A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نحن نقدم نظرة عامة شاملة وصقل البروتوكولات الحالية لتشكيل سرطان الخلايا الكبدية (HCC) ، والتي تشمل جميع مراحل زراعة الأعضاء العضوية. ويعمل هذا النظام كنموذج قيم لتحديد الأهداف العلاجية المحتملة وتقييم فعالية الأدوية المرشحة.

Abstract

سرطان الخلايا الكبدية (HCC) هو ورم منتشر ومميت للغاية في جميع أنحاء العالم ، واكتشافه المتأخر وعدم وجود عوامل علاجية محددة فعالة يستلزم مزيدا من البحث في التسبب في المرض والعلاج. حظيت الكائنات العضوية ، وهي نموذج جديد يشبه إلى حد كبير أنسجة الورم الأصلية ويمكن زراعتها في المختبر ، باهتمام كبير في السنوات الأخيرة ، مع العديد من التقارير حول تطوير نماذج عضوية لسرطان الكبد. في هذه الدراسة ، نجحنا في تحسين الإجراء وإنشاء بروتوكول استزراع يتيح تكوين عضويات HCC أكبر حجما مع ظروف مرور وثقافة مستقرة. لقد حددنا بشكل شامل كل خطوة من خطوات الإجراء ، والتي تغطي العملية الكاملة لتفكك أنسجة سرطان الكبد ، والطلاء العضوي ، والثقافة ، والمرور ، والحفظ بالتبريد ، والإنعاش ، وقدمنا احتياطات مفصلة في هذه الورقة. تظهر هذه الكائنات العضوية تشابها وراثيا مع أنسجة سرطان الكبد الأصلية ويمكن استخدامها في تطبيقات متنوعة ، بما في ذلك تحديد الأهداف العلاجية المحتملة للأورام وتطوير الأدوية اللاحقة.

Introduction

حظي سرطان الخلايا الكبدية (HCC) ، وهو ورم منتشر ومتنوع على نطاق واسع1 ، باهتمام كبير داخل المجتمع الطبي. يشير وجود لدونة النسب وعدم التجانس الكبير في سرطان الكبد إلى أن الخلايا السرطانية التي تنشأ من مرضى مختلفين وحتى آفات مميزة داخل نفس المريض قد تظهر سمات جزيئية ومظهرية مختلفة ، مما يمثل عقبات هائلة في تقدم الأساليب العلاجية المبتكرة2،3،4،5. وبالتالي، هناك حاجة ملحة إلى تعزيز فهم الخصائص والآليات البيولوجية لمقاومة الأدوية في سرطان الكبد للاسترشاد بها في صياغة استراتيجيات علاجية أكثر فعالية.

Protocol

تم الحصول على أنسجة خزعة بشرية من المريض المعني في مستشفى السرطان التابع ومعهد جامعة قوانغتشو الطبية ، وتم الحصول على موافقة مستنيرة من المرضى. راجع جدول المواد للحصول على تفاصيل حول جميع المواد والكواشف والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. إنشاء عضويات سرطان الكبد المشتقة من المريض من العينات الجراحية

ملاحظة: يشمل إنشاء عضويات سرطان الكبد مراحل مختلفة ، وهي تفكك الأنسجة ، والطلاء العضوي ، والثقافة ، والمرور ، والحفظ بالتبريد ، والإنعاش. تتطلب عملية تفكك الأنسجة مدة 2 ساعة ، بينما يستغرق بذر المواد العضوية على طبق حوالي 40 دقيقة. بعد ذلك ، يخضع الجيل الأولي من عضويات سرطان الكب....

النتائج

عند تنفيذ الإجراء المذكور أعلاه ، يمكن ملاحظة ظهور كرويات عضوية HCC عادة في غضون 3 أيام (الشكل 1). يوضح الشكل 1 أ ، ب عضوي HCC الثابت ، والذي يطور على الفور كرويات مدمجة تتميز بحواف مستديرة وسيتوسول نافذ في اليوم الأول من التأسيس. أثناء نمو عضويات سرطان ا?.......

Discussion

تكمن إحدى الفوائد الملحوظة للنماذج العضوية المشتقة من المريض في قدرتها على تكرار الخصائص البيولوجية للأورام بأمانة ، بما في ذلك بنية الأنسجة والمشهد الجينومي. تظهر هذه النماذج مستوى ملحوظا من الدقة وتعكس بشكل فعال عدم تجانس الأورام وتطورها ، حتى على مدى فترات طويلة من الزراعة6

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82122048 ؛ 82003773 ؛ 82203380) ومؤسسة قوانغدونغ للبحوث الأساسية والتطبيقية (2023A1515011416).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
[Leu15]-gastrin I humanMerckG9145
1.5 mL MicrotubesMerckAXYMCT150LC
A8301 (TGFβ inhibitor)Tocris Bioscience2939
B27 Supplement (503), minus vitamin AThermo Fisher Scientific12587010
B-27 Supplement (503), serum-freeThermo Fisher Scientific17504044
BMP7Peprotech120-03P
Cell strainer size 100 μmMerckCLS352360
CHIR99021MerckSML1046
Collagenase DMerck11088858001
Corning Costar Ultra-LowMerckCLS3473
Costar 24-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates, Individually Wrapped, SterileCorning3473
Costar 6-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates, Individually Wrapped, SterileCorning3471
Cultrex Organoid Harvesting SolutionR&D SYSTEMS3700-100-01Organoid harvesting solution
Cultrex Reduced Growth Factor BME, Type 2 PathClear (BME)Merck3533-005-02
DAPTMerckD5942
DexamethasoneMerckD4902
DMSOMerckC6164
DNaseIMerckDN25
Dulbecco's Modified Eagle Medium/Ham's F-12Thermo Fisher Scientific12634028Advanced DMEM/F-12
Earle’s balanced salt solution (EBSS)Thermo Fisher Scientific24010043
ForcepsN/AN/A
ForskolinTocris Bioscience1099
GlutaMAX supplementThermo Fisher Scientific35050061
HEPES, 1 MThermo Fisher Scientific15630080
Leica DM6 B Fluorescence Motorized MicroscopeLeicaN/A
N2 supplement (1003)Thermo Fisher Scientific17502048
N-acetylcysteineMerckA0737-5MG
NicotinamideMerckN0636
Nunc 15 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge TubesThermo Fisher Scientific339651
Nunc 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge TubesThermo Fisher Scientific339653
Penicillin/streptomycin (10,000 U/mL)Thermo Fisher Scientific15140122
Recombinant human EGFPeprotechAF-100-15
Recombinant human FGF10Peprotech100-26
Recombinant human FGF19Peprotech100-32
Recombinant human HGFPeprotech100-39
Recombinant human NogginPeprotech120-10C
Rho kinase inhibitor Y-27632 dihydrochlorideMerckY0503
R-spodin1-conditioned medium(Broutier et al.)N/ASecretion of cell lines
Surgical scissorsN/AN/A
Surgical specimen of tumor removed from HCC patientsAffiliated Cancer Hospital and Institute of Guangzhou Medical UniversityN/A
TNFαPeprotech315-01A
TrypLE Express Enzyme (1x), no phenol redThermo Fisher Scientific12604013Trypsin substitute
Wnt-3a-conditioned medium(Broutier et al.)N/ASecretion of cell lines

References

  1. Vogel, A., Meyer, T., Sapisochin, G., Salem, R., Saborowski, A. Hepatocellular carcinoma. Lancet. 400 (10360), 1345-1362 (2022).
  2. Craig, A. J., von Felden, J., Garcia-Lezana, T., Sarcognato, S., Villanueva, A. Tumour evolution in hepatocellular carcinoma.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

198

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved