نموذج معدل لانسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الجمجمة لدراسة نتائج السكتة الدماغية في الفئران المسنة

Summary

يوضح هذا البروتوكول نموذجا فريدا لضربة الماوس مع احتشاء متوسط الحجم ومعدل بقاء ممتاز. يسمح هذا النموذج لباحثي السكتة الدماغية قبل السريرية بتمديد مدة نقص التروية ، واستخدام الفئران المسنة ، وتقييم النتائج الوظيفية طويلة الأجل.

Abstract

في أبحاث السكتة الدماغية التجريبية ، يستخدم انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) بخيوط داخل اللمعة على نطاق واسع لنمذجة السكتة الدماغية الإقفارية في الفئران. يظهر نموذج MCAO الفتيل عادة احتشاء دماغي هائل في الفئران C57Bl / 6 التي تتضمن أحيانا أنسجة المخ في المنطقة التي يوفرها الشريان الدماغي الخلفي ، والذي يرجع إلى حد كبير إلى ارتفاع معدل رتق الشريان الخلفي المتصل. تعتبر هذه الظاهرة مساهما رئيسيا في ارتفاع معدل الوفيات الذي لوحظ في الفئران C57Bl / 6 أثناء التعافي من السكتة الدماغية على المدى الطويل بعد خيوط MCAO. وبالتالي ، فإن العديد من دراسات السكتة الدماغية المزمنة تستغل نماذج MCAO البعيدة. ومع ذلك ، فإن هذه النماذج عادة ما تنتج احتشاء فقط في منطقة القشرة ، وبالتالي ، فإن تقييم العجز العصبي بعد السكتة الدماغية يمكن أن يمثل تحديا. أنشأت هذه الدراسة نموذجا معدلا ل MCAO عبر الجمجمة يتم فيه إغلاق MCA في الجذع جزئيا إما بشكل دائم أو عابر عبر نافذة جمجمة صغيرة. نظرا لأن موقع الانسداد قريب نسبيا من أصل MCA ، فإن هذا النموذج يولد تلفا في الدماغ في كل من القشرة والمخطط. أظهر التوصيف المكثف لهذا النموذج معدل بقاء ممتاز على المدى الطويل ، حتى في الفئران المسنة ، بالإضافة إلى عجز عصبي يمكن اكتشافه بسهولة. لذلك ، يمثل نموذج الماوس MCAO الموصوف هنا أداة قيمة لأبحاث السكتة الدماغية التجريبية.

Introduction

يعاني ما يقرب من 800000 شخص من سكتة دماغية في الولايات المتحدة كل عام ، ومعظم هذه السكتات الدماغية هي نقص تروية في الطبيعة¹. استعادة تدفق الدم الدماغي في الوقت المناسب مع منشط البلازمينوجين الأنسجة (tPA) و / أو استئصال الخثرة هو حاليا العلاج الأكثر فعالية لمرضى السكتة الدماغية. ومع ذلك ، فإن الشفاء التام للوظائف العصبية على المدى الطويل أمر نادر الحدوث ^2,3. وبالتالي ، فإن البحث عن علاج جديد للسكتة الدماغية يستهدف التحسين الوظيفي هو مجال مكثف للبحث يتطلب نماذج حيوانية ذات صلة سريريا للسكتة الدماغية.

يستخدم نموذج السكتة الدماغية الإقفارية الأكثر شيوعا في القوار....

Protocol

يتم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذا العمل وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام في البحث ، وقد تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة رعاية واستخدام بمعهد ديوك (IACUC). تم استخدام ذكور الفئران الصغيرة (8-10 أسابيع) والذين تتراوح أعمارهم بين (22 شهرا) C57Bl / 6 في الدراسة الحالية. يوضح الشكل 1 نظرة عامة على هذا البروتوكول.

1. التحضير الجراحي

1. افحص الماوس بحثا عن تشوهات جسيمة وعجز سلوكي.
   ملاحظة: قبل الجراحة ، من المهم أن يرتدي الجراحون معدات الوقاية الشخصية المناسبة (المعدات الشخصية الواقية) ، بما في ذلك القناع الجراحي والقبعة والقفازات والعباءة.
2. وزن الماو....

النتائج

من خلال عرض مباشر تحت المجهر الجراحي ، يمكن التأكد بصريا من أن تدفق الدم MCA يتم حظره أثناء نقص التروية. أظهرت دراستنا السابقة انخفاضا بنسبة >80٪ في تدفق الدم في المنطقة الإقفارية باستخدام جهاز مراقبة دوبلر بالليزر⁶. من أجل تحديد تغيرات تدفق الدم بعد MCAO ، يمكن استخدام LSCI لمزيد من ?.......

Discussion

تم إنشاء أول نموذج انسداد MCA عبر الجمجمة في الفئران في عام 1981¹¹،^{12 ،} واستبدل بنموذج MCAO بدون استئصال الجمجمة في عام 1989⁴. كان لانسداد MCA الأولي عبر الجمجمة مجال جراحي واسع ، بحيث تمت إزالة القوس الوجني بالكامل وسحب العضلات بشكل جانبي. تورمت الأنسجة ا?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25% bupivacaine	Hospira	NDC 0409-1159-18
0.9% sodium chloride	ICU Medical	NDC 0990-7983-03
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)	Sigma or any available vendor
20 G IV catheter	BD	381534	20 GA 1.6 IN
30 G needle	BD	305106
4-0 silk suture	Look	SP116	Black braided silk
8-0 suture with needle	Ethilon	2822G
Alcohol swabs	BD	326895
Anesthesia induction box	Any suitable vendor		Pexiglass make
Electrical grinder	JSDA	JD 700
High temperature cautery loop tip	Bovie	AA03
Isoflurane	Covetrus	NDC 11695-6777-2
Laser doppler perfusion monitor	Moor Instruments	moorVMS-LDF1
Lubricant eye ointment	Bausch + Lomb	339081
Mouse rectal probe	Physitemp	RET-3
Nitrous Oxide	Airgas	UN1070
Otoscope	Welchallyn	728	2.5 mm Speculum
Oxygen	Airgas	UN1072
Povidone-iodine	CVS	955338
Recovery box	Brinsea	TLC eco
Rimadyl (carprofen)	Zoetis	6100701	Injectable 50 mg/mL
Rodent ventilator	Harvard	Model 683
Temperature controller	Physitemp	TCAT-2DF
Triple antibioric & pain relief	CVS	NDC 59770-823-56
Vaporizer	RWD	R583S