JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هذا العمل يقدم بروتوكولا لإنشاء ثقافة تعليق الخلية المستمدة من الشاي(كاميليا سينينسيس L.) الأوراق التي يمكن استخدامها لدراسة عملية التمثيل الغذائي للمركبات الخارجية التي يمكن تناولها من قبل النبات كله، مثل المبيدات الحشرية.

Abstract

تم تطوير منصة لدراسة الأيض المبيدات الحشرية باستخدام الأنسجة في المختبر من مصنع الشاي. وقد تم حث أوراق من النباتات الشاي المعقم لتشكيل كالوس فضفاضة على Murashige وSkoog (MS) وسائل الإعلام القاعدية مع الهرمونات النباتية 2،4-ثنائي كلوروفينوكسي حمض (2،4-D، 1.0 ملغ L-1)والكينتين (KT، 0.1 ملغ L-1). شكلت كلوس بعد 3 أو 4 جولات من subculturing، كل 28 يوما. ثم تم تلقيح الكلوس الفضفاض (حوالي 3 غرام) في وسائل الإعلام السائلة B5 التي تحتوي على نفس الهرمونات النباتية وكان مثقفا في حاضنة تهز (120 دورة في الدقيقة) في الظلام في 25 ± 1 درجة مئوية. بعد 3-4 الثقافات الفرعية، تم تأسيس تعليق الخلية المستمدة من ورقة الشاي في نسبة ثقافة فرعية تتراوح بين 1:1 و 1:2 (تعليق السائل الأم: المتوسطة الطازجة). باستخدام هذه المنصة، تم إضافة ستة مبيدات حشرية (5 ميكروغرام مل-1 كل ثياميثوكسام، إيميداكلوبريد، أسيتامبريد، إيميداكلوتيز، ديميثات، وأوميثوت) إلى ثقافة تعليق الخلايا المشتقة من أوراق الشاي. وقد تم تتبع عملية التمثيل الغذائي للمبيدات الحشرية باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة وكروماتوغرافيا الغاز. للتحقق من فائدة ثقافة تعليق خلية الشاي، تمت مقارنة المستقلبات من الثياميثوكسان وdimethoate الموجودة في الثقافات الخلايا المعالجة والنباتات سليمة باستخدام الطيف الكتلي. في الثقافات خلية الشاي المعالجة, تم العثور على سبعة المستقلبات من الثياميثوكسان واثنين من الأيض من dimethoate, بينما في النباتات السليمة المعالجة, تم العثور على اثنين فقط من الأيض من الثياميثوكسام واحد من dimethoate. استخدام تعليق الخلية تبسيط التحليل الأيضي مقارنة مع استخدام نباتات الشاي سليمة، وخاصة بالنسبة لمصفوفة صعبة مثل الشاي.

Introduction

الشاي هو واحد من المشروبات غير الكحولية الأكثر استهلاكا على نطاق واسع في العالم1،2. يتم إنتاج الشاي من أوراق وبراعم الكاميليا الخشبية المعمرة سينينسيس L. تزرع نباتات الشاي في مزارع واسعة وهي عرضة للعديد من الآفات الحشرية3،4. وغالبا ما تستخدم المبيدات الحشرية العضوية وneonicotinoid كمبيد حشري نظامي5 لحماية نباتات الشاي من الآفات مثل الذباب الأبيض، النطاط ورقة، وبعض أنواع lepidopteran6،7. بعد الاستخدام، يتم امتصاص هذه المبيدات الحشرية أو نقلها إلى النبات. داخل النبات، يمكن أن تتحول هذه المبيدات الحشرية النظامية من خلال التحلل المائي، والأكسدة أو التفاعلات الحد من قبل الإنزيمات النباتية. هذه المنتجات التحول يمكن أن تكون أكثر القطبية وأقل سمية من المركبات الأم. ومع ذلك، بالنسبة لبعض الفوسفات العضوي، والأنشطة الحيوية لبعض المنتجات أعلى. على سبيل المثال، يتم استقلاب الاسباهياتفي الميثاميدوفوس الأكثر سمية 8،9،وdimethoate في omethoate10،11. دراسات الأيض النباتية هي بالتالي مهمة لتحديد مصير مبيد الآفات داخل مصنع12.

وقد ثبت أن نباتات الأنسجة النباتية منصة مفيدة للتحقيق في عملية التمثيل الغذائي لمبيدات الآفات، مع الأيض المحددة مماثلة لتلك الموجودة في النباتات سليمة13،14،15. استخدام الأنسجة الثقافات، ولا سيما الخلايا مع لتعليق الثقافات، له العديد من المزايا. أولا، يمكن إجراء التجارب خالية من الكائنات الحية الدقيقة، وبالتالي تجنب تدخل تحويل مبيدات الآفات أو تدهورها من قبل الميكروبات. ثانيا، توفر زراعة الأنسجة مواد متسقة للاستخدام في أي وقت. ثالثا، الأيض هي أسهل لاستخراج من ثقافات الأنسجة من النباتات سليمة، وثقافات الأنسجة غالبا ما يكون أقل المركبات المتشابكة وتعقيد أقل من المركبات. وأخيرا، يمكن استخدام ثقافات الأنسجة بسهولة أكبر لمقارنة سلسلة من الأيض مبيدات الآفات في تجربة واحدة16.

في هذه الدراسة، تم بنجاح إنشاء تعليق الخلية المستمدة من أوراق نبات الشاي المعقم. ثم استخدمت ثقافة تعليق خلية الشاي لمقارنة سلوكيات تبديد ستة مبيدات حشرية نظامية.

ويهدف هذا البروتوكول المفصل لتوفير بعض الإرشادات بحيث يمكن للباحثين إنشاء منصة زراعة الأنسجة النباتية مفيدة لدراسة مصير الأيض من xenobiotics في الشاي.

Protocol

1. الشاي ثقافة كالوس

ملاحظة: تم اشتقاق الأوراق المعقمة من خطوط نباتية مزروعة في المختبر تم تطويرها لأول مرة في مجموعة البحث17. وقد تم تنفيذ جميع الإجراءات حتى القسم 5 في غطاء محرك السيارة تدفق الصفيحة المعقمة، باستثناء وقت الثقافة في حاضنة.

  1. ضبط درجة الألف درجة الألف من وسائل الإعلام اثنين (Murashige وSkoog [MS] المتوسطة القاعدية ومتوسط السائل B5 Gamborg) إلى 5.8 قبل الأوتوكلاف (121 درجة مئوية، 20 دقيقة).
  2. يُقطّع على طول الوريد الأوسط لورقة معقمة باستخدام مقص، ثم يُقسم كل نصف إلى قطع صغيرة تبلغ حوالي 0.3 سم x 0.3 سم في طبق بتري.
  3. ضع الإفرازات المعقمة (قطع أوراق صغيرة) على وسائط MS القاعدية التي تحتوي على الهرمونات النباتية 2،4-D (1.0 ملغ L-1)وKT (0.1 ملغ L-1). يمكن وضع ستة نباتات في قارورة 300 مل تحتوي على 100 مل من وسائل الإعلام القاعدية MS.
  4. ثقافة ال [إإكسبلوس] أعلاه أوراق في درجة حرارة ثابتة من 25 [ك] في الظلام. بعد 28 يوما، حدد الجيل الأول من الكالوس المستحث ونقل إلى قارورة جديدة (ثقافة فرعية). الحصول على الكانوس الفضفاض ة بعد الثقافات الفرعية 3-4.

2. الشاي خلية تعليق الثقافة

  1. اقطع الأقنعة القوية والقابلة للتفتيت والفضفاضة من الوسط الصلب إلى قطع صغيرة (تتراوح بين 0.5 و2 مم) باستخدام شفرة جراحية معقمة في ظروف معقمة.
  2. تزن حوالي 3 غرام من قطع صغيرة من كالوس. ضع الكالوس في قارورة 150 مل تحتوي على 20 مل من وسائل الإعلام السائلة B5 مع 2,4-D (1.0 ملغ L-1)وKT (0.1 ملغ L-1).
  3. ثقافة تعليق الخلية السائلة في درجة حرارة ثابتة (25 ± 1 درجة مئوية) في حاضنة تهز في 120 دورة في الدقيقة في الظلام.
  4. بعد 7 إلى 10 أيام من زراعة، وإزالة قوارير الثقافة والسماح لهم الوقوف لبضع دقائق.
  5. تأخذ كل supernatant كمادة البذور للزراعة الفرعية إلى المتوسطة الطازجة (نسبة الزراعة الفرعية من السائل الأم تعليق إلى المتوسطة الطازجة تراوحت بين 1:1 و 1:2). إزالة المعجل، calluses كبيرة.
  6. الحصول على ثقافة تعليق الخلية النهائية نمت بشكل جيد بعد 3-4 دورات الثقافة الفرعية من 28 يوما لكل منهما.

3. ثلاثي الفينيل رباعي الزيوم كلوريد تقييم مدى بقاء الخلية

  1. قتل عينة من الخلايا الحية في 100 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة كخلية التحكم قبل تلطيخ الحياة.
  2. جهاز طرد مركزي جميع ثقافة تعليق الخلية لمدة 8 دقيقة في 6000 × ز. إزالة supernatant قبل تعليق الخلايا في 2.5 مل من الفوسفات المخزنة في العازلة المالحة (PBS) العازلة (pH 7.3)، ويهز لمدة دقيقة واحدة باليد.
  3. إضافة 2.5 مل من 0.4٪ ثلاثي الفينيل رباعي الزيوم (TTC) محلول ويهز باليد مرة أخرى.
  4. احتضان الخليط لمدة ساعة في حاضنة دائمة (30 درجة مئوية).

4- معالجة وأخذ عينات من ثقافات تعليق خلايا الشاي بالمبيدات الحشرية

  1. إضافة a aliquot من 400 ميكرولتر من محلول المخزون المعقم بالفلتر (500 ميكروغرام مل-1)من أربعة نيونيكوتينويدس (ثياميثوكسام، أسيتاميبريد، إيميداكلوبريد، وإيميداكلوتيز) أو اثنين من الفوسفات العضوي (الديميثوتي وomethoate) في ثقافات تعليق الخلية، التوالي.
    ملاحظة: إذا كان الهدف هو مقارنة السلوكيات xenobiotic، استخدم نفس دفعة الأم من تعليق الخلية لاختبار المركبات المختلفة.
  2. زرع عينات من تعليق الخلية مع المبيدات الحشرية في درجة حرارة ثابتة (25 ± 1 درجة مئوية) وتهتز سرعة الحاضنة (120 دورة في الدقيقة). خذ العينات (انظر الخطوة 4.3 أو 4.4) على 0، 3، 5 10، 15، 20، 25، 30، 35، 40، 45، 50، 55، 60، 65، 70 و 75 يوما.
  3. لاختبار عينة تحتوي على neonicotinoid، إزالة 1 مل من aliquot من ثقافة الخلية متجانسة، ووضعها في أنبوب الطرد المركزي البلاستيك 1.5 مل، والطرد المركزي في 4000 x ز لمدة 2 دقيقة.
    1. تمرير الفوق من خلال 0.22 ميكروم المسام الحجم غشاء التصفية قبل التحليل عن طريق ارتفاع أداء السائل الكروماتوغرافيا والأشعة فوق البنفسجية (HPLC-UV) وفائقة الأداء السائل الكروماتوغرافيا رباعي ة وقت الرحلة (UPLC-QTOF) كتلة قياس الطيف (جدولالمواد).
  4. لاختبار عينة تحتوي على الفوسفات العضوي، قم بإزالة نسبة الأليكوت 500 μL من ثقافة الخلية ووضعها في أنبوب طرد مركزي سعة 35 مل أو أنبوب طرد مركزي بلاستيكي سعة 1.5 مل (إعداد العينة الأخيرة مثل تلك التي نيونيكوتينويد).
    1. إضافة 0.1 غرام من كلوريد الصوديوم و 5 مل من أسيتات الأسيتات الأسيتون/إيثيل (3:7، v/v) في أنبوب الطرد المركزي 35 مل من عينات 500 ميكرولتر.
    2. دوامة الخلائط لمدة 1 دقيقة، ثم السماح لهم للراحة لمدة 10 دقيقة.
    3. خذ 2.5 مل من supernatant في أنبوب زجاجي 10 مل وتتبخر إلى شبه جفاف باستخدام مبخر النيتروجين في 40 درجة مئوية.
    4. حل بقايا مع 1 مل الأسيتون، دوامة لمدة 1 دقيقة، وتمريرها من خلال غشاء مرشح 0.22 ميكروم قبل تحليلها من قبل الغاز الكروماتوغرافيا اللهب كاشف القياس الضوئي (GC-FPD).

5. إعداد عينة من مصنع الشاي سليمة مع المبيدات الحشرية

ملاحظة: أجريت تجربة مصنع الشاي سليمة في نظام الزراعة المائية باستخدام شتلات الشاي نمت في 50 مل من محلول المغذيات (30 NH4+، 10 NO3-، 3.1 PO4-، 40 ك+، 20 Ca2 +، 25 ملغ2 +، 0.35 Fe 2+، 0.1 B 3+، 1.0 Mn2+، 0.1 zn2+، 0.025 Cu2+، 0.05 مو+، و 10 آل3 +، في ملغ L-1)18. وكان الدفيئة التجريبية تحت دورة الضوء المظلم (12 ساعة من الضوء و 12 ح من الظلام) في 20 درجة مئوية في جامعة انهوي الزراعية.

  1. وضع خمسة نباتات في وعاء من البلاستيك 4 لتر لمدة 15 يوما.
  2. إضافة 0 جزء في المليون (التحكم) أو 100 جزء في المليون من الثياميثوكسام أو dimethoate في الأواني البلاستيكية، على التوالي.
  3. إعداد عينة النبات سليمة وفقا للطريقة السابقة، باستثناء presoaking19،ثم تحليل مع الطيف الكتلي للطيف كتلة دقيقة.

6- تحليل الآلات

  1. تحليل HPLC للسلوك الأيضي للنيونيكوتينويدات
    1. استخدام HPLC-UV(جدولالمواد) للكشف عن محتوى ومنتجات التمثيل الغذائي من الثياميثوكسام وأسيتاميد في طول الموجة من 254 نانومتر، وimidacloprid وimidaclothiz في 270 نانومتر في عينات من القسم 4.3.
      ملاحظة: كانت حالة HPLC-UV هي نفسها التي كانت الدراسة السابقة19.
  2. تحليل GC للسلوك الأيضي للفوسفات العضوي
    1. كشف محتوى dimethoate وomethoate في عينات من القسم 4.4 من قبل GC-FPD باستخدام عمود chiral (جدولالمواد).
    2. استخدام النيتروجين كغاز الناقل وتعيين معدل التدفق في 1.0 مل دقيقة-1.
    3. تعيين درجة الحرارة الأولية إلى 120 درجة مئوية، وعقد لمدة 5 دقيقة. وأخيرا زيادة إلى 210 درجة مئوية في 30 درجة مئوية دقيقة-1 ثم عقد لمدة 5 دقائق.
    4. تعيين درجة حرارة الحقن إلى 200 درجة مئوية في وضع الانقسام. تعيين درجة حرارة كاشف إلى 250 درجة مئوية.
    5. قم بتعيين حجم الحقن إلى 1 ميكرولتر.
  3. تحليل UPLC-QTOF للأيض المبيدات الحشرية في ثقافة الخلايا
    1. كشف الأيض من المبيدات الحشرية في ثقافة الخلية (عينات من القسم 4.3) باستخدام UPLC-QTOF مع عمود C18 (جدولالمواد).
    2. تعيين معدل التدفق إلى 0.2 مل دقيقة-1. قم بتعيين حجم الحقن إلى 10 ميكرولتر.
    3. بالنسبة للعينات المعالجة بالنيونيكوتينويد، قم بتعيين المرحلة المتنقلة الأولية إلى 85% A (5 mM ماء الأمونيوم فورمات) و15% B (أسيتونتريل). أكثر من 10 دقيقة، وزيادة المرحلة المتنقلة B إلى 38٪ والعودة إلى 15٪ على 1 دقيقة، عقد لمدة 9 دقائق.
    4. بالنسبة للعينات التي تعالجها الفوسفات العضوي، قم بتعيين المرحلة المتنقلة الأولية إلى 55% A (0.1% من مياه حمض الفورميك) و45% B (الأكيتوني). أكثر من 5 دقائق، وزيادة المرحلة المتنقلة B إلى 70٪، ثم العودة إلى 45٪ من B على 0.5 دقيقة، وعقد لمدة 2.5 دقيقة.
    5. تعيين المعلمات عملية كيو تي أو ف على النحو التالي: درجة حرارة الغاز، 325 درجة مئوية؛ تجفيف الغاز (النيتروجين)، 10 لتر دقيقة-1؛ درجة حرارة غاز غمد، 350 درجة مئوية؛ تدفق الغاز غمد، 11 L دقيقة-1؛ الجهد الشعري، 4000 V. فوهة الجهد، 1000 V؛ جهد الشظية، 100 فولت للمبيدات الحشرية neonicotinoid أو 110 V للمبيدات الحشرية الفوسفورية العضوية؛ مكشطة الجهد، 65 V؛ تعمل في وضع الليونات الإيجابية.
    6. تعيين الصك إلى الطيف المسح الكامل والهدف MS / MS الوضع.
    7. معالجة البيانات باستخدام أدوات كتلة دقيقة؛ يستنتج الأيض مع ما من منتجات معياريّة من ال [مس/مس] تعليق توضيحيّ فضلا عن الأدب12,15,20,21,22.
  4. تحليل UPLC-Orbitrap للمستقلبات المبيدات الحشرية في استخراج النبات سليمة
    1. الكشف عن الأيض من المبيدات الحشرية في استخراج النبات سليمة باستخدام UPLC-Orbitrap قياس الطيف الكتلي (جدولالمواد).
    2. تعيين قياس الطيف الكتلي(جدول المواد) المعلمات العملية على النحو التالي: ضغط الغاز غمد، 35 arb؛ درجة حرارة الغاز، 300 درجة مئوية؛ فوهة الجهد، 3.5 KV؛ درجة حرارة الشعرية، 350 درجة مئوية.
    3. تعيين برامج الأوتيون كما أعلاه (الخطوتين 6.3.3 و 6.3.4) لتحليل UPLC-QTOF من ثقافة الخلية.

النتائج

تم مقارنة الحث من الكالوس من أوراق حصادها من أشجار الشاي المزروعة في الميدان ومن أوراق مستخرجة من نباتات الشاي المزروعة في المختبر في بيئة معقمة عن طريق قياس التلوث، والبني، والحث بعد 28 يوما من الزراعة على وسائل الإعلام MS ( الشكل 1 ألف). وقد سجل نمو كلوس في 2...

Discussion

يعرض هذا المقال عملية مفصلة لإنشاء نموذج من الأيض المبيدات في الأنسجة النباتية الشاي، بما في ذلك اختيار explants، وتحديد بقاء الخلية، وإنشاء ثقافة تعليق خلية الشاي مع ارتفاع التمثيل الغذائي النشاط. ويمكن استخدام أي أجزاء من الأنسجة النباتية لبدء كالوس في بيئة معقمة25. وقد تم اختي...

Disclosures

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

وقد تم دعم هذا العمل من قبل البرنامج الوطني للبحوث والتطوير الرئيسي (2016YFD02009000) للصين، والمؤسسة العلمية الطبيعية الوطنية في الصين (رقم 31772076 ورقم 31270728)، والمؤسسة الصينية للعلوم ما بعد الدكتوراه (2018M630700)، والصندوق المفتوح للعلوم مختبر الدولة الرئيسية لبيولوجيا مصنع الشاي واستخدامها (SKLTOF20180111).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Acetamiprid (99.8%)Dr. Ehrenstorfer46717CAS No: 135410-20-7
Acetonitrile (CAN, 99.9%)TediaAS1122-801CAS No: 75-05-8
AgarSolarbio Science & TechnologyA8190CAS No: 9002-18-0
Clothianidin (99.8%)Dr. Ehrenstorfer525CAS No: 210880-92-5
Dimethoate (98.5%)Dr. Ehrenstorfer109217CAS No: 60-51-5
Imidacloprid (99.8%)Dr. Ehrenstorfer91029CAS No: 138261-41-3
Imidaclothiz (99.5%)Toronto Research ChemicalI275000CAS No: 105843-36-5
Kinetin (KT, >98.0%)Solarbio Science & TechnologyK8010CAS No: 525-79-1
Omethoate (98.5%)Dr. Ehrenstorfer105491CAS No: 1113-02-6
Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)Solarbio Science & TechnologyP8070CAS No: 25249-54-1
SucroseTocris Bioscience5511CAS No: 57-50-1
Thiamethoxam (99.8%)Dr. Ehrenstorfer20625CAS No: 153719-23-4
Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)Solarbio Science & TechnologyT8170CAS No: 298-96-4
2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, >98.0%)Guangzhou Saiguo BiotechD8100CAS No: 94-75-7
chiral columnAgilent CYCLOSIL-B112-6632Chromatography column (30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)
Gas chromatography (GC)Shimadu2010-PlusPaired with Flame Photometric Detector (FPD)  
High-performance liquid chromatography (HPLC)Agilent1260Paired with Ultraviolet detector (UV)
HSS T3 C18 columnWaters186003539Chromatography column (100 mm × 2.1 mm × 1.8 μm)
Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)Agilent1290-6545Tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometer (QTOF)
Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC)Thermo ScientificUltimate 3000-Q Exactive FocusConnected to a Orbitrap mass spectrometer

References

  1. Zhao, Y., et al. Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS. Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).
  2. Alcazar, A., et al. Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).
  3. Kopjar, M., Tadic´, M., Pilizˇota, V. Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves. Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).
  4. Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry. Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).
  5. Hou, R. Y., et al. Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles. Environmental Science & Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).
  6. Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).
  7. Fang, Q., et al. Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes. Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).
  8. Pan, R., et al. Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis). PloS One. 10 (9), e0138309 (2015).
  9. Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. Fatal intoxication with omethoate. International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).
  10. Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.). Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).
  11. Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal. International Biodeterioration & Biodegradation. 69, 1-9 (2012).
  12. Ford, K. A., Casida, J. E. Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).
  13. Frear, D. S., Swanson, H. R. Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton. Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).
  14. Sandermann, H., Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals. Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).
  15. Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).
  16. Lichtner, F. Phloem mobility of crop protection products. Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).
  17. Sun, J., et al. Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea. Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).
  18. Meng, M. T., et al. Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L). Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).
  19. Hou, R. Y., et al. Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).
  20. Karmakar, R., Kulshrestha, G. Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop. Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).
  21. Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).
  22. Lucier, G. W., Menzer, R. E. Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).
  23. Yang, G. W. . Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties. , (2004).
  24. Jiao, W., et al. Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).
  25. Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures. Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).
  26. Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium. Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).
  27. Grover, A., et al. Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis. Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).
  28. Lei, P. D., et al. Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis. Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).
  29. Hou, X., Guo, W. The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell. Guihaia. 18, 169-172 (1998).
  30. Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques. ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

148

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved