JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

توضح هذه المقالة البروتوكولات المستخدمة لإنتاج منصة جديدة لتوصيل اللقاح، "polybubbles"، لتمكين إطلاق انفجار متأخر. واستخدمت البوليسترات بما في ذلك بولي (حمض اللاكتيك شارك الجليكوليك) والبولي كابرولكتون لتشكيل polybubbles والجزيئات الصغيرة والمستضدات واستخدمت كبضائع.

Abstract

إن استراتيجيات إيصال اللقاحات التي يمكن أن تحد من تعرض البضائع للمذيبات العضوية مع تمكين الملامح الجديدة للإطلاق هي ذات أهمية حاسمة لتحسين تغطية التمنيع في جميع أنحاء العالم. هنا ، يتم تقديم رواية قابلة للحقن ، والأشعة فوق البنفسجية ، curt وتأخر إطلاق انفجار تمكين منصة توصيل اللقاح تسمى polybubbles. تم حقن البضائع في البولي بوببلس القائم على البوليستر التي تشكلت في 10٪ carboxymethycellulose - القائم على محلول مائي. تتضمن هذه الورقة بروتوكولات للحفاظ على الشكل الكروي للبولي بوبلز وتحسين وضع البضائع والاحتفاظ بها لزيادة كمية البضائع داخل polybubbles. ولضمان السلامة، تم تحليل محتوى المذيبات المكلورة داخل البولي بوبل باستخدام تحليل تنشيط النيوترونات. وأجريت دراسات الإفراج مع جزيئات صغيرة والبضائع داخل polybubble لتأكيد تأخر إطلاق انفجار. وللمزيد من إظهار إمكانية تسليم البضائع عند الطلب، كانت ألياف النانو مزجت داخل قشرة البوليمر لتمكين التنشيط بالليزر القريب من الأشعة تحت الحمراء.

Introduction

ويؤدي تغطية التحصين المحدودة إلى وفاة 3 ملايين شخص بسبب الأمراض التي يمكن الوقاية منها باللقاحاتتحديداً 1. وتؤدي ظروف التخزين والنقل غير الملائمة إلى هدر اللقاحات الوظيفية، وبالتالي تسهم في خفض التحصين العالمي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن عدم اكتمال التطعيم بسبب عدم الالتزام بجداول اللقاحات المطلوبة يتسبب أيضاً في تغطية محدودة باللقاحات، وتحديداً في البلدان النامية2. ويلزم القيام بزيارات متعددة للعاملين الطبيين خلال الفترة الموصى بها لتلقي الجرعات المعززة، مما يحد من النسبة المئوية للسكان الذين يحصلون على التطعيم الكامل. ومن ثم، هناك حاجة إلى وضع استراتيجيات جديدة لتقديم اللقاحات الخاضعة للرقابة للتغلب على هذه التحديات.

وتشمل الجهود الحالية نحو تطوير تكنولوجيات إيصال اللقاحات النظم البوليمرية المستحلب3،4. ومع ذلك، غالباً ما تتعرض البضائع إلى كمية أكبر من المذيبات العضوية التي يمكن أن تسبب تراكم وdenaturation، وتحديدا في سياق البضائع القائمة على البروتين5،6. لقد قمنا بتطوير منصة جديدة لتوصيل اللقاح ، "polybubbles" ، التي يمكن أن تضم مقصورات شحن متعددة مع تقليل حجم البضائع التي تتعرض للمذيبات7. على سبيل المثال، في منصة القذيفة الأساسية متعددة الزهاء، يتم حقن جيب شحن قطره 0.38 مم (SEM) في وسط بولي بوبل 1 مم. وفي هذه الحالة، فإن مساحة سطح البضائع المعرضة لمذيب عضوي ستكون حوالي 0.453 مم2. بعد النظر في كثافة التعبئة من المجالات (الجسيمات الدقيقة) داخل المجال (مستودع البضائع)، والحجم الفعلي للجسيمات الدقيقة (10 ميكرومتر في القطر) التي يمكن أن يصلح في مستودع 0.17 مم3. حجم الجسيمات الدقيقة واحد هو 5.24x10-8 ملم3، وبالتالي فإن عدد الجسيمات الدقيقة التي يمكن أن تناسب المستودع هو ~ 3.2x106 الجسيمات. إذا كان كل الجسيمات الدقيقة لديها 20 جيب البضائع (نتيجة مستحلب مزدوج) من 0.25 ميكرومتر القطر، ثم مساحة السطح من البضائع المعرضة للمذيبات العضوية هو 1274 مم2. مستودع البضائع داخل polybubble وبالتالي سيكون لها ~ 2800-fold أقل مساحة السطح المعرضة للمذيبات العضوية مقارنة مع تلك التي من البضائع العضوية المذيبات المعرضة في الجسيمات الدقيقة. وبالتالي يمكن أن تقلل من منصة البوليستر لدينا كمية البضائع المعرضة للمذيبات العضوية التي يمكن أن تسبب خلاف ذلك تجميع البضائع وعدم الاستقرار.

يتم تشكيل polybubbles على أساس مبدأ فصل المرحلة حيث يتم حقن البوليستر في المرحلة العضوية في محلول مائي مما يؤدي إلى فقاعة كروية. ويمكن بعد ذلك حقن البضائع في المرحلة مائي في وسط polybubble. ويمكن أن يكون من الممكن أن يتحقق آخر مقصورة الشحن داخل polybubble عن طريق خلط شحنة مختلفة مع قذيفة البوليمر. وسوف polybubble في هذه المرحلة تكون مرنة ، وسوف بعد ذلك الشفاء يؤدي إلى هيكل polybubble الصلبة مع البضائع في الوسط. تم اختيار polybubbles كروية على الأشكال الهندسية الأخرى لزيادة قدرة البضائع داخل polybubble مع التقليل من الحجم الكلي للبولي بوبل. تم اختيار polybubbles مع البضائع في المركز لإثبات تأخر إطلاق انفجار. وأدرجت أيضا polybubbles مع الأشعة تحت الحمراء القريبة (NIR)- حساسة (أي، ثيرانوستيك تمكين) عامل، وهي نانورود الذهب (AuNR)، للتسبب في زيادة في درجة حرارة polybubbles. ويمكن أن ييسر هذا التأثير التحلل بشكل أسرع ويمكن استخدامه للتحكم في الحركة في التطبيقات المستقبلية. في هذه الورقة، ونحن وصف نهجنا لتشكيل وتوصيف polybubbles، لتحقيق تأخر إطلاق انفجار من polybubbles، ودمج AuNR داخل polybubbles للتسبب NIR-التنشيط.

Protocol

1. بوليكبرولاكيوني ثلاثية الكريريلات (PCLTA) التوليف

  1. الجافة 3.2 مل من 400 Da polycaprolacyone (PCL) الثلاثي بين عشية وضحاها في 50 درجة مئوية في قارورة مفتوحة 200 مل أسفل جولة وK2CO3 في قارورة زجاجية في 90 درجة مئوية.
  2. اخلط الثلاثي مع 6.4 مل من ديكلوروميثان (DCM) و4.246 غرام من كربونات البوتاسيوم (K2CO3) تحت الأرجون.
  3. مزيج 2.72 مل من كلوريد الاكريلويل في 27.2 مل من DCM وإضافة dropwise إلى خليط رد فعل في قارورة أكثر من 5 دقائق.
  4. تغطية خليط التفاعل مع رقائق الألومنيوم وتركها دون عائق في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة تحت الأرجون.
  5. بعد 24 ساعة، قم بتصفية خليط التفاعل باستخدام ورقة تصفية على قمع Buchner تحت الفراغ لتجاهل الكواشف الزائدة.
  6. راسب filtrate من الخطوة 1.5 التي تحتوي على البوليمر endcapped في الأثير ديثيل في 1:3 (vol/vol) و rotovape في 30 درجة مئوية لإزالة الأثير ديثيل.

2. تشكيل polybubble

ملاحظة: حقن البوليمر في المياه deionized (DI) من شأنه أن يسبب polybubbles إلى الهجرة إلى الجزء السفلي من القارورة مما أدى إلى أسفل بالارض. استخدام 10٪ (wt/vol) carboxymethyl السليلوز (CMC) ملء الزجاج بدلا من ذلك قارورة لتجنب التسطيح polybubble.

  1. إعداد 10٪ (wt/ vol) CMC الحل في DI المياه.
  2. تعبئة 0.92 مل قارورة زجاجية مع 0.8 مل من 10٪ CMC باستخدام أنبوب نقل 1 مل.
  3. مزيج 1000 ملغ / مل من 14 كيلو Da PCL في DCM وتوليف PCLTA في 1:3 (vol/vol) لمجم 200 ميكرولتر أو إعداد 200 ميكرولتر من 1000 ملغ/مل من 5 كيلو بولي (حمض اللاكتيك المشترك الجليكوليك) diacrylate (PLGADA) في الكلوروفورم.
  4. مزيج من 2-هيدروكسي-4′-(2-هيدروكسيثوكسي)-2-ميثيل بروبيوفينون (فوتوينيتاتير) مع البوليمر (PLGADA أو PCL/PCLTA) في 0.005:1 (فول/فول).
  5. تحميل 200 ميكرولتر من خليط البوليمر في حقنة زجاجية 1 مل محمولة على مضخة حقنة متصلة بأنبوب الفولاذ المقاوم للصدأ الاستغناء مع قطر داخلي 0.016 بوصة.
  6. استخدام micromotor للسيطرة على الحركة إلى الأمام والخلف من أنبوب البوليمر لحقن البوليمر في 10٪ CMC في الزجاج القارورة لتشكيل polybubble.
  7. علاج polybubbles تحت الأشعة فوق البنفسجية (UV) في الطول الموجي 254 نانومتر لمدة 60 s في 2 W / cm2.
  8. فلاش تجميد polybubbles في النيتروجين السائل وlyophilize بين عشية وضحاها في 0.010 mBar فراغ وعند -85 درجة مئوية.
  9. فصل polybubbles من CMC المجففة باستخدام ملقط وغسل polybubbles مع DI المياه لإزالة أي CMC المتبقية. لاحظ أنه يمكن استخدام البوليمرات الأخرى على الأرجح مع تعديلات لتغيير حركية الإطلاق.

3. تعديل من متعدد بوبل قطر

  1. تعبئة 0.92 مل الزجاج القارورة مع 10٪ CMC باستخدام أنبوب نقل 1 مل.
  2. خلط PCL/PCLTA في 1:3 (فول / فول) مع 1000mg/mL 14kDa PCL وتوليف PCLTA. اخلطي المُتَرِّف الضوئي مع خليط البوليمر في 0.005:1 (vol/vol).
  3. قم بتحميل خليط البوليمر في حقنة زجاجية 1 مل مثبتة على مضخة حقنة متصلة بأنبوبة من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر داخلي 0.016 بوصة.
  4. استخدام micromotor للسيطرة على الحركة إلى الأمام والخلف من أنبوب البوليمر لحقن البوليمر في 10٪ CMC في الزجاج القارورة لتشكيل polybubble.
  5. للحصول على polybubbles بأطر مختلفة ، تختلف معدل الاستغناء من 0.0005 إلى 1 ميكرولتر / س.
  6. التقاط صور للقارورة مع polybubbles مع قطر متفاوتة.
  7. استخدام ImageJ لتحديد قطر polybubbles واستخدام حجم القارورة على نطاق.

4. البضائع مركزة داخل polybubble

  1. تعديل لزوجة PCL/PCLTA باستخدام K2CO3:
    ملاحظة: لا يلزم تعديل لزوجة PLGADA باستخدام K2CO3 لأن لزوجة 5 كيلو اديا PLAGDA في 1000 ملغ/مل كافية لتمركز البضائع.
    1. أضف K2CO3 (التي تم عزلها بعد تفاعل PCLTA) إلى PCLTA بتركيزات متفاوتة بما في ذلك 0 ملغم/مل، 10 ملغم/مل، 20 ملغ/مل، 40 ملغم/مل، و60 ملغم/مل.
    2. قياس اللزوجة الديناميكية للحلول عن طريق تغيير معدل القص من 0 إلى 1000 1/s باستخدام اِلتيْر الرحَم.
    3. حقن البضائع يدويا في الوسط (راجع الخطوة 4.2 لإعداد خليط البضائع) من polybubbles التي تشكلت باستخدام PCL / PCLTA الحلول مع تركيزات مختلفة من2K CO3 (الخطوة 4.1.1). تحديد التركيز الأمثل من K2CO3 من خلال مراقبة الحل الذي من الخطوة 4.1.1 يمكن أن يؤدي إلى الاحتفاظ البضائع في الوسط.
  2. توسيط الحمولة (سبق أن أظهرت جدوى مع جزيئات صغيرة) مع CMC
    1. اخلط الحمولة مع 5٪ (wt/vol) CMC في الدوار بين عشية وضحاها لزيادة لزوجة البضائع.
    2. يدويا حقن 2 ميكرولتر من خليط البضائع في polybubble والمضي قدما مع الشفاء من الأشعة فوق البنفسجية في الطول الموجي 254 نانومتر لمدة 60 s في 2 W /cm2.
    3. فلاش تجميد polybubbles في النيتروجين السائل لمدة 30 s وlyophilize بين عشية وضحاها في 0.010 mBar فراغ وعند -85 درجة مئوية.
    4. فصل polybubbles من CMC المجففة باستخدام ملقط وغسلها مع DI المياه لإزالة أي CMC المتبقية.
    5. قطع polybubble في نصف وصورة النصفين باستخدام المجهر confocal لضمان أن البضائع تركزت (الرجوع إلى الخطوة 6 لالإثارة والانبعاثات الطول الموجي المستخدمة).

5- تركيبات الشحنات

ملاحظة: يمكن أن تضم تركيبة polybubble أنواع مختلفة من البضائع، بما في ذلك الجزيئات الصغيرة والبروتينات والأحماض النووية.

  1. استنادا إلى الدراسات السابقة، في حالة البضائع البروتين، واستخدام سواغ بما في ذلك البولي ايثيلين جلايكول (PEG)6، polyvinylpyrrolidone (PVP)، وغليكوبوليكمرات6 لتحسين استقرار البروتين أثناء صياغة polybubble.
  2. شكل polybubbles استناداً إلى البروتوكول في الخطوة 2.
  3. تحضير محلول مستضد بإضافة 17.11 غرام من تريهالوس إلى 625 ميكرولتر من فيروس نقص المناعة البشرية gp120/41 مستضد.
  4. حقن يدويا 1 ميكرولتر من محلول مستضد في منتصف polybubble.
  5. فتح polybubbles في أيام 0 و 7 و 14 و 21 ، وسجل الفلوريس من المستضد مع الإثارة والانبعاثات الطول الموجي 497 نانومتر و 520 نانومتر ، على التوالي.
  6. تحديد وظيفة المستضد باستخدام المقايسة المناعية المرتبطة بالانزيم (ELISA) واستخدام الحليب غير الدهني 5٪ كمخزن عازل للحجب.

6 - الإفراج عن البضائع

ملاحظة: يمكن استخدام جزيء صغير أو مستضد كنوع الحمولة

  1. جزيء صغير
    1. احتضان polybubbles مع acriflavine مركز في 400 ميكرولتر من الفوسفات المالحة العازلة (PBS) في 37 درجة مئوية، 50 درجة مئوية لبولي بوببلس PLGADA وعند 37 درجة مئوية، 50 درجة مئوية، 70 درجة مئوية لPCL / PCLTA polybubbles.
      ملاحظة: السبب الذي ونوصي بإجراء اختبار فوق درجات حرارة الجسم هو أ) محاكاة درجة الحرارة (50 درجة مئوية) التي يصل فيها البولي بوبل أثناء بالليزر على نانورود الذهب (AuNRs) داخل PCL وPLGA. و ب) تسريع عملية التحلل من PCL (50 درجة مئوية، 70 درجة مئوية).
    2. في كل نقطة زمنية، وجمع سراويل واستبدالها مع 400 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني جديد.
    3. استخدام قارئ لوحة لتحديد كثافة الفلوريسنس في عظمى جمعها.
      ملاحظة: استخدام ex/em من 416 نانومتر/514 نانومتر ل acriflavine.
  2. Antigen
    1. احتضان polybubbles مع محورها بولفين الألبومين المصل (BSA)-488 في 400 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية، 50 درجة مئوية لبولي بوببلس PLGADA وعند 37 درجة مئوية، 50 درجة مئوية لPCL / PCLTA polybubbles.
    2. في كل نقطة زمنية، وجمع عظمى واستبدالها مع 400 μL برنامج تلفزيوني جديد.
    3. استخدام قارئ لوحة لتحديد كثافة الفلوريسنس في عظمى جمعها. استخدام السابقين / م من 497 نانومتر/520 نانومتر لBSA-488.
      ملاحظة: لا ينبغي إجراء دراسة الافراج عند 70 درجة مئوية لبولي بوبل PCL/PCLTA لتجنب تعريض المستضد لدرجة حرارة قصوى.

7- السمية

  1. قياس محتوى الكلور في polybubbles باستخدام تحليل تنشيط النيوترون (NAA)
    1. استخدام polybubbles التي تم lyophilized ل 2، 4، 6، 20، و 24 h لهذه الدراسة في 0.010 mBar فراغ وعند -85 درجة مئوية.
    2. قياس 5-9 ملغ من polybubbles ووضعها على قارورة الإشعاع LDPE.
    3. إعداد 1000 غرام / مل من محلول معايرة الكلور من المعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا (NIST) - حل المعايرة التي يمكن تتبعها.
    4. استخدام 1- ميغاوات مفاعل تريغا لتنفيذ الإشعاعات النيوترونية على كل عينة بمعدل فلونس نيوتروني قدره 9.1 ×10 12 /سم2·s ل 600 s.
    5. نقل polybubbles إلى قنينات غير المشعة.
    6. استخدم كاشف HPGe للحصول على أطياف أشعة غاما لمدة 500 s بعد فواصل تحلل 360 s.
    7. استخدام برنامج NAA من قبل كانبيرا للصناعات لتحليل البيانات.
  2. تحديد كمية محتوى الكلور الصادر من polybubbles باستخدام NAA
    1. احتضان polybubbles التي تم التجميل بين عشية وضحاها (في 0.010 مل 0 فراغ في 85 درجة مئوية) في 400 μL من برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية.
    2. جمع اادفع في الأسابيع 1 و 2 و 3 بعد الحضانة.
    3. تحليل المواد الفائقة لمحتوى الكلور باستخدام NAA باستخدام نفس الأسلوب كما هو موضح أعلاه في الخطوة 7.1.

8. أو إنر التوليف من قبل كيتلر، S.، وآخرون8

  1. تحضير محلول البذر AuNR عن طريق خلط 250 ميكرولتر من 10 mM حمض الكلوروواريك (HAuCl4)،7.5 مل من 100 M 100 بروميد التريتيمونيوم (CTAB)، و 600 ميكرولتر من 10 mM الجليد البارد بوروهيدريد (NaBH4).
  2. تحضير حل النمو عن طريق خلط 40 مل من 100 mM CTAB، 1.7 مل من 10 مل HAuCl4،250 μL من نترات الفضة (AgNO3)،و 270 μL من 17.6 ملغ / مل حمض الاسكوربيك إلى أنبوب.
  3. مزيج بقوة 420 ميكرولتر من حل البذور مع حل النمو في 1200 دورة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة. ثم اترك الخليط دون عائق ليتفاعل لمدة 16 ساعة.
  4. إزالة الكواشف الزائدة من الخليط عن طريق الطرد المركزي في 8000 × غرام لمدة 10 دقيقة والتخلص من supernatant.

9 - إضفاء التحلل من الفلوروفيك على الـ AuNRs من قبل سليمان، و M.G.، وآخرون9

  1. ضبط درجة حَسّة 1.5 مل من الـ CTAB-استقرت في الـ 10 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم 1 mM (NaOH).
  2. حرك الحل مع 0.1 مل من 0.3 mM الميثيليد PEG (mPEG) thiol في 400 دورة في الدقيقة بين عشية وضحاها.
  3. مزيج PEGylated AuNRs مع 0.4 M دوديسيلامين (DDA) في الكلوروفورم في 500 دورة في الدقيقة لمدة 4 أيام.
  4. Pipet خارج الطبقة العضوية العلوية التي تحتوي على AuNRs hydrophobicized وتخزينها في 4 درجة مئوية حتى الاستخدام في المستقبل.

10. NIR تفعيل polybubbles

  1. اخلطي البوليمر (PLGADA أو PCL/PCLTA) مع محلول AuNRs المضروب في 1:9 (vol/vol).
  2. إضافة الضوئيات إلى البوليمر-أورار خليط في 0.005:1 (vol/vol).
  3. شكل polybubbles عن طريق حقن خليط البوليمر-أورار في 0.92 مل قارورة زجاجية مع 10٪ CMC (wt/vol) (الرجوع إلى الخطوة 2).
  4. علاج polybubbles في 254 نانومتر الطول الموجي لمدة 60 s في 2 W / cm2.
  5. فلاش تجميد في النيتروجين السائل لمدة 30 s وlyophilize بين عشية وضحاها في 0.010 mBar فراغ وعند -85 درجة مئوية.
  6. فصل polybubbles المجففة باستخدام ملقط وغسلها مع DI المياه لإزالة أي CMC المتبقية.
  7. احتضان polybubbles في 400 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية.
  8. تفعيل polybubbles باستخدام 801 نانومتر NIR الليزر في 8A لمدة 5 دقائق كل يوم اثنين والأربى والجمعة.
  9. اتخاذ الأشعة تحت الحمراء التطلعية (FLIR) صور من polybubble قبل وبعد تنشيط الليزر للحصول على قيم درجة الحرارة.
  10. حساب الاختلافات في درجة الحرارة بين قبل وبعد تنشيط الليزر على أساس قيم درجة الحرارة من الصور FLIR.

النتائج

وتتميز polybubbles على نطاق واسع باستخدام SEM وNAA. تم تمركز البضائع بنجاح لنتيجة في إطلاق انفجار تأخر. كما تم تنشيط بوليسات متعددة بنجاح بالليزر بسبب وجود AuNRs داخل polybubbles.

توصيف polybubble
أدى polybubbles حقنها في محلول مائي دون CMC في بولبوبل بالا?...

Discussion

التكنولوجيات والتحديات الحالية
يشيع استخدام الجسيمات الدقيقة والنانوية القائمة على المستحلب كناقلات توصيل المخدرات. على الرغم من أن حركية الإفراج عن البضائع من هذه الأجهزة قد درست على نطاق واسع، والسيطرة على حركية إطلاق انفجار كان تحديا كبيرا11. كما أن براعة الشح?...

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

نود أن نشكر الدكتور بريان E. توملين التابعة لمختبر التحليل عنصري داخل قسم الكيمياء في TAMU الذي ساعد في تحليل تنشيط النيوترونات (NAA).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1-Step Ultra Tetramethylbezidine (TMB)-Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Substrate SolutionThermo scientific34028
2-Hydroxy-2-methylpropiophenoneTCI AMERICAH0991
450 nm Stop Solution for TMB SubstrateAbcamab17152
Acryloyl chlorideSigma AldrichA24109-100G
AcriflavineChem-Impex International22916
Anhydrous ethyl etherFisher ChemicalE138-500
Anti-HIV1 gp120 antibody conjugated to horseradish peroxidase (HRP)
Bovine serum albumin (BSA)Fisher BioReagentsBP9700100
BSA-CF488 dye conjugatesInvitrogenA13100
Bromosalicylic acidAcros OrganicsAC162142500
Carboxymethylcellulose (CMC)Millipore Sigma80502-040
Centrimonium bromide (CTAB)MP BiomedicalsICN19400480
ChloroformFisher ChemicalC2984
Coating bufferAbcamab210899
Dichloromethane (DCM)Sigma Aldrich270997-1L
Diethyl etherFisher ChemicalE1384
Dodeacyl AmineAcros OrganicsAC117665000
Doxorubicin hydrochlorideFisher BioReagentsBP251610
L-ascorbic acidAcros OrganicsA61 100
Legato 100 Syringe PumpKD Scientific14 831 212
mPEG thiolLaysan BioNC0702454
Nonfat dry milkAndwin ScientificNC9022655
Potassium carbonateAcros OrganicsAC424081000
Phosphate saline bufferFisher BioReagentsBP3991
(Poly(caprolactone)Sigma Aldrich440744-250G
(Poly(caprolactone) triolAcros OrganicsAC190730250
Poly (lactic-co-glycolic acid) diacrylateCMTec280050
Potassium carbonateAcros OrganicsAC424081000
Recombinant HIV1 gp120 + gp41 proteinAbcamab49054
Silver nitrateAcros OrganicsS181 25
Sodium borohydrideFisher ChemicalS678 10
Tetrachloroauric acidFisher ChemicalG54 1
TrehaloseAcros OrganicsNC9022655
Triethyl amineAcros OrganicsAC157910010

References

  1. . Global Immunization: Worldwide Disease Incidence Available from: https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view (2018)
  2. Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing cosmeceuticals. Organic and Biomolecular Chemistry. 17 (33), 7689-7693 (2019).
  3. Kumari, A., Yadav, S. K., Yadav, S. C. Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 75 (1), 1-18 (2010).
  4. Dai, C., Wang, B., Zhao, H. Microencapsulation peptide and protein drugs delivery system. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 41 (2-3), 117-120 (2005).
  5. Souery, W. N., et al. Controlling and quantifying the stability of amino acid-based cargo within polymeric delivery systems. Journal of Control Release. 300, 102-113 (2019).
  6. Wang, W. Advanced protein formulations. Protein Science. 24 (7), 1031-1039 (2015).
  7. Lee, J., et al. An ultraviolet-curable, core-shell vaccine formed via phase separation. Journal of Biomedical Materials Research Part A. , (2019).
  8. Kittler, S., Hickey, S. G., Wolff, T., Eychmüller, A. Easy and Fast Phase Transfer of CTAB Stabilised Gold Nanoparticles from Water to Organic Phase. Zeitschrift für Physikalische Chemie. 229, 235 (2015).
  9. Soliman, M. G., Pelaz, B., Parak, W. J., del Pino, P. Phase Transfer and Polymer Coating Methods toward Improving the Stability of Metallic Nanoparticles for Biological Applications. Chemistry of Materials. 27 (3), 990-997 (2015).
  10. Arun Kumar, S., Good, J., Hendrix, D., Yoo, E., Kim, D., Deo, K. A., Jhan, Y. Y., Gaharwar, A. K., Bishop, C. J. Nanoengineered Light-Activatable Polybubbles for On?Demand Therapeutic Delivery. Adv. Funct. Mater. , 2003579 (2020).
  11. Wuthrich, P., Ng, S. Y., Fritzinger, B. K., Roskos, K. V., Heller, J. Pulsatile and delayed release of lysozyme from ointment-like poly(ortho esters). Journal of Controlled Release. 21 (1), 191-200 (1992).
  12. Wang, W. Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals. International Journal of Pharmaceutics. 185 (2), 129-188 (1999).
  13. Wong, D. Y., Hollister, S. J., Krebsbach, P. H., Nosrat, C. Poly(epsilon-caprolactone) and poly (L-lactic-co-glycolic acid) degradable polymer sponges attenuate astrocyte response and lesion growth in acute traumatic brain injury. Tissue Engineering. 13 (10), 2515-2523 (2007).
  14. Davoodi, P., et al. Drug delivery systems for programmed and on-demand release. Advanced Drug Delivery Reviews. 132, 104-138 (2018).
  15. Huang, Y. C., Lei, K. F., Liaw, J. W., Tsai, S. W. The influence of laser intensity activated plasmonic gold nanoparticle-generated photothermal effects on cellular morphology and viability: a real-time, long-term tracking and monitoring system. Photochemical and Photobiological Sciences. 18 (6), 1419-1429 (2019).
  16. Link, S., Burda, C., Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. Laser-Induced Shape Changes of Colloidal Gold Nanorods Using Femtosecond and Nanosecond Laser Pulses. The Journal of Physical Chemistry B. 104 (26), 6152-6163 (2000).
  17. . Chlorine Available from: https://www.epa.gov/sites/production/files/2016-09/documents/chlorine.pdf (2000)

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

164 polybubble NIR

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved