مرتفعة بالإضافة إلى متاهة اختبار جنبا إلى جنب مع الفيديو تتبع البرمجيات للتحقيق في تأثير والمركنه ملاحق Ketogenic خارجية

Summary

نقدم هنا، بروتوكولا للتحقيق في التغيرات في مستوى القلق من القوارض نماذج حيوانية. مرتفعة بالإضافة إلى متاهة اختبار (EPM)، يستخدم جنبا إلى جنب مع فيديو تتبع البرامج، يوفر طريقة موثوقة لتوثيق أثر العلاجات والمركنه المحتملة المختلفة في سيناريوهات المختبرات الإكلينيكية.

Abstract

والهدف العام لهذه الدراسة وصف منهجية ترقيته بالإضافة إلى اختبار المتاهة (EPM) في تركيبة مع فيديو تتبع البرمجيات. وغرض الأسلوب توثيق تأثير مختلف العلاجات والمركنه المحتملة على نماذج القوارض المختبرية. ويستند اختبار EPM نزعة القوارض نحو الأماكن المظلمة المحمية المغلقة وغير المشروطة من الخوف من الأماكن المفتوحة ومرتفعات، ودوافعها الفطرية مكثفة لاستكشاف بيئات جديدة. اختبار EPM هو اختبار سلوكية تستخدم على نطاق واسع للتحقيق في الردود والمركنه أو أنكسيوجينيك من القوارض نظراً للمخدرات أن من المعروف أن تؤثر على السلوك. المراقبة مما يدل على أن نسبة انخفاض الوقت الذي ينفق على الأسلحة مغلقة، ونسبة متزايدة من الوقت المستغرق في فتح الأسلحة وتخفيض عدد الإدخالات للأسلحة مغلقة على عدد مرتفع من إدخالات لفتح الأسلحة تقاس باختبار EPM قد يعكس انخفاض مستويات القلق. باستخدام هذا الأسلوب، يتم اختبار أثر مكملات كيتون الخارجية على السلوك المتصلة بالقلق في الفئران سبراغ داولي (الحزب الاشتراكي الديمقراطي). ملاحق خارجية كيتون مزمن تتغذى على الفئران لمدة 83 يوما أو سوبتشرونيكالي وجافاجيد حدة شفويا، اختبار يوميا لمدة 7 أيام، قبل إجراء استخدام EPM. يتم جمع البيانات السلوكية باستخدام الفيديو الذكية نظام تتبع المراقبين أعمى في نهاية العلاج. النتائج الرئيسية تشير إلى أن اختبار EPM هو طريقة فعالة للكشف عن التأثير الناجم عن الملحق والمركنه كيتون، ويمكن اعتباره مقياسا حساسة تقييم التغيرات في السلوك القلق المرتبطة بالمخدرات أو الأيضية المستندة إلى العلاجات.

Introduction

والهدف من هذه المقالة وصف منهجية اختبار EPM في تركيبة مع فيديو تتبع البرمجيات من أجل رصد التغيرات في السلوك المتصلة بالقلق وعلاجات جديدة في نماذج القوارض المختبرية. اختبار EPM هو أسلوب تقييم سلوكية بسيطة نسبيا، التي تم تطويرها للتحقيق لقياس مستويات السلوك القلق واستجابات القلق من الفئران بعد تطبيق العلاجات المخدرات¹. في الواقع، فإنه قد ثبت أن اختبار EPM مقايسة سلوكية المستخدمة على نطاق واسع وفعال للتحقيق في أحداث تغييرات في مستويات القلق من القوارض^1،2. ويستند تطبيق اختبار EPM في القوارض (أساسا الجرذان والفئران) بهم نزعة نحو الأماكن المغلقة المظلمة (نهج) وخوف غير المشروطة مفتوحة ممنوع/مرتفعات (الأبطال) ومستوى عال من الدوافع الفطرية لاستكشاف رواية بيئات. ونتيجة لذلك، اختبار EPM منهجية راسخة تستند نهج-تجنب صراع^2،3.

استخدام EPM هو جهاز على شكل زائد تتألف من أربعة أذرع مرتفعة، مما قد وصف هاندلي وميثاني⁴ (الشكل 1)، ويتكون من اثنين من الأسلحة المقابلة التي تكون مفتوحة إلى المناطق المحيطة بها (أذرع مفتوحة)، بينما هما إغلاق الأسلحة مقابل (الأسلحة مغلقة) مجهزة بالجدران. بعد العلاج، إذا هو زيادة الوقت الذي يستغرقه أذرع مفتوحة و/أو الكشف عن زيادة عدد إدخالات ذراع مفتوحة مقارنة بالسيطرة على الحيوانات (غير المعالجة) على استخدام EPM، وهذا يدل تأثير والمركنه^2،3. رد الأبطال أقوى قد تجلى في 5 دقائق الأولى بعد البدء (التنسيب للفئران في تقاطع أربعة أذرع من EPM) مقايسة EPM⁵؛ ولذلك، عادة يسجل أي سلوك بعد علاج لمدة 5 دقائق على EPM. تدابير إضافية لمستوى القلق، والعدد من الانخفاضات الرأس، الشاسي (الدائمة الرأسي من القوارض على ساقيه الخلفيتين)، بولي البراز، فضلا عن مجموع الذراع يمكن أيضا تسجيل إدخالات (النشاط الحركي العفوي) والمواقف المختلفة (تمتد أو تجميد)، على EPM². وهكذا، يمكن ترجمة معلمات السلوكية متعددة لتقديم تقييم شامل للسلوك المتصلة بالقلق.

من أجل زيادة صحة النتائج، ثلاثة فحوصات السلوكية تستخدم عادة معا، مثل الاختبار اختيار الضوء الظلام، والاختبار، والتفاعل الاجتماعي واختبار EPM، لقياس مستويات القلق الحيوان مختلف نماذج⁶. مقايسة EPM القيام وحدها على القوارض أيضا طريقة مناسبة للتحقيق في تأثير المخدرات المختلفة⁷والمركنه أو أنكسيوجينيك. يتم اختبار EPM حساسة ليس فقط لنوع البنزوديازيبين المهدنه (مثلاً، الديازيبام)⁸، ولكن أيضا، بين أمور أخرى، إلى مركبات حمض مونوأمين وبيبتيديرجيك ونوكليوسيديرجيك الأمينية (مثلاً، خصم N-الميثيل-د-اسبارتاتي (نمدا) AP7، حمض α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic (امبا) خصم كنقكس، المورفين مؤثر على مستقبلات شبائه الأفيون μ، NPY1 خصم BIBP3226، ومادة ف، جريلين، الاوكسيتوسين، يضع مستقبلات السيروتونين والخصوم مثل 8-أوه-نيال و WAY-100635، وخصم β1 ادريناليه بيتاكسولول)^9،10،،من¹¹¹². ونتيجة لذلك، مقايسة EPM على القوارض هو أسلوب مناسب وحساسة للتحقيق في تأثير العلاجات المختلفة التي تؤثر على مناطق الدماغ تشارك في تأثير والمركنه (مثلاً، اللوزة والحصين ومناطق الحوفي) و آليات العمل (مثلاً، نظام هرمون السيروتونين وجابايرجيك وأدينوسينيرجيك) المتورطين في القلق². وتشمل وكلاء اختبار في هذه الدراسات EPM ملاحق خارجية كيتون أن يغير الدماغ إشارات بطرق خفية قد تتطلب طريقة حساسة للكشف عن التغيرات السلوكية.

في هذه المقالة، يصف لنا اختبار EPM المستخدمة في تركيبة مع فيديو تتبع البرمجيات، مما يساعد على القضاء على التحيز التجريبية ويسهل جمع وتحليل التغييرات السلوكية استجابة للعلاجات والمركنه الرواية.

Protocol

وأجريت معاملة الحيوان وقياس الإجراءات وفقا لجامعة جنوب فلوريدا المؤسسية الحيوان الرعاية واستخدام اللجنة (IACUC) المبادئ التوجيهية (بروتوكول #0006R). كل الجهود بذلت لخفض عدد الحيوانات المستخدمة.

1-الأعمال التحضيرية

ملاحظة: البروتوكول يتطلب عادة فئران المختبرات تربيتها أو الماوس لاختبار EPM. ومع ذلك، أيضا تم اختبار الحيوانات الأخرى، مثل خنازير غينيا، على ابمس¹³. من المهم أن تنظر في تباين اللون بين الحيوانات في المتاهة ولون المتاهة عند استخدام تعقب الفيديو. على النقيض من أقل أهمية للباحثين في مشاهدة الحيوانات الحية أو عن طريق الفيديو. إعدادات الفيديو تتبع البرمجيات الحاجة إلى تكوين للوثيقة أن الحيوانات هي الأسود أو الأبيض في متاهة أسود أو أبيض. يمكن أن تحدث مشاكل مع إعدادات التكوين مع متاهة اكريليك واضحة، لكن يمكن أن تكون متاهة رمادية ماتي الأمثل لكل ألوان القوارض.

1. حدد الحيوانات للتجربة، النظر في إمكانية التأثير على عوامل مثل السلالة، والجنس، ودورة السفاد، والعمر، فضلا عن وزن الجسم².
2. استناداً إلى التجربة الفردية، تحديد عدد الحيوانات كل مجموعة للاختبار.
   ملاحظة: سوف يكون حجم المجموعة تعتمد على حجم التأثير المتوقع مع معاملة الاختبار. عموما تتم التحليلات السلطة قبل البدء التجربة لتحديد الحد الأدنى لعدد من المواضيع التي ستدرج نظراً للتباين في استجابات الحيوان في أي مهمة معينة، فضلا عن العدد من المجموعات/الظروف التجريبية.
3. تصميم التجربة (فيه بطارية اختبارات السلوكية المختلفة، مثل فتح حقل تجارب واختبار EPM، اختبار ثقب-المجلس، واختبار سباحة أجبر ستستخدم) بعناية.
   ملاحظة: قد تتغير قبل التعرض القوارض إلى بيئة اختبار رواية (مثل إجراء اختبار حقل مفتوح) مباشرة قبل الاختبارات EPM سلوك الحيوانات في EPM^1،2.
4. التعامل مع جميع الحيوانات بطريقة مماثلة قبل اختبار EPM.
   ملاحظة: قد ثبت أن عوامل الإجهاد المختلفة، وتطبيق المخدرات (مثلاً، الحقن) والإجهاد، ومناولة الشحن يمكن تغيير السلوك والاستجابات السلوكية للقوارض في EPM¹⁶. وهكذا، ضرورية تعود الحيوانات إلى منزل على حيوان (مثلاً، بعد شحن، 1-2 أسابيع قبل اختبار EPM) والظروف التجريبية، وإجراءات العلاج (مثلاً، جافاجينج). من المهم أيضا أن التعامل مع القوارض وأي خبرة مسبقة الإجهاد، لا سيما فورا قبل إجراء الاختبار، يتسق عبر الحيوانات ومجموعات العلاج.
5. إجراء الدراسات السلوكية في الحيوانات ليلية، مثل الفئران والجرذان، استخدام دورة ضوء عكسي، حيث يمكن إجراء تقييم السلوكية عند الحيوانات في مرحلتها النشطة ومظلمة.
   ملاحظة: آثار الظروف السكنية المختلفة والخفيفة إيقاعات الإيقاعية/دورة في السلوك وتأثيرها على النتائج EPM أظهرت سابقا¹⁷، حيث ينظم هرمونات الحيوانات دائرة الضوء.
6. استخدام المجربون نفسه أثناء الإجراءات، وأطلب منهم أن تجنب العطور أو الصابون مع رائحة قوية.
7. اسأل المجربون لا الحديث قرب الحيوان أثناء التجربة أو نقل الكائنات القريبة البيئة EPM.
   ملاحظة: من الأهمية بمكان أن يجعل المراقب حركات الحد الأدنى ولا الضوضاء عند جمع البيانات السلوكية.
8. تنظيف EPM كامل بعد كل محاكمة لمحو أي روائح الحيوانات السابقة والتي قد تتداخل مع الاستكشاف باختبار الحيوان.
9. (مستحسن) التعامل مع الحيوانات لعدة أيام قبل الاختبار EPM (التقاط أنه بلطف بالجذع وعقد لمدة دقيقة أو اثنتين) إلى تأقلم لهم المجرب.
10. عند وضع الحيوانات على EPM، تأكد من التعامل مع جميع الحيوانات بطريقة متسقة، ومكان كل القوارض في EPM في نفس الموضع التي تواجه نفس الذراع (مثلاً، في مركز تواجه ذراع مفتوحة بعيداً عن المجرب).

2-تطبيق ملاحق خارجية كيتون

1. قياس وزن الجسم من الحيوانات قبل البدء في أي علاجات لتحديد حساب الجرعة للعلاج (مثلاً، إجراء تزقيمية مدتها).
2. تعريف الحيوانات إلى الأسلوب تزقيمية إجراء (فترة التكيف) استخدام المياه قبل تزقيمية مدتها 5 د قبل مكملات كيتون (تشاو القوارض القياسية/معيار النظام الغذائي [SD] + تزقيمية المياه؛ سبيل المثال، 2.5 غ/كغ من وزن الجسم من الماء في اليوم). استبعاد استخدام أي الحيوانات التي لا تتكيف مع أسلوب إجراء تزقيمية مدتها.
3. بعد انتهاء فترة التكيف، تغذية الحيوانات المزمن عن د 83 وسوبتشرونيكالي د 7 مع التنمية المستدامة وتزقيميه يوميا مع أما المياه (مثلاً، 5 غ/كغ من وزن الجسم يوميا؛ ومجموعة المراقبة: n = 8)، كيتون ملاحق مثل إستر كيتون (كه؛ 1، 3- هناك أسيتواسيتاتي دييستر؛ مثلاً, 5 غ/كغ من وزن الجسم يوميا؛ n = 8)، الملح كيتون (KS؛ نا⁺/K⁺\u2012beta-hydroxybutyrate [βHB] الملح المعدنية؛ مثلاً, 5 غ/كغ من وزن الجسم يوميا؛ n = 8)، أو KS + الدهون الثلاثية متوسطة السلسلة (نسبة 1:1، كسمكت؛ n = 8)^18،،من¹⁹²⁰.
   ملاحظة: تم اختبار الحيوانات التي تلقت تزقيمية إجراء على EPM 1 ح بعد العلاج. تغذية الفئران مع تشو القوارض القياسية وجافاجيد بالماء (باستثناء مكملات كيتون) بمثابة مجموعات التحكم.

3-القلق بالانزيم

1. جهاز EPM
   1. استخدام الجهاز نفسه عبر دراسة لتوحيد النتائج. EPM هو جهاز على شكل زائد، الذي يتكون من أربعة أذرع (مثلاً، الأسلحة قد تكون 10 سم وطولها 50 سم): يتم فتح الأسلحة مقابل اثنين، وهما مغلقة مقابل الأسلحة مجهزة بجدران عالية (مثلاً، 30 سم). الجهاز هو مرتفعة فوق الكلمة (مثلاً، من 55 سم)².
      ملاحظة: المعلمات الأكثر استخداماً هي الوقت المتراكم الذي يقضيه في أذرع مفتوحة وعدد الإدخالات في أحضان مفتوحة؛ غير أن الوقت الذي يقضيه في الأسلحة مغلقة ومركز، وتقاس بعدد الإدخالات في الأسلحة مغلقة والمركز، فضلا عن المسافة التي سافر في كل مجال.
   2. تضيء EPM باستخدام الإضاءة المباشرة (أي، مباشرة على ضوء المصدر تجاه السقف بدلاً من مباشرة إلقاء الضوء على جهاز EPM) وكفالة جميع الأسلحة الأربعة هي المثل مضيئة (دون الظلال، انظر الشكل 2).
      ملاحظة: التغييرات في مستوى الضوء تغير سلوك القوارض على EPM. ولذلك، هناك حاجة إلى الإضاءة مماثلة في الحيوانات التجريبية على التوالي والأيام (مثلاً، لومن 2,800 في الغرفة)².
2. نظام تتبع الفيديو
   ملاحظة: استخدام شريط فيديو تتبع النظام مع واجهة كمبيوتر وكاميرا فيديو لجمع البيانات والتي سيقوم تلقائياً بجمع البيانات السلوكية في الفئران (الشكل 3). للفيديو تتبع النظام، ومجموعة متنوعة من الكاميرات التناظرية القياسية أو مصادر المعرفة من قبل المستخدم الصورة (كاميرات الأشعة تحت الحمراء، كاميرا فيديو، كاميرا USB WIA المتوافقة، كاميرات،etc.) يمكن استخدامها. عند تحليل الفيديو المسجلة، ويدعم البرنامج تتبع حركة جميع صيغ الفيديو الشائعة، مثل.avi.vob،.wmv,.asf، موف،.qt، ميلا في الغالون،.mpeg،.mp4،.3 سباق الجائزة الكبرى ومكف. إذا كان الفيديو لا عدم تشغيل بشكل صحيح، فإنه قد يتطلب برنامج ترميز معينة؛ يدعم تنسيقات الفيديو إضافية إذا تم تثبيت برنامج الترميز المقابلة في النظام. يمكن أيضا استخدام البرمجيات تتبع حركة لتحليل أشرطة الفيديو المكتسبة سابقا ومعالجة الصور من مصادر مختلفة، مثل مسجلات دي في دي عالية الدقة، وملفات الفيديو الرقمية (أفي، وافي،.mpeg،etc.)، كاميرات، كاميرات الفيديو الرقمية، وأجهزة تصوير WIA متوافق.
   1. إعداد النظام
      1. قم بتوصيل المفتاح تثبيت البرامج تتبع حركة منفذ USB 2.0 وإطلاق أداة التثبيت.
      2. إصلاح الكاميرا فوق منطقة تجريبية والتأكد من أنها ستبقى غير متحرك طوال فترة التجربة.
      3. إعداد تجربة جديدة في نظام تتبع حركة البرمجيات باستخدام دليل التعليمات. حدد جديدة التجربة. انقر نقراً مزدوجاً فوق الرمز للبروتوكول أن التجربة الجديدة ينبغي أن تتبع (الشكل 3، 1 ملف تكميلي).
      4. أدخل تفاصيل التسمية/وصف التجربة في مربع الحوار معلومات التجربة .
      5. تحديد المصدر تسلسل الفيديو العملية.
      6. تعريف قاعدة التحويل لقياس مسافات صحيحة. عملية المعايرة يتيح البرنامج تتبع حركة لإبلاغ الأبعاد الفعلية للمنطقة التجريبية بغية الحصول على قيم موثوق بها للمسافات والسرعات.
      7. تحديد المناطق ذات الاهتمام (مناطق) في مجال العمل.
      8. قم بتعديل معالم عملية الكشف.
         1. من أجل البرامج تتبع الحركة دقة الكشف عن موقف الحيوان في الصورة، يجب تعيين بعض التعديلات الكشف.
         2. تتطلب عملية تتبع صورة واضحة وجيدة يتناقض باستخدام تسوية غرامة عامة السطوع والتباين المعلمات في المقطع لوحة الكشف عن إعدادات السطوع والتباين . حسب الحاجة، قم بضبط هذه الإعدادات للصورة بأكملها أو لمناطق المعرفة من قبل المستخدم.
      9. وضع الفئران في كل ساحة لاختبار عملية الكشف.
      10. اضغط على زر ابدأ اختبار للتحقق من إذا كان تحديد عملية الكشف عن هذا الموضوع بشكل صحيح. تأكيد الاكتشاف يتم تفعيلها من خلال ظهور نقطة على الشاشة. عملية المعايرة الذي ينبغي القيام به قبل بدء الاختبار.
      11. ويعتبر الكشف عن تأكيد عند النقطة السوداء فقط سيظهر في المشغل هو الحيوان يجري تعقب. تتبع الخط الأحمر يحتاج إلى تتابع عن كثب تشريد جميع الحيوان. تتبع السليم كما أكد مع تسمية أبيض سرد عدد الحيوانات وما يقابلها الإحداثيات استناداً إلى التشرد. إذا لم يتم الحصول على مثل هذا الكشف عن ضبط معلمات العتبة و تقرحات للاستفادة المثلى من الكشف وتعقب العملية.
      12. ضبط معلمات العتبة و تآكل للحصول على صورة أكثر وضوحاً وخالية من التشويش اختبار.
      13. إذا تم الكشف عن مسار تتبع بشكل صحيح، اضغط على زر إيقاف الاختبار (الشكل 4). إذا كانت هذه التعديلات سوف تستخدم لكل ملف تجريبي جديد، اضغط على زر حفظ كافتراضي . اضغط على زر موافق لحفظ إعدادات الكشف الجديد.
      14. تعيين الشروط وقت المحاكمات.
      15. إذا كان البروتوكول التجريبي يتطلب عملية اقتناء المسار لبدء هذا الموضوع يوضع في منطقة تجريبية في الوقت نفسه، من الممكن إعداد وحدة التحكم عن بعد الذي يأتي مع البرنامج أو استخدام ماوس لاسلكية.
          ملاحظة: يوفر هذا الخيار إمكانية التحكم عن بعد في البداية وتاريخ التوقف.
   2. إعداد المواضيع في النظام
      1. إدارة قاعدة بيانات لموضوع التجريب. لإنشاء قاعدة بيانات للمواضيع التجريبية، أدخل مدير قاعدة بيانات المواضيع بالضغط على زر المواضيع في شريط مساعد التجريب .
      2. + اضغط على زر لإضافة مواضيع جديدة إلى قاعدة البيانات.
      3. مع خيار موضوع واحد محدد مسبقاً، قم بإدخال التعليمات البرمجية في هذا الموضوع.
      4. قم بتعبئة بقية المعلومات في هذا الموضوع في المقطع خصائص الموضوع .
      5. اضغط على زر إنشاء لإضافة موضوع جديد.
      6. تعريف الخطة التجريب. استخدام جدولة لتحديد المراحل المختلفة والدورات، والمحاكمات، والمواضيع المزمع تنفيذها في إطار المشروع التجريبي. يتم تحديد تلقائياً "المحاكمة المقبلة" في المحاكمة ليتم تنفيذها. هذه الخاصية تظهر كعلامة خضراء على الجانب الأيسر من الاسم للمحاكمة.
   3. الحصول على البيانات بنفس الوقت لتسجيل وتتبع
      ملاحظة: عندما يتم تحديد مصدر صورة حية، يقدم الفريق لاعب وحدة نمطية تسجيل مضمنة لالتقاط الفيديو القادمة من الكاميرا المختارة بسهولة.
      1. إعداد برامج تتبع الحركة للحصول على البيانات (المعايرة، تعريف المنطقة، والكشف عن إعدادات، إعدادات الوقت، جدولة).
      2. افتح لوحة الحصول على البيانات .
      3. بدء تسجيل فيديو التجربة دون الحيوان بالضغط على زر بدء التسجيل المتاحة في البرنامج.
      4. ضع الحيوان في منطقة تجريبية.
      5. بدء عملية الحصول على البيانات بالضغط على زر بدء تشغيل لوحة التحكم الوقت . عملية التعقب ستجري متزامنة مع عملية التسجيل. حسب الحاجة، اسأل المجرب ملاحظة أسفل المتغيرات السلوكية يدوياً، مثل الشاسي، رئيس الانخفاضات، وشلالات (الشكل 5).
      6. جمع البيانات EPM يدوياً وكذلك المراقبين أعمى (فصل المراقب من EPM بستارة) في غرفة الاختبار.
      7. الانتظار حتى انتهاء التسجيل عملية التعقب أو اضغط على زر إيقاف في لوحة التحكم الوقت .
      8. إزالة الحيوان من منطقة تجريبية. إيقاف عملية تسجيل الفيديو بالضغط على زر إيقاف متاح على لاعب البرمجيات تتبع الحركة.
      9. تعد منطقة تجريبية للحيوان القادم بالغسيل والتجفيف. تكرار الدورة من جديد.
   4. تحليل البيانات
      1. للوصول إلى أداة التحليل ، اضغط على زر تحليل في شريط مساعد التجريب .
      2. لإنشاء تقارير تحليل المحاكمات الانتهاء، حدد المحاكمات لتحليل. تكوين وحدد تقرير التحليل. تعيين الفواصل الزمنية يتم تحليلها. إنشاء ومراجعة التقارير. تصدير النتائج إلى تنسيقات جدول البيانات أو الصورة (الشكل 6).
3. EPM لقياس مستويات القلق
   1. القيام بتجارب EPM تحت ظروف نونستريس (في غرفة مضاءة خافت وهادئ) بعد تزقيمية الشفوي.
      ملاحظة: تأكد من أن يتم تشغيل التجارب في فترة زمنية قريبة (مثلاً، بين 1200 و 1400) لأنه يمكن أن يؤثر على إيقاع circadian السلوك القوارض في^15،EPM¹⁷. تجنب الحركات غير الضرورية والضوضاء أثناء التجربة.
   2. قبل بدء الاختبار، تأكد من أن EPM تنظيفها والمجففة والفيديو تتبع النظام جاهز للاستخدام.
   3. نقل الفئران في قفص المنزل بهم إلى غرفة تجريبية 30 دقيقة قبل البدء التجربة.
   4. مكان الفئران عند تقاطع أربعة أذرع EPM، تواجه ذراع مفتوحة مقابل المجرب.
   5. تشغيل الفيديو تتبع البرمجيات، فضلا عن تسجيل يدوياً في سلوك الحيوان، لمدة 5 دقائق.
   6. إذا كان الحيوان يقع قبالة استخدام EPM، التقط ووضعه مرة أخرى على نفس النقطة EPM حيث سقطت. استبعاد البيانات السلوكية لهذا الحيوان من التحليل.
      ملاحظة: بصوت عال الضوضاء أو حركة قد شل/تجميد الحيوانات على أذرع مفتوحة. إذا لم تسمع ضجيج مرتفع أثناء التجربة، تستبعد البيانات السلوكية للحيوان تمر بهذه التجربة في تلك اللحظة من التحليل.
   7. في نهاية الاختبار 5 دقائق، وقف الفيديو تتبع البرامج وإزالة الحيوان من EPM. وضعه مرة أخرى في قفصة المنزل.
   8. قبل التجربة القادمة/الحيوان، تنظيف EPM بمطهر مطهر (مثلاً، كواتريسيدي) متبوعاً بماء الصنبور. جاف على الجهاز مع مناشف ورقية.

4-تحليل البيانات المجمعة عن طريق الفيديو نظام تتبع

1. وبناء على البيانات المسجلة، تحليل مقدار الوقت المستغرق في فتح الأسلحة والأسلحة مغلقة؛ عدد الإدخالات التي تم إجراؤها بأذرع مفتوحة، مغلقة من الأسلحة، وإلى منطقة مركز؛ زمن الوصول لدخول الأسلحة مغلقة؛ سافر المسافة بأذرع مفتوحة، الأسلحة مغلقة، وفي منطقة المركز.
   ملاحظة: يعتبر هذا الحيوان في منطقة عند المركز الهيئة الشامل في هذا المجال.
2. تحديد آثار المعالجات على السلوك باستخدام تحليل تباين (ANOVA) مع الفرق فيشر الأقل أهمية (LSD) اختبار اختبار/توكي المقارنات المتعددة.

النتائج

التجربة الحالية يحقق الفرضية القائلة بأن مكملات كيتون خارجية تدار أما مزمن (بنك الاحتياطي الفيدرالي لمدة 83 يوما) أو سوبتشرونيكالي (جافاجيد شفويا لمدة 7 أيام) له تأثير والمركنه على اثنين شهرا الذكور (الفئران سبراغ داولي (الحزب الاشتراكي الديمقراطي) 250-350 غ). الإدارة المزمنة وتألفت من الملاحق كيتون التالية: إستر كيتون جرعة منخفضة (LKE؛ 1، 3--هناك--أسيتواسيتاتي دييستر، ~ 10 غ/كغ/يوم، LKE)، إستر كيتون جرعة عالية (هك؛ ~ 25 غرام/كغ/يوم، هك)، بيتا-هيدروكسيبوتيراتي-المعدنية الملح (-S; ز ~ 25/ كجم/يوم، كانساس)، والدهون الثلاثية سلسلة-S + المتوسطة (MCT؛ ~ 25 غرام/كغ/يوم، كسمكت). لتجارب الفمية، استخدمت المجموعات المعاملة التالية: كه، كانساس، وكسمكت (5 غ/كغ/يوم). وشملت المجموعات مراقبة التنمية المستدامة أو التنمية المستدامة مع تزقيمية المياه (تحكم). ومثلت كافة البيانات كالمتوسط ± الخطأ المعياري للوسط (SEM). تم النظر في النتائج هامة عندما ف < 0.05. الأهمية تحددها ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار LSD فيشر.

بعد تغذية مزمنة، الفئران في المجموعة كسمكت قضى وقتاً أكثر بكثير بأذرع مفتوحة (p = 0.0094) مقارنة بمجموعة التحكم. الوقت الذي يقضيه في الأسلحة مغلقة كان أقل بشكل ملحوظ في المجموعات LKE، كانساس، وكسمكت (ف = 0.0389 و 0.0077 0.0019، على التوالي)، في حين أن فريق كانساس قضى وقتاً أكثر بكثير في المركز (p = 0.0239) (مجموعة المراقبة (SD) بالمقارنة مع الشكل 7 أ) ¹⁸.

الفئران في كانساس وكسمكت المجموعات سافر مسافات أطول بشكل ملحوظ بأذرع مفتوحة (p = 0.036 و 0.0165)، بينما سافر على الفئران في مجموعات LKE وكانساس وكسمكت وأظهرت إلى حد كبير أقل مسافة في الأسلحة مغلقة (p = 0.0252، 0.00041، و 0.0032، على التوالي)، مقارنة بمجموعة المراقبة (SD) (الشكل 7). بالمقارنة مع مجموعة المراقبة، مجموعات كانساس وكسمكت كان أكبر المسافة سافر في منطقة مركز (p = 0.0206 و 0.0482، على التوالي)، بينما في المجموعة كسمكت، وزمن الوصول إلى المدخل الأول إلى الأسلحة مغلقة كان أكبر بكثير بعد التغذية المزمن (p = 0.0038)¹⁸ (الشكل 7).

الوقت الذي يقضيه في الأسلحة مفتوحة وكان أكبر في المجموعة كه (ف = 0.0281) بعد 7 أيام تزقيمية الشفوية، بينما في المجموعات كه وكانساس وكسمكت، الوقت الذي يقضيه في وسط تناقص (p = 0.0005، < 0.0001، و = 0.023، على التوالي)، مقارنة كنترول l مجموعة (الشكل 8 أ)¹⁸. في مجموعات كه وكانساس، كان أدنى بكثير من عدد الإدخالات إلى الأسلحة مغلقة (p = 0.0436 و 0.0234، على التوالي) بعد 7 أيام إدارة (8B الشكل)، بينما الفئران في كانساس المجموعة أيضا دخلت وسط أقل كثيرا (ف = 0.0193)، مقارنة بمجموعة المراقبة (SD).

رقم 1: مرتفعة بالإضافة إلى متاهة (EPM) المستخدمة لاختبار الفئران. كل ذراع 10 سم وفتحه طويلة، مع اثنين من الأسلحة مقابل 50 سم مع حافة بارزة. البلدين مغلقة مقابل الأسلحة مجهزة 30 سم ارتفاع الجدران. ارتفاع المدرج من الكلمة هو 55 سم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 2: أمثلة على المباشر والإضاءة المباشرة. ضمان مصدر الضوء أشار نحو السقف، بينما يتم حظر الضوء مباشرة فوق منطقة تجريبية. من المهم استخدام الضوء غير المباشر أثناء تجارب EPM كي تضيء وبالمثل جميع الأسلحة الأربعة دون الظلال. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 3: شريط مساعد التجريب لتتبع حركة البرمجيات. صمم لتوفير الوصول إلى العمليات الرئيسية. تتوافق مع الأزرار لهذه المهمة في إطار عملية التجريب نموذجي، بينما تنشط المهام المسموح بها حاليا فقط. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 4: مسار هذا الموضوع يتسم بخط أحمر بعد حركة الحيوان. عن طريق ضبط العتبة، يمكن تقليل الخلفية حتى يتم الكشف عنها فقط من هذا الحيوان وتعقبها بواسطة خط أحمر. يتم الإشارة إلى إحداثيات الموقف الحالي، ويتابع المسار مركز الكتلة من هذا الموضوع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الرقم 5: مرتفعة بالإضافة إلى متاهة (EPM) مع الفئران سبراغ داولي (الحزب الاشتراكي الديمقراطي) في arm. فتح ويتضح مثال الإعداد التجريبية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 6: مسار حركة المتراكمة للحيوان أثناء محاكمة- كجزء من تحليل البيانات، يمكن عرض تتبع المسار التي تم جمعها من هذا الموضوع في مجال التعقب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 7: الاستجابات السلوكية للفئران والحزب الديمقراطي الاشتراكي في EPM بعد 83 يوما من التغذية المزمن من مكملات كيتون خارجية. هذه اللوحات إظهار الممثل النتائج التي تم جمعها باستخدام EPM و نظام تتبع حركة¹⁸. (أ) مجموعة كسمكت أنفقت نسبة مئوية أكبر من الزمن بأذرع مفتوحة، بينما LKE، كانساس، وجماعات كسمكت أنفاق وقت أقل في الأسلحة مغلقة، مقارنة بمجموعة المراقبة (SD). مجموعات كانساس (ب) وكسمكت سافر مسافة أكثر بأذرع مفتوحة، بينما LKE، كانساس، وجماعات كسمكت سافر مسافة أقل في الأسلحة مغلقة، عرض تخفيض القلق بالمقارنة مع عنصر التحكم المجموعة (SD). دخلت المجموعة (ج) كسمكت الأسلحة مغلقة في وقت لاحق، مما يشير إلى انخفاض القلق بالمقارنة مع السيطرة المجموعة (SD). المختصرات: SD = تشاو القوارض القياسية + الماء (25 غ/كغ من وزن الجسم (يتعلق) من الماء في اليوم)؛ LKE = SD + LKE (1، 3--هناك--أسيتواسيتاتي دييستر، b.w./day 10 جرام/كجم)؛ هك = SD + هك (25 غرام/كغ b.w./day)؛ KS = SD + الملح بيتا-هيدروكسيبوتيراتي-المعدنية (ليالي b.w./day 25 غرام/كغ)؛ كسمكت = SD + الدهون الثلاثية سلسلة-S + المتوسطة (MCT b.w./day 25 غرام/كغ)؛ الحزب الديمقراطي الاشتراكي = فأر سبراغ داولي؛ EPM = مرتفعة بالإضافة إلى متاهة (* p < 0.05؛ * * ف < 0.01؛ * * * ف < 0.001؛ * * * ف < 0.0001). لقد تم تعديل هذا الرقم من آرية وآخرون. ¹⁸- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 8: الاستجابات السلوكية من الفئران والحزب الديمقراطي الاشتراكي بعد 7 أيام تزقيمية الشفوي مكملات كيتون خارجية. وجمعت نتائج ممثلة من خلال استخدام EPM اختبار، استخدام نظام تتبع حركة برمجيات¹⁸. (أ) مجموعة كه أنفقت نسبة مئوية أكبر من الزمن بأذرع مفتوحة، في حين كه، كانساس، وجماعات كسمكت قضى وقتاً أقل في المركز (مقارنة بمجموعة التحكم [SD])، مما يشير إلى انخفاض القلق. (ب) مقارنة بالسيطرة المجموعة (SD)، تم الكشف عن إدخالات أقل في الأسلحة مغلقة من الفئران في المجموعات كه وكانساس. المختصرات: SD = تشاو القوارض القياسية + الماء (يتعلق 5 غ/كغ من الماء يوميا)؛ كه = SD + كيتون إستر (1، 3--هناك--أسيتواسيتاتي دييستر، b.w./day 5 غ/كغ)؛ KS = SD + الملح بيتا-هيدروكسيبوتيراتي-المعدنية (ليالي b.w./day 5 غ/كغ)؛ كسمكت = SD + S MCT (b.w./day 5 غ/كغ)؛ الحزب الديمقراطي الاشتراكي = فأر سبراغ داولي؛ EPM = مرتفعة بالإضافة إلى متاهة (* p < 0.05؛ * * * ف < 0.001؛ * * * ف < 0.0001). لقد تم تعديل هذا الرقم من آرية وآخرون. ¹⁸- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Discussion

بشكل عام، عدة عادة استخدام الاختبارات، مثل اختبار اختيار الضوء الظلام، والتفاعل الاجتماعي، والاختبار EPM، تستخدم لقياس مستوى القلق في نماذج حيوانية مختلفة. ومع ذلك، مقايسة EPM وحدها طريقة مناسبة للتحقيق في, على سبيل المثال، مكملات أثر كيتون خارجية على القوارض القلق مستويات^18،20.

والميزة الرئيسية لطريقة استخدام EPM أنها تعتمد على نزعة غريزية القوارض تجاه المساحات المظلمة، والمغلقة، بالإضافة إلى الخوف غير المشروطة من مرتفعات وتجنب الأماكن المفتوحة. من ناحية أخرى، تقوم الأساليب الأخرى لدراسة السلوك مثل القلق على الاستجابات السلوكية لبعض المؤثرات الضارة، مثل الصدمات الكهربائية، والحرمان من الغذاء والماء، وضجيج عال، والتعرض ل رائحة المفترس³. هذه الاختبارات عادة ما يؤدي في رد مشروط، في حين EPM أيضا يمثل بديلاً أكثر إنسانية. علاوة على ذلك، استخدام EPM يمكن أن تكون أداة مفيدة لدراسة مشاركة مناطق الدماغ المختلفة (مثلاً، مناطق الحوفي، الحصين) والآليات الكامنة (مثلاً، غابا، غلوتامات، السيروتونين، الادينوسين) السلوك القلق².

عند تطبيق العلاجات التي تكون مرهقة جداً للحيوانات (مثلاً، تزقيمية الشفوي)، فمن المهم أن تعالج جميع الحيوانات بنفس الطريقة ونفس الشخص، خاصة عند تقييم آثار والمركنه المحتملة، وخفية. إذا كان ذلك ممكناً، قد يكون مقدمة للمخدرات/المجمع في مياه الشرب، أو عن طريق قبولا 'علاج' أسلوب مفضل. لضمان أن تدار بنفس المبلغ لكل الحيوانات، يمكن استخدام تزقيمية شفوي. استناداً إلى خصائص الحرائك الدوائية للمجمع، فمن المستحسن عادة لاختبار الحيوانات في EPM غضون ساعة واحدة بعد جافاجينج. عند اختيار المواضيع التجريبية، من المهم أن تنظر على السلالة، والجنس، ودورة السفاد، والعمر، فضلا عن وزن الجسم، وفقا للأهداف واختبار المواد². فيما يتعلق بالعمر، وعند تصميم الدراسات EPM وتفسير البيانات، من المهم أن تنظر في أن تزيد النسبة المئوية لذراع فتح إدخالات خطيا مع سن²¹ والتغييرات المتعلقة بالشيخوخة في السلوك EPM هي سلالة محددة²².

وعند إجراء اختبار EPM، هناك المشكلات المحتملة التي تحتاج إلى معالجة. في بعض الأحيان تحتاج الحيوانات استبعادها من التحليل بسبب الاتجاهات الخارجة (مثلاً، الحيوان لم يترك المنطقة حيث أنها وضعت، تقريبا يقع قبالة الجهاز، وهو يصرف بالضوضاء أو حدث خارج الجهاز). وقد تشمل المزيد من التعقيدات مع اختبار EPM العلاجات التي تسبب التخدير أو فرط النشاط لهذه الأنواع من الآثار بحاجة إلى أن المقررة عن طريق معلمات EPM.

من المهم أن تعرض الحيوانات لاختبار EPM مرة واحدة فقط نظراً لانخفاض النشاط المعني أذرع مفتوحة، وأظهرت انخفاض إجمالي وقت ينفق على المنبر المركزي في التعرض (متكررة) الثانية من القوارض بالمقارنة مع التعرض الأولى في EPM ^14،15. لذلك، ينصح بشدة تعرض مرة واحدة للقوارض لاختبار EPM. ومع ذلك، إذا كان هناك على الأقل ثلاثة أسابيع بين التعرض الأول والثاني إلى EPM وإنشاء EPM يتم نقله إلى غرفة أخرى (بيئة مختلفة)، وقد حقق الحيوانات من EPM اختبار أكثر من مرة².

استخدام EPM المتاحة في مختلف المواد والأحجام (مثلاً، للماوس أو الفئران)، ودراسة الألوان، والتي يلزم أخذها في الاعتبار عند اختيار المواضيع. من المهم أن نضع في اعتبارنا أن الروائح خلفتها الحيوانات السابقة على الجهاز قد تغير سلوك الحيوان اللاحقة. ولذلك، نوصي باستخدام EPM مصنوعة من المواد التي من السهل نظيفة، مثل زجاج اﻷكريليك (غير شفافة)، التي لا تحتفظ بروائح بعد الغسيل. تجنب الأجهزة EPM مصنوعة من الخشب. ويفضل استخدام ماتي لون مختلف عن لون الحيوانات اختبار EPM (مثلاً، الأسود إذا اختبرت الحيوانات البيضاء). أفضل التباين بين الحيوان والعلبة، كان ذلك أفضل الكشف عن الحيوان وارتفعت الموثوقية والدقة في النتائج التي تم الحصول عليها (المسافة المقطوعة، والسرعة، تتبع). جهاز EPM مصنوعة من مادة رمادية ماتي مفيدة مع الحيوانات الأبيض والأسود، والأبيض والأسود.

وثمة ميزة أخرى لنظام تتبع الفيديو أنه بالإضافة إلى استخدام EPM، يوفر طريقة سهلة ومرنة لإعداده مع طائفة واسعة من الاختبارات السلوكية، مثل المتاهة المائية، فتح الحقل، زائد/شعاعي الذراع/T-Y متاهات، تفضيل المكان، اضطر سباحة ، وذيل تعليق الاختبارات.

باختصار، أن الهدف من هذه المادة وصف اختبار EPM المستخدمة في تركيبة مع فيديو تتبع برامج لجمع وتحليل التغييرات السلوكية استجابة للعلاجات والمركنه الرواية. وتشمل التطبيقات الممكنة لاستخدام EPM فرز وكلاء الدوائية المطورة حديثا لعلاج الاضطرابات المتصلة بالقلق. بالإضافة إلى وكلاء والمركنه وأنكسيوجينيك، يمكن أيضا التحقيق السلوكية تأثير الهرمونات المختلفة لتعاطي المخدرات. ويمكن أيضا تقييم تأثير الشيخوخة والتعرض لعوامل الإجهاد المختلفة. خلصت هذه الدراسة إلى أنه عندما يتم اتخاذ الخطوات المناسبة، استخدام EPM قد ثبت أن طريقة حساسة لتقييم التغيرات السلوكية المرتبطة كيتون مكملات^18،20.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Elevated Plus Maze for mice and rats	Coulbourn Instruments	H10-35-EPM
SMART Video Tracking Software	Harvard Apparatus	SMART 3.0