JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يلعب إفراز الدماغ دورا محوريا في تطور الجهاز العصبي المركزي وعمله الطبيعي. في هذه المقالة ، نقدم بروتوكولا مفصلا لعزل إفراز الدماغ عن ثقافات شرائح الدماغ خارج الجسم الحي .

Abstract

يتكون إفراز الدماغ من بروتينات إما تفرز بنشاط أو تتساقط من سطح الخلية عن طريق الانقسام المحلل للبروتين في المصفوفة خارج الخلية للجهاز العصبي. تشمل هذه البروتينات مستقبلات عامل النمو وبروتينات الغشاء ، من بين أمور أخرى ، تغطي مجموعة واسعة من الأدوار في التطور والأداء الطبيعي للجهاز العصبي المركزي. الإجراء الحالي لاستخراج الإفرازات من السائل النخاعي معقد ويستغرق وقتا طويلا ، ومن الصعب عزل هذه البروتينات عن أدمغة التجريبية. في هذه الدراسة ، نقدم بروتوكولا جديدا لعزل إفراز الدماغ عن مزارع شرائح دماغ الفأر. أولا ، تم عزل الأدمغة وتقطيعها إلى شرائح واستزراعها من الجسم الحي. ثم تم ترشيح وسط الثقافة وتركيزه لعزل البروتينات عن طريق الطرد المركزي بعد بضعة أيام. أخيرا ، تم حل البروتينات المعزولة باستخدام الرحلان الكهربائي لجل دوديسيل كبريتات الصوديوم بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) ثم تم فحصها لاحقا لتوصيف النقاء بواسطة اللطخة الغربية. يمكن استخدام إجراء العزل هذا لإفراز الدماغ من مزارع شرائح الدماغ خارج الجسم الحي للتحقيق في تأثيرات الإفرازات على مجموعة متنوعة من أمراض النمو العصبي ، مثل اضطرابات طيف التوحد.

Introduction

تتكون المصفوفة خارج الخلية للجهاز العصبي من بروتينات يتم إفرازها بنشاط أو التخلص منها من سطح الخلية ، تسمى "الإفراز". يحتوي إفراز الدماغ على بروتينات مثل مستقبلات عامل النمو وبروتينات الغشاء1 ، والتي تشمل مجموعة واسعة من الأدوار في التطور والأداء الطبيعي للجهاز العصبي المركزي. يعكس عدد كبير من البروتينات التي تفرزها الخلايا الدبقية ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية على وجه الخصوص ، مجموعة متنوعة من الحالات الدبقية ، بما في ذلك الالتهاب العصبي في الجهاز العصبيالمركزي 2. ثبت أن إفراز البروتين له تأثيرات عصبية وسامة للأعصاب. على سبيل المثال ، تم العثور على الجينات التي تشفر neuroligin ، وهو بروتين عبر الغشاء موجود في ما بعد المشابك التي تنظم بنية ووظيفة التقاطعات المشبكية3 ، لتكون عامل خطر لاضطرابات طيف التوحد. يخضع Neuroligin لعملية تسمى التخلص من المجال الخارجي ، حيث يتم إطلاق النطاقات الخارجية للبروتينات عبر الغشاء من سطح الخلية عن طريق الانقسام من الغشاء في شكل إفرازات4،5.

يمكن اكتشاف العديد من البروتينات الموجودة في الإفراز داخل الدماغ في السائل النخاعي. وبالتالي ، يمكن أن يساعد التحليل البروتيني لهذا السائل في تحديد الآليات الفسيولوجية والمرضية الجديدة والمؤشرات الحيوية للأمراض العصبية6،7. لا تزال العديد من الوظائف الفسيولوجية لبروتينات إفرازات الدماغ غير معروفة وتتطلب مزيدا من الاستكشاف. يعد إنشاء إجراء فعال لاستخراج إفراز الدماغ أمرا بالغ الأهمية لهذه الدراسات. ومع ذلك ، فإن الإجراء الحالي لاستخراج الإفرازات من السائل النخاعي معقد ويستغرق وقتا طويلا ، ومن الصعب عزل هذه البروتينات عن أدمغة التجريبية8. في هذه المقالة ، نقدم بروتوكولا جديدا لعزل السكرتوم عن شرائح دماغ الفأر.

تحتوي شرائح الدماغ المزروعة في المختبر على نفس أنواع الخلايا وبنية الخلايا ثلاثية الأبعاد مثل أنسجة المخ ، مما يحافظ على الدوائر المشبكية الطبيعية والسليمة ، وتوزيع المستقبلات ، ونقل المرسل ، والوظائف الفسيولوجية الأخرى. يحاكي النموذج نمو الخلايا العصبية وعملها في الفئران عندما يتم وضع شرائح الدماغ في وسط استزراع مناسب لضمان نمو الخلايا المستدام وبقائها على قيد الحياة. في هذه الدراسة ، استمرت شرائح دماغ الفأر في إفراز البروتينات الإفرازية العصبية9 ، وتم تشريح الدماغ المعزول ووضعه على مرشح في ظل ظروف معقمة. تم وضع إدخالات المرشح في ألواح ذات 6 آبار تحتوي على وسط الاستزراع. بالنظر إلى أن البروتينات التي تفرزها الخلايا العصبية والخلايا الدبقية يمكن أن تخترق غشاء الإدخال ولكن ليس الخلايا ، يمكن بالتالي جمع إفراز الدماغ من وسط الثقافة الشرطية.

تصف هذه المقالة الإجراءات الأساسية ل (أنا) عزل شرائح الدماغ ، (ب) جمع شرائح الدماغ ، (3) جمع ثقافات شرائح الدماغ من الوسط الشرطي ، (4) تحليلات اللطخة الغربية ، و (5) التحليل البروتيني (الشكل 1).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تمت الموافقة على هذا البروتوكول ويتبع إرشادات رعاية التي وضعتها لجنة رعاية واستخدام بالجامعة الجنوبية للعلوم والتكنولوجيا (SUSTech-JY202112006). تم استخدام الفئران البالغة من الذكور والإناث C57BL / 6J (6-8 أسابيع ، 22-30 جم) في هذه الدراسة. تم إيواء الفئران عند 22-25 درجة مئوية في دورة يومية من 12 ساعة من الضوء و 12 ساعة من الظلام ، مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء. يتم سرد خطوات البروتوكول على النحو التالي.

1. عزل شرائح الدماغ

  1. تحضير الأدوات الجراحية: ملاقط ثني العيون ، أكواب (250 مل ، 500 مل) ، ورق ترشيح ، مقص ، شفرة حلاقة ، شفرة أحادية الجانب ، وقلم فرشاة. ضع هذه الأدوات في صندوق رغوي مملوء بالثلج المجروش لتبرد.
  2. افتح الصمام للغاز المختلط الذي يحتوي على 95٪ O2 و 5٪ CO2. نظف رأس أنبوب الغاز عن طريق وضعه في دورق من الماء فائق النقاء.
  3. قم بإعداد المخزن المؤقت لتشريح الثلج البارد باستخدام المكونات التالية: 225 ملي مولار سكروز ، 2.5 ملي كلوريد كلوريد ، 1.25 ملي هيدروهيدراتالصوديوم 2PO4 ، 26 ملي مولار NaHCO3 ، 11 ملي مولار د-جلوكوز ، 5 ملي مولار لحمض الأسكوربيك ، 3 ملي مولار بيروفات الصوديوم ، 7 ملي ملي مجم سولات الكلوريد 4 ، و 0.5 ملي كلوريدالكالسيوم 2. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.3-7.4.
  4. قم بإعداد محلول الاستزراع بالمكونات التالية: 122 ملي كلوريد الصوديوم ، 2.5 ملي كلوريد كلوريد ، 1.25 ملي هيدروهيدروكسيدهيدروكسيد 2PO4 ، 26 ملي هيدروكسيد الصوديوم3 ، 11 ملي مولار د-جلوكوز ، 7 ملي ملي كلوريد المجم 4 ، و 0.5 ملي كلوريدالكالسيمات 2. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.3-7.4 ، ثم قم بتصفية وإضافة 10٪ من محلول البنسلين والستربتومايسين (P / S) إلى محلول المزرعة.
  5. قم بتزويد محلول المزرعة بالأكسجين ومحلول التشريح لمدة 30 دقيقة قبل التضحية بالفئران. اكسر شفرة الحلاقة لتأخذ نصف الشريحة ، ثم قم بتثبيتها على آلة التقطيع. قم بتثبيت قاعدة وحامل أداة تقطيع.
  6. التضحية بالفئران عن طريق خلع عنق الرحم ، أو باستخدام 2٪ -3٪ متزوفلوران للتخدير.
    1. استخدم المقص لقطع الجمجمة في الرقبة. قطع الجلد في منتصف الجمجمة لكشف الجمجمة بأكملها.
    2. استخدم مقص العيون لقص الجمجمة على طول الخط المتوسط واستخدم ملقط العين المنحني لقطع الجمجمة.
    3. أخيرا ، استخدم ملقطا منحنيا للوصول إلى قاعدة الجمجمة وقطع العصب الأساسي ؛ يمكن الآن إزالة الدماغ بأكمله.
  7. ضع الدماغ بسرعة في مخزن مؤقت للتشريح المثلج. استخدم شفرة حادة ومعقمة من جانب واحد لقطع الأجزاء الزائدة من الدماغ ، بما في ذلك الجزء السفلي.
  8. قم بلصق أنسجة المخ في الخزان باستخدام الغراء المناسب. صب محلول التقطيع في الخزان ، مع التأكد من تغطية أنسجة المخ ، والاستمرار في الحصول على الأكسجين.
  9. اضبط معلمات الاهتزاز لتقطيع الأنسجة إلى أقسام بسمك 300 ميكرومتر. كانت سرعة وتكرار القطاعة المستخدمة في هذه الدراسة 0.3 مم / ثانية و 70 هرتز على التوالي.
  10. استخدم فرشاة لالتقاط شرائح الدماغ ووضعها في طبق به محلول الثقافة. بعد ذلك ، قم بنقل شريحتين إلى أربع شرائح على كل إدراج مزرعة أنسجة بحجم المسام 30 مم ، 0.4 ميكرومتر في ألواح مكونة من 6 آبار تحتوي على 1.5 مل من محلول الاستزراع ، على مسافة لا تسمح للشرائح بالنمو في بعضها البعض.
  11. احتضان الأنسجة عند 37 درجة مئوية ، و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 ، و 95٪ رطوبة لمدة 14 ساعة.

2. جمع شريحة الدماغ

  1. استنشق وسط الثقافة من الغطاء وانقل شريحة الدماغ برفق إلى أنبوب سعة 1.5 مل باستخدام فرشاة.
  2. أضف 200-400 ميكرولتر من محلول الملح المتوازن من هانكس (HBSS) الذي يحتوي على 1 مليمول / لتر من فلوريد فينيل ميثيل سلفونيل (PMSF) إلى الأنبوب. تتأرجح بدقة وتخلط لتشكيل محلول متجانس باستخدام مطحنة الأنسجة. كان التردد والوقت المستخدمان في هذه الدراسة 800 هرتز و 60 ثانية على التوالي.
  3. جهاز الطرد المركزي التعليق عند 700 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، اجمع المادة الطافية في أنبوب طرد مركزي جديد سعة 1.5 مل.
  4. أضف 20-40 ميكرولتر من 20٪ Triton X-100 إلى المادة الطافية وقم بتدوير العينة باستخدام شاكر هزاز عند 4 درجات مئوية لمدة ساعة واحدة.
  5. جهاز الطرد المركزي التعليق عند 13,000 × جم لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية وجمع المادة الطافية. تطبيع جميع عينات شرائح الدماغ إلى تركيز بروتين يبلغ 2 ميكروغرام / ميكرولتر باستخدام مجموعة فحص بروتين حمض البيسنشونينيك (BCA).
  6. امزج المادة الطافية في 5x كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) (10٪ SDS ، 10 ملي مولار ديثيوثريتول [DTT] ، 250 ملي مولار تريس هيدروكلوريك [درجة الحموضة 6.8] ، 30٪ [حجم / حجم] جلسرين ، و 0.05٪ [وزن / حجم] صبغة بروموفينول الزرقاء) واغلي العينة لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية.
  7. قم بتجميد العينات المحضرة عند -20 درجة مئوية. سيتم إخضاعهم لاحقا للكشف عن طريق الرحلان الكهربائي وطرق النشاف الغربي.

3. مجموعة من ثقافة شريحة الدماغ الوسط المشروط (سم)

  1. قم بشفط وسط الثقافة بعد 14 ساعة وقم بتصفية CM باستخدام مرشح 0.22 ميكرومتر.
  2. قم بتركيز الوسط المكيف حتى 100 ميكرولتر باستخدام أنبوب طرد مركزي فائق الترشيح 10 كيلو دالتون عند 9,000 × جم لمدة 50 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تطبيع جميع العينات المتوسطة إلى تركيز بروتين يبلغ 0.8 ميكروغرام / ميكرولتر باستخدام مجموعة فحص بروتين BCA.
  3. قم بإزالة الوسط المكيف في مخزن مؤقت للتحميل 5x SDS واتركه يغلي لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية.
  4. قم بتجميد العينات المحضرة عند -20 درجة مئوية. سيتم إخضاعهم لاحقا للكشف عن طريق الرحلان الكهربائي وطرق النشاف الغربي.

4. تحليلات اللطخة الغربية

  1. تحضير جل الرحلان الكهربائي لجل دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS-PAGE) كما هو موضحسابقا 10. قم بتحميل شريحة الدماغ والعينة المتوسطة على المواد الهلامية SDS-PAGE مسبقة الصب. افصل العينات بجهد ثابت 80 فولت لمدة 30 دقيقة في البداية ، ثم بجهد ثابت 120 فولت لمدة 70 دقيقة.
  2. انقل البروتينات إلى أغشية ثنائي فلوريد البولي فينيلدين (PVDF) وقم بحظر ألبومين مصل البقر بنسبة 5٪ (BSA) في محلول ملحي مخفض ثلاثي الأبعاد 20 (TBST ؛ 150 ملي كلوريد الصوديوم ، 20 ملي تريس ، 0.1٪ توين -20 ، درجة الحموضة 7.4) لمدة ساعة واحدة.
  3. أضف الأجسام المضادة الأولية في TBST على النحو التالي: الفأر المضاد ل sAPP-α (نسبة تخفيف الأجسام المضادة 1: 5,000) ، ومضاد للأرانب المضاد للكلاستوجين (نسبة تخفيف الأجسام المضادة 1: 5,000) ، والفأر المضاد ل MAP2 (نسبة تخفيف الأجسام المضادة 1: 5,000) ، والفأر المضاد ل GAPDH (نسبة تخفيف الأجسام المضادة 1: 5,000) ، والفأر المضاد للأكتين (نسبة تخفيف الأجسام المضادة 1: 5,000) ، واحتضان بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية على الروك.
  4. اغسل الغشاء ثلاث مرات باستخدام TBST لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  5. أضف جسما مضادا ثانويا مناسبا في المخزن المؤقت ل TBST على النحو التالي: m-IgGκ BP-HRP (تخفيف 1: 5,000) ، IgG-HRP المضاد للأرانب (نسبة تخفيف الأجسام المضادة الثانوية 1: 5,000). احتضان لمدة 1-2 ساعة.
  6. اغسل الغشاء ثلاث مرات باستخدام TBST لمدة 15 دقيقة لكل منهما.
  7. مسح الأغشية وتصويرها باستخدام نظام تصوير مناسب.

5. تحليل البروتينات

  1. في هذه الدراسة ، قم بجمع وسط الاستزراع (CM) وفقا للخطوة 3.1 ثم تركيزه لاحقا على حجم نهائي قدره 80 ميكرولتر باستخدام أنبوب تركيز 3 كيلو دالتون عند 9,000 × جم لمدة 40 دقيقة عند 4 درجات مئوية. قم بتخزين عينة CM على الجليد ، في انتظار تحليل قياس الطيف الكتلي.
  2. إجراء طرق الكشف والتحليل البروتيني للعينات باتباع البروتوكولات كما هو موضح في الأوراق السابقة11 ، 12 ، 13.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

لتحديد إفراز البروتينات خارج الخلية في شرائح الدماغ ، قمنا بفحص تركيزات البروتين لعينات شريحة الدماغ وعينات الوسط المكيفة من خلال تجارب فحص BCA. تحتوي عينات شرائح الدماغ والعينات المتوسطة المكيفة على تركيزات عالية من البروتين (الجدول 1 والشكل 2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

يشير إفراز الدماغ إلى مجموعة جزيئات الإشارات ، والمعروفة باسم منتجات الإفراز العصبي أو الببتيد العصبي ، والتي يتم إطلاقها بواسطة الخلايا العصبية أو الخلايا الدبقية في البيئة خارج الخلية. يحمل إفراز الدماغ وظائف حاسمة في العديد من العمليات البيولوجية والفسيولوجية في ا?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

يذكر أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

تم دعم هذا البحث من قبل مركز شنتشن للبحوث السريرية للاضطرابات العقلية (20210617155253001) ، وصندوق شنتشن للتخصصات السريرية عالية المستوى في مقاطعة قوانغدونغ (SZGSPO13) ، ولجنة الابتكار في العلوم والتكنولوجيا في شنتشن (JCYJ20200109150700942) ، وبرنامج البحث والتطوير في المنطقة الرئيسية لمقاطعة قوانغ دونغ (2019B030335001) ، وصندوق بناء الانضباط الطبي الرئيسي في شنتشن (SZXK042) نحن ممتنون للمساعدة من مختبر مقاطعة قوانغدونغ الرئيسي المواد الحيوية المتقدمة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 μm Non-Sterile Millex Syringe Filters with PES MembraneMilliporeSLGPR33RB
1,4-Dithio-DL-threitol (DTT)Merck (Sigma Aldrich)DTT-RO
6-well platesCORNING3516
Actin antibodyCell Signaling Technology #3700
APP AntibodyCell Signaling Technology2452
BioRad Mini-Protean TGX precast gelsBioRad#1610185
Bovine serum albumin (BSA)Merck (Sigma Aldrich)10735094001
Bromophenol BlueMerck (Sigma Aldrich)B0126
Brush penDeli1.00008E+11
CaCl2Merck (Sigma Aldrich)C1016
CF3COOHMerck (Sigma Aldrich)302031
CH3CNMerck (Sigma Aldrich)34851
Clusterin antibodyCell Signaling Technology#42143
D-GlucoseMerck (Sigma Aldrich)G8270
Easy-nLC1200Thermo Fisher ScientificEasy-nLC1200
Filter paperROHUROHU-DLLZ00105
GAPDH antibodyCell Signaling Technology# 5174S
GlycerolMerck (Sigma Aldrich)G5516-100ML
Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS)Invitrogen (Gibco)14175095
Human/Rat NLGN2 AntibodyR&D SystemsAF5645
ICH2CONH2Merck (Sigma Aldrich)I6125
Immun-Blot PVDF membranesBIO-RAD#1620177
KClMerck (Sigma Aldrich)P3911
L-Ascorbic AcidMerck (Sigma Aldrich)A92902
Map2 antibodyCell Signaling Technology# 4542S
MgSO4Merck (Sigma Aldrich)M7506
m-IgGκ BP-HRPSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-516102
Millicell-CM 0.4 μmMilliporePIHP03050
Millipore AmiconUltra-0.5MLMilliporeUFC5010
mouse anti-rabbit IgG-HRPSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-2357
NaH2PO4Merck (Sigma Aldrich)S0751
NaHCO3Merck (Sigma Aldrich)S5761
NH4HCO3Merck (Sigma Aldrich)A6141
ParenzymeThermo Fisher ScientificR001100
Penicillin-Streptomycin Solution(P/S)Invitrogen (Gibco)15070063
Pierce BCA Protein Assay KitThermo Fisher Scientific23225
QEactiveThermo Fisher ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZR
Rabbit Anti-Goat IgG (H&L)-HRP ConjugatedEasybioBE0103-100
Razor bladeBFYING EAGLEHX-L146-1H
Sodium chloride NaClMerck (Sigma Aldrich)S6150
Sodium dodecylsulfate (SDS)Merck (Sigma Aldrich)V900859
Sodium PyruvateMerck (Sigma Aldrich)P2256
SpeedVac SRF110 Refrigerated Vacuum Concentrator (German)Thermo Fisher ScientificSRF110P2-115
SucroseMerck (Sigma Aldrich)G8270
Tissue grinderSCIENTZSCIENTZ-48
Tris (Hydroxymethyl)Merck (Sigma Aldrich)TRIS-RO
TritonX-100Merck (Sigma Aldrich)T8787
Tween-20Merck (Sigma Aldrich)P1379
Vibratory slicerLeicaLeica VT 1000S

References

  1. Martín-de-Saavedra, M. D., et al. Shed CNTNAP2 ectodomain is detectable in CSF and regulates Ca2+ homeostasis and network synchrony via PMCA2/ATP2B2. Neuron. 110 (4), 627-643 (2022).
  2. Jha, M. K., et al. The secretome signature of reactive glial cells and its pathological implications. Biochimica et Biophysica Acta. 1834 (11), 2418-2428 (2013).
  3. Maćkowiak, M., Mordalska, P., Wędzony, K. Neuroligins, synapse balance and neuropsychiatric disorders. Pharmacological Reports. 66 (5), 830-835 (2014).
  4. Suzuki, K., et al. Activity-dependent proteolytic cleavage of neuroligin-1. Neuron. 76 (2), 410-422 (2012).
  5. Venkatesh, H. S., et al. Targeting neuronal activity-regulated neuroligin-3 dependency in high-grade glioma. Nature. 549 (7673), 533-537 (2017).
  6. Shen, F., et al. Proteomic analysis of cerebrospinal fluid: toward the identification of biomarkers for gliomas. Neurosurgical Review. 37 (3), 367-380 (2014).
  7. Suk, K. Combined analysis of the glia secretome and the CSF proteome: neuroinflammation and novel biomarkers. Expert Review of Proteomics. 7 (2), 263-274 (2010).
  8. Pegg, C. C., He, C., Stroink, A. R., Kattner, K. A., Wang, C. X. Technique for collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in rat. Journal of Neuroscience Methods. 187 (1), 8-12 (2010).
  9. Bossu, J. L., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Gähwiler, B. H. Somatic voltage-gated potassium currents of rat hippocampal pyramidal cells in organotypic slice cultures. The Journal of Physiology. 495, 367-381 (1996).
  10. Hirano, S. Western blot analysis. Methods in Molecular Biology. 926, 87-97 (2012).
  11. Davey, J. R., et al. Integrated expression analysis of muscle hypertrophy identifies Asb2 as a negative regulator of muscle mass. Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (5), e85477(2016).
  12. Ren, H., et al. Identification of TPD52 and DNAJB1 as two novel bile biomarkers for cholangiocarcinoma by iTRAQ-based quantitative proteomics analysis. Oncology Reports. 42 (6), 2622-2634 (2019).
  13. Li, J., et al. Identification and characterization of 293T cell-derived exosomes by profiling the protein, mRNA and MicroRNA components. PLoS One. 11 (9), 0163043(2016).
  14. Kuhn, P. H., et al. Systematic substrate identification indicates a central role for the metalloprotease ADAM10 in axon targeting and synapse function. eLife. 5, e12748(2016).
  15. Chiasserini, D., et al. Proteomic analysis of cerebrospinal fluid extracellular vesicles: a comprehensive dataset. Journal of Proteomics. 106, 191-204 (2014).
  16. Dislich, B., et al. Label-free quantitative proteomics of mouse cerebrospinal fluid detects β-site APP cleaving enzyme (BACE1) protease substrates in vivo. Molecular and Cellular Proteomics. 14 (10), 2550-2563 (2015).
  17. Chenau, J., Michelland, S., Seve, M. Secretome: definitions and biomedical interest. La Revue de Médecine Interne. 29 (7), 606-608 (2008).
  18. Assunção-Silva, R. C., et al. Exploiting the impact of the secretome of MSCs isolated from different tissue sources on neuronal differentiation and axonal growth. Biochimie. 155, 83-91 (2018).
  19. Ardianto, C., et al. Secretome as neuropathology-targeted intervention of Parkinson's disease. Regenerative Therapy. 21, 288-293 (2022).
  20. Willis, C. M., Nicaise, A. M., Peruzzotti-Jametti, L., Pluchino, S. The neural stem cell secretome and its role in brain repair. Brain Research. 1729, 146615(2020).
  21. Pandamooz, S., et al. Modeling traumatic injury in organotypic spinal cord slice culture obtained from adult rat. Tissue and Cell. 56, 90-97 (2019).
  22. Peixoto, R. T., et al. Transsynaptic signaling by activity-dependent cleavage of neuroligin-1. Neuron. 76 (2), 396-409 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

SDS PAGE

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved