JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نقدم هنا، بروتوكولا لرصد البقاء على قيد الحياة على أساس خلية واحدة وتحديد المتغيرات التي كثيرا التنبؤ بموت الخلايا.

Abstract

فحوصات سيتوتوكسيسيتي القياسية، التي تتطلب جمع ليساتيس أو الخلايا الثابتة في نقاط زمنية متعددة، حدت من الحساسية والقدرة على تقييم العوامل التي تؤثر على مصير الخلايا العصبية. وتتطلب هذه الاختبارات مراقبة السكان منفصلة من الخلايا عند نقاط زمنية منفصلة. كنتيجة لذلك، لا يمكن أن يتبع الخلايا الفردية مستقبلي مع مرور الوقت، الحد من شدة القدرة على تميز ما إذا كانت الأحداث سوبسيلولار، مثل تشكيل بونكتا أو ميسلوكاليزيشن البروتين، السائقين المسببة للمرض، وردود التماثل الساكن، أو الظواهر مجرد مصادفة. خلية واحدة طولية الفحص المجهري يتغلب على هذه القيود، يسمح للباحث تحديد الاختلافات في البقاء على قيد الحياة بين السكان ورسم العلاقات السببية مع زيادة حساسية. وسيتناول هذا الفيديو دليل سير عمل ممثل لتجارب قياس بقاء خلية واحدة من الفئران الخلايا العصبية القشرية الأولية معربا عن علامة نيون بروتين. المشاهد سوف تعلم كيفية تحقيق ترانسفيكشنز ذات الكفاءة العالية، وجمع ومعالجة الصور يتيح تتبع المحتملين من خلايا فردية، وقارن النسبي بقاء السكان الخلايا العصبية باستخدام تحليل المخاطر النسبية كوكس.

Introduction

موت الخلايا غير طبيعية عامل قيادة في العديد من الأمراض، بما في ذلك السرطان، نيوروديجينيريشن، والسكتة الدماغية1. فحوصات قوية وحساسة لموت الخلية ضرورية لتوصيف هذه الاضطرابات، فضلا عن وضع استراتيجيات علاجية لتمديد أو تقليص الخلوية البقاء على قيد الحياة. لا يوجد حاليا عشرات من أساليب لقياس موت الخلية، أما مباشرة أو من خلال علامات البديل2. على سبيل المثال، يمكن تقييم موت الخلية بصريا مع المساعدة من الأصباغ الحيوية التي وصمة بشكل انتقائي خلايا ميتة أو حية3، أو عن طريق رصد مظهر فوسفوليبيدات محددة على غشاء البلازما4،5،6 . يمكن أيضا استخدام القياسات للمكونات داخل الخلايا أو نواتج الأيض الخلوية تسربها إلى وسائل الإعلام عند انحلال الخلوية كوكلاء للخلية وفاة7،8. وبدلاً من ذلك، يمكن تقريبها صلاحية الخلوية بتقييم النشاط الأيضي9،10. على الرغم من أن هذه الأساليب توفير وسائل سريعة لتقييم بقاء الخلية، فليست دون محاذير. ويلاحظ كل تقنية الثقافة السكان واحدة، مما يجعل من المستحيل التمييز بين خلايا فردية وفريدة من نوعها معدلات البقاء على قيد الحياة. وعلاوة على ذلك، هذه الاختبارات المستندة إلى السكان غير قادر على قياس العوامل التي قد تكون هامة لموت الخلايا، بما في ذلك مورفولوجيا الخلوية أو تعبير البروتين أو التعريب. في كثير من الحالات، هذه فحوصات تقتصر على النقاط الزمنية المنفصلة، ولا تسمح للمراقبة المستمرة للخلايا على مر الزمن.

وفي المقابل، مجهرية الفلورية الطولية هو منهجية مرنة للغاية التي ترصد مباشرة واستمرار خطر الوفاة على أساس خلية واحدة11. وباختصار، مجهرية الفلورية الطولية تمكن آلاف خلايا الفردية لتعقب على فترات منتظمة لفترات طويلة من الزمن، والسماح بتحديدات دقيقة لموت الخلايا والعوامل التي تعزز أو منع موت الخلايا. عند قاعدته، ينطوي الأسلوب تعداء عابرة أو توصيل الخلايا مع ناقلات ترميز البروتينات الفلورية. ثم ينشأ من fiduciary فريدة من نوعها، وموضع كل الخلية transfected فيما يتعلق بهذا المعلم يسمح للمستخدم بالصورة، وتعقب الخلايا الفردية على مدى ساعات أو أيام أو أسابيع. عندما ينظر إلى هذه الصور تسلسلياً، موت الخلية يتسم بالتغيرات المميزة في الأسفار ومورفولوجيا وتجزؤ الجسم الخلية، مما يتيح تخصيص وقت الوفاة لكل خلية. معدل الوفيات، تحدد بواسطة الدالة المخاطر المحسوبة يمكن ثم كمياً مقارنة بين الشروط، أو تتصل بتحديد الخصائص الخلوية باستخدام وحيد المتغير أو المتغيرات تحليل المخاطر النسبية كوكس12. معا، تمكين هذه النهج بالتمييز دقيقة وموضوعية لمعدلات موت الخلية بين السكان الخلوية، وتحديد المتغيرات التي تنبئ بشكل ملحوظ موت الخلية و/أو البقاء على قيد الحياة (الشكل 1).

على الرغم من أن يمكن استخدام هذا الأسلوب لرصد البقاء على قيد الحياة في أي نوع الخلية بعد الانقسامية في مجموعة متنوعة من تنسيقات الطلاء، سيصف هذا البروتوكول شروط ترانسفيكتينج وتصوير الخلايا العصبية القشرية الفئران مثقف في صفيحة 96-جيدا.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

وأقر جميع أعمال الحيوانات الفقارية اللجنة المتعلقة باستخدام ورعاية الحيوانات في جامعة ميشيغان (بروتوكول # PRO00007096). التجارب هي التخطيط بعناية التقليل من عدد الحيوانات التضحية. يتم إيواء الحوامل الإناث البرية من نوع (WT)، غير المعدلة وراثيا "إيفانز طويلة" الفئران (الجرذ النرويجي) منفردة في غرف مجهزة بالإثراء البيئي، والرعاية من قبل الوحدة للطب الحيوانات المختبرية (اولام) في جامعة ميشيغان، في وفقا لدليل المدعومة من المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. وأبقى جميع الفئران في الإسكان لأقل وقت ممكن قبل القتل الرحيم، تمشيا مع التوصيات الواردة في المبادئ التوجيهية بشأن القتل الرحيم للجمعية الطبية البيطرية الأمريكية وجامعة ميشيغان أساليب القتل الرحيم بالروتين المبادئ التوجيهية للأنواع.

1-المواد من إعداد

  1. تشريح الخلايا العصبية القشرية من الجنينية يوم 19 – 20 الجراء الفئران وثقافة الفئران الخلايا العصبية القشرية في 0.5 × 106 خلايا في المليلتر على ألواح بولي-د-يسين المغلفة لمدة 4 أيام في المختبر، كما هو موضح سابقا1413،، 15،،من1617،،من1819.
  2. إعداد بلازميد الحمض النووي لمصلحة اتباع الخطوات الموضحة بعزل الحمض النووي بلازميد خالية من الذيفان كيت (انظر الجدول للمواد). تحديد كمية الحمض النووي الناتجة باستخدام جهاز المطياف الضوئي.
  3. اليوم في المختبر 4 (DIV4)، الكوة، تصفية تعقيم، واحتضان الوسائط التالية في 37 ° c: 6 مل تقليل الوسائط المصل (RSM؛ على سبيل المثال.، أوبتيميم)، 25 مل العصبية القاعدية وسائط الإعلام (مولدوفا)، 40 مل نبكي (مولدوفا + 1 ملم حمض كينورينيك + 10 مم مجكل2، تعديل للرقم الهيدروجيني 7. 4)، 10 مل بي سي (مولدوفا + 1 x العصبية خلية الثقافة الملحق + 1 س لام الجلوتامين الملحق + 1 × بكتيريا القلم).
    ملاحظة: سرد وحدات التخزين كافية للوحة 96-بئر واحدة ترانسفيكتينج. الرجوع إلى الجدول للمواد اللازمة الكواشف محددة.

2-تعداء الخلايا العصبية القشرية الفئران

  1. تعديل المثال تعداء الورقة المقدمة (انظر تكميلية ملف 1) عن طريق ضبط نوع اللوحة، لوحة خريطة، عدد من السلطات الوطنية المعينة، تركيز الحمض النووي، وعدد من الآبار (مربعات خضراء).
    ملاحظة: الحمض النووي مجموع المبالغ إلى 0.2 ميكروغرام كل جيدا، بغض النظر عن ما إذا كان واحد (على سبيل المثال.أو بالحمض النووي) أو متعددة (مثل الحمض النووي ب وج) تتم إضافة ثوابت الحمض النووي لكل بئر.
  2. العامل من جدول البيانات، الجمع بين المبلغ المناسب RSM والحمض النووي في أنبوب واحد. الجمع بين المبلغ المناسب لكاشف RSM وتعداء (مثلاً، ليبوفيكتاميني) في أنبوب منفصل.
  3. احتضان في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 5 دقائق.
  4. والجمع بين الحمض النووي وتعداء كاشف RSM الخلائط واحتضانها في RT لمدة 20 دقيقة.
  5. أثناء هذه الخطوة حضانة، استخدام ماصة متعددة القنوات وأحواض بلاستيكية معقمة يغسل خلايا x 2 مع 100 ميليلتر كل من مولدوفا جيدا. حجز الوسائط مكيفة (سم) وتخزينها في 37 درجة مئوية. لهذا، واتباع الخطوات، الحرص على تقليل مقدار الوقت الخلايا العصبية ويتعرض للهواء.
  6. قم بإزالة الوسائط مولدوفا واستبدال 100 ميليلتر الواحدة من نبكي جيدا.
  7. بعد مرور 20 دقيقة، إضافة 50 ميليلتر من خليط كاشف/الحمض النووي تعداء dropwise لكل بئر.
  8. احتضان الخلايا مع المجمعات تعداء الكاشف/الحمض النووي لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
  9. شطف x 2 مع نبكي واستبدال مع 100 ميليلتر من سم و 100 ميليلتر لشبكة أن بي سي كل بئر.
  10. خلايا ترانسفيكتيد بنجاح يجب أن تكون مرئية بالفحص المجهري الأسفار داخل ح 16-24 من تعداء. لقياس كفاءة استخدام مجهر فلوري للتحقق من تعداء بعد الحضانة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: يؤدي هذا الأسلوب كفاءة تعداء عموما من 5 إلى 10%.

3-تصوير

  1. وضع اللوحة على مجهر فلوري مع مرحلة المزودة بمحركات، وإقامة fiduciary (مثلاً، علامة على الجزء السفلي من اللوحة) التي تسمح للمستخدم بمحاذاة اللوحة في كل مرة كان يتم تصويرها. حفظ صورة من هذا الائتمانية للرجوع إليها.
  2. انتقل إلى حقل اهتمام وملاحظة إحداثيات س ص بالنسبة إلى التعهدات.
  3. وتركز على transfected الخلايا معربا عن تسمية فلورسنت.
  4. التقاط صور مضيئة في المناسبة القناة أو القنوات (مثل البروتين البروتين الفلورسنت الأحمر [العروض]، أخضر نيون [بروتينات فلورية خضراء]، 4, 6-دياميدينو-2-فينيليندولي [DAPI])، أما يدوياً أو بطريقة تلقائية. بأخذ العديد من الصور على فترات متباعدة بشكل منتظم، ويمكن تجميع مونتاج من البئر أثناء معالجة الصور (راجع الخطوة 4).
    ملاحظة: التباعد يعتمد على عدة عوامل، بما في ذلك التكبير، والبصريات المجهر، وحجم الكاشف. بشكل عام، سوف تكون المسافات البصرية بين الصور المجاورة بين 90 – 95% حجم كل صورة فردية، للسماح بدرجة صغيرة من تداخل الصورة وميزة المحاذاة.
  5. كرر هذه العملية كلما كان ذلك مطلوب، ومواءمة للمؤتمن الأصلي في كل مرة. لتحليل البقاء على قيد الحياة، يتم تصوير كل ح 6 – 24، تبعاً لنوع الخلية والغرض من هذه التجربة.

4. معالجة الصورة

ملاحظة: وبعد الحصول على الصور، سلسلة من خطوات معالجة مطلوبة قبل تحليل الصور. هذه تشمل، ولكنها لا تقتصر على، خياطة، التراص، وخلفية الطرح (الشكل 1). والهدف من هذه الخطوات هو ﻹحداث المكدس الصورة، أو السلاسل الزمنية، التي خلايا ملحوظ من خلفيتهم بوضوح وسهلة المتابعة عبر نقاط زمنية متعددة. ماكرو مخصص في فيجي (Image_Processing.ijm، انظر تكميلية ملف 2) ويقوم بخياطة الأساسية، التراص، وخلفية الطرح. ويرد شرح لكل خطوة والمعلمات لأخذها في الاعتبار عند القيام بمعالجة الصور في قسم مناقشة.

  1. ضبط البيانات الخام أو دليل الإدخال لمطابقة تنسيق هو مبين في الشكل 2.
  2. إذا كانت النقاط الزمنية غير المتجاورة (أي، T1، T2، T3)، إعادة تسمية هذه المجلدات بحيث تكون. تعد هذه الخطوة الحاسمة لضمان أن لا تحطم الماكرو Image_Processing خلال التراص.
  3. انقر نقراً مزدوجاً فوق الرمز فيجي لفتح البرنامج، ثم انقر واسحب الماكرو Image_Processing إلى شريط فيجي. سيؤدي هذا إلى فتح الماكرو في فيجي.
  4. ضبط أسطر الماكرو Image_Processing لتحديد إدخال الدليل الذي يحتوي على الصور، دليل الإخراج المطلوب للصور مخيط ومكدسة، وعدد من تيميبوينتس التصوير، عدد القنوات الفلورسنت وتنسيق لوحة 2-7.
  5. تحديد الترتيب الذي تم الحصول الصور. لاختبار هذا، يدوياً غرزة مونتاج للصور في فيجي بالمناورة الإضافات المنسدلة القائمة | خياطة | مجموعة شبكة/خياطة. ضبط الإعدادات الموجودة ضمن القوائم المنسدلة نوع و ترتيب حتى يتم إنتاج صورة مخيط بدقة.
  6. ضبط المتغيرات GRID_TYPE و STITCH_ORDER في البنود 8 و 9 من الماكرو Image_Processing لمطابقة هذه التحديدات.
  7. تحديد عدد الصور الواحدة وكذلك عن طريق ضبط السطر 10 في الماكرو Image_Processing .
    ملاحظة: أن قراءة هذا السطر لمونتاج 2 × 2 من الصور، خافت = 2.
  8. إذا كان الطرح الخلفية المطلوبة، ضبط السطر 14 في الماكرو Image_Processing إلى بجسوب = true.
  9. تعيين نصف قطر الكرة المتداول عن طريق ضبط السطر 15 في الماكرو Image_Processing .
    ملاحظة: لتحقيق أفضل النتائج، بتعيين نصف قطرها على الأقل قطر الكائن الأمامي أكبر في الصورة.
  10. انقر فوق تشغيل لبدء تشغيل الماكرو Image_Processing . متى بدأت، سوف تقدم Image_Processing تلقائياً عن طريق خياطة والتراص، والطرح الخلفية.

5-سجل موت الخلية

ملاحظة: راجع المقطع المناقشة للحصول على المزيد من المعلومات في التهديف موت الخلايا ومراقبة البيانات.

  1. قم بتحديد موقع رصات الصور التي ينتجها البرنامج النصي Image_Processing . فتح هذه في فيجي.
  2. استخدم النقطة أداة داخل فيجي لتسمية كل خلية على حدة مع عدد. الضغط على المفتاح t بعد كل نقطة سيتم إضافة المعرف الخاص بالخلية إلى المدير (المنطقة من الفائدة) العائد على الاستثمار.
    ملاحظة: يمكن تصور المعرفات بواسطة النقر فوق تسميات و إظهار كافة خانات الاختيار في إدارة العائد على الاستثمار.
  3. التقدم من خلال تيميبوينتس في كل صورة المكدس وسجل تيميبوينت عند كل خلية يموت أو احتياجات يكون للرقابة في ملف Survival_spreadsheet.csv (انظر الملف الإضافي 3).
    1. ويحتل كل خلية صف واحد في جدول البيانات، حيث يتألف معرف فريد (معرف) لكل خلية من المقابلة جيدا وعدد دوروا داخل هذا البئر. tp_death هو آخر نقطة الوقت يلاحظ خلية على قيد الحياة، بينما يمثل time_death الوقت الفعلي للوفاة في ساعات. لكل خلية، إدخال هذه البيانات. من المهم الحفاظ على هذا الهيكل لتحليلها لاحقاً باستخدام البقاء على قيد الحياة. R (انظر 4 ملف إضافي).
      ملاحظة: معايير تحديد موت الخلية ذات أهمية حاسمة، وقد تختلف تبعاً لنوع الخلية. وتستخدم ثلاثة معايير رئيسية في تحديد الخلايا العصبية الميت11،20 (الشكل 3): فقدان كثافة الفلورية (مثلاً العصبية 1 في ح 69)، التقريب من الجسم الخلايا (مثل الخلايا العصبية 2 في ح 188)، وفقدان نورت السلامة أو بلبينغ (مثلاً، 2 العصبية في ح 188).
  4. سجل حالة الرقيب الخلية الموجودة في العمود الأخير.
    ملاحظة: هنا، بسبب الطريقة التي تنفرد بها رقابة تتم معالجته بالبحث والتطوير، خلايا الرقابة تميزت 0، بينما تميزت 1الخلايا غير الخاضعة للرقابة. لاحظ أن كافة الخلايا التي تعيش إلى آخر نقطة الوقت للرقابة، وذلك وضع علامة ك 0.

6-أداء النسبي كوكس المخاطر تحليل وتصور النتائج

  1. إذا لزم الأمر، تحميل استوديو R في https://cran.r-project.org/mirrors.html.
  2. فتح استوديو للبحث والتطوير، وانقر نقراً مزدوجاً فوق الرمز الخاص ببقاء . R البرنامج النصي.
  3. قم بوضع المؤشر على الخط 2 البقاء على قيد الحياة. R ، وانقر فوق الزر تشغيل في الإطار الرئيسي لاستوديو البحث والتطوير من أجل تحميل مكتبة البقاء على قيد الحياة.
  4. قم بتغيير السطر 5 من بقاء . R البرنامج النصي لمطابقة موقع الملف Survival_spreadsheet.csv. انقر فوق تشغيل لتحميل بيانات البقاء على قيد الحياة داتافرامي.
  5. تسليط الضوء على خطوط 8 و 9 وانقر فوق الزر تشغيل في إطار وحدة التحكم استوديو البحث والتطوير بغية إجراء تحليل كوكس للمخاطر النسبية. إحصاءات الإنتاج والنتائج تظهر في نافذة وحدة التحكم من استوديو R.
  6. تسليط الضوء على خطوط 12-16 البقاء على قيد الحياة. R وضرب على زر تشغيل من أجل إنتاج تراكمي خطر الموت الأرض، التي سوف تظهر في علامة التبويب المؤامرات في الاستوديو R. يمكن حفظ هذا الملف بالنقر فوق الزر تصدير أعلاه الأرض.
  7. إذا كان من المستصوب لرسم البيانات البقاء على قيد الحياة كمنحنى كابلان-ماير، تسليط الضوء على خطوط 19-24 البقاء على قيد الحياة. R وضرب على زر تشغيل .

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

استخدام الإجراء تعداء الموصوفة هنا، DIV4 الفئران الخلايا العصبية القشرية تم transfected مع بلازميد ترميز mApple البروتين الفلورسنت. بدءاً من تعداء بعد 24 ساعة، تم تصويرها الخلايا بالميكروسكوب الأسفار كل 24 ساعة لمدة 10 أيام متتالية. الصور الناتجة كانت نظمت كما هو مبين في ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

ويرد هنا، منهجية لرصد مباشرة بقاء الخلايا العصبية على أساس خلية واحدة. على عكس الاختبارات التقليدية لموت الخلايا التي تقتصر على النقاط الزمنية المنفصلة ومجموعات سكانية بأكملها من الخلايا، يسمح هذا الأسلوب للتقييم المستمر لمجموعة متنوعة من العوامل مثل مورفولوجيا الخلوية أو تعبير البروت...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

ونحن نشكر ستيف فينكبينر وأعضاء في مختبر فينكبينر للرائد مجهرية الروبوتية. ونشكر أيضا دان بيساتش لبناء البرمجيات الأولية اللازمة لمعالجة الصور والآلي تحليل البقاء على قيد الحياة. تم تمويل هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية و "السكتة الدماغية" (NINDS) R01-NS097542، جامعة ميشيغان البروتين للطي المرض المبادرة، وأن أربور نشطة ضد المرض.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Neurobasal MediumGIBCO21103-049
Opti-MEMGIBCO31985-070
CompactPrep Plasmid Maxi KitQiagen12863
Magnesium chloride HexahydrateSigmaM9272
Kynurenic Acid HydrateTCIH0303
Poly D-LysineMilliporeA-003-E
GlutamaxGIBCO35050-061
Lipofectamine 2000Invitrogen52887
B27 supplementThermo FisherA3582801
Penicillin/StreptomycinGIBCO15140122
96 well platesTPP0876

References

  1. Lockshin, R. A., Zakeri, Z. Cell death in health and disease. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 11, 1214-1224 (2007).
  2. Kepp, O., Galluzzi, L., Lipinski, M., Yuan, J., Kroemer, G. Cell death assays for drug discovery. Nature Reviews Drug Discovery. 10, 221-237 (2011).
  3. Lemasters, J. J., et al. The mitochondrial permeability transition in cell death: a common mechanism in necrosis, apoptosis and autophagy. Biochimica et Biophysica Acta Bioenergetics. , 177-196 (1998).
  4. Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V. Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).
  5. Chien, K. R., Abrams, J., Serroni, A., Martin, J. T., Farber, J. L. Accelerated phospholipid degradation and associated membrane dysfunction in irreversible, ischemic liver cell injury. Journal of Biological Chemistry. 253, 4809-4817 (1978).
  6. Zwaal, R. F. A., Comfurius, P., Bevers, E. M. Surface exposure of phosphatidylserine in pathological cells. Cell and Molecular Life Sciences. 62, 971-988 (2005).
  7. Mitchell, D. B., Santone, K. S., Acosta, D. Evaluation of cytotoxicity in cultured cells by enzyme leakage. Journal of Tissue Culture Methods. 6, 113-116 (1980).
  8. Moran, J. H., Schnellmann, R. G. A rapid beta-NADH-linked fluorescence assay for lactate dehydrogenase in cellular death. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36, 41-44 (1996).
  9. Mossman, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
  10. Guerzoni, L. P. B., et al. In Vitro Modulation of TrkB Receptor Signaling upon Sequential Delivery of Curcumin-DHA Loaded Carriers Towards Promoting Neuronal Survival. Pharmaceutical Research. 34 (2), 492-505 (2017).
  11. Arrasate, M., Finkbeiner, S. Automated microscope system for determining factors that predict neuronal fate. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102, 3840-3845 (2005).
  12. Christensen, E. Multivariate survival analysis using Cox’s regression model. Hepatology. 7, 1346-1358 (1987).
  13. Barmada, S. J., et al. Autophagy induction enhances TDP43 turnover and survival in neuronal ALS models. Nature Chemical Biology. 10, 677-685 (2014).
  14. Barmada, S. J., et al. Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 112, 7821-7826 (2015).
  15. Malik, A. M., et al. Matrin 3-dependent neurotoxicity is modified by nucleic acid binding and nucleocytoplasmic localization. Elife. 7, (2018).
  16. Archbold, H. C., et al. TDP43 nuclear export and neurodegeneration in models of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia. Scientific Reports. 8, 4606(2018).
  17. Green, K. M., et al. RAN translation at C9orf72-associated repeat expansions is selectively enhanced by the integrated stress response. Nature Communications. 8, 2005(2017).
  18. Park, S. -K., et al. Overexpression of the essential Sis1 chaperone reduces TDP-43 effects on toxicity and proteolysis. PLOS Genetics. 13, e1006805(2017).
  19. Gupta, R., et al. The Proline/Arginine Dipeptide from Hexanucleotide Repeat Expanded C9ORF72 Inhibits the Proteasome. eNeuro. 4, (2017).
  20. Angelov, B., Angelova, A. Nanoscale clustering of the neurotrophin receptor TrkB revealed by super-resolution STED microscopy. Nanoscale. 9 (28), 9797-9804 (2017).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

143

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved