى إنشاء مخطط انحراف المعياري (SD خريطة) في الإطار الأيسر.
   3. انقر فوق على خريطة التنمية المستدامة ومن ثم اضغط ] مفتاح x 19 لتطبيق خريطة حرارة اللون المناسب.
   4. انقر بالزر الأيمن على الخريطة SD وحدد STM تحميل وحفظ، الذي سوف يقدم خيار حفظ stm كالمشاجرة لحفظ مخطط التنمية المستدامة.
   5. ثم، اضغط [ مفتاح x 19 للعودة إلى خارطة لون رمادي.
   6. اضغط C ثم D لإحضار أدوات رسم خرائط الكثافة. باستخدام زر الماوس الأيسر ومركز زر الماوس، قم بضبط العتبة تشمل كل نشاط الفلورسنت هو موضح في خريطة التنمية المستدامة.
   7. اضغط C لإغلاق أدوات الكثافة مع الحفاظ على إعدادات العتبة.
   8. انقر بالزر الأيمن خريطة التنمية المستدامة وتحديد جزيئات تحقيق الاستقرار والانتساب ، ومن ثم العثور على بتكلس.
      ملاحظة: هذا سيتم تحديد خلايا فردية معربا عن نشاط الفلورسنت.
   9. انقر بالزر الأيمن على الخريطة SD مرة أخرى وحدد إنشاء رويس الجسيمات.
      ملاحظة: هذا سوف ركب الخلايا المحددة على شريط الفيديو الأصلي للفائدة.
   10. أثناء الضغط على المفتاح Shift، انقر بالزر الأيمن على أي واحد من الجسيمات التي تم تحديدها الآن رويس في الفيديو الأصلي.
   11. حدد علامة العائد على الاستثمار و تدبير Int في العائد على الاستثمار.
       ملاحظة: سيؤدي هذا إلى إنشاء نشاط الأفراد الفلورسنت مؤامرات لكل عائد الاستثمار المحددة في شريط فيديو للاهتمام. هذه يمكن حفظها بواسطة زر الماوس الأيمن فوق أي واحد من هؤلاء وتحديد أسورتيد، تليها دوروا تفريغ كنص.
4. لمنطق مفصلة الكامنة وراء هذه العمليات، الرجاء مراجعة ملف التعليمات البرمجية المصدر⁹.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

عدة أمثلة للتغييرات كثافة الأسفار، توسط الزيادات من داخل الخلية Ca^{2 +} ضمن أنواع الخلايا المحددة NMJ، تظهر فائدة هذا النهج. وترد هذه النتائج كخرائط كثافة fluorescence المكاني، الذي يقدم موقع الخلايا المستجيبة، وكذلك الكثافة من ردودها، مما يسمح لتقييم الاستجابة كم عدد الخلا?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

هنا نقدم بعض الأمثلة لقياس Ca^{2 +} الردود في خلايا معينة في الأنسجة العضلية سليمة معربا عن جيتشي الفئران باستخدام. بغية تنفيذ هذه التجارب بنجاح، من الضروري لا تصيب العصب فرينيك أثناء التشريح. الصورة Ca^{2 +} الردود في خلايا شوان في السلطة أما منخفضة أو عالية (أي20 X أو 60 X)، من الضروري ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Myf5-Cre mice	Jax	#007893	Drives muscle cell expression as early as E136
Wnt1-Cre mice	Jax	#003829	Drives expression into all  Schwann cells at E13 but not P209
Sox10-Cre mice	Jax	#025807	Drives Schwann cell expression at older ages
Conditional GCaMP3 mice	Jax	#029043	Expresses GCaMP3 in cell-specific fashion
Conditional GCaMP6f mice	Jax	#024105	Expresses GCaMP6f in cell-specific fashion
BHC (3-(N-butylethanimidoyl)-4-hydroxy-2H-chromen-2-one)	Hit2Lead	#5102862	Blocks skeletal muscle myosin but not neurotransmission6
CF594-α-BTX	Biotium	#00007	Labels acetylcholine receptor clusters at NMJ
µ-conotoxin GIIIb	Peptides Int'l	#CONO20-01000	Blocks Nav1.4 voltage-dependent sodium channel8
Silicone Dielectric Gel; aka Sylgard	Ellswoth Adhesives	# Sil Dielec Gel .9KG	Allows for the immobilization of the diaphragm by minutien pins
Minutien pins (0.1mm diameter)	Fine Science Tools	26002-10	Immobilizes diaphragm onto silicone dielectric gel
Eclipse FN1 upright microscope	Nikon	MBA74100	Allows staging and observation of specimen
Basic Fixed Microscope Platform with Manual XY Microscope Translator	Autom8	MXMScr	Allows movement of specimen
Manual micromanipulator	Narishige	M-152	Holds recording and stimulating electrodes
Microelectrode amplifier	Molecular Devices	Axoclamp 900A	Allows sharp electrode intracellular electrophysiological recording
Microelectrode low-noise data acquisition system	Molecular Devices	Digidata 1550	Allows electrophysiological data acquisition
Microelectrode data analysis system	Molecular Devices	PCLAMP 10 Standard	Performs electrophysiological data analysis
Square wave stimulator	Grass	S48	Stimulates nerve to excite muscle
Stimulus Isolation Unit	Grass	PSIU6	Reduces  stimulation artifacts
Borosilicate filaments, 1.0 mm outer diameter, 0.5mm internal diameter	Sutter	FG-GBF100-50-15	Impales and records nerve-evoked muscle potentials
Borosilicate filaments, 1.5 mm outer diameter, 1.17mm internal diameter	Sutter	BF150-117-15	Lengthened and used for suction electrode
Micropipette Puller	Sutter	P-97	Pulls and prepares recording electrodes
1200x1200 pixel, back-illuminated cMOS camera	Photometrics	Prime 95b	Sensitive camera that allows high-resolution, high-speed imaging
Light Source	Lumencor	Spectra X	Provides illumination from LEDs for fluorescence obsevation
Infinity-corrected fluorescent water immersion objectives, W.D. 2mm	Nikon	CFI60	Provide long working distances for visualization of specimen
Fiber Optic Illuminator with Halogen lamp	Sumita	LS-DWL-N	Provides illumination for brightfield observation
W-View Gemini Image Splitter	Hamamatsu	A12801-01	Projects 1 pair of dual wavelength images separated by a dichroic to single camera
Single-band Bandpass Filters  (512/25-25 and 630/92-25)	SemRock	FF01-512/25-25; FF01-630/92-25	Permits dual band imaging
560 nm Single-Edge Dichroic Beamsplitter	Sem Rock	FF560-FDi01-25x36	Dichroic mirror which separates beams of light to allow dual-wavelength imaging
Imaging data acquisition system	Nikon	NIS Elements - MQS31000	Allows imaging data acquisition
Wavelength control module	Nikon	MQS41220	Module for imaging data acqusiition
Emission splitter hardware module	Nikon	MQS41410	Module for imaging data acqusiition
Imaging data analysis system	NA	Volumetry 8D5, Fiji	Allows analysis of fluorescence intensity and other imaging data