JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول عزل الخلايا الظهاريه من المناطق التشريحية المختلفة من الغشاء السلوى البشري لتحديد تغايرها وخصائصها الوظيفية للتطبيق المحتمل في النماذج السريرية والفسيولوجية.

Abstract

وقد تم الإبلاغ عن العديد من البروتوكولات في الأدبيات لعزله وثقافة الخلايا الظهاريه الإنسان السلوى (HAEC). ومع ذلك ، فان هذه تفترض ان ظهاره السلوى طبقه متجانسة. يمكن تقسيم الإنسان إلى ثلاث مناطق تشريحيه: منعكسة ، والمشيمة ، والسرة. كل منطقه لها ادوار فسيولوجية مختلفه ، كما هو الحال في الحالات المرضية. هنا ، ونحن وصف بروتوكول لتشريح الانسجه الإنسان امايون في ثلاثه أقسام والحفاظ عليه في المختبر. وفي الثقافة ، تظهر الخلايا المشتقة من الامايون المنعكس شكلا كوبويدالا ، في حين ان الخلايا الماخوذه من منطقتي المشيمة والسرة كانت حرشفية. ومع ذلك ، فان جميع الخلايا التي تم الحصول عليها لديها النمط الظاهري الظهاريه ، التي أظهرتها المناعة من البريد الكتروني. التالي ، لان المناطق المشيمة والمنعكسة في الموقع تختلف في المكونات الخلوية والوظائف الجزيئية ، قد يكون من الضروري للدراسات في المختبر للنظر في هذه الاختلافات ، لأنها يمكن ان يكون لها اثار فسيولوجية لاستخدام HAEC في البحوث الطبية الحيوية والتطبيق الواعد لهذه الخلايا في الطب التجديدي.

Introduction

خلايا ظهاره الإنسان السلوى (HAEC) تنشا خلال المراحل المبكرة من النمو الجنيني ، في حوالي ثمانيه أيام بعد الإخصاب. انها تنشا من السكان من الخلايا الظهاريه الحرشفية من العدسة التي تستمد من الطبقة الأعمق من الغشاء السلوى1. وهكذا ، تعتبر HAEC بقايا الخلايا المستحثة من العدسة التي لديها القدرة علي التفريق في الطبقات الجرثومية الثلاث من الجنين2. في العقد الماضي ، قامت مجموعات بحثيه متنوعة بتطوير طرق لعزل هذه الخلايا عن الغشاء السلوى في فتره الحمل لتوصيف خصائصها الافتراضية ذات الصلة بالتعدد في نموذج الثقافة في المختبر3،4.

وبناء علي ذلك ، وجد ان HAEC سمات مميزه للخلايا الجذعية لمستحث البشرية (HPSC) ، مثل المستضدات السطحية SSEA-3 و SSEA-4 و TRA 1-60 و TRA 1-81 ؛ جوهر عوامل النسخ تعدد OCT4, SOX2, و NANOG; ومؤشر الانتشار KI67 ، مما يوحي بأنها ذاتية التجديد5،6،7. وعلاوة علي ذلك ، تم تحدي هذه الخلايا باستخدام بروتوكولات التمايز للحصول علي خلايا ايجابيه لعلامات النسب المحددة من الطبقات الجرثومية الثلاثة (اكوديرم ، الأديم المتوسط ، والأديم الباطن)4،5،8، وكذلك في النماذج الحيوانية من الامراض البشرية. أخيرا, [هتيك] مستعجله [ا-كهنرين], اي يبرهن ان هم يحتبسون [ظهاري] طبيعة كثير مثل ال [هبس]5,9.

بعيدا عن أصلهم الجنيني ، زرع13.

ومع ذلك ، فقد افترضت التقارير السابقة ان الإنسان البشري هو غشاء متجانس ، دون النظر إلى انه يمكن ان ينقسم تشريحيا وفيزيولوجيا إلى ثلاث مناطق: المشيمة (الذي يغطي السرة ساقط) ، السري (الجزء الذي يغلف الحبل السري) ، وينعكس (بقية الغشاء غير مرتبط بالمشيمة)14. وقد تبين ان المشيمة والمناطق المنعكسة من الخلافات عرض الاختلافات في المورفولوجية, نشاط الميتوكوندريا, الكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلي15, التعبير ميرنا16, وتفعيل إشارات مسارات17. وتشير هذه النتائج إلى ان الإنسان البشري مندمج من قبل مجموعه غير متجانسة من السكان ذات الوظائف المختلفة التي ينبغي النظر فيها لاجراء المزيد من الدراسات في النماذج في الموقع أو في المختبر. في حين ان المختبرات الأخرى قد صممت بروتوكولات لعزل HAEC من الغشاء كله ، فقد إنشا مختبرنا بروتوكولا لعزل وثقافة وتوصيف الخلايا من مختلف المناطق التشريحية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تمت الموافقة علي هذا البروتوكول من قبل اللجنة الاخلاقيه للمعهد الوطني لperinatología في مكسيكو سيتي (السجل رقم 212250-21041). وكانت جميع الإجراءات التي أجريت في هذه الدراسات متفقه مع المعايير الاخلاقيه للمعهد الوطني لperinatología ، وإعلان هلسنكي ، والمبادئ التوجيهية المنصوص عليها في المعيار المكسيكي الرسمي لوزارة الصحة.

1-الاعداد

  1. اعداد حل ل 1x تلفزيوني مع أدتا. للقيام بذلك ، أضافه 500 μL من 0.5 M الأسهم أدتا إلى 500 mL من 1x تلفزيوني للتركيز النهائي من 0.5 mM أدتا.
  2. اعداد الثقافة المتوسطة ل HAEC. خذ 450 مل من ارتفاع الجلوكوز-dmem, تكمله مع 5 مل من بيروفات الصوديوم (100 mM), 50 ml من الدم البقري الجنين غير النشطة المؤهلين للخلايا الجذعية, 5 مل من الأحماض الامينيه غير الاساسيه (100x), 5 مل من المضادات الحيوية انتيكو200 تيك 500 μL من mercaptoethanol (1 ، 000x).
  3. تعقيم الحاويات لنقل ومعالجه الانسجه: وعاء من الفولاذ المقاوم للصدا مع غطاء لنقل المشيمة بأكملها من مسرح التشغيل إلى المختبر ، وصينية (20 سم × 30 سم × 8 سم) لغسل وأزاله الدم من المشيمة كلها قبل تشريح الغشاء السلوى ، ومجلس تقطيع البلاستيك لفصل الغشاء السلوى في المناطق الثلاث.
  4. تعقيم الاداات الجراحية (القشرية ، مقص ، ملقط ، والمشابك) ، 500 مل الأكواب ، القطن gauzes ، ومحلول ملحي.

2. الحصول علي انسجه المشيمة

ملاحظه: تم الحصول علي الاغشيه السلوى من النساء في الحمل علي المدى الكامل (37 − 40 أسبوعا) ، تحت اشاره الولادة القيصرية ، دون اي دليل علي العمل النشط ، وليس الخصائص الميكروبيولوجية للعدوى. ونفذت إجراءات العزل والثقافة الكاملة في اطار مجلس للأمن البيولوجي في ظل ظروف عقيمه.

  1. في غرفه العمليات ، المشبك الحبل السري لمنع تدفق الدم إلى بقية الانسجه. جمع المشيمة بأكملها مع الحبل السري فرضت في حاويه معقمه.
  2. أضف 500 مل من محلول ملحي إلى الحاوية لترطيب المشيمة.
  3. إغلاق الحاوية ونقل الانسجه إلى المختبر في درجه حرارة الغرفة.
  4. وضع الحاوية مع المشيمة داخل مجلس الوزراء البيولوجي.
    ملاحظه: في حاله عدم اجراء تشريح في غضون 15 دقيقه من جمع المشيمة ، وتخزين الحاوية مع المشيمة علي الجليد حتى المعالجة. تجنب أكثر من 1 ساعة من الوقت المنقضي بين الحصول علي المشيمة وبداية التشريح.

3. الفصل الميكانيكي لكل منطقه من الغشاء السلوى

ملاحظه: يجب ان يتم الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي في ظل ظروف معقمه وفي درجه حرارة الغرفة.

  1. قم بازاله المشيمة بأكملها من الحاوية ووضعها علي الصينية مع الحبل السري الذي يواجه الأعلى.
  2. باستخدام شاش قطني معقم ، نظف الجلطات الدموية من سطح الغشاء الذي يغطي المشيمة.
  3. تحديد المناطق الثلاث من الغشاء: السرة السرية التي تغلف الحبل السري ، والمشيمة التي تغطي البسملة الحمراء ، والمنطقة المنعكسة ، والتي هي بقية الامايون التي لا تعلق علي المشيمة (الشكل 1).
  4. تشريح منطقه السرة السرية (الشكل 2 ا).
    1. باستخدام ملقط تشريح ، عقد جزء من الغشاء امايون الذي يغطي تقاطع المشيمة والحبل السري.
    2. مع مشرط ، تشريح المنطقة التي تحيط الحبل بينما تمتد لفصلها عن chorion.
    3. إيداع الانسجه المفصولة في الكاس المسمي مع 100 مل من محلول ملحي.
  5. تشريح منطقه اميون المشيمة (الشكل 2 ب).
    1. باستخدام شاش قطني معقم ، قم بازاله الجلطات الدموية من سطح المشيمة التي تغطيها.
    2. عقد الغشاء علي الحدود بين المشيمة والمنطقة المنعكسة مع تشريح ملقط.
    3. قطع علي طول محيط المشيمة مع مشرط.
    4. افصلي المشيمة عن المشيمة ، كوني حريصه علي عدم قطع اي من الاوعيه الدموية.
    5. وضع الانسجه المفصولة في كاس آخر المسمي مع 300 مل من محلول ملحي.
  6. افصل بقية الغشاء السلوى الذي لا يعلق علي المشيمة (اي الجزء المنعكس) من المشيميه (الشكل 2 ج).
    1. جمع المنطقة المنعكسة في كاس آخر المسمي مع 300 mL من محلول ملحي.
      ملاحظه: أضافه محلول ملحي باستمرار خلال تشريح لمنع الانسجه من الجفاف.

4. غسل الاغشيه

ملاحظه: يجب تنفيذ الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي تحت ظروف معقمه في درجه حرارة الغرفة.

  1. تخلص من المحلول الملحي لكل منطقه غشاء بشكل منفصل.
  2. أضف 100 مل من محلول ملحي طازج إلى منطقه السرة.
  3. أضف 300 مل من محلول ملحي طازج إلى المناطق المشيمة والمنعكسة علي التوالي.
  4. يحرك الاغشيه بمساعده تشريح الملقط لأزاله بقايا الدم.
  5. تجاهل المحلول الملحي.
  6. كرر غسل والانفعالات علي الأقل 3x حتى الاغشيه هي شفافة.
  7. وضع وتوسيع الاغشيه علي اللوحة لتنظيف مع الشاش العقيمة جلطات الدم التي لم يتم ازالتها مع يغسل.
    ملاحظه: من المهم جدا لأزاله العديد من الكريات الحمراء قدر الإمكان ، ووجودها يؤثر علي وظيفة التريبسين وصلاحيه الثقافات الخلية اللاحقة.

5. الهضم الانزيمي لاغشيه من مناطق مختلفه

ملاحظه: يجب تنفيذ الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي في ظل ظروف معقمه.

  1. قطع المناطق المنعكسة والمشيمة إلى جزئين أو ثلاثه أجزاء.
  2. لا تقطع المنطقة السرية.
  3. ضع شظايا كل منطقه في أنابيب الطرد المركزي. أضافه 20 مل من 0.5 ٪ التريبسين/أدتا إلى المناطق المنعكسة والمشيمة و 5 مل من 0.5 ٪ التريبسين/أدتا إلى منطقه السرة ، علي التوالي.
    ملاحظه: من المهم قطع المناطق المنعكسة والمشيمة إلى قطع أصغر لأنها تحتاج إلى ان تكون مغمورة تماما في حل التريبسين.
  4. هز أنابيب الطرد المركزي بخفه لمده 30 ثانيه. تجاهل التريبسين.
  5. أضافه 30 مل من جديد 0.5 ٪ تريبسين/أدتا إلى المناطق المنعكسة والمشيمة و 15 مل من جديد 0.5 ٪ تريبسين/أدتا إلى منطقه السرة ، علي التوالي.
  6. وضع الأنابيب في المدورة داخل الحاضنة.
  7. احتضان مع دوران (20 دوره في الدقيقة) لمده 40 دقيقه في 37 درجه مئوية.
    ملاحظه: إذا كان المدورة أنبوب غير متوفر ، يهز الأنابيب يدويا كل 10 دقيقه.
  8. نقل الحلول التريبسين/الخلية من كل منطقه إلى أنابيب الطرد المركزي الجديدة.
  9. أضافه 2x حجم الوسائط HAEC مسبقا في 37 درجه مئوية لكل أنبوب لتنشيط الانزيم.
  10. تخزين أول الهضم علي الجليد.
  11. كرر الخطوات 5.6 − 5.8 لفتره هضم ثانيه.
  12. بالنسبة لكل منطقه ، امسك طرفا واحدا من جزء امايون باستخدام ملقط تشريح ، ومع ضغط زوج آخر علي طول الانسجه لأزاله صفوف من الخلايا الظهاريه التي لم تقشر تماما اثناء فترات الحضانة السابقة.
  13. جمع الهضم الثاني في مجموعه أخرى من أنابيب الطرد المركزي وإلغاء تنشيط مع 2x حجم وسائل الاعلام haec.
  14. تخلص من الاغشيه المهضومة في وعاء الخطر البيولوجي.

6-عزل الجماعة الاوروبيه

ملاحظه: يجب تنفيذ الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي في ظل ظروف معقمه.

  1. الطرد المركزي جميع أنابيب في 200 x g لمده 10 دقيقه في 4 ° c.
  2. تجاهل ماده طافي وأضافه 10 مل من وسائل الاعلام haec مسبقه التسخين (إلى 37 درجه مئوية) لكل أنبوب و ماصه pipet-x بلطف لتصنيف كل بيليه.
  3. الجمع بين المعلقات الخلوية لهضمين في أنبوب الفردية لكل منطقه الغشاء.
  4. تصفيه المعلقات الخلوية باستخدام 100 ميكرومتر خليه مصافي لأزاله الحطام مصفوفة خارج الخلية والحصول علي خلايا واحده.
  5. اعداد ثلاثه قسامات مع 90 μl من التريكان الأزرق في أنبوب الطرد المركزي.
  6. أضافه 10 μL من كل تعليق الخلية لكل منطقه الغشاء في أنابيب الطرد المركزي ومزيج.
  7. عد الخلايا مع مقياس اللزوجة تحت مجهر حقل الضوء.

7. ثقافة HAEC

  1. بذور HAEC من المناطق الثلاث علي حده في كثافة من 3 × 104 خلايا/سم2 مع وسائل الاعلام haec مسبقه التسخين ، تستكمل مع 10 نانوغرام/مل من عامل نمو البشرة البشرية (egf).
    1. بذور الخلايا في لوحات 100 مم للحفاظ عليها في المختبر أو في 24 لوحات جيدا للتحليل المناعي.
  2. احتضان الاطباق في 37 درجه مئوية تحت ظروف نورموكسيك (5 ٪ CO2) في حاضنه ترطيب.
  3. أضافه EGF يوميا وتغيير المتوسطة كل يوم ثالث.
    ملاحظه: ستصبح الخلايا متموج بعد 4 − 6 أيام.
  4. استخدام الخلايا لمناعي التقليدية ، تحليل الفرز الخلية ، بالتبريد ، الجيش النيبالي الريبي واستخراج البروتين ، أو لمواصله المرور.

8. مرور HAEC

  1. أزاله المتوسطة HAEC وغسل 2x مع الحل التلفزيوني/أدتا 0.01 M.
  2. احتضان مع الحل التلفزيوني/أدتا 0.01 M لمده 15 دقيقه في 37 درجه مئوية.
  3. أزاله تلفزيوني/أدتا وأضافه 1.5 mL من 0.5 ٪ التريبسين/أدتا.
  4. احتضان لمده 5 − 8 دقيقه في 37 درجه مئوية.
  5. Inactivate الانزيم مع اثنين من مجلدات من وسائل الاعلام HAEC.
  6. جمع الحل المختلط والطرد المركزي لمده 5 دقائق في 200 x g.
  7. عد الخلايا وتابع مع الممرات التالية أو استخدام الخلايا لمزيد من التحليل.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

تم عزل HAEC من كل من المناطق التشريحية الثلاثة من الغشاء السلوى ومثقف بشكل فردي في المختبر. بعد 48 h من الثقافة ، والخلايا مع النمط الظاهري الظهاريه التمسك سطح لوحه ، علي الرغم من ان وسائل الاعلام أيضا تحتوي علي الحطام الخلوي والخلايا العائمة ، والتي أزيلت بمجرد تغيير المتوسطة (الش?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

نفذنا بروتوكولا جديدا لعزل HAEC من الاغشيه الاجله. وهو يختلف عن التقارير السابقة في ان كل غشاء كان ينقسم إلى المناطق التشريحية الثلاث قبل العزلة لتحليل الخلايا من كل واحد.

واحده من الخطوات الأكثر اهميه في البروتوكول هو غسل الغشاء لأزاله جميع جلطات الدم ، لأنها يمكن ان تتداخل ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgements

وقد دعمت أبحاثنا بمنح من المعهد الوطني لperinatología المكسيكية (21041 و 21081) و CONACYT (A1-S-8450 و 252756). نشكر جيسيكا غونزاليس نوريس وليديا يوريريا باريدس فيفاس علي الدعم الفني.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Culture reagents
2-MercaptoethanolThermo Fisher Scientific/Gibco2198502355 mM
Animal-Free Recombinant Human EGFPeprotechAF-100-15
Antibiotic-AntimycoticThermo Fisher Scientific/Gibco15240062100X
Dulbecco's Modified Eagle MediumThermo Fisher Scientific/Gibco12430054Supplemented with high glucose and HEPES
EDTAThermo Fisher Scientific/AmbionAM9260G0.5 M
Embryonic stem-cell FBS, qualifiedThermo Fisher Scientific/Gibco10439024
Non-Essential Amino AcidsThermo Fisher Scientific/Gibco11140050100X
Paraformaldehydeany brand
Phosphate-Buffered SalineThermo Fisher Scientific/Gibco100100231X
Saline solution (sodium chloride 0.9%)any brand
Sodium PyruvateThermo Fisher Scientific/Gibco11360070100 mM
Trypsin/EDTA 0.05%Thermo Fisher Scientific/Gibco25300054
Disposable material
100 µm Cell StrainerCorning/Falcon352360
100 mm TC-Treated Culture DishCorning430167
24-well Clear TC-treated Multiple Well PlatesCorning/Costar3526
6-well Clear TC-treated Multiple Well PlatesCorning/Costar3516
Non-Pyrogenic Sterile Centrifuge Tubeany brandwith conical bottom
Non-Pyrogenic sterile tips of 1,000 µl, 200 µl and 10 µl.
Sterile cotton gauzes
Sterile serological pipettes of 5, 10 and 25 mLany brand
Sterile surgical glovesany brand
Equipment
Biological safety cabinet
Centrifuge
Micropipettes
Motorized Pipet Filler/Dispenser
Sterile beakers of 500 mL
Sterile plastic cutting board
Sterile scalpels, scissors, forceps, clamps
Sterile stainless steel container
Sterile tray
Tube RotatorMaCSmix
Antibodies and KitsAntibody ID
Anti-E-cadherinBD Biosciences610181RRID:AB_3975
Anti-KI67Santa Cruz23900RRID:AB_627859)
Anti-NANOGPeprotech500-P236RRID:AB_1268274
Anti-OCT4Abcamab19857RRID:AB_44517
Anti-SOX2MilliporeAB5603RRID:AB_2286686
Anti-SSEA-4Cell Signaling4755RRID:AB_1264259
Anti-TRA-1-60Cell Signaling4746RRID:AB_2119059
Goat Anti-Mouse Alexa Fluor 488Thermo Fisher ScientificA-11029RRID:AB_2534088
Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor 568Thermo Fisher ScientificA-11036RRID:AB_10563566
Tunel Assay KitAbcam66110

References

  1. Shahbazi, M. N., et al. Self-organization of the human embryo in the absence of maternal tissues. Nature Cell Biology. 18 (6), 700-708 (2016).
  2. Garcia-Lopez, G., et al. Human amniotic epithelium (HAE) as a possible source of stem cells (SC). Gaceta Medica de Mexico. 151 (1), 66-74 (2015).
  3. Gramignoli, R., Srinivasan, R. C., Kannisto, K., Strom, S. C. Isolation of Human Amnion Epithelial Cells According to Current Good Manufacturing Procedures. Current Protocols in Stem Cell Biology. 37, (2016).
  4. Murphy, S., et al. Amnion epithelial cell isolation and characterization for clinical use. Current Protocols in Stem Cell Biology. , Chapter 1, Unit 1E 6 (2010).
  5. Garcia-Castro, I. L., et al. Markers of Pluripotency in Human Amniotic Epithelial Cells and Their Differentiation to Progenitor of Cortical Neurons. PLoS One. 10 (12), 0146082(2015).
  6. Garcia-Lopez, G., et al. Pluripotency markers in tissue and cultivated cells in vitro of different regions of human amniotic epithelium. Experimental Cell Research. 375 (1), 31-41 (2019).
  7. Yang, P. J., et al. Biological characterization of human amniotic epithelial cells in a serum-free system and their safety evaluation. Acta Pharmacological Sinica. 39 (8), 1305-1316 (2018).
  8. Zou, G., et al. MicroRNA32 silences WWP2 expression to maintain the pluripotency of human amniotic epithelial stem cells and beta isletlike cell differentiation. International Journal of Molecular Medicine. 41 (4), 1983-1991 (2018).
  9. Avila-Gonzalez, D., et al. Capturing the ephemeral human pluripotent state. Developmental Dynamics. 245 (7), 762-773 (2016).
  10. Niknejad, H., et al. Properties of the amniotic membrane for potential use in tissue engineering. European Cells & Materials. 15, 88-99 (2008).
  11. Miki, T. Stem cell characteristics and the therapeutic potential of amniotic epithelial cells. American Journal of Reproductive Immunology. 80 (4), 13003(2018).
  12. Wu, Q., et al. Comparison of the proliferation, migration and angiogenic properties of human amniotic epithelial and mesenchymal stem cells and their effects on endothelial cells. International Journal of Molecular Medicine. 39 (4), 918-926 (2017).
  13. Hammer, A., et al. Amnion epithelial cells, in contrast to trophoblast cells, express all classical HLA class I molecules together with HLA-G. American Journal of Reproductive Immunology. 37 (2), 161-171 (1997).
  14. Benirschke, K., et al. Anatomy and Pathology of the Placental Membranes. Pathology of the Human Placenta. , Springer. 268-318 (1995).
  15. Banerjee, A., et al. Different metabolic activity in placental and reflected regions of the human amniotic membrane. Placenta. 36 (11), 1329-1332 (2015).
  16. Kim, S. Y., et al. miR-143 regulation of prostaglandin-endoperoxidase synthase 2 in the amnion: implications for human parturition at term. PLoS One. 6 (9), 24131(2011).
  17. Han, Y. M., et al. Region-specific gene expression profiling: novel evidence for biological heterogeneity of the human amnion. Biology of Reproduction. 79 (5), 954-961 (2008).
  18. Alcaraz, A., et al. Autocrine TGF-beta induces epithelial to mesenchymal transition in human amniotic epithelial cells. Cell Transplantation. 22 (8), 1351-1367 (2013).
  19. Canciello, A., et al. Progesterone prevents epithelial-mesenchymal transition of ovine amniotic epithelial cells and enhances their immunomodulatory properties. Scientific Reports. 7 (1), 3761(2017).
  20. Canciello, A., Greco, L., Russo, V., Barboni, B. Amniotic Epithelial Cell Culture. Methods in Molecular Biology. 1817, 67-78 (2018).
  21. Singh, A. M., et al. Signaling network crosstalk in human pluripotent cells: a Smad2/3-regulated switch that controls the balance between self-renewal and differentiation. Cell Stem Cell. 10 (3), 312-326 (2012).
  22. Villa-Diaz, L. G., Kim, J. K., Laperle, A., Palecek, S. P., Krebsbach, P. H. Inhibition of Focal Adhesion Kinase Signaling by Integrin alpha6beta1 Supports Human Pluripotent Stem Cell Self-Renewal. Stem Cells. 34 (7), 1753-1764 (2016).
  23. Bednar, A. D., Beardall, M. K., Brace, R. A., Cheung, C. Y. Differential expression and regional distribution of aquaporins in amnion of normal and gestational diabetic pregnancies. Physiological Reports. 3 (3), 12320(2015).
  24. Avila-Gonzalez, D., et al. Human amniotic epithelial cells as feeder layer to derive and maintain human embryonic stem cells from poor-quality embryos. Stem Cell Research. 15 (2), 322-324 (2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

153

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved