JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

وقد استوفت سقالة DOX-CL المعدة الشروط المسبقة لارتداء ملابس DW مثالية في القوة الميكانيكية والمسامية وامتصاص المياه ومعدل التدهور والإفراج المستمر والتوافق البيولوجي المضاد للبكتيريا والخصائص المضادة للالتهابات ، والتي تعتبر ضرورية لاستعادة الأنسجة التالفة في DWs.

Abstract

أحد المضاعفات الرئيسية لمرض السكري هو الجروح السكرية (DW). المرحلة المطولة من الالتهاب في مرض السكري يعوق مراحل أخرى من إصابة مما يؤدي إلى تأخر التئام الجروح. اخترنا دوكسيسيكلين (DOX) ، كدواء محتمل للاختيار ، بسبب خصائصه المضادة للبكتيريا إلى جانب خصائصه المضادة للالتهابات المبلغ عنها. تهدف الدراسة الحالية إلى صياغة سقالات دوكس المحملة بالكولاجين-الشيتوزان غير المترابطة (NCL) والمتشابكة (CL) وتقييم قدرتها على الشفاء في حالات السكري. تكشف نتيجة توصيف السقالات أن سقالة DOX-CL تحمل مسامية مثالية ، ومعدل تورم وتدهور منخفض ، وإطلاق مستمر من DOX مقارنة بسقالة DOX-NCL. تكشف الدراسات المختبرية أن سقالة DOX-CL كانت متوافقة بيولوجيا ونموا معززا للخلايا مقارنة بسقالات CL المعالجة ومجموعات التحكم. وقد أظهرت الدراسات المضادة للبكتيريا أن سقالة DOX-CL كانت أكثر فعالية من سقالة CL ضد البكتيريا الأكثر شيوعا الموجودة في DW. باستخدام نموذج العقديات والحمية عالية الدهون الناجمة عن DW ، لوحظ معدل أسرع بشكل ملحوظ (p≤0.05) من تقلص الجروح في المجموعة المعالجة بسقالة DOX-CL مقارنة بتلك الموجودة في سقالة CL المعالجة ومجموعات التحكم. يمكن أن يثبت استخدام سقالة DOX-CL أنه نهج واعد للعلاج المحلي ل DWs.

Introduction

مرض السكري (DM) هو حالة حيث فشل الجسم في تقديم الأنسولين أو التفاعل مع نتائجه في الهضم غير طبيعي من السكريات واضحة يجلب طفرة في جلوكوز الدم 1. التشابك الأكثر تتاليا وسحقا من DM هو الجرح السكري (DW). ما يقرب من 25٪ من المرضى الذين يعانون من DM لديهم الفرصة لبناء DW في حياتهم 1. الشفاء يعوق DW معتمد لاعتلال ثلاثي من DM: اعتلال المناعة, اعتلال الأوعية الدموية, واعتلال الأعصاب. كلما تركت DW دون علاج، فإنه قد يؤدي إلى تطوير الغرغرينا، مما دفع بالتالي إزالة الجهاز المعني 2.

الكثير من العلاجات، مثل إرشاد المرضى (فحص الجرح يوميا، تطهير الجرح، وتجنب الأنشطة التي تخلق الضغط على الجرح، ومراقبة الجلوكوز الدوري، الخ)، والسيطرة على جلوكوز الدم، و debridement الجرح، تفريغ الضغط، الإجراء الطبي، العلاج بالأوكسجين عالي الضغط، والعلاجات المتقدمة هي في الممارسة 3،4. غالبية هذه الأدوية تفشل في تلبية جميع الشروط الأساسية الحيوية لرعاية DW في ضوء الظروف المرضية المرضية متعددة العوامل والنفقات غير المتوقعة المتعلقة بهذه الأدوية 5. على الرغم من أن مرض DW متعدد العوامل ، إلا أن الالتهاب المستمر مع إدارة الأنسجة غير الملائمة ذكر أنه السبب الفعلي لتأخر الشفاء في DWs 5،6.

المستويات المعززة من الوسطاء الالتهابيين والمؤيدين للالتهابات في DW تؤدي إلى انخفاض عوامل النمو المسؤولة عن تأخر التئام الجروح 2،6. اعتماد تشكيل مصفوفة خارج الخلية غير صحيح (ECM) في DWs لزيادة مستويات metalloproteinases مصفوفة (MMPs) مسؤولة عن التدهور السريع لهذه الإدارة شكلت. في MMPs، يتم الإبلاغ عن MMP-9 كوسيط رئيسي مسؤول عن الالتهاب لفترات طويلة وتدهور ECM السريع 7. يذكر أن العلاج المحلي مع دواء مضاد للالتهابات يقلل من مستويات مرتفعة من MMP-9 يعيد تأسيس التوازن الجلدي، وترتيب الإطار ويطالب الشفاء أفضل من DWs 8،9.

تم اختيار Doxycycline (DOX) ، وهو مثبط MMP-9 ، لقمع المستويات المرتفعة من MMP-9 ، وهو وسيط التهاب رئيسي مسؤول عن الالتهاب المستمر في DWs 10و11و12. وبالإضافة إلى ذلك، DOX تمتلك مضادات الأكسدة (إنتاج الحرة هيدروكسي والجذور فينوكسي قادرة على ربط مع أنواع الأكسجين التفاعلي) 13 ومكافحة أبوبتوتيك (تمنع التعبير كاسباس واستقرار الميتوكوندريا) 14 الأنشطة التي تعتبر ضرورية لعلاج DW. تم اختيار ترتيب الأطر التي تحتوي على DOX والكولاجين (COL) والشيتوزان (CS). اختيار COL يعتمد على الطريقة التي يساعد في توفير الإطار اللازم المسؤول عن القوة الميكانيكية وتجديد الأنسجة 15. من ناحية أخرى، CS هو متجانسة هيكليا لغليكوسامينوغليكان، المرتبطة عدة مراحل التئام الجروح. وتفيد التقارير أيضا أن CS يحمل خاصية كبيرة مضادة للبكتيريا 15. وبالتالي ، يتم صياغة سقالة COL / CS من DOX لقمع الالتهاب المطول ، يليه دعم تشكيل المصفوفة لتضميد الجروح بنجاح في ظروف DM.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية التي أجريت من قبل اللجنة الأخلاقية الحيوانية المؤسسية لكلية JSS للصيدلة ، Ooty ، الهند.

1. إعداد DOX تحميل السقالات المسامية عن طريق طريقة تجميد التجفيف

  1. أضف 1.2 غرام من كول إلى 100 مل من الماء (على سبيل المثال، ميليبور) والحفاظ على جانبا لتورم.
  2. حرك تشتت COL المتورم في 2000 دورة في الدقيقة بين عشية وضحاها لضمان الانحلال الكامل ل COL.
  3. إعداد محلول CS عن طريق حل ما يقرب من 0.8 غرام من CS في 100 مل من حمض الخليك 1٪.
  4. قم بتحريك حل CS بين عشية وضحاها عند 2000 دورة في الدقيقة لضمان التشتت الموحد.
  5. مزيج DOX (1٪ ث / v)، تليها حل CS، إلى حل COL، ويحرك لمدة 30 دقيقة.
  6. تصفية الخليط المادي الذي تم الحصول عليه باستخدام قطعة قماش الموسلين لإزالة الجسيمات.
  7. تجميد عميق في filtrate التي تم الحصول عليها في -85 درجة مئوية ± 4 درجة مئوية لحوالي 24 ساعة.
  8. Lyophilize خليط التجميد العميق في -85 درجة مئوية ± 4 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.
  9. تخزين السقالات التي تم الحصول عليها في desiccator لمزيد من التحليل 16،17.

2. الربط المتبادل من سقالة

  1. حل MES (0.488 غرام) في 50 مل من الماء.
  2. نقع 50 ملغ من سقالة DOX محملة في 20 مل من العازلة MES لمدة 30 دقيقة.
  3. امزج 19.5 مل من المخزن المؤقت ل MES مع 0.1264 جرام من EDC و0.014 جرام من NHS في كوب منفصل.
  4. تزج السقالة في خليط العازلة لمدة 4 ساعة لتحقيق crosslinking 16.
  5. تخزين DOX تحميل السقالات (CL) وغير مترابطة (NCL) لمزيد من التقييم.

3. توصيف السقالات

  1. الفحص المورفولوجي باستخدام المجهر الإلكتروني المسح الضوئي (SEM)
    1. تميز السقالات للتحليل المورفولوجي باستخدام SEM (1 سم × 1 سم × 0.5 سم).
    2. وصمة عار المقطع العرضي والسطح الخارجي للسقالة مع طبقة حساسة من الذهب (~ 150 Å).
    3. التقط الصورة الفوتوغرافية بجهد الإثارة الذي قدره 5 كيلو فولت و10 كيلو فولت.
    4. ضع العينات في كعب الألومنيوم وأرفقها بالذهب في حوالي 9 فولت.
    5. قياس سقالة باستخدام SEM مع زيادة القرار في 10 كيلو فولت.
  2. تحديد المسامية
    1. قياس المسامية من السقالات باستخدام طريقة التشريد السائل (الإيثانول) 18.
    2. حساب المسامية من السقالات باستخدام الصيغ أدناه.
      figure-protocol-2326
      Ww = الوزن الرطب للسقالة
      Wd = الوزن الجاف للسقالة
      Wv = حجم السقالة
  3. تحديد قدرة امتصاص المياه
    1. قياس الوزن الجاف للسقالة.
    2. احتضان السقالة وزنها في 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في الفوسفات العازلة المالحة (PBS) درجة الحموضة 7.4.
    3. إزالة برنامج تلفزيوني الزائدة على السقالة باستخدام ورقة التصفية.
    4. قياس قدرة امتصاص المياه باستخدام الصيغ أدناه 17.
      figure-protocol-2861
      WS = النسبة المئوية لامتصاص الماء
      W1= وزن الرطب من السقالة
      W0= الوزن الجاف للسقالة
  4. تدهور السقالة
    1. احتضان السقالة (1cm × 1cm) في 37 درجة مئوية لمدة 7 أيام في برنامج تلفزيوني من درجة الحموضة 7.4 التي تحتوي على lysozymes.
    2. غسل السقالة لإزالة أي أيونات ملتصقة على السطح.
    3. تجميد الجافة سقالة غسلها 17.
    4. حساب معدل التدهور باستخدام الصيغ.
      figure-protocol-3389
      Ww = الوزن الأولي للسقالة
      WD = وزن السقالة بعد تجميد التجفيف
  5. دراسات إطلاق المختبر
    1. تحديد سلوك الافراج عن DOX من سقالة باستخدام طريقة كيس غسيل الكلى.
    2. تفريق السقالة في بضع ملليلترات من السائل الجرح محاكاة (pH 7.4) ونقله إلى كيس غسيل الكلى.
    3. أغلق بإحكام نهايات كيس الغشاء وانغمس في 500 مل من محلول سائل الجرح المحاكي.
    4. حرك محلول سائل الجرح الذي يحتوي على كيس غسيل الكلى عند 200-250 دورة في الدقيقة.
    5. جمع الحل supernatant واستبداله بكمية متساوية من محلول المخزن المؤقت الطازجة في فترات زمنية محددة.
    6. تحديد النسبة المئوية لإطلاق DOX من السقالات في محلول فائق التناسخ باستخدام مطياف الأشعة فوق البنفسجية المرئية في 240 نانومتر.

4. في المختبر دراسات مضادة للبكتيريا

  1. تحديد الحد الأدنى من تركيز المثبطة (MIC) من CL و DOX-CL السقالات ضد S. أوريوس, S. البشرة, E. القولونية, P. aeruginosa باستخدام طريقة تخفيف مرق الصغيرة.
  2. إعداد الثقافات البكتيرية باستخدام مرق مولر هينتون بنسبة 1:1000 للحصول على 0.5 عكر ماكفارلاند.
  3. إضافة د الجلوكوز (800 ملغ / ديسيلت) إلى الثقافات البكتيرية لفرط السكر 19،20.
  4. Mince و solubilize وCL و DOX-CL في DMSO (التحكم السلبي).
  5. تخفيف التعليق البكتيري مفرط الغليكة (100 ميكرولتر) عينات الاختبار (100 ميكرولتر من محلول السقالات) في 96 لوحة بئر.
  6. احتضان لوحة في 37 درجة مئوية لمدة 20-24 ساعة.
  7. تسجيل امتصاص في الطول الموجي من 600 نانومتر 21.

5. في المختبر دراسات التوافق البيولوجي

  1. تقييم التوافق البيولوجي للسقالات المعدة باستخدام MTT [(3-(4، 5 ثنائي ميثيل ثيازول-2 yl) -2، 5-ديفينيل رباعي البروميد)] المقايسة.
  2. تعقيم السقالات من البعد القياسي ووضعها في 24 لوحات البئر.
  3. إضافة خلايا 3T3-L1 إلى لوحة البئر 24 واحتضانها لمدة 72 ساعة.

6. في الدراسات الحيوانية في الجسم الحي

  1. تحريض DM والجرح استئصال
    1. إطعام الحيوان مع اتباع نظام غذائي عالي الدهون لمدة أسبوعين وإعطاء جرعة واحدة من streptozotocin (STZ) (50 ملغ / كجم وزن الجسم) في محلول عازل سيترات intraperitoneally للفئران المهق ويستار (180-200 غرام) لتحريض مرض السكري من النوع 2.
    2. اختيار الحيوانات مع جلوكوز الدم المستمر من 250 ملغ / ديسيلت للدراسة.
    3. عشوائية الحيوانات المختارة لتحريض جروح ختان الأعصاب.
    4. تخدير الفئران السكري باستخدام الأثير diethyl (تمت إضافة 5 مل إلى غرفة التخدير المشبعة مسبقا) وتأكيد استخدام طريقة قرصة إصبع القدم ولون الغشاء المخاطي.
    5. حلق المنطقة الظهرية (الصدر الظهري، المنطقة القطنية) باستخدام أداة تشذيب وشفرات مطهرة (A40).
    6. تعقيم منطقة حلق مع مسحة الكحولية.
    7. استئصال الجلد (2 × 2 سم2 وعمق 1 ملم) مع شفرة A40 الجراحية العقيم على منطقة حلق لخلق جرح مفتوح.
    8. تقسيم الحيوانات إلى ثلاث مجموعات (المجموعة 1- السيطرة على الأمراض (السيطرة)، المجموعة 2- سقالة CL (وهمي)، المجموعة 3- سقالة DOX CL)، كل مجموعة تتكون من 6 فئران.
    9. لصق سقالات CL و DOX CL باستخدام الشريط الجراحي وتغطية مجموعة التحكم بالشاش العقيم لمدة 21 يوما.
    10. تتبع منطقة الجرح على ورقة OHP معقمة وقياس النسبة المئوية للحد من الجرح باستخدام طريقة الشبكة في الأيام 0 و 7 و 14 و 21 لجميع المجموعات.
    11. حساب نسبة الحد من الجرح باستخدام الصيغ أدناه.
      figure-protocol-6818

7. الدراسات الهستوباثولوجية

  1. عزل منطقة الجرح تلتئم في أيام 7, 14, و 21, تخزين في حل الفورماتين (10٪).
  2. قسم الأنسجة باستخدام microtome للحصول على سمك 6 ميكرومتر.
  3. جبل المقاطع على شريحة زجاجية وصمة عار باستخدام Hematoxylin وeosin 17.
  4. التقط الصور تحت تكبير 40x باستخدام مجهر رقمي.

8. تقدير هيدروكسي برولين

  1. عزل منطقة الجرح الملتئم في الأيام 0 و 7 و 14 و 21 للتقييم.
  2. تقدير محتوى الهيدروكسي برولين باستخدام الإجراء الذي وصفه ريدي G وآخرون، 1996 22.

9. اختبار إليسا

  1. تقدير مستويات MMP-9 باستخدام مجموعة إليسا وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  2. عزل عينات الأنسجة من منطقة الجرح تلتئم في اليوم 21 ومفروم باستخدام متجانس الأنسجة.
  3. الطرد المركزي المتجانسة التي تم الحصول عليها وجمع supernatant.
  4. تمييع supernatant في 100 أضعاف باستخدام المخزن المؤقت المقايسة.
  5. مسح اللوحة ضوئيا باستخدام قارئ لوحة متعددة.

10. التحليل الإحصائي

  1. تمثيل النتائج التي تم الحصول عليها على أنها متوسط ± SD.
  2. إجراء التحليل الإحصائي باستخدام المنشور لوحة الرسم البياني v5.01.
  3. تحقيق الأهمية الإحصائية باستخدام تحليل اتجاه واحد للتباين (ANOVA) واختبار Dunnet اللاحق.
  4. النظر في القيم مع p≤0.05 كما كبيرة.

النتائج

توصيف DOX تحميل NCL وسقالة CL
على الفحص البصري، تم العثور على سقالة NCL وCL أن يكون كريم في اللون. الى جانب ذلك ، يبدو أن كلا السقالات مثل الإسفنج ، قاسية وغير متانة عند فحصها جسديا. تظهر صور SEM لسقالات NCL وCL في الشكل 1. ومن هذا الرقم، كان من الواضح أن هناك انخفاضا في حجم الم...

Discussion

وكان الهدف الرئيسي من هذه الدراسة لتحديد تأثير DOX تحميل COL-CS سقالة على DW الشفاء في الفئران. تم إعداد CL و NCL وتقييمها من حيث مورفولوجيا، مؤشر تورم، في الحركية الافراج في المختبر، والتوافق البيولوجي.

توصيف DOX تحميل NCL وسقالة CL
تم العثور على السقالات المعدة لتكون مسامي?...

Disclosures

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون الدكتور أشيش د وضواني. (أستاذ مساعد ورئيس قسم التكنولوجيا الحيوية الصيدلانية، كلية JSS للصيدلة، أوتي، الهند) للمساعدة في دراسات جدوى الخلايا المختبرية.

ويود المؤلفون أن يشكروا قسم العلوم والتكنولوجيا - صندوق تحسين البنية التحتية للعلوم والتكنولوجيا في الجامعات ومؤسسات التعليم العالي (DST-FIST)، نيودلهي، لدعم قسمنا.

كما يود أصحاب البلاغ أن يشكروا السيد سانجو. (س) والسيد (سريرام) Narukulla M. فارم الطلاب لدعمهم في تبادل لاطلاق النار الفيديو.

تم دعم هذا البحث من قبل أكاديمية JSS للتعليم العالي والبحوث (JSSAHER).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1-ethyl-(3-3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)Merck Millipore, Mumbai, IndiaE7750
2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid (MES)Merck Millipore, Mumbai, India137074
3-(4, 5 dimethyl thiazole-2 yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)Thermo Fisher, Mumbai, IndiaM6494
Deep freezer verticleLabline Instruments, Kochi, India
Dialysis sackMerck Millipore, Mumbai, IndiaD6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da
DoxycyclineSigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, IndiaD9891
Elisa kitR&D SystemsRMP900
Escherichia coli (E. coli)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 2567
EthanolMerck Millipore, Mumbai, India100983
Lyophilizer-SZ042Sub-Zero lab instruments, Chennai, India
Mechanical Stirrer-RQ-122/DRemi laboratory instruments, Mumbai, India
Medium molecular weight ChitosanSisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India18824
Microtome-RM2135Leica, U.K
Mouse embryonic fibroblast cells (3T3-L1)National Centre for Cell Sciences, Pune, India
Multiple plate reader -Inifinte M200 ProTecan Instruments, Switzerland
N-hydroxy succinimide (NHS)Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India130672
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 2036
Scanning Electron Microscopy (SEM)-S-4800Hitachi, India
Sodium hydroxide (NaOH) pelletsQualigen fine chemicals, Mumbai, IndiaQ27815
Staphylococcus aureus (S. aureus)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 5022
Staphylococcus epidermis (S. epidermis)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 5270
Streptozotocin (STZ)Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India14653
Type-1 rat CollagenSigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, IndiaC7661
Ultraviolet–visible spectroscopy-1700Shimadzu

References

  1. . IDF Diabetes Atlas, 9th edn Available from: https://www.diabetesatlas.org (2019)
  2. Falanga, V. Wound healing and its impairment in the diabetic foot. The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).
  3. Frykberg, R. G., Banks, J. Challenges in the treatment of chronic wounds. Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).
  4. Alexiadou, K., Doupis, J. Management of diabetic foot ulcers. Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).
  5. Karri, V. V. S. R., et al. Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers. Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).
  6. Sanapalli, B. K., et al. Human beta defensins may be a multifactorial modulator in the management of diabetic wound. Wound Repair and Regeneration. 28 (3), 416-421 (2020).
  7. Caley, M. P., Martins, V. L., O'Toole, E. A. Metalloproteinases and wound healing. Advances in Wound Care. 4 (4), 225-234 (2015).
  8. Reiss, M. J., et al. Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model. Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).
  9. Gill, S. E., Parks, W. C. Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 40 (6-7), 1334-1347 (2008).
  10. Stechmiller, J., Cowan, L., Schultz, G. The role of doxycycline as a matrix metalloproteinase inhibitor for the treatment of chronic wounds. Biological Research for Nursing. 11 (4), 336-344 (2010).
  11. Griffin, M. O., Fricovsky, E., Ceballos, G., Villarreal, F. Tetracyclines: a pleitropic family of compounds with promising therapeutic properties. Review of the literature. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (3), 539-548 (2010).
  12. Burns, F., Stack, M., Gray, R., Paterson, C. Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (7), 1569-1575 (1989).
  13. Kraus, R. L., et al. Antioxidant properties of minocycline: neuroprotection in an oxidative stress assay and direct radical-scavenging activity. Journal of Neurochemistry. 94 (3), 819-827 (2005).
  14. Yrjänheikki, J., Keinänen, R., Pellikka, M., Hökfelt, T., Koistinaho, J. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotective in global brain ischemia. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (26), 15769-15774 (1998).
  15. Moura, L. I., Dias, A. M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review. Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).
  16. Natarajan, J., et al. Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing. Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).
  17. Karri, V. V. S. R., et al. Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing. International Journal Of Biological Macromolecules. 93, 1519-1529 (2016).
  18. Hsieh, W. -. C., Chang, C. -. P., Lin, S. -. M. Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).
  19. Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition. Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).
  20. Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. I. Effect of glucose and pH on uropathogenic and non-uropathogenic Escherichia coli: studies with urine from diabetic and non-diabetic individuals. Journal of Medical Microbiology. 48 (6), 535-539 (1999).
  21. Eloff, J. N. A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria. Planta Medica. 64 (8), 711-713 (1998).
  22. Reddy, G. K., Enwemeka, C. S. A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues. Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).
  23. Charulatha, V., Rajaram, A. Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes. Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).
  24. Rehakova, M., Bakoš, D., Vizarova, K., Soldán, M., Jurícková, M. Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking. Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).
  25. Chang, M. -. Y., et al. Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).
  26. Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).
  27. Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. Clinical Perspective. Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).
  28. Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass. International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

174

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved