نموذج سريع لتقييم إمكانات مكافحة السمنة من مزيج من العطرية Syzygium (القرنفل) والسموم الكمون (الكمون) على C57BL6/j الفئران تغذية النظام الغذائي الغني بالدهون

Summary

يقدم هذا العمل بروتوكولا لاستكشاف تأثير مكافحة السمنة لنبتين يستخدمان معا، لمدة 5 أسابيع. كان هناك إدارة مشتركة للمستخلص والنظام الغذائي الغني بالدهون (HFD) في الفئران البدينة. يمكن أن تعزز هذه الطريقة فوائد النباتات في علاج السمنة.

Abstract

وقد أظهرت العديد من الدراسات أن المحتويات الكيميائية النباتية للنباتات هي عوامل محتملة مضادة للسمنة. في هذه الدراسة ندرس تأثير استخدام مزيج من الأزرار الجافة من العطريات Syzygium والبذور من سيمينوم الكمون (CC) على الفئران C57BL6/J الناجمة عن السمنة عن طريق النظام الغذائي الغني بالدهون (HFD). والهدف من هذه الدراسة هو إثبات أن الطريقة المقترحة في الدراسة خفضت السمنة بشكل كبير بعد عدة أسابيع من التجارب. تم استخراج المقتطف من كلا النباتين باستخدام الموجات فوق الصوتية لتعزيز استخراج المواد الكيميائية النباتية. تم الحصول على ظروف الاستخراج الأمثل مع الإيثانول على النحو التالي: 50:50 v/v المياه مع قوة الموجات فوق الصوتية من 300 واط، ووقت ultrasonication من 30 دقيقة. أدى الإدارة المتزامنة لاستخراج CC في HFD لمدة 5 أسابيع إلى تنظيم ملامح الدهون (الكوليسترول والدهون الثلاثية) ، والحد من تناول الطعام ، وزيادة الوزن ، والأنسجة الدهنية ووزن الكبد. النتائج التي تم الحصول عليها من قبل هذا النموذج السمنة تشير إلى أن استخراج CC يمكن أن تمنع السمنة. بالمقارنة مع الطريقة التقليدية 16 أسابيع (8 أسابيع للحصول على الدهون، و 8 أسابيع لانقاص وزنه)، تم الحصول على نتائج مماثلة في نموذج السمنة الدراسة الحالية في وقت أقل من التجريب.

Introduction

تراكم الدهون الزائدة في الجسم هو سمة من سمات السمنة. عدم التوازن بين استهلاك الطاقة واستهلاكها يؤدي إلى تخزين الطاقة الزائدة في الخلايا الدهنية، والتي ترتبط بعوامل الخطر الأيضية لارتفاع السكر في الدم ومقاومة الأنسولين في مرض السكري من النوع 2، وارتفاع ضغط الدم، وارتفاع الكوليسترول في الدم، وأمراض القلب والأوعية الدموية^1،2.

المنتجات الطبيعية مع الحد الأدنى من الآثار الجانبية وانخفاض التكلفة قد تلقت اهتماما متزايدا منذ الدراسات السابقة وأفادت المواد الكيميائية النباتية النشطة بيولوجيا وعوامل مكافحة السمنة المحتملة مع الآليات التي عكس أو تأخير متلازمة التمثيل الغذائي والأمراض المرتبطة^{بها 8}.

وقد درست العديد من النباتات الطبية لمنع السمنة والأمراض ذات الصلة. من بينها، وقد تم التحقيق في العطرية Syzygium لقدرتها المضادة للسمنة في العلاج في المختبر على خلايا 3T3-L1 وفي علاج الجسم الحي على الفئران التي تتغذى على نظام غذائي عالي الدهون¹¹. وبالإضافة إلى ذلك، لوحظت آثار كبيرة لمكافحة زيادة الوزن في محاكمة مفتوحة متعددة المراكز من الكمونوم cyminum على مواضيع السمنة المفرطة¹². في هذه الدراسة، تم استخدام الفئران C57BL6/J للتحقيق في النموذج التجريبي السريع لتقييم عامل محتمل لمكافحة السمنة باستخدام مزيج من كل من النباتات الصالحة للأكل.

Protocol

وقد وافقت لجنة التجارب الحيوانية التابعة للجنة التجارب الحيوانية التابعة لهيئة علم الأحياء التابعة ل Escuela Nacional de Ciencias Biologicas على جميع التجارب على الحيوانات؛ البروتوكول رقم 2732).

1. إعداد استخراج مزيج من القرنفل والكمون

ملاحظة: تم شراء النباتات الصالحة للأكل، Syzygium العطرية (القرنفل) والكمونوم cyminum (الكمون) من وسط دي Abastos CDMX، المكسيك.

1. طحن 500 غرام من البذور من النباتات وأداء استخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية. Sonicate لهم (320 واط؛ 24 كيلوهرتز التردد، 30 دقيقة) مع الإيثانول: الماء (60:40 v/v) في نطاق درجة حرارة 30 ± 4 درجة^مئوية.
2. تصفية المواد الصلبة باستخدام Whatman رقم 2 ورقة تصفية تحت فراغ وتركيز استخراج مع المبخر الدوارة.
3. قياس الطيف الأشعة فوق البنفسجية فيس من استخراج كل من النباتات (CC).

2. الحيوانات

1. استخدام الذكور C57BL6/J الفئران من ستة أسابيع من العمر (48 في المجموع، وزن الجسم 24-29 غرام) للدراسة.
2. منزل الحيوانات في مجموعات من ثمانية في ظروف المختبر القياسية: درجة الحرارة (20-22 ± 1 درجة مئوية)، الرطوبة النسبية (45-54 ± 2٪)، والإضاءة (08:00-20:00 ساعة) مع الغذاء والماء الإعلان libitum. تأقلم الفئران في هذه الظروف لمدة أسبوع قبل التجربة.

3. إجراء تجريبي

1. إعداد النظام الغذائي الغني بالدهون¹⁴ كما هو الحال في الجدول 1.
2. في بداية الاختبار، تخضع كل مجموعة من المجموعات التي تشكلت (ن = 8) لعلاجات مختلفة: تغذية المجموعة 1 على نظام غذائي طبيعي. المجموعة 2، على نظام غذائي عالي الدهون. المجموعة 3, على نظام غذائي عالي الدهون + 100 ملغم/كغ من مستخلص CC; المجموعة 4، على النظام الغذائي الغني بالدهون + 250 ملغم/كغ من مستخلص CC. المجموعة 5، على النظام الغذائي الغني بالدهون + 450 ملغم/كغ من مستخلص CC. المجموعة 6، على النظام الغذائي الغني بالدهون + phentermine (دواء مضاد للتطفل يستخدم كسيطرة إيجابية)¹⁵.
3. إطعام جميع مجموعات الفئران لمدة 5 أسابيع وتسجيل كمية الطعام المستهلكة يوميا.
   1. في أنبوب اختبار مع سدادة، تجانس استخراج أو الدواء مع جرعة من الماء المقابلة للمجموعة التي تدار العلاج. ويتم ذلك مع دوامة شاكر.
   2. مرة واحدة متجانسة، إضافة كل العلاج المقابلة في شارب كل مجموعة.

4. جمع العينات

1. قياس كل من تناول الطعام ووزن الجسم مرة واحدة في الأسبوع. سرعة الفئران بين عشية وضحاها لمدة 5 أسابيع.
2. التضحية بهم عن طريق خلع عنق الرحم والنخر.
3. بعد التضحية بالفئران، شل حركتها في وضع ية.
4. باستخدام ملقط ومقص جراحي نظيف، حدد مكان الجلد المركزي ورفعه بالقرب من الأعضاء التناسلية واصنع شقا صغيرا بحجم 0.2 مم.
5. أدخل المقص المسطح أفقيا في الشق وفصل جلد البطن بعناية عن جدار البطن.
6. مع ملقط، ورفع الجلد المركزي ومع مقص الجراحية قطع عليه على مستوى القفص الصدري. ثم قطع الجلد فوق كل من الأطراف الخلفية لتسهيل جمع الأنسجة الدهنية.
7. ضمان جمع جميع الأنسجة الدهنية من الجسم عن طريق تشريح حاد مع مقص والملقط. مرة واحدة جمعت، ضع الأنسجة الدهنية في رقائق الألومنيوم. تذكر لجمع الدهون حول الأعضاء التناسلية. تجنب تراكم الشعر والجلد لعدم تغيير النتائج.
8. للوصول إلى الأنسجة الدهنية الحشوية، قطع عضلة البطن بمقص جراحي من الأعضاء التناسلية إلى القفص الصدري، مما يجعل شق في عضلات البطن من الأعضاء التناسلية نحو ظهر الماوس.
9. إجراء استئصال الكبد لإزالة 100٪ من الكبد. لتعكير الكبد، وإزالة الأعضاء غير الضرورية وقطع الأوردة الكبدية والشرايين لفصل الكبد عن بقية الجسم. كخطوة أخيرة، استخراج المرارة بدقة من الكبد¹⁶.
10. قياس ارتفاع الكولسترول في الدم (الكوليسترول) وارتفاع الدهون (الدهون الثلاثية) باستخدام مجموعات المقايسة التجارية وفقا لمؤشرات الشركة المصنعة.

5. التحليل الإحصائي

ملاحظة: يجب أن تكون جميع النتائج التجريبية ممثلة من ثلاثة مقايسات مستقلة، يتم التعبير عنها على أنها متوسط الانحراف المعياري ±.

1. حساب الخطأ القياسي مع تحليل ANOVA أحادي الاتجاه للتباين يليه اختبار نطاق Tukey. النظر في P< 0.05 كما ذات دلالة إحصائية.

النتائج

استخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية
وكان الشرط الأمثل لاستخراج الإيثانول: الماء (50:50، v/v) مع قوة الموجات فوق الصوتية من 300 W ووقت ultrasonication من 30 دقيقة. وبهذه الطريقة، كان الاستخراج أسرع من طرق الاستخراج التقليدية(الجدول 2). وأظهر المستخلص ذروة امتصاص مكثفة عند 320 نانومتر في أطيا...

Discussion

في هذه الدراسة قمنا بتقييم، لأول مرة، تأثير الإدارة عن طريق الفم من مزيج من القرنفل والكمون (CC) استخراج على ملامح الدهون والسمنة في الفئران التي تتغذى على نظام غذائي عالي الدهون لمدة 5 أسابيع. وأشارت النتائج إلى أن مجموعات HFD أظهرت زيادة وزن الجسم أعلى بكثير بالمقارنة مع مجموعة ND، والتي أظه?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Distilled Water	Any vendor	n/a	Available for other vendors as well
Ethanol	Fermont	6063	99.8% purity
Diet Ingredients
Casein	Any vendor	n/a
Cellulose	Any vendor	n/a
Centrum balance multivitamin	Pfizer	n/a
Choline Bitartrate	Any vendor	n/a
L- cystein	Sigma Aldrich	168149	Available for other vendors as well
Lard	Any vendor	n/a
Maltodextrin 10	Any vendor	n/a
Pellets Nutricubos	Purina	n/a	Available for other vendors as well
Soybean Oil	Any vendor	n/a
Sucrose	Any vendor	n/a
Extraction Equipment
Rotavapor	Buchi	R-300
Shimadzu UV-1800 UV/Visible Scanning Spectrophotometer	Cole Parmer	T-83400-20	Available for other vendors as well
Ultrasonic Unit	Elma	TI-H-20	Available for other vendors as well
Vacuum pump	Buchi	V-100