JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف البروتوكول الحالي تقييم تخطيط صدى القلب لمورفولوجيا البطين الأيسر ووظيفته وتدفق الدم التاجي في الفئران حديثي الولادة البالغة من العمر 7 أيام.

Abstract

تخطيط صدى القلب هو إجراء غير جراحي يتيح تقييم المعلمات الهيكلية والوظيفية في النماذج الحيوانية لأمراض القلب والأوعية الدموية ويستخدم لتقييم تأثير العلاجات المحتملة في الدراسات قبل السريرية. عادة ما يتم إجراء دراسات تخطيط صدى القلب في الفئران البالغة الشابة (أي 4-6 أسابيع من العمر). لا يتم إجراء تقييم وظيفة القلب والأوعية الدموية المبكرة لحديثي الولادة عادة بسبب صغر حجم صغار الفئران والصعوبات الفنية المرتبطة بها. أحد أهم التحديات هو أن الطول القصير لأطراف الجراء يمنعهم من الوصول إلى الأقطاب الكهربائية في منصة تخطيط صدى القلب. درجة حرارة الجسم هي التحدي الآخر ، حيث أن الجراء معرضون جدا للتغيرات في درجة الحرارة. لذلك ، من المهم إنشاء دليل عملي لإجراء دراسات تخطيط صدى القلب في جراء الفئران الصغيرة لمساعدة الباحثين على اكتشاف التغيرات المرضية المبكرة ودراسة تطور أمراض القلب والأوعية الدموية بمرور الوقت. يصف العمل الحالي بروتوكولا لأداء تخطيط صدى القلب في جراء الفئران في سن مبكرة من عمر 7 أيام. كما تم وصف توصيف تخطيط صدى القلب لمورفولوجيا القلب ووظيفته وتدفق الشريان التاجي في الفئران الوليدية.

Introduction

الهدف العام من هذا البروتوكول هو فحص مورفولوجيا القلب ووظيفته وتدفق الشريان التاجي في جراء الفئران حديثي الولادة البالغة من العمر 7 أيام باستخدام تخطيط صدى القلب. الأساس المنطقي وراء تطوير هذه التقنية هو تحديد التغيرات المبكرة في تدفق الشريان التاجي ووظيفة القلب في نماذج الفئران من أمراض القلب1. تعتبر الطبيعة غير الغازية لتخطيط صدى القلب مفيدة لأنها تسمح للباحثين بتقييم وظيفة القلب والأوعية الدموية في ظل الظروف الفسيولوجية وتوفر للباحثين أداة فحص لدراسة العلاجات المستهدفة لعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية 2,3. تقليديا ، يتم إجراء دراسات تخطيط صدى القلب مع الفئران البالغة الشابة (4-6 أسابيع) ؛ ومع ذلك ، فإن بعض نماذج الفئران (أي النماذج المعدلة وراثيا) تظهر بالفعل تغيرات مرضية واختلال وظيفي في القلب في هذا العصر. لذلك ، ركزت أبحاث القلب باستخدام النماذج الحيوانية في المقام الأول على العوامل العلاجية التي تعمل على تحسين أو علاج ضعف القلب. في المقابل ، في الآونة الأخيرة ، تم إعادة توجيه الجهود البحثية للتركيز على التدابير الوقائية والتدخلات المبكرة في أمراض القلب4.

وصفت الدراسات السابقة استخدام تخطيط صدى القلب لقياس وظيفة القلب في نماذج احتشاء عضلة القلب في الفئران حديثي الولادة 5,6; ومع ذلك ، فشلت هذه الدراسات في قياس تدفق الشريان التاجي ، والأهم من ذلك ، فشلت في تسجيل بيانات مخطط كهربية القلب (ECG) ومعدل ضربات القلب (HR) أثناء العملية ، على الأرجح بسبب صغر حجم أطراف الجراء ، والتي لم تستطع الوصول إلى منصات القطب. نتغلب على هذه المشكلة في هذا البروتوكول عن طريق ربط رقائق الألومنيوم بالأطراف لتمكينها من الوصول إلى وسادات القطب وإنشاء دائرة تخطيط القلب. علاوة على ذلك ، يصف هذا البروتوكول ويميز تدفق الشريان التاجي في الفئران حديثي الولادة.

حصلت هذه الدراسة على صور B-mode و M-mode في مناظر المحور الطويل والقصير لقياس المعلمات الهيكلية والوظيفية 2,3. تضمنت المعلمات المورفولوجية الأبعاد الأذينية اليسرى ، وأبعاد البطين الأيسر (LV) ، وسمك جدار LV ، وكتلة LV ، وسمك الجدار النسبي (RWT). تضمنت المعلمات الوظيفية الكسر القذفي (EF) ، والتقصير الجزئي (FS) ، والنتاج القلبي (CO) ، وسرعة تقصير الألياف المحيطية (Vcf). تم استخدام دوبلر موجة النبض (PW) لقياس تدفق الأبهر في عرض المحور القصير شبه القصي (PSAX) ولقياس تدفق الدم التاجي في المنظر القمي المكون من أربع غرف. تم استخدام المنظر القمي المكون من أربع غرف أيضا لأداء دوبلر الأنسجة في الجزء الحاجز من حلقة الصمام التاجي. كما تم فحص التدفق التاجي في الشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط (LAD) باستخدام عرض المحور الطويل شبه القصي المعدل (PLAX). تم حساب احتياطي التدفق التاجي (CFR) بعد تحدي الإجهاد الناجم عن زيادة تركيز الأيزوفلوران.

يوضح البروتوكول الحالي أنه يمكن إجراء دراسات تخطيط صدى القلب في سن مبكرة جدا في الفئران حديثي الولادة ، مما يسمح بالتعرف المبكر على أمراض القلب ودراسات المتابعة الطولية لديناميكا الدم LV ومعلمات التدفق التاجي في نماذج الفئران المختلفة. يمكن استخدام هذه التقنية لدراسة دور التغيرات الجينية أو التدخلات الدوائية في وظيفة القلب في الأعمار المبكرة بعد الولادة. علاوة على ذلك ، يوفر البروتوكول أداة قيمة لتحديد ظهور أمراض القلب في وقت مبكر من الحياة ، وبالتالي تمكين الباحثين من إطلاق الآليات الجزيئية الكامنة وراء المراحل الأولية لأمراض القلب في نماذج الفئران المختلفة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان بجامعة إلينوي في شيكاغو. بالنسبة للتجارب ، تم استخدام فئران FVB / N البالغة من العمر 7 أيام. ينقسم البروتوكول إلى إعداد الماوس ، والحصول على صورة تخطيط صدى القلب ، ورعاية الحيوانات بعد التصوير.

1. إعداد الماوس

  1. الحصول على الفئران البالغة من العمر 7 أيام من قفص التكاثر.
    ملاحظة: في هذه السن المبكرة ، من الصعب تحديد جنس الحيوان عن طريق الفحص البدني.
  2. ضع جل ECG (انظر جدول المواد) على وسادات القطب الكهربائي للمنصة الدافئة. ضع شرائط رقائق الألومنيوم (~ 1.5 بوصة × 0.25 بوصة) أعلى وسادات القطب لتوسيع نطاق القطب وتأمينه بشريط (الشكل 1 أ). بعد ذلك ، ضع جل ECG أعلى شرائط رقائق الألومنيوم.
    ملاحظة: تأكد من أن الجل الموجود أسفل شرائط رقائق الألومنيوم لا يجف أثناء العملية. إذا حدث ذلك ، أضف المزيد من الجل للحفاظ على الموصلية.
  3. اقطع إصبعا من قفاز النتريل وقم بتركيبه لتغطية كل من مخروط أنف الأيزوفلوران / الأكسجين على جانب واحد وأنف الفأر على الجانب الآخر (الشكل 1 ب).
  4. ضع جرو الفأر في غرفة تحريض الأيزوفلوران وابدأ توصيل الأيزوفلوران بتركيز 2.5٪ مدفوعا بأكسجين 100٪ (الشكل 1C).
  5. ضع الجرو المخدر في وضع ضعيف على منصة التصوير مع وضع الكفوف أعلى وسادات رقائق الألومنيوم وثبتها بشريط. تأكد من اكتمال الدائرة الكهربائية وتسجيل مخطط كهربية القلب.
  6. تقليل توصيل الأيزوفلوران إلى 1.5٪ مدفوعا بالأكسجين بنسبة 100٪. ثبت الإصبع المقطوع من القفاز حول أنف الجرو بشريط لاصق. تأكد من عمق التخدير عن طريق قرص الكفوف الجرو.
  7. ضع طبقة سميكة من جل الموجات فوق الصوتية الدافئة مسبقا فوق الجزء العلوي من جسم الجرو. استخدم لفافتين من الشاش للحفاظ على هلام الموجات فوق الصوتية في مكانه (الشكل 1 د).
  8. استخدم مصباح تسخين للحفاظ على درجة حرارة جسم الجرو الطبيعية (الشكل 1E).
    ملاحظة: لم يتم استخدام مسبار المستقيم لمراقبة درجة حرارة الجسم في الدراسة الحالية بسبب صغر حجم الجرو.

2. الحصول على صورة تخطيط صدى القلب وتحليلها

  1. إجراء تخطيط صدى القلب عبر الصدر باستخدام أداة تخطيط صدى القلب مجهزة بمحول صفيف خطي عند 40 ميجاهرتز للوضع B وعند 32 ميجاهرتز لدوبلر (معدل الإطارات 233) (انظر جدول المواد) ، باتباع بروتوكولات تخطيط صدى القلب للفئران البالغة7،8،9.
  2. تجنب الضغط المفرط على تجويف صدر الجرو عند وضع محول الصدى أثناء الحصول على صورة تخطيط صدى القلب.
    ملاحظة: نظرا لصغر حجم الجرو ، قد يؤدي وزن محول الطاقة نفسه إلى تغيير وظائف القلب أو الوفاة.
  3. التقط منظر PLAX لمجرى تدفق البطين الأيسر والأذين الأيسر.
    1. ضع محول الطاقة في الحامل ، مع وضع علامة الفهرس باتجاه الكتف الأيمن للجرو.
    2. اخفض محول الطاقة حتى يتلامس مع الجل وتصور مجرى تدفق البطين الأيسر في الوضع B (الشكل 2 أ).
    3. استخدم الوضع M في وريقات الأبهر لقياس الحد الأقصى لقطر الأذين الأيسر (LA) عند نهاية الانقباض (الشكل 2 ب ، الجدول 1). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات.
  4. التقط منظر PSAX للبطين الأيسر لقياس أبعاد الحجرة وسمك الجدار وتدفق الأبهر والتدفق الرئوي.
    1. قم بتدوير محول الطاقة ~ 90 درجة في اتجاه عقارب الساعة من PLAX للحصول على عرض PSAX.
    2. ضع المسبار على مستوى العضلات الحليمية واستخدم الوضع M لقياس الأقطار الداخلية للبطين الأيسر (LVID) ، وسمك الحاجز بين البطينين (IVS) ، و PW أثناء الانقباض والانبساط (الشكل 3 أ ، الجدول 1). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات.
    3. احسب RWT ، وهو مؤشر تضخم ، باستخدام أبعاد الغرفة الانبساطية على النحو التالي 3,10:
      (PW + IVS في نهاية الانبساط) / (LVID في نهاية الانبساط)
    4. حرك الترجام باتجاه قاعدة القلب واستخدم الدوبلر الملون لتصور الشريان الرئوي. اضغط على PW Doppler لتحديد سرعة تدفق الذروة الرئوية ، وملامح التدفق الرئوي ، ووقت الطرد الرئوي (PET) ، ووقت التسارع الرئوي (PAT) 11,12 (الشكل 3B). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات.
    5. حرك الترجام أكثر نحو القاعدة واستخدم دوبلر الملون لتصور تدفق الأبهر (الشكل 3C). استخدم PW Doppler لتصور تدفق الدم وقياس وقت طرد الأبهر (AET). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات.
    6. احسب Vcf (circ / sec) 13،14 ، وهو مؤشر لأداء عضلة القلب ، باستخدام انبساط نهاية LVID (LVIDd) ، و LVID نهاية الانقباض (LVIDs) ، و AET على النحو التالي (الجدول 1):
      (LVIDd - LVIDs) / (LVIDd × AET)
  5. التقط المنظر القمي المكون من أربع غرف.
    1. ضع المنصة في وضع Trendelenburg ، وقم بإمالتها إلى اليسار ، واضبط المسبار لتصور الغرف الأربع (الشكل 4 أ).
    2. استخدم دوبلر ملون لتصور تدفق الدم و PW دوبلر عند طرف وريقات الصمام التاجي في وسط فتحة الصمام التاجي لتسجيل التدفق التاجي. اضغط على Cine Store لتسجيل البيانات.
    3. في طريقة العرض هذه ، احسب المعلمات التالية2،3،10 (الشكل 4B والجدول 1):
      1. احسب نسبة E/A، وهي السرعة القصوى لتدفق الدم في المرحلة المبكرة من الانبساط (E) على السرعة القصوى لتدفق الدم في المرحلة المتأخرة من الانبساط (A).
      2. أوجد زمن تباطؤ الموجة E (DT)، وهو الزمن من الذروة E إلى نهاية الانبساط المبكر.
      3. احسب وقت استرخاء LV متساوي المقدار (IVRT) ، وهو الوقت من إغلاق الصمام الأبهري إلى فتح الصمام التاجي.
      4. احسب وقت انقباض الصمام الأبهري إلى فتح الصمام الأبهري.
    4. استخدم دوبلر الأنسجة في الجانب الحاجز من حلقة الصمام التاجي في عرض من أربع غرف لقياس ذروة سرعة استرخاء عضلة القلب في الحشو الانبساطي المبكر (e') والحشو الانبساطي المتأخر (a') ، بالإضافة إلى ذروة سرعة تقلص عضلة القلب الانقباضي (s') (الشكل 4C والجدول 1). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات.
  6. التقط عرض PLAX المعدل لفحص الشريان التاجي النازل الأمامي الأيسر.
    1. استخدم عرض PLAXالمعدل 15 ، وحرك محول الطاقة أفقيا وقم بإمالة الحزمة نحو الأمام (الشكل 5 أ).
    2. حرك المسبار واستخدم دوبلر الملون لتصور أصل الشريان التاجي الرئيسي الأيسر (LCA) الذي يولد من الشريان الأورطي. تحديد الشريان LAD الذي يولد من LCA ويمتد بين جدار البطين الأمامي الأيسر ومجرى تدفق البطين الأيمن16,17. في هذا الوضع ، قم بتطبيق PW Doppler لقياس تدفق LAD (الشكل 5B). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات.
    3. احسب معلمات تدفق الشريان التاجي LAD التالية (الشكل 5C والجدول 2): ذروة سرعة تدفق الشريان التاجي (CFV) ، ومتوسط CFV ، وتكامل السرعة الزمنية (VTI).
      ملاحظة: تقاس جميع هذه البارامترات بتركيز إيزوفلوران قاعدي بنسبة 1.5٪ (خط الأساس).
    4. قم بزيادة تركيز الأيزوفلوران إلى 2.5٪ وانتظر لمدة 5 دقائق لتحقيق أقصى تدفق (الشكل 5C). اضغط على زر Cine Store لتسجيل البيانات. احسب CFR كنسبة CFV للذروة الانبساطية عند التدفق الأقصى إلى الذروة الانبساطية CFV عند خط الأساس18،19،20 (الجدول 2):
      CFR = الذروة الانبساطية CFV (2.5٪) / الذروة الانبساطية CFV (1.5٪)

3. مراقبة الحيوانات ورعايتها بعد التصوير

  1. بعد الانتهاء من التصوير بتخطيط صدى القلب ، قم بتنظيف الجرو بعناية واتركه يتعافى من التخدير لمدة 2 دقيقة تقريبا.
  2. قبل إعادة الجرو إلى قفصه ، قم بتشويه الجرو بفراش أم القفص لمنع الرفض أو أكل لحوم البشر.
  3. راقب سلوك الأم لمدة 30 دقيقة بعد العملية. إذا لوحظ سلوك عدواني ، فقم بالقتل الرحيم للجرو باتباع إرشادات إجراءات الحيوان.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

استخدمت هذه الدراسة جراء فأر يبلغ من العمر 7 أيام لتوصيف مورفولوجيا القلب ووظيفته وتدفق الشريان التاجي. يجب أن يتم التعامل مع الماوس بعناية ، ويجب تكييف منصة الماوس مع الحجم الصغير للجراء ، كما هو موضح في الشكل 1. يتم عرض صورة تمثيلية لعرض PLAX في الشكل 2A و?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

في عصر الطب الوقائي ، يلزم إجراء تقييم مبكر للتغيرات في وظيفة القلب والأوعية الدموية لتحديد بداية المرض وتصميم العلاجات التدخلية المناسبة. يتم استخدام الفئران بشكل متزايد كنماذج قبل السريرية في أبحاث القلب ، وعادة ما يتم إجراء دراسات تخطيط صدى القلب مع الفئران البالغة الشابة. ومع ذلك ، ل?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون تشاد إم وارن ، MS (جامعة إلينوي في شيكاغو) ، لتحرير هذه المخطوطة. تم دعم هذا العمل من خلال منح NIH / NHLBI K01HL155241 و AHA CDA849387 إلى PCR.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Depilating agentNair Hair Remover
Electrode gelParker Laboratories15-60
High Frequency UltrasoundFUJIFILM VisualSonics, Inc.Vevo 2100
IsofluraneMedVetRXISO-250
Linear array high frequency transducerFUJIFILM VisualSonics, Inc.MS550D
Mice breeding pairCharles River LaboratoriesFVB/NStrain Code 207
Ultrasound GelParker Laboratories11-08
Vevo Lab SoftwareFUJIFILM VisualSonics, Inc.Verison 5.5.1

References

  1. Le, V. P., Wagenseil, J. E. Echocardiographic Characterization of Postnatal Development in Mice with Reduced Arterial Elasticity. Cardiovascular Engineering and Technology. 3 (4), 424-438 (2012).
  2. Nagueh, S. F., et al. Recommendations for the Evaluation of Left Ventricular Diastolic Function by Echocardiography: An Update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. European Heart Journal: Cardiovascular Imaging. 17 (12), 1321-1360 (2016).
  3. Lang, R. M., et al. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. European Heart Journal: Cardiovascular Imaging. 16 (3), 233-270 (2015).
  4. Chrysant, S. G. A new paradigm in the treatment of the cardiovascular disease continuum: focus on prevention. Hippokratia. 15 (1), 7-11 (2011).
  5. Blom, J. N., Lu, X., Arnold, P., Feng, Q. Myocardial infarction in neonatal mice, a model of cardiac regeneration. Journal of Visualized Experiments. (111), e54100(2016).
  6. Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice. Nature Protocol. 9 (2), 305-311 (2014).
  7. Chowdhury, S. A. K., et al. Modifications of sarcoplasmic reticulum function prevent progression of sarcomere-linked hypertrophic cardiomyopathy despite a persistent increase in myofilament calcium response. Frontiers in Physiology. 11, 107(2020).
  8. Batra, A., et al. Deletion of P21-activated kinase-1 induces age-dependent increased visceral adiposity and cardiac dysfunction in female mice. Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (3), 1337-1349 (2021).
  9. Capote, A. E., et al. B-arrestin-2 signaling is important to preserve cardiac function during aging. Frontiers in Physiology. 12, 1302(2021).
  10. Armstrong, W. F., Ryan, T., Feigenbaum, H. Feigenbaum's Echocardiography. 7th ed. , Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins. (2010).
  11. Su, J., et al. Impact of chronic hypoxia on proximal pulmonary artery wave propagation and mechanical properties in rats. American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 314 (6), 1264-1278 (2018).
  12. Rudski, L. G., et al. Guidelines for the echocardiographic assessment of the right heart in adults: a report from the American Society of Echocardiography endorsed by the European Association of Echocardiography, a registered branch of the European Society of Cardiology, and the Canadian Society of Echocardiography. Journal of the American Society of Echocardiography. 23 (7), 685-713 (2010).
  13. Wilson, J. R., Reichek, N. Echocardiographic indices of left ventricular function. A comparison. Chest. 76 (4), 441-447 (1979).
  14. Stypmann, J., et al. Echocardiographic assessment of global left ventricular function in mice. Lab Animal. 43 (2), 127-137 (2009).
  15. Wikstrom, J., Gronros, J., Bergstrom, G., Gan, L. M. Functional and morphologic imaging of coronary atherosclerosis in living mice using high-resolution color Doppler echocardiography and ultrasound biomicroscopy. Journal of the American College of Cardiology. 46 (4), 720-727 (2005).
  16. Douglas, P. S., Fiolkoski, J., Berko, B., Reichek, N. Echocardiographic visualization of coronary artery anatomy in the adult. Journal of the American College of Cardiology. 11 (3), 565-571 (1988).
  17. Lambertz, H., Lethen, H., Tries, H. P., Kersting, S. Non-invasive assessment of coronary flow reserve - valuable functional information in cardiac workflow. Ultraschall in der Medizin. 25 (1), 25-33 (2004).
  18. Lenzarini, F., Di Lascio, N., Stea, F., Kusmic, C., Faita, F. Time course of isoflurane-induced vasodilation: A Doppler ultrasound study of the left coronary artery in mice. Ultrasound in Medicine and Biology. 42 (4), 999-1009 (2016).
  19. Gan, L. M., Wikstrom, J., Bergstrom, G., Wandt, B. Non-invasive imaging of coronary arteries in living mice using high-resolution echocardiography. Scandinavian Cardiovascular Journal. 38 (2), 121-126 (2004).
  20. Gan, L. M., Wikstrom, J., Fritsche-Danielson, R. Coronary flow reserve from mouse to man--from mechanistic understanding to future interventions. Journal of Cardiovascular Translational Research. 6 (5), 715-728 (2013).
  21. Krzanowski, M., Bodzon, W., Dimitrow, P. P. Imaging of all three coronary arteries by transthoracic echocardiography. An illustrated guide. Cardiovascular Ultrasound. 1, 16(2003).
  22. Constantinides, C., Mean, R., Janssen, B. J. Effects of isoflurane anesthesia on the cardiovascular function of the C57BL/6 mouse. ILAR Journal. 52 (3), 21-31 (2011).
  23. Ha, T. W., Oh, B., Kang, J. O. Electrocardiogram recordings in anesthetized mice using lead II. Journal of Visualized Experiments. (160), e61583(2020).
  24. Chu, V., et al. Method for non-invasively recording electrocardiograms in conscious mice. BMC Physiology. 1, 6(2001).
  25. Hartley, C. J., et al. Effects of isoflurane on coronary blood flow velocity in young, old and ApoE(-/-) mice measured by Doppler ultrasound. Ultrasound in Medicine and Biology. 33 (4), 512-521 (2007).
  26. You, J., Wu, J., Ge, J., Zou, Y. Comparison between adenosine and isoflurane for assessing the coronary flow reserve in mouse models of left ventricular pressure and volume overload. American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 303 (10), 1199-1207 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

182

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved