غسيل الكلى المجهري داخل الأدمة: نهج للتحقيق في الآليات الجديدة لضعف الأوعية الدموية الدقيقة لدى البشر

Summary

غسيل الكلى داخل الأدمة هو تقنية طفيفة التوغل تستخدم للتحقيق في وظيفة الأوعية الدموية الدقيقة في الصحة والمرض. يمكن استخدام كل من بروتوكولات الاستجابة للجرعة والتدفئة المحلية لهذه التقنية لاستكشاف آليات توسع الأوعية وتضيق الأوعية في الدورة الدموية الجلدية.

Abstract

الأوعية الدموية الجلدية هي نسيج يمكن الوصول إليه ويمكن استخدامه لتقييم وظيفة الأوعية الدموية الدقيقة في البشر. غسيل الكلى داخل الأدمة هو تقنية طفيفة التوغل تستخدم للتحقيق في آليات العضلات الملساء الوعائية والوظيفة البطانية في الدورة الدموية الجلدية. تسمح هذه التقنية بالتشريح الدوائي للفيزيولوجيا المرضية للخلل البطاني الوعائي الدقيق كما هو مفهرس بانخفاض توسع الأوعية بوساطة أكسيد النيتريك ، وهو مؤشر على خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية. في هذه التقنية ، يتم وضع مسبار غسيل الكلى الدقيق في الطبقة الجلدية من الجلد ، ويتم وضع وحدة تسخين محلية مع مسبار قياس تدفق دوبلر بالليزر فوق المسبار لقياس تدفق خلايا الدم الحمراء. يتم تثبيت درجة حرارة الجلد المحلية أو تحفيزها بتطبيق الحرارة المباشر ، ويتم استخدام العوامل الدوائية من خلال المسبار لتحفيز أو تثبيط مسارات الإشارات داخل الخلايا من أجل تحفيز توسع الأوعية أو تضيق الأوعية أو لاستجواب الآليات ذات الأهمية (العوامل المشتركة ، مضادات الأكسدة ، إلخ). يتم تحديد التوصيل الوعائي الجلدي ، ويمكن تحديد آليات الخلل البطاني في حالات المرض.

Introduction

أمراض القلب والأوعية الدموية (CVD) هي السبب الرئيسي للوفاة في الولايات المتحدة¹. ارتفاع ضغط الدم (HTN) هو عامل خطر مستقل للسكتة الدماغية وأمراض القلب التاجية وفشل القلب ويقدر أنه يؤثر على ما يزيد عن ~ 50٪ من سكان الولايات المتحدة². يمكن أن يتطور HTN كأمراض قلبية وعائية مستقلة (HTN أولية) أو نتيجة لحالة أخرى ، مثل مرض الكلى المتعدد الكيسات و / أو اضطرابات الغدد الصماء (HTN الثانوي). اتساع نطاق مسببات HTN يعقد التحقيقات في الآليات الأساسية وتلف الأعضاء النهائية التي لوحظت مع HTN. هناك حاجة إلى مناهج بحثية متنوعة وجديدة في الفيزيولوجيا المرضية لتلف الأعضاء النهائية المرتبط ب HTN.

واحدة من أولى ال....

Protocol

تتم الموافقة على جميع الإجراءات من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لجامعة ولاية بنسلفانيا قبل توظيف المشاركين.

1. إعداد المعدات

1. قم بتشغيل وحدة التدفئة المحلية ومقياس تدفق دوبلر بالليزر.
   ملاحظة: يجب معايرة كلاهما قبل جمع البيانات وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. يجب توصيل مقياس تدفق دوبلر بالليزر بأجهزة الحصول على البيانات مع أخذ العينات عند 100 هرتز (100 عينة / دقيقة) والتسجيل المستمر في برنامج الحصول على البيانات. بينما يمكن استخدام أجهزة وبرامج الحصول على البيانات الأخرى ، من أجل البساطة ، تعكس الإرشادات المتبقية إمكانات أجهزة PowerLab وبرامج LabChart.
2. افتح ملف برنامج LabChart.
   ملاحظة: يجب عمل ملف مرجعي مع إدخال البيانات....

النتائج

بروتوكول الاستجابة لجرعة الأسيتيل كولين

يصور الشكل 1 أ مخططا يوضح بالتفصيل بروتوكول الاستجابة لجرعة ACh. يوضح الشكل 1B التتبع التمثيلي لقيم تدفق كرات الدم الحمراء (وحدات التروية ، PU ؛ متوسطات 30 ثانية) من بروتوكول الاستجابة لجرعة ACh الق.......

Discussion

تقنية غسيل الكلى داخل الأدمة هي أداة متعددة الاستخدامات في أبحاث الأوعية الدموية البشرية. قد يغير المحققون البروتوكول لزيادة تنويع تطبيقاته. على سبيل المثال ، وصفنا بروتوكول الاستجابة لجرعة ACh ، لكن التحقيقات الأخرى في آليات تضيق الأوعية أو النغمة الحركية الوعائية ، بدلا من توسع الأوعية .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringes	BD Syringes	302100
Acetlycholine	United States Pharmacopeia	1424511	Pilot data collected in our lab indicate drying acetylcholine increases variability of CVC response; do not dry, store in desiccator
Alcohol swabs	Mckesson	191089
Baby Bee Syringe Drive	Bioanalytical Systems, Incorporated	MD-1001	In this study the optional 3-syringe bracket (catalg number MD-1002) was utilized
CMA 30 Linear Microdialysis Probes	Harvard Apparatus	CMA8010460
Connex Spot Monitor	WelchAllyn	74CT-B	automated blood pressure monitor
Hive Syringe Pump Controller	Bioanalytical Systems, Incorporated	MD-1020	Controls up to 4 Baby Bee Syringe Drives
LabChart 8	AD Instruments		**PowerLab hardware and LabChart software must be compatible versions
Lactated Ringer's Solution	Avantor (VWR)	76313-478
Laser Doppler Blood FlowMeter	Moor Instruments	MoorVMS-LDF
Laser Doppler probe calibration kit	Moor Instruments	CAL
Laser Doppler VP12 probe	Moor Instruments	VP12
Linear Microdialysis Probes	Bioanalytical Systems, Inc.	MD-2000
NG-nitro-l-arginine methyl ester	Sigma Aldrich	483125-M	L-NAME
Povidone-iodine / betadine	Dynarex	1202
PowerLab C Data Acquisition Device	AD Instruments	PLC01	**
PowerLab C Instrument Interface	AD Instruments	PLCI1	**
Probe adhesive discs	Moor Instruments		attach local heating unit to skin
Skin Heater Controller	Moor Instruments	moorVMS-HEAT 1.3
Small heating probe	Moor Instruments	VHP2
Sterile drapes	Halyard	89731
Sterile gauze	Dukal Corporation	2085
Sterile surgical gloves	Esteem Cardinal Health	8856N	catalogue number followed by the initials of the glove size, then the letter "B" (e.g., 8856NMB for medium)
Surgical scissors	Cole-Parmer	UX-06287-26