JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هنا ، نصف بروتوكولا لإنشاء نظام تخمير مشترك منهجي وشامل لإنتاج منتجات التحول الأحيائي الغنية بالصابونين اللاذع باستخدام Marsdenia tenacissima (Roxb.) وايت وآرن. (MT) كوسيط تخمير ل Ganoderma lucidum. سيكون هذا بمثابة مرجع منهجي لتطوير عقاقير عرقية أخرى.

Abstract

مارسدينيا تيناسيسيما (Roxb.) وايت وآرن. (MT) ، كدواء عشبي صيني تقليدي وداي ، له خصائص مضادة للالتهابات ومضادة للبكتيريا ومضادة للأورام. ومع ذلك ، فإن معظم المواد الفعالة الرئيسية هي مادة الأجليكونات ، مثل tenacigenin A و tenacigenin B. نظرا لأن التوافر البيولوجي ل MT منخفض ومكوناته الطبية النشطة يصعب تصنيعها ، يتم دراستها بشكل أساسي عن طريق التحول الحيوي. تهدف هذه الدراسة إلى إنتاج منتجات التحول الأحيائي الغنية بالصابونين اللاذعة باستخدام MT كوسيط تخمير ل Ganoderma lucidum (G. lucidum).

من خلال الفحص الأولي لثلاثة فطريات طبية ، وجد أن G. lucidum و Ophiocordyceps sinensis (O. sinensis) يمكن أن تنمو بشكل عام في وسط MT. ومن ثم ، تم فحص فعالية تخمير نوعي الفطريات باستخدام نموذج فأر لسرطان الرئة. أخيرا ، التخمير المشترك ل G. lucidum و MT تم اختياره لمزيد من التحقيق. تم إجراء تحليل الأيض غير المستهدف على منتجات MT مع G. lucidum التخمير المشترك. حددنا 12 نوعا محددا من الصابونين من MT من منتجات التخمير ، وحصلنا على مركب أحادي ، tenacigenin A ، من منتجات التخمير.

أظهر معظم التيناسجينين اتجاها تصاعديا كبيرا ، من خلال مستويات tenacigenin A و tenacigenin B. أظهرت النتائج أن فعالية MT تحسنت بعد التخمير بواسطة G. لوسيدوم. علاوة على ذلك ، كان التحول الأحيائي للجليكوسيدات الستيرويدية C21 في MT هو التفاعل المركزي في عملية التخمير هذه. باختصار ، أنشأت هذه الدراسة نظاما منهجيا وشاملا للتخمير المشترك وطريقة تقييم ديناميكية دوائية ل MT ، والتي لم تعزز فقط الاستخدام الكامل للمواد الفعالة في MT ولكن أيضا قدمت مرجعا منهجيا لتطوير العقاقير الإثنية الأخرى.

Introduction

ينتمي سرطان الرئة إلى فئة "كربونكل الرئة" في الطب الصيني التقليدي. التسبب في الجمرة الرئوية هو ضعف في "Qi" الصحي للمرضى ، وعدم توازن الين واليانغ ، والسموم ، والركود في الرئة ، مما يؤدي إلى خلل في الرئة ، وانسداد الدم ، وفقدان السوائل في الرئة. وبالتالي ، فإن ركود الدم طويل الأمد وسموم البلغم في الرئتين تشكل كتلة رئوية1. لذلك ، فإن تقوية Qi والقضاء على العوامل المسببة للأمراض هو المبدأ الأساسي لعلاج سرطان الرئة. تستخدم طرق تغذية الين لموازنة الين واليانغ ، وإزالة الحرارة ، وإزالة السموم وتشتيت الركود ، ومكملات Qi وتغذية Yin ، وإزالة البلغم لعلاج ومنع تكوين دمامات الرئة2.

مارسدينيا تيناسيسيما (MT) هو نبات طبي ينتمي إلى عائلة Asclepiadaceae (Marsdenia ssp.) ، المعروف أيضا باسم Wuguteng. له آثار إزالة الحرارة وإزالة السموم ، وتخفيف السعال والربو ، وله خصائص مضادةللأورام 3. حقن Xiaoaiping ، مستحضر مصنوع من عشب واحد من MT ، تم استخدامه على نطاق واسع في العيادات ويظهر تأثيرا علاجيا جيدا مضادا للسرطان4. ومع ذلك ، مع زيادة عدد السكان ، زاد الطلب على MT بشكل حاد. وفقا لذلك ، فإن المعروض من موارد MT البرية غير كاف ، وجودة المواد الطبية المزروعة غير متساوية. هناك مشاكل مثل رداءة جودة المواد العشبية ، والمحتوى غير المستقر للمكونات ، وانخفاض التوافر البيولوجي ، مما يهدد بشكل خطير تطور MT. من بين هذه المركبات النشطة بيولوجيا ، تم التحقيق في الصابونين من MT بشكل كبير. تم تحديد أكثر من 100 مادة صابونين من MT. يمكن تقسيمها إلى نوعين رئيسيين: (1) C21 جليكوسيدات ستيرويدية في MT ، بما في ذلك tenacissoside A-P و marsdenoside A-M و tenacigenoside A-L و tenacigenin A-D. (2) ثلاثي التربين خماسي الحلقات ، مثل حمض الأوليانوليك وحمض أورسوليك. أشارت العديد من الدراسات إلى أن النشاط المضاد للسرطان لمستخلصات الأثير البترولي أعلى من الجزيئات شديدة القطبية من MT. وبالتالي ، فمن المفيد تحويل عديد السكاريد الرئيسي للصابونين من MT إلى مادة aglycone ثانوية أخرى من MT مع توافر بيولوجي وأنشطة حيويةأعلى 5.

يشير التحول الأبيولوجي ، المعروف أيضا باسم التحفيز الحيوي ، إلى التفاعلات الفسيولوجية والكيميائية الحيوية للتحول أو التعديل الهيكلي للركائز الخارجية باستخدام الإنزيمات ذات الصلة في الأنظمةالبيولوجية 6. إنه أكثر اقتصادا وأكثر أمانا وانتقائية إقليميا وانتقائيا مجسيما من التخليق الكيميائي التقليدي ويمكن أن ينتج بعض المركبات النشطة بيولوجيا التي يصعب تحضيرها بواسطة الكيمياء الاصطناعية التقليدية7،8. لذلك ، فإن تطوير الطب الصيني التقليدي والعقاقير الطبيعية أمر ضروري لتعزيز تحديث وتدويل الطب الصيني التقليدي.

تم إنشاء نظام التخمير المشترك ل MT باستخدام التحول الحيوي. تم تحويل المواد الطبية الأصلية بواسطة أنظمة الإنزيمات الميكروبية. من ناحية أخرى ، تم استخدام مستخلص MT كركيزة لإنتاج ثقافة تخمير الفطريات في هذا الوضع. في الوقت نفسه ، أدى التخمير الفطري إلى تقصير دورة تكاثر البكتيريا ، وخفض تكاليف الإنتاج ، وتحسين كفاءةالإنتاج 9. من ناحية أخرى ، فإن زيادة ترسيب المكونات النشطة عن طريق التخمير الفطري مفيد ، حيث ينتج مكونات كيميائية وفعالية محسنة10. يعد استخدام تقنية التخمير السائل ثنائي الاتجاه مفيدا لحماية المكونات النشطة للمواد الطبية ، وتحسين الفعالية ، وتوفير مصادر الأدوية ، وقد ينتج فعالية أفضل من خلال توفير تقنيات للتعديل الهيكلي للمكونات النشطة للمواد العشبية. من الأهمية بمكان تحسين مستوى تحديث الطب الصيني التقليدي.

في هذه الدراسة ، G. lucidum و O. sinensis و Inonotus obliquus (I. obliquus) تم اختيارها ككائنات دقيقة تخمير في المرحلة المبكرة بعد مراجعة الأدبيات ، وتم فحص السلالات مبدئيا. بعد ذلك ، تم تحديد سلالات التخمير النهائية من خلال استكشاف فعالية السلالات التي تم فحصها من خلال نموذج الفأر الورمي. أخيرا ، تم تحليل وتقييم المستقلبات الأولية الأولية والمستقلبات الثانوية لمنتجات التخمير بشكل منهجي بواسطة LC-MS ، وحصلنا على مركب أحادي ، tenacigenin A ، من منتجات التخمير.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

أجريت هذه الدراسة وفقا لتوصيات مركز التجريبية بجامعة مينزو (رقم 10). ECMUC2019008AA). تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة أخلاقيات التجريبية بجامعة مينزو. تم جمع MT من كونمينغ بمقاطعة يونان.

1. التحضير للدراسة

  1. استخرج MT بالماء الساخن (100 درجة مئوية ؛ MT / الماء = 1/10 ، w / v) لمدة 30 دقيقة وجمع بقايا استخراج MT كمادة اختبار.
  2. الحفاظ على خط خلايا سرطان الرئة للفأر LLC في وسط النسر المعدل (DMEM) من Dulbecco المكمل بمصل بقري الجنين بنسبة 10٪ ، و 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين في جو مرطب عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
  3. احتفظ بالفئران C57BL / 6J ، التي تتراوح أعمارها بين 6 و 8 أسابيع ووزنها 19 ± 2 جم ، في غرفة خاضعة للرقابة البيئية مع دورة إضاءة / ظلام 12 ساعة / 12 ساعة مع وصول غير محدود إلى الطعام والماء. تطهيرها بانتظام.

2. الفحص الأولي للسلالات

  1. تلقيح ثلاث سلالات من الفطريات في وسط صلب سكر العنب للبطاطس (PDA) باستخدام تقنيات معقمة وزراعتها في الظلام عند 28 درجة مئوية. بعد تغطية الأطباق بالكامل بالفطريات ، قم بتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية.
  2. تلقيح السلالات المحفوظة في الوسط الصلب PDA في محلول البذور لقارورة الاهتزاز في المرحلة الأولى وزراعتها عند 28 درجة مئوية ، مع الرج عند 120 دورة في الدقيقة لمدة 4-5 أيام. قم بتلقيح سائل الفطريات في المرحلة الأولى في قارورة الاهتزاز التي تحتوي على سائل الفطريات الثانوي بنسبة حجم 1:20 في شاكر درجة حرارة ثابتة لمدة 4-5 أيام.
  3. خفف MT بالماء إلى 100 مجم / لتر (MT / ماء) وأضف المحلول إلى أجار لتشكيل وسط صلب. تلقيح 1 مل من السائل الفطري الثانوي لكل من السلالات الثلاث في المزرعة الصلبة التي تحتوي على MT فقط ، ثم قسمها إلى G. lucidum-MT و I. obliquus-MT و O. sinensis-MT أنظمة الاستزراع. ضع أنظمة الاستزراع هذه عند 28 درجة مئوية دون الاهتزاز في الظلام.
  4. بعد مرور بعض الوقت ، لاحظ نمو السلالات في أنظمة الاستزراع الثلاثة المذكورة أعلاه ، وحدد السلالات التي لا يمكن أن تنمو إلا باستخدام MT لمزيد من الفحص.

3. إعادة فحص اختيار السلالة

ملاحظة: بعد الفحص الأولي ، فقط G. lucidum و O. sinensis يمكن أن ينمو بشكل طبيعي على وسط صلب يحتوي على MT. لمزيد من تحديد النظام ذو التأثير الجيد المضاد للأورام ، تم اختبار الفعالية المضادة للأورام في نموذج فأر ورم مزروع.

  1. تلقيح G. lucidum و O. sinensis في وسط سائل يحتوي فقط على MT-MT مع G. lucidum التخمير المشترك (MGF) و MT مع O. sinensis التخمير المشترك (MOF) ، والتخمير لمدة 10 أيام عند 28 درجة مئوية مع الرج عند 180 دورة في الدقيقة.
  2. بعد التخمير ، قم بتصفية الفطريات من خلال الشاش وجففها. يستخرج مع 80٪ إيثانول 3 × 12 ساعة.
  3. تحقق من النشاط المضاد للأورام ل MT المخمر وغير المخمر في الفئران الحاملة لخلايا الورم C57BL / 6J ذات المسؤولية المحدودة.
    1. حقن خلايا LLC تحت الجلد (1.0 × 106 خلايا في 0.2 مل من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) لكل فأر) في الجناح الأيمن من ذكور الفئران C57BL / 6J (باستثناء المجموعة الضابطة).
    2. لتأكيد التأسيس الناجح للنموذج ، المس عقيدات الورم وتحقق من حجمها ~ 5 مم. قم بتجميع الفئران الحاملة للورم بشكل عشوائي (ن = 10 لكل مجموعة) في المجموعة النموذجية ، ومجموعة MGF ، ومجموعة MOF ، ومجموعة MT ، ومجموعة سيسبلاتين (التحكم الإيجابي). تطبيق محلول ملحي للمجموعة الضابطة (بدون خلايا سرطانية) والمجموعة النموذجية. التضحية بالفئران بعد 14 يوما من العلاج وجمع أنسجة الورم.

4. تحليل التركيب الكيميائي لمنتجات التخمير

ملاحظة: بعد التحقق من فعالية التخمير, G. لوسيدوم تم اختياره كسلالة التخمير في هذه الدراسة. أجرينا تحليل التمثيل الغذائي ل MGF بواسطة قياس الطيف الكتلي الكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS) 11.

  1. استخرج 10 ملغ من MT و G. lucidum و MT مع G. lucidum التخمير المشترك (MGF) مع 500 ميكرولتر من الميثانول: H2O (7: 3) ، يهز عند 4 درجات مئوية لمدة دقيقة واحدة ، سونيكات لمدة 30 دقيقة ، وجهاز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة عند 1،200 × جم. اجمع المواد الطافية ، وقم بترشيحها من خلال غشاء فلوريد بولي فينيلدين 0.22 ميكرومتر ، وحقنها في إعداد قياس الطيف الكتلي الترادفي للكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS / MS).
    ملاحظة: تم إنشاء مستقلبات مفصولة عن الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء (UPLC) ومكتبة عينات مراقبة الجودة (QC) بواسطة قياس الطيف الكتلي عالي الدقة (انظر جدول المواد).
  2. استخدم شروط UPLC التالية: عمود C18 (100 مم × 2.1 مم ؛ 8 ميكرومتر) ، المرحلة المتنقلة A-0.1٪ (v / v) حمض الفورميك في الماء فائق النقاء ، المرحلة المتنقلة B-acetonitrile. اضبط ملف تعريف الشطف المتدرج ليكون 0 دقيقة 5٪ B ؛ 2 دقيقة 5٪ ب ؛ 14 دقيقة 98٪ ب ؛ 17 دقيقة 98٪ ب ؛ 17.1 دقيقة 5٪ ب ؛ 20 دقيقة 5٪ بمعدل تدفق 0.3 مل / دقيقة.
  3. اكتشاف وتحديد المستقلبات عن طريق قياس الطيف الكتلي عالي الدقة. اضبط درجة حرارة العمود على 40 درجة مئوية ، ودرجة حرارة الحاقن التلقائي على 4 درجات مئوية ، وحجم الحقن على 2 ميكرولتر. حافظ على ظروف MS التالية: جهد مصدر أيون الرش الكهربائي: + 5,500 / - 4,500 فولت ؛ ضغط غاز الستارة ، مصدر الأيونات 1 ، ومصدر الأيونات 2: 35 و 60 و 60 رطل لكل بوصة مربعة ، على التوالي ؛ درجة حرارة مصدر الأيون: 600 درجة مئوية ؛ إمكانات إزالة البلمرة: ± 100 فولت.
  4. قم بإعداد عينات مراقبة الجودة (QCs) عن طريق خلط كميات متساوية من مستخلصات MT و GL و MGF ، وقم بتسمية التكرارات الثلاثة QC 1-3 ، على التوالي. معالجة واكتشاف عينات مراقبة الجودة والتحليل باتباع نفس الخطوات. أدخل عينة مراقبة الجودة لكل ثلاث عينات للتحقق من قابلية تكرار الكشف والتحليل.

5. استخراج وعزل منتجات التخمير

  1. قم بإذابة مستخلص التخمير الذي تم الحصول عليه من مرق التخمير في الماء المقطر وحركه جيدا.
    ملاحظة: هنا ، تم الحصول على 2 كجم من مستخلص التخمير من 40 لترا من مرق التخمير.
  2. من القسم 4 ، قم بإزالة 10٪ و 30٪ و 50٪ و 70٪ و 95٪ من كسور الإيثانول باستخدام عمود راتنج امتصاص كبير المسامية وجمع الكسور.
    ملاحظة: هنا ، تم الحصول على 10.72 جم من جزء الإيثانول بنسبة 95٪ ، و 34.72 جم من جزء الإيثانول 70٪ ، و 61.57 جم من جزء الإيثانول بنسبة 50٪ ، و 79.7 جم من جزء الإيثانول بنسبة 30٪.
  3. بناء على قطبية الكسور ، قم بمسح جزء الإيثانول بنسبة 70٪ باستخدام كروماتوغرافيا عمود هلام السيليكا مع أسيتات الإيثيل: شطف الميثانول وجمع الكسور.
    ملاحظة: هنا ، Fr. 1-Fr. تم جمع 7.
  4. قم بإجراء كروماتوغرافيا عمود Sephadex LH-20 لمزيد من تنقية الكسور (هنا ، Fr. 3 و Fr. 4) متبوعا بفصل الطور السائل شبه التحضيري بعد التنقية باستخدام 1.0 جم من كل جزء.
    ملاحظة: باستخدام كروماتوغرافيا السائل شبه التحضيري وكروماتوغرافيا عمود هلام السيليكا ، قمنا بعزل وتنقية جزء الإيثانول بنسبة 95٪.
  5. قم بإجراء التحليل الطيفي المجهري والتحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي ومقارنة بنية المركب (المركبات) مع الهياكل من قواعد البيانات ل 600M و 700M وتحديد الهيكل المستوي للمركب (المركبات).
    ملاحظة: هنا ، تم استخدام مطياف الكتلة الهجين لتحديد الوزن الجزيئي للخليط. حددنا هيكل مركب واحد (انظر الشكل التكميلي S1).

6. التحليلات الإحصائية

  1. كرر جميع تجارب التخمير ست مرات. تقييم الدلالة الإحصائية باستخدام اختبار t للطالب. عبر عن جميع البيانات كمتوسط ± SD ، وكرر جميع التجارب ثلاث نسخ ، واضبط p < 0.05 للدلالة الإحصائية (* 0.01 ≤ ص ≤ 0.05 ، ** 0.001 ≤ ص ≤ 0.01 ، *** ص ≤ 0.001).
  2. استخدم برنامج SCIEX OS لتحديد المستقلبات بناء بشكل أساسي على خطأ الكتلة ، ووقت الاحتفاظ ، وتطابق النظائر ، ودرجة نقاء مكتبة MS / MS ، والصيغة الجزيئية الحسابية. استخدم معلمات إعداد المكتبة التالية: خطأ الكتلة < 5 جزء في المليون، وفرق نسبة النظائر < 20، ودرجة المكتبة > 50.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

نتائج الفحص الأولي للسلالات
لاستكشاف الفطريات القادرة على التخمير المشترك مع MT ، اخترنا ثلاثة فطريات: G. lucidum و I. obliquus و O. sinensis. أولا ، تم تنشيط السلالات: G. lucidum و I. obliquus و O. sinensis تم تلقيحها في وسط المساعد الرقمي الشخصي كما هو موضح في

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

بعد تجارب فحص السلالة ، وجدنا أنه لا يمكن لجميع الفطريات الطبية البقاء على قيد الحياة بشكل طبيعي على مواد الأعشاب. بدون أي وسيط إضافي ، يعتمد بقاء الفطريات الطبية على تدهور المكونات في المواد الطبية من خلال إنزيماتها الخاصة لتصنيع مصادر الكربون والنيتروجين المطلوبة. يم?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية يمكن أن يبدو أنها تؤثر على العمل المبلغ عنه في هذه الورقة.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل بمنح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81973977). تم تحديد عينات MT من قبل البروفيسور Tongxiang-Liu وحفظها في كلية الصيدلة بجامعة Minzu في الصين.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileTonguang Fine Chemicals Company, Beijing, China20200923
AgarSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd., USANO.20080107
AutoclaveBinJiang Medical Co., Ltd., Jiangyin, ChinaLS-50LD
constant shaking incubatorZhicheng Inc. All rights reserved., Shanghai, ChinaZWY-100D
Ganoderma lucidumBeNa Culture Collection, Beijing, China31732
Inonotus obliquusBeNa Culture Collection, Beijing, China117822
LLC Mouse lung cancer cellNational Infrastructure of Cell Line Resource, Beijing, ChinaPUMC000673
Male C57BL/6J miceVital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd., Beiijng, ChinaNo.110011210107024684
MethanolTonguang Fine Chemicals Company, Beijing, China20210723
Ophiocordyceps sinensisBeNa Culture Collection, Beijing, China118371
Poly tetra fluoroethyleneJinteng Experiment Equipment Co., Ltd., Tianjing,ChinaNo.997
QTRAP 5500 LC/MSAB Sciex Pte. Ltd., USACV20231711
Rotary EvaporatorBUCHI Co., Ltd., Shanghai, ChinaR-300
SyringeZhiyu Medical Instrument Co., Ltd., Jinagsu, ChinaV500111
Ultra-clean benchBOXUN Medica Bioological Instrument Co., Ltd., Shanghai, ChinaSW-CJ-LFD

References

  1. Jansen, B. J., Liang, H., Ye, J. International Conference on Cognitive Based Information Processing and Applications (CIPA 2021). 85, Springer Nature. (2021).
  2. WANG, J., et al. Literature-based research on common syndromes of cough variant asthma). Chinese General Practice. , (2022).
  3. Meng, H., et al. Influence of different substrate and plant growth regulators on rooting of cutting of Marsdenia tenacissima. Journal of Yunnan Agricultural University. 29 (4), 540-543 (2014).
  4. Xing, W., Chen, B., Mi, H., Wu, Y. Textual research of Wuguteng. Zhong yao cai=Zhongyaocai=. Journal of Chinese Medicinal Materials. 26 (7), 524-526 (2003).
  5. Yin, C. Investigation of Polyoxypregnane Compounds Isolated from Marsdenia Tenacissima for the Anti-Cancer Activity and Circumvention of Multidrug Resistance. The Chinese University of Hong Kong. , Hong Kong. Doctoral Dissertation (2019).
  6. Singer, A. C., Crowley, D. E., Thompson, I. P. Secondary plant metabolites in phytoremediation and biotransformation). Trends in Biotechnology. 21 (3), 123-130 (2003).
  7. Bianchini, L. F., et al. Microbial biotransformation to obtain new antifungals. Frontiers in Microbiology. 6, 1433(2015).
  8. Pimentel, M. R., Molina, G., Dionísio, A. P., Maróstica Junior, M. R., Pastore, G. M. The use of endophytes to obtain bioactive compounds and their application in biotransformation process. Biotechnology Research International. 2011, 576286(2011).
  9. Hsu, B. Y., Lu, T. J., Chen, C. H., Wang, S. J., Hwang, L. S. Biotransformation of ginsenoside Rd in the ginseng extraction residue by fermentation with lingzhi (Ganoderma lucidum). Food Chemistry. 141 (4), 4186-4193 (2013).
  10. Wang, D., et al. Biotransformation of gentiopicroside by asexual mycelia of Cordyceps sinensis. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 17 (11), 3195-3197 (2007).
  11. Li, R., et al. Nontargeted metabolomics study and pharmacodynamic evaluation of bidirectional fermentation for Ganoderma lucidum with Marsdenia tenacissima. Frontiers in Pharmacology. , 4590(2022).
  12. Zhang, H., et al. Five new C21 steroidal glycosides from the stems of Marsdenia tenacissima. Steroids. 75 (2), 176-183 (2010).
  13. Deng, J., Liao, Z., Chen, D. Marsdenosides A-H, polyoxypregnane glycosides from Marsdenia tenacissima. Phytochemistry. 66 (9), 1040-1051 (2005).
  14. Xia, Z. -H., et al. Pregnane glycosides from the stems of Marsdenia tenacissima. Journal of Asian Natural Products Research. 6 (2), 79-85 (2004).
  15. Deng, J., Liao, Z., Chen, D. Three new polyoxypregnane glycosides from Marsdenia tenacissima. Helvetica Chimica Acta. 88 (10), 2675-2682 (2006).
  16. Hu, Y., et al. Mechanism of Marsdenia tenacissima extract promoting apoptosis of lung cancer by regulating Ca2+/CaM/CaMK signaling. Journal of Ethnopharmacology. 251, 112535(2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

Marsdenia Tenacissima Ganoderma lucidum Tenacigenin A Ophiocordyceps Sinensis

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved