A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
* These authors contributed equally
هنا ، نصف نموذجا تجريبيا لاحتشاء عضلة القلب ، وإجراء تخطيط صدى القلب لدراسة إعادة تشكيل القلب ووظيفته ، وإجراءات تحديد التليف والتضخم في أقسام picrosirius الملطخة باللون الأحمر والملطخة بالرودامين ، بالإضافة إلى حجم الاحتشاء ومؤشر التمدد في الشرائح الملطخة بثلاثية الألوان من Masson.
أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الأكثر انتشارا للوفاة في الدول الغربية ، حيث يكون احتشاء عضلة القلب الحاد (MI) هو الشكل الأكثر انتشارا. تصف هذه الورقة بروتوكولا لدراسة دور الجالكتين 3 (Gal-3) في التطور الزمني للشفاء القلبي وإعادة تشكيله في نموذج حيواني تجريبي ل MI.
تشمل الإجراءات الموصوفة نموذجا تجريبيا ل MI مع رباط تاجي دائم في ذكور C57BL / 6J (تحكم) و Gal-3 بالضربة القاضية (KO) ، وإجراء تخطيط صدى القلب لدراسة إعادة تشكيل القلب والوظيفة الانقباضية في الجسم الحي ، وتقييم نسيجي لتليف عضلة القلب الخلالي مع أقسام ملطخة بالليكتين الملطخة باللون الأحمر والرودامين لدراسة تضخم الخلايا العضلية بواسطة منطقة المقطع العرضي (MCSA) ، والقياس الكمي لحجم الاحتشاء وإعادة تشكيل القلب (ترقق الندبة ، وسمك الحاجز ، ومؤشر التمدد) عن طريق قياس المسطح في شرائح ملطخة بكلوريد ثلاثي الألوان ثلاثي الألوان وثلاثي فينيل تيترازوليوم من Masson. غال-3 أظهرت الفئران KO المصابة ب MI تعطل في إعادة تشكيل القلب وزيادة في نسبة ترقق الندبات ومؤشر التمدد. في بداية MI ، تأثرت وظيفة عضلة القلب وإعادة تشكيل القلب بشدة. في 4 أسابيع بعد MI ، تأثر أيضا التطور الطبيعي للتليف في فئران Gal-3 KO المصابة بالاحتشاء.
باختصار ، يعد النموذج التجريبي ل MI نموذجا مناسبا لدراسة التطور الزمني لإصلاح القلب وإعادة تشكيله في الفئران مع الحذف الجيني ل Gal-3 والنماذج الحيوانية الأخرى. يؤثر نقص Gal-3 على ديناميكيات إصلاح القلب ويعطل تطور إعادة تشكيل القلب ووظيفته بعد MI.
احتشاء عضلة القلب (MI) هو الشكل الأكثر انتشارا لأمراض القلب والأوعية الدموية. بعد MI ، يخضع عضلة القلب لتغييرات مورفولوجية ووظيفية متسلسلة ، بما في ذلك التئام منطقة احتشاء MI ، وإعادة تشكيل البطين (VR) ، وضعف عضلة القلب1. شفاء MI هو عملية ديناميكية ومنسقة جيدا مرتبطة بتسلل التهابي عميق ينتهي بتكوين ندبة ليفية2،3. يستخدم النموذج التجريبي ل MI في الفئران حاليا لدراسة إعادة تشكيل القلب في ظل الظروف المرضية4،5 ، والوعي بالبروتوكول الجراحي الدقيق ضروري لتطوير إجراء قابل للتكرار وفعال لتحفيز رباط الشريان التاجي الدائم. هذه الطريقة ضرورية لدراسة شفاء MI وأهميته في التطور الزمني لإعادة تشكيل البطين الأيسر (LVR) والخلل الوظيفي القلبي المرتبط ب MI.
الجالكتين عبارة عن مجموعة من الليكتين التي تتعرف على كربوهيدرات معينة في الروابط داخل الخلايا ومستقبلات الغشاء والبروتينات السكرية خارج الخلية. Galectin 3 (Gal-3) هو عضو في هذه العائلة يعمل من خلال التعرف على N- و O-glycans والربط المتبادل في الجليكوكونجوجات على سطح الخلية ، ويتم التعبير عنه على نطاق واسع في الجهاز المناعي6. بحثت الدراسات السابقة في دور Gal-3 كمنظم للالتهاب والتليف في أمراض القلب والأوعية الدموية7،8،9،10،11،12. نظرا لأن استهداف العوامل التنظيمية للالتهاب أثناء الشفاء مهم للغاية لأن الالتهاب يمكن أن يؤثر بشكل ملحوظ على تطور إعادة التشكيل ، فقد هدفنا إلى وصف بروتوكول لدراسة التطور الزمني لإعادة تشكيل البطين بعد MI وخطوات وطرق تحديد كيفية تعديل الطفرة الجينية ل Gal-3 التطور الزمني للشفاء في MI وتؤثر على إعادة تشكيل القلب ووظيفته في الفئران.
ملاحظة: تمت الموافقة على جميع التجارب الموضحة في هذا البروتوكول من قبل لجنة رعاية وأبحاث بجامعة بوينس آيرس (CICUAL) ، بما يتماشى مع لجنة المجلس الوطني للبحوث (الولايات المتحدة) لتحديث دليل رعاية واستخدام المختبر13. بالنسبة للتجارب ، استخدم الفئران الذكور المتطابقة مع العمر C57BL / 6J و Gal-3 KO (8-10 أسابيع) التي تزن 30-35 جراما ، مما يسمح بمعالجة أفضل للجراحة. اسمح للحيوانات بالوصول إلى الماء والغذاء بشكل خاص. تم تربية الفئران Gal-3 KO على خلفية C57BL / 6J في نفس مرافق الموارد الحيوية مثل فئران التحكم C57BL / 6J.
1. المنطقة والأدوات الجراحية
2. التخدير والتنبيب
3. تصميم الدراسة
4. تخطيط صدى القلب
ملاحظة: بالنسبة لمخططات صدى القلب للماوس ، يجب استخدام محولات الطاقة الخطية التي تزيد عن 10 ميجاهرتز للتصور الصحيح لأقطار الجدار وأحجام التجاويف. يمكن إجراء هذا الإجراء تحت التخدير باستخدام أفرتين داخل الصفاق (IP) عند 1.15 مل / كجم أو في الواعية. ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي هذا الأخير إلى نتائج مربكة في الفئران المصابة ب MI بسبب التوتر والقلق الناجم عن التلاعب.
5. تقييم الأنسجة
6. التحديد الكمي لحجم الاحتشاء وقياس الخطة لتقييم إعادة تشكيل القلب
البقاء على قيد الحياة والتشريح بعد MI
على مدى 4 أسابيع من المتابعة ، تم العثور على 17٪ (4/23) من فئران C57 مقابل 40٪ (8/20) من فئران Gal-3 KO ميتة. تم إجراء التشريح. أظهرت الفئران الميتة Gal-3 KO قلوبا أكبر من الفئران C57 (الشكل 1) ، و 38٪ من الفئران C57 مقارنة ?...
يستخدم النموذج التجريبي ل MI بواسطة رباط الشريان التاجي الدائم لدراسة مجموعة متنوعة من الآليات الفيزيولوجية المرضية لإصلاح القلب وإعادةتشكيله 5،14،17. تلخص هذه المقالة الطرق المختلفة المستخدمة حاليا في هذا المختبر لدرا?...
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.
يقدر المؤلفون مع امتنان المساعدة الفنية التي قدمتها آنا كيارو. تم دعم هذا العمل من خلال منح من الوكالة الأرجنتينية لتعزيز العلوم والتكنولوجيا (PICT 2014-2320 ، 2019-02987 و PICT 2018-03267 إلى VM) وجامعة بوينس آيرس (UBACyT 2018- 382 20020170100619BA إلى GEG).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
8-0 silk suture | Ethicon | ||
C57BL/6J mice | Department of Bioresources of the Faculty of Veterinary of the University of Buenos Aires, Argentina | ||
Forceps | |||
Hardvard 386 respirator | Hardvard company | ||
Heating pad | maintain animal's temperature during surgery | ||
Image Pro-Plus 6.0 | Media Cybernetics | Image Analysis Software | |
Ketamine | Holiday | ||
Masson Trichrome | BIOPUR | ||
Picrosirius red | BIOPUR | ||
Retractors | |||
Rodent Ventilator Model 683 | Harvard Apparatus | Mechanical ventilator | |
Scissors | |||
Stereoscopic magnifying glass | Arcano | ||
Vivid 7 machine (General Electric Medical Systems, Horten, Norway) | General Electric | Any tracking software can be utilized with this protocol | |
WGA no. RL-1022, Vector Laboratories, Burlingame | Vector Laboratories | ||
Xylazine | Pro-Ser |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved