توصيف مورفولوجيا الأوعية الدموية للتنكس البقعي المرتبط بالعمر الوعائي الحديث بواسطة تصوير الأوعية الخضراء الإندوسيانين

Summary

حاليا ، تصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) هو الطريقة المفضلة لتحديد أنماط التسرب في النماذج الحيوانية للأوعية الدموية المشيمية (CNV). ومع ذلك ، لا يوفر FA معلومات حول مورفولوجيا الأوعية الدموية. يحدد هذا البروتوكول استخدام تصوير الأوعية الخضراء الإندوسيانين (ICGA) لتوصيف أنواع الآفات المختلفة من CNV الناجم عن الليزر في نماذج الفئران.

Abstract

التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) هو السبب الرئيسي للعمى بين الأفراد الأكبر سنا ، ويتزايد انتشاره بسرعة بسبب شيخوخة السكان. الأوعية الدموية المشيمية (CNV) أو AMD الرطب ، والتي تمثل 10٪ -20٪ من جميع حالات AMD ، مسؤولة عن 80٪ -90٪ من العمى المرتبط ب AMD. تظهر العلاجات الحالية المضادة ل VEGF استجابات دون المستوى الأمثل في حوالي 50٪ من المرضى. غالبا ما ترتبط مقاومة العلاج المضاد ل VEGF في مرضى CNV ب CNV الشرياني ، بينما يميل المستجيبون إلى الإصابة ب CNV الشعري. بينما يستخدم تصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) بشكل شائع لتقييم أنماط التسرب في مرضى AMD الرطب والنماذج الحيوانية ، فإنه لا يوفر معلومات حول مورفولوجيا الأوعية الدموية CNV (CNV الشرياني مقابل CNV الشعري). يقدم هذا البروتوكول استخدام تصوير الأوعية الخضراء الإندوسيانين (ICGA) لتوصيف أنواع الآفات في نماذج فأر CNV التي يسببها الليزر. هذه الطريقة ضرورية للتحقيق في آليات واستراتيجيات العلاج لمقاومة VEGF في AMD الرطب. يوصى بدمج ICGA جنبا إلى جنب مع FA لإجراء تقييم شامل لكل من التسرب والسمات الوعائية ل CNV في الدراسات الميكانيكية والعلاجية.

Introduction

التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) هو حالة سائدة تؤدي إلى فقدان البصر الشديد لدى الأفراد الأكبر سنا¹. في الولايات المتحدة وحدها ، من المتوقع أن يتضاعف عدد مرضى AMD ، ليصل إلى ما يقرب من 22 مليون بحلول عام 2050 ، مقارنة ب 11 مليون حاليا. على الصعيد العالمي ، من المتوقع أن يصل العدد التقديري لحالات AMD إلى 288 مليون حالة بحلول عام 2040².

يمكن أن يكون للأوعية الدموية المشيمية (CNV) ، والمعروفة أيضا باسم AMD "الرطب" أو الأوعية الدموية الحديثة ، آثار مدمرة على الرؤية بسبب تكوين أوعية دموية غير طبيعية تحت الشبكية المركزية. هذا يؤدي إلى نزيف ، نضح الشبكية ، وفقدان البصر بشكل كبير. أحدث إدخال علاجات ع....

Protocol

حصلت التجارب على التي أجريت في هذه الدراسة على موافقة من اللجان المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) في كلية بايلور للطب. تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية الموضحة في بيان جمعية أبحاث الرؤية وطب العيون (ARVO) لاستخدام في أبحاث العيون والرؤية. تم استخدام الفئران الصغيرة (7-9 أسابيع) والقديمة (12-16 شهرا) C57BL / 6J من الذكور والإناث في هذه الدراسة. تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد).

1. إعداد نظام التصوير

1. ضع وسادة تدفئة على منصة التصوير (انظر جدول المواد) لضمان الحفاظ على درجة حرارة جسم الماوس أثناء التصوير. قم بتنشيط وسادة التدفئة واضبط درجة الحرارة على 35 درج....

النتائج

بعد البروتوكول ، تم إجراء ICGA و FA على CNV المستحث بالليزر في الفئران الصغيرة (7-9 أسابيع) والقديمة (12-16 شهرا) C57BL / 6J. يوفر FA معلومات حول موقع وتسرب آفات CNV (الشكل 1 ، اللوحات اليسرى) ، بينما يكشف ICGA عن مورفولوجيا الأوعية الدموية لآفات CNV (الشكل 1 ، اللوحات اليمنى). في ا?.......

Discussion

أظهرت هذه الدراسة استخدام تصوير الأوعية الخضراء الإندوسيانين (ICGA) لتحديد مورفولوجيا الأوعية الدموية للأوعية الدموية المشيمية الشريانية والشعرية (CNV) في نماذج الفئران مع CNV الناجم عن الليزر. مكنت خصائص ضوء الهيموغلوبين والأشعة تحت الحمراء لصبغة الإندوسيانين الخضراء (ICG) من اكتشاف مورفولوج.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236