JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

من خلال دمج تصميم تجربة التفاعل وتحليل متطلبات المستخدم ، نقدم مكشطة خلايا مبتكرة تعزز فحوصات التئام الجروح الخلوية من حيث قابلية التكاثر والاعتمادية والتطبيق العملي والسلامة الخلوية وتجربة المستخدم.

Abstract

غالبا ما يتم تقويض موثوقية قياس الهجرة الخلوية في مقايسات التئام الجروح بسبب عدم الاستقرار المنهجي السائد ، أي الطريقة القائمة على الأطراف. نقدم أداة مبتكرة مصممة لمعالجة هذه القيود. تتفوق مكشطة الخلايا الجديدة الخاصة بنا على النهج الحالي ، مما يولد فجوة خالية من الخلايا أكثر اتساقا واستقرارا. تكشف التجارب البيولوجية المتكررة أن الفجوة الخالية من الخلايا التي تنتجها مكشطة الخلية تظهر حوافا أكثر استقامة وحجما وشكلا موحدين مقارنة بالتقنية القائمة على الطرف (p < 0.05). من حيث تصميم المنتج ، تتميز مكشطة الخلايا بنظام ألوان مكرر مناسب للبيئات المختبرية ، مما يعزز مراقبة النتائج التجريبية ، ويسمح بالتعقيم من خلال التعقيم لإعادة الاستخدام. والجدير بالذكر أنه بعد العلاج ، تظهر مكشطة الخلايا تأثيرا ضئيلا على صلاحية الخلية وتكاثرها (97.31٪ و 24.41٪ على التوالي). على العكس من ذلك ، فإن الطريقة القائمة على الطرف تؤدي إلى انخفاض صلاحية الخلية (91.37٪) والانتشار (18.79٪). يقدم هذا التحقيق مكشطة الخلايا كجهاز جديد قابل لإعادة الاستخدام قادر على توليد فجوات خالية من الخلايا قابلة للتكرار مع الحفاظ على الجدوى الخلوية ، وبالتالي زيادة موثوقية فحوصات التئام الجروح مقارنة بالتقنيات الحالية.

Introduction

تتميز الأورام بسمات مميزة مثل مزايا النمو الانتقائي ، وإعادة الأسلاك الأيضية ، والتعديل المناعي ، وكلها تساهم بشكل مثير للاهتمام في تعزيز هجرة الخلايا ، وهو سلوك خبيث حرج للخلايا السرطانية. تؤثر هذه الميزة بشكل مباشر على ورم خبيث بعيد للورم الرئيسي ، مما يعرض للخطر بقاء المرضى على المدى الطويل1،2،3. تمكن مزايا النمو الانتقائي الخلايا السرطانية من التفوق على الخلايا الطبيعية ، بينما تدعم إعادة الأسلاك الأيضية هذا الانتشار السريع عن طريق تغيير مسارات الطاقة. في الوقت نفسه ، يسمح التعديل المناعي للأورام بالتهرب من دفاعات الجسم. تؤكد الدراسات على شدة هذه المشكلة ، حيث تظهر أن ورم خبيث في الرئة ، غالبا ما يكون نتيجة لهجرة الخلايا المعززة ، هو حدث نهائي يؤدي إلى وفاة مرضى يعانون من سرطانات مختلفة4. على سبيل المثال ، تمثل سرطانات الثدي5 وسرطان عنق الرحم4 وساركوما العظم6 20٪ و 9٪ و 30٪ من هذه الحالات على التوالي. لذلك ، أصبح تقييم هجرة الخلايا السرطانية جزءا لا يتجزأ من أبحاث الأورام الحالية ، مما يسلط الضوء بشكل أكبر على الطبيعة متعددة الأوجه لتطور الورم.

مقايسة التئام الجروح الخلوية هي طريقة سهلة الاستخدام لقياس الهجرة الخلوية في المختبر ، وغالبا ما تستخدم في دراسات الأورام7. يستخدم معظم المجربين أطراف الماصة لإنشاء جروح الخلايا يدويا8. على الرغم من أن مثل هذه الطريقة يمكن أن تشكل جروح الخلايا بسرعة وسهولة ، إلا أنها لا تزال تحتوي على العديد من القيود التي تؤثر على قابلية التكاثر والدقة لتقييم هجرة الخلايا. أولا ، يتأثر استخدام أطراف الماصة لإنشاء خدوش يدويا بشكل كبير بزاوية تشغيل المشغل وقوته وسرعته ، مما يؤثر على قابلية تكرار الطريقة8. ثانيا ، عادة ما يكون لعيوب الخلايا الناتجة عن الطرف حواف خشنة بدلا من حواف مستقيمة لأن أطراف الماصة هي منتجات بلاستيكية ذات مرونة معينة9. تولد بعض الدراسات الجروح عن طريق وضع إدخالات مستنبتة مسبقة الصنع مباشرة في لوحة زراعة الخلايا لتقييد نطاق تكاثر الخلايا10. يتحايل هذا النهج على قيود الطريقة القائمة على النصائح ، مثل الحواف الخشنة وقابلية التكاثر. ومع ذلك ، حتى مع المواد المتوافقة حيويا ، فإن التعايش طويل الأمد للتضمين مع الخلايا لا يزال يؤثر على نمو الخلايا11. علاوة على ذلك ، قد يتسبب التضمين أيضا في حدوث تغيرات جينية خلوية في المنطقة الهامشية بسبب تقييد الاتصال12. كما أن إدراج التلامس المنتج من مواد متوافقة حيويا باهظ الثمن ويصعب إعادة استخدامه ، مما يحد من جدواها13. لذلك ، هناك حاجة إلى أداة جديدة وقابلة للتكرار وعملية لتحديد الهجرة الخلوية في المختبر بسهولة.

الهدف الأساسي من هذه الطريقة هو تقديم أداة مبتكرة لتحديد الهجرة الخلوية في المختبر في دراسات الأورام ، ومعالجة قيود التقنيات الحالية وتعزيز قابلية التكاثر والدقة في تقييم الهجرة الخلوية.

يكمن الأساس المنطقي وراء تطوير هذه التقنية في الأهمية الحاسمة لتقييم هجرة الخلايا السرطانية في علم الأورام. تظهر الأورام سمات مميزة ، بما في ذلك مزايا النمو الانتقائي ، وإعادة الأسلاك الأيضية ، والتعديل المناعي ، وكلها تساهم في تعزيز هجرة الخلايا ، وهو جانب أساسي من الأورام الخبيثة السرطانية. تهدف هذه الطريقة إلى توفير وسيلة أكثر موثوقية لدراسة الهجرة الخلوية ، مما يساهم في فهم أعمق لسلوك الورم.

تقدم هذه الطريقة مزايا كبيرة على التقنيات الحالية. يمكن أن تعاني فحوصات الخدش اليدوية من التداخل المعتمد على المشغل ، بينما قد تؤثر إدخالات الثقافة على نمو الخلايا والتعبير الجيني. في المقابل ، توفر هذه الطريقة قابلية محسنة للتكرار والدقة والتطبيق العملي ، مما يوفر حلا فعالا من حيث التكلفة لقياس الهجرة الخلوية في المختبر في أبحاث الأورام. إنه يلبي حاجة ماسة إلى أداة موثوقة ويمكن الوصول إليها لدراسة هجرة الخلايا في أنواع مختلفة من السرطان ، مما يجعلها إضافة قيمة إلى هذا المجال.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

وقدم جميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة كاملة. لم تكن الموافقة الأخلاقية قابلة للتطبيق لأنه لم يتم تضمين عينات من أو الأنسجة البشرية في هذه الدراسة.

1. التحقيق في متطلبات مجتمع المستخدمين

  1. تسليم الاستبيانات إلى علماء الأحياء / المجرب الذي يعمل على مقايسات التئام الجروح الخلوية. جمع الاستبيانات المكتملة واستخدامها للدراسة. لهذه الدراسة ، من 12 أكتوبر 2021 إلى 3 فبراير 2022 ، تم تسليم 100 استبيان إلى 100 عالم أحياء. كانت نسبة الاستجابة 97٪.
  2. اطلب من المستجيبين الإجابة على أسئلة مثل ، أي من تجارب خدش الخلايا أزعجتك أكثر؟ وما الأداة التي تم استخدامها لإجراء خدش الخلية؟ اتبع هذه الأسئلة بأسئلة فرعية لتتبع الأسباب.
  3. تحقق من تصورات التجريبيين لأدوات مثل أطراف الماصة وإدراج زراعة الخلايا في تجارب التئام الجروح الخلوية. فهم وجمع أسبابهم لاختيار أداة على أخرى ، باستخدام نظرية سلسلة نهاية الوسائل القائمة على تقنيات التدرج في قسم الاستبيانات14،15.
    ملاحظة: تنقسم طريقة السلم إلى نوعين: طريقة السلم الناعم مع المقابلات المتعمقة وطريقة السلم الصلب مع الاستبيانات أو اختبارات الورق والقلمالرصاص 16. كانت طريقة السلم الصلب هي التقنية الأساسية المستخدمة في هذه الدراسة. تشير نظرية سلسلة الوسائل والنهاية إلى أن المعرفة الصريحة التي يحتفظ بها المستخدمون المستهدفون سطحية وملموسة ، في حين أن المعرفة الضمنية عميقة ومجردة17،18،19.

2. التصميم والنمذجة ثلاثية الأبعاد

  1. ارسم رسما تخطيطيا من الأفكار التي تم جمعها من مسح الاستبيان السابق وابدأ عملية التصميم. استخدم هذا الرسم الأولي كمخطط أساسي.
    1. قم بتوضيح أبعاد وتخطيط كل مكون من خلال تطبيق وظائف DimRadius و DimRadius و DimDiameter في برنامج النمذجة.
    2. قم بإجراء قياسات بواسطة الفرجار الورني بدقة 0.02 مم على ألواح 6 آبار فعلية للتأكد من الأبعاد النهائية لمكشطة الخلية. تأكد من أن طولها 42.1 مم وعرضها 42.1 مم وارتفاعها 18.5 مم. انتبه إلى التفاصيل في مرحلة التصميم ، وخاصة ارتفاع المنتج واللياقة البدنية في البئر ، لتسهيل تجميع أكثر سلاسة.
  2. بناء نموذج ثلاثي الأبعاد وتقديمه.
    1. ابدأ تصميم 3D في برنامج عن طريق إنشاء نموذج أساسي. انقر فوق أزرار مثل ExtrudeCrv للتمدد و Loft لتشكيل التصميم. قم بتحسين النموذج ثم انقر FilletEdge للحصول على حواف ناعمة.
      ملاحظة: تشمل أزرار الوظائف الأخرى المستخدمة ، الخطوط - لرسم مقاطع خط مستقيم ، خطوط متعددة - لإنشاء خطوط متصلة تتكون من مقاطع متعددة ، المستطيلات - لرسم أشكال مستطيلة ، الدوائر - لرسم أشكال دائرية ، الأقواس - لرسم أشكال قوسية أو بيضاوية الشكل ، النقاط - لوضع علامات نقطة واحدة ، النص - لإضافة تسميات نصية ، الأبعاد - لإضافة أبعاد مقاسة إلى النماذج ، صفيف - لإنشاء أنماط منسوخة من الكائنات ، تدوير - لتدوير الكائنات إلى الزوايا المطلوبة ، نقل - لنقل الكائنات إلى مواقع جديدة ، مقياس - لتغيير حجم الكائنات أكبر أو أصغر ، تقليم / تمديد - لقص أو توسيع الكائنات لتلبية هندسة أخرى ، الاتحاد المنطقي / الاختلاف / التقاطع - لدمج الكائنات أو طرحها أو إيجاد تقاطعها ، الطبقات - لتنظيم الكائنات على طبقات مختلفة ، عرض - لإنشاء طرق عرض معروضة باستخدام المواد والإضاءة والتصدير - لتصدير هندسة النموذج إلى تنسيقات ملفات أخرى.
    2. استيراد النموذج إلى برنامج تقديم 3D. قم بتطبيق المواد بما في ذلك البلاستيك والإسفنج والفولاذ ، ثم اضبط الإضاءة للحصول على عرض واقعي.
      ملاحظة: تتضمن قائمة أزرار الوظائف المعممة ، السحب والإفلات - لتطبيق المواد مباشرة على الأجزاء أو النماذج عن طريق سحب مادة من المكتبة وإفلاتها في المكون المطلوب في العرض في الوقت الفعلي ، انقر بزر الماوس الأيمن - عند النقر بزر الماوس الأيمن فوق مادة في المكتبة ، سترى عادة خيارات من أجل: تطبيق على التحديد - قم بتطبيق المادة على جزء محدد في العرض في الوقت الفعلي. تحرير المواد - ضبط خصائص المواد. خصائص المواد (بعد اختيار مادة) - للوصول إلى خصائص محددة للمادة وتعديلها ، مثل اللون والخشونة ومعامل الانكسار والسمات الأخرى. شريط البحث - للعثور بسرعة على مادة في المكتبة عن طريق كتابة اسمها أو الكلمات الرئيسية المرتبطة بها. الفئات / المجلدات - للتنقل عبر فئات أو مجلدات مختلفة من المواد مثل المعادن والبلاستيك والزجاج وما إلى ذلك. إضافة إلى المفضلة - لوضع علامة على مواد معينة كمفضلة لسهولة الوصول إليها خلال الجلسات المستقبلية. مفاتيح الاختصار - يمكن الوصول إلى بعض العمليات عبر مفاتيح الاختصار. على سبيل المثال ، عادة ما يكون M هو مفتاح الاختصار لإظهار خصائص المواد لجزء محدد بسرعة.
    3. أخيرا ، قم بتحسين تباين الصورة (+56) والتشبع (Vibrance +19 ، Saturation +7) في برامج الصور والتصميم ، وأضف عناصر الخلفية (معلومات النص واللون من الأبيض إلى خلفية التدرج الرمادي الفاتح) للسياق لضمان تمثيل منتج واقعي عالي الجودة.
      1. استخدم تعديلات > الصورة ، السطوع / التباين لضبط تباين الصورة. استخدم صبغة الصورة >/التشبع لتعديل مستوى تشبع الصورة. استخدم أداة النص (أيقونة T) لإضافة معلومات نصية إلى الصورة .
        ملاحظة: تتضمن قائمة أزرار الوظائف المعممة أداة القطع الناقص (U) - لرسم النقاط / الدوائر. قم بتعيين الأداة لرسم شكل، واختر لون التعبئة الذي تريده، ثم انقر واسحب (اضغط باستمرار على مفتاح العالي للحفاظ على دائرة مثالية) لإنشاء نقطة. أداة الخط (U) - لرسم خطوط مستقيمة على الصورة. حدد الأداة، واضبط عرض الخط المطلوب، ثم انقر واسحب لرسم خط. أداة الفرشاة (B) - طريقة بديلة لرسم النقاط والخطوط. حدد حجم الفرشاة وشكلها، ثم انقر (للنقاط) أو انقر واسحب (للخطوط).
  3. بعد الانتهاء من النموذج ثلاثي الأبعاد ، تابع إنتاج مكشطة الخلية عبر طريقة الطحن والتجميع20،21،22.

3. الإنتاج

  1. توظيف نظرية اللون والمواد والتشطيب (CMF) في الدراسة الحالية لتصميم النماذج الأولية لمكشطة الخلية. تعمل نظرية CMF كمنهجية تصميم في البحث العلمي. إنه يعزز قابلية استخدام المنتج ، ويشكل تصور المستخدم ، ويوجه اختيار المواد23،24،25.
    1. حدد الألوان المراد استخدامها في مكشطة الخلايا من نظام الألوان القياسي ، بما في ذلك Black 6 C و Cool Gray 6 C و 11-0601TPG26,27.
    2. لبناء مكشطة الخلايا التي تلبي معايير المختبر ، اختر المواد المناسبة بما في ذلك البولي بروبلين (PP) والإسفنج والفولاذ عالي الكربون. لتصنيع النماذج المادية ، ابدأ باستخدام طابعة 3D لإنتاج الإطار الهيكلي. بعد ذلك ، استخدم الموصلات أو العوامل اللاصقة لإكمال تجميع الكاشطة.
      ملاحظة: لتحضير المنتج المادي لمكشطة الخلية ، قم بطحن وتجميع المواد اللازمة. يجب اتباع بروتوكولات السلامة طوال العملية بأكملها لضمان منتج نهائي آمن وفعال.
    3. انتقل إلى عملية التشطيب ، والتي قد تتضمن القطع أو الطحن أو التلميع أو الختم أو غيرها من التقنيات. ابدأ بصنفرة النموذج باستخدام ورق صنفرة متوسط الحبيبات و 120 حبيبة رملية لإزالة أي حواف خشنة.
    4. اتبع ذلك بورق صنفرة ناعم الحبيبات 220 حبيبة رملية لتحقيق سطح أملس.
    5. بعد الصنفرة لتنعيم الأسطح ، مما يضمن مطابقة الموصلات الإضافية أو المدمجة بشكل صحيح.
    6. قم بربط الشريحة I و II بأمان باستخدام الموصلات (القضبان الثابتة) لضمان تجميع قوي ودائم لمكشطة الخلايا. حقق الشكل النهائي الثابت لمكشطة الخلية من خلال مزيج من التثبيت الميكانيكي والترابط اللاصق. استخدم السحابات ، وتحديدا هيكل نقر و tenon ، لتأمين الأجزاء معا من خلال القوة الميكانيكية. بالإضافة إلى ذلك ، لتعزيز قوة التجميع ، ضع مادة لاصقة (غراء) لربط المكونات بشكل أكبر.
    7. الأوتوكلاف مكشطة على حرارة 121.3 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لضمان احتفاظها بشكلها الأصلي وخصائصها الفيزيائية.

4. ثقافة الخلية

  1. تنمو خلايا HOS في الحد الأدنى من الوسط الأساسي المكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ (FBS) و 1٪ بنسلين ستربتومايسين. استزراعهم عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2.
  2. تغيير وسط الثقافة كل 2 أيام.
  3. عندما يتجاوز نمو الخلايا التقاء 80٪ ، أضف 1 مل من التربسين مع 0.25٪ EDTA واهضمه لمدة 60 ثانية. بعد ذلك ، قم بطرد الخلايا عند 300 × جم لمدة 5 دقائق للزراعة الفرعية. إزالة الطافات وإضافة وسط الاستزراع للحصول على تركيز نهائي من 5 × 104 خلايا لكل بئر. استخدم عداد خلايا آلي لحساب عدد الخلايا.

5. تقييم إمكانات جرح الخلية لمكشطة الخلية والطريقة القائمة على النصائح

  1. تحضير جميع المواد للجرح وتعقيمها بالأشعة فوق البنفسجية عن طريق تعريضها لمدة 30 دقيقة.
  2. بعد التعقيم ، قم بجرح خلايا HOS المتقاربة بنسبة 100٪ في ألواح ذات 6 آبار بتركيز 5 × 104 خلايا لكل بئر باستخدام طريقة مكشطة الخلايا أو الطريقة القائمة على النصائح.
    1. بالنسبة للطريقة القائمة على الطرف ، استخدم طرفا بحجم 100 ميكرولتر واسحبه عبر الخلية التي تحتوي على وسيط بضربة واحدة في الاتجاه الأفقي والآخر في الاتجاه الرأسي.
    2. بالنسبة لطريقة مكشطة الخلايا ، ضع النموذج الأولي للمكشطة في أحد الآبار وبمساعدة الملقط اضغط برفق مرة واحدة. الخلايا مصابة. نفذ كل تجربة جرح في ثلاث نسخ.
  3. تحليل جميع جروح الخلايا باستخدام نظام المجهر الرقمي وبرامج التصوير.

6. قياس صلاحية الخلية وتكاثر الخلايا

  1. قم بإجراء جميع فحوصات صلاحية الخلية باتباع البروتوكول المقدم في مجموعة CCK-8.
  2. احتضان الخلايا بمحلول CCK-8 لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية ، ثم قم بقياس امتصاصها عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة لتحديد صلاحية الخلية.
  3. صمم مقايسة دمج 5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU) لتحديد تكرار الحمض النووي بدقة وتحديد نسبة تكاثر الخلايا مباشرة. تحديد تأثير الطرق المختلفة لتوليد جروح الخلايا على تكاثر الخلايا باستخدام مقايسة EdU ، باتباع البروتوكول الموضح في المنشور السابق28.
  4. قم بتلطيخ الخلايا وتصويرها باستخدام نظام المجهر الرقمي. تأكد من إجراء كل تجربة في ثلاث نسخ.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

تشريح مطالب المستخدم للحصول على أدوات لتوليد جروح الخلايا
تتطلب الطريقة التجريبية الحالية لتوليد جروح الخلايا مزيدا من التحسين لمعالجة العديد من المشكلات التي تعرض للخطر التكاثر البيولوجي والمتانة والاستهلاك الاقتصادي وتجربة المستخدم لمقايسة التئام الجر?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

تهدف الدراسة الحالية إلى تطوير أداة ميكانيكية أوتوماتيكية لمقايسة التئام الجروح الخلوية. على حد علمنا ، فإنه يمثل المحاولة الأولى لتطبيق بنية مدفوعة ميكانيكية لإنشاء جروح الخلايا بنقرة واحدة تلقائيا. من خلال هذا ، نهدف إلى معالجة أوجه القصور في الطريقة التقليدية القائ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

Acknowledgements

هذه الدراسة مدعومة بمنحة من المؤسسة الوطنية للعلوم الاجتماعية (22FYSB023) ، ومؤسسة أبحاث مركز هوبى للتصميم الصناعي (08hqt201412046) ، ومؤسسة العلوم الإنسانية والاجتماعية التابعة لإدارة التعليم بمقاطعة هوبى (15Y054).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
CCK-8 KitBeyotime Company, ChinaC0037
digital microscope systemOlympusIX81
fetal bovine serumGibco, USA16000044
HOS Procell Life Science & Technology Co., LtdCL-0360
Image-Pro PlusMedia Cyberneticsversion 6.0
KeyShotLuxionversion 11.03D rendering software
microplate readerBioTek, GermanELX808
Minimum Essential MediumGibco, USA11095080
Pantone matching systemPantonecommercial color matching
penicillin-streptomycinBeyotime Company, ChinaST488
PhotoshopAdobephoto and design software
Rhinoceros 3DRobert McNeel & Associatesversion 7.03D design software
TC20 Automated Cell CounterBio-RadTC20
TrypsinCytiva HyClone, United StateSH30042.01

References

  1. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell migration. Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).
  2. Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review. Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).
  3. Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts. FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).
  4. Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series. J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).
  5. Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets. Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).
  6. Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma. Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).
  7. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).
  8. Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model. Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).
  9. Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates. J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
  10. Roch, T., et al. Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness. Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).
  11. Jonkman, J. E., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).
  12. Freshney, R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. , John Wiley & Sons, Inc. (2015).
  13. Kato, T., et al. Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies. Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).
  14. Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. Discussing laddering application by the means-end chain theory. Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).
  15. Yang, T., Yang, F., Men, J. Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective. Int J Info Manage. 68, 102589(2023).
  16. Sadeghlou, S., Emami, A. Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory. J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).
  17. Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. A means-end chain approach to consumer goal structures. Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).
  18. Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis. J Advert Res. 31, 30-45 (1991).
  19. Nunkoo, R., Ramkissoon, H. Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism. J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).
  20. Development of an automatic mold polishing system. Tsai, M. J., Chang, J. L., Haung, J. F. IEEE Int Conf Robot Auto, 3, 3517-3522 (2005).
  21. Altan, T., et al. Advanced techniques for die and mold manufacturing. CIRP Annals. 42 (2), 707-716 (1993).
  22. Kalt, E., Monfared, R., Jackson, M. Towards an automated polishing system: Capturing manual polishing operations. Int J Res Eng Tech. 5 (7), 182-192 (2016).
  23. Becerra, L. CMF design: the fundamental principles of colour, material and finish design. , Frame Publishers, UK. (2016).
  24. Pan, C., et al. Next-generation immuno-oncology agents: current momentum shifts in cancer immunotherapy. J Hematol Oncol. 13 (1), 29(2020).
  25. Kim, S., Nah, K. The development direction of emotional materials by increasing sensorial experiences-Focusing on the case study of CMF design. Arch Des Res. 27 (2), 121-135 (2014).
  26. Eiseman, L. The complete color harmony, pantone edition: expert color information for professional results. , Rockport Publishers. (2017).
  27. Eiseman, L., Recker, K. Pantone: The twentieth century in color:(coffee table books, design books, best books about color). , Chronicle Books. (2011).
  28. Deng, P., Jin, W., Liu, Z., Gao, M., Zhou, J. Novel multifunctional adenine-modified chitosan dressings for promoting wound healing. Carbohydr Polym. 260, 117767(2021).
  29. Ares, G., Giménez, A., Gámbaro, A. Understanding consumers' perception of conventional and functional yogurts using word association and hard laddering. Food Quality Prefer. 19 (7), 636-643 (2008).
  30. Lee, W. J. A study on word cloud techniques for analysis of unstructured text data. J Converg Culture Tech. 6 (4), 715-720 (2020).
  31. Word Cloud Explorer: Text Analytics Based on Word Clouds. Heimerl, F., Lohmann, S., Lange, S., Ertl, T. 47th Hawaii international conference on system sciences, , IEEE. (2014).
  32. Kulevicz, R. A., et al. Influence of sustainability reports on social and environmental issues: bibliometric analysis and the word cloud approach. Env Rev. 28 (4), 380-386 (2020).
  33. Rubbo, S. D., Gardner, J. F. A review of sterilization and disinfection. Lloyd-Luke. , (1965).
  34. Kelsey, J. C. Sterilization by ethylene oxide. J Clin Pathol. 14 (1), 59-61 (1961).
  35. Shintani, H. Ethylene oxide gas sterilization of medical devices. Biocontrol Sci. 22 (1), 1-16 (2017).
  36. Rutala, W. A., Gergen, M. F., Weber, D. J. Comparative evaluation of the sporicidal activity of new low-temperature sterilization technologies: ethylene oxide, 2 plasma sterilization systems, and liquid peracetic acid. Am J Infect Control. 26 (4), 393-398 (1998).
  37. Dion, M., Parker, W. Steam sterilization principles. Pharm Eng. 33 (6), 1-8 (2013).
  38. Környei, Z., et al. Cell sorting in a Petri dish controlled by computer vision. Sci Rep. 3, 1088(2013).
  39. Hsu, J. T., et al. Chronic wound assessment and infection detection method. BMC Med Inform Decis Mak. 19 (1), 99(2019).
  40. Katoh, M. Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants. J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).
  41. Li, X., Zhao, J., Ma, G., Huang, S. Experimental study on the traditional timber mortise-tenon joints. Adv Str Eng. 18 (12), 2089-2102 (2016).
  42. Cottle, R. W. The principal pivoting method revisited. Mathematical Prog. 48, 369-385 (1990).
  43. Cross, N. Engineering design methods: strategies for product design. , John Wiley & Sons. (2021).
  44. Otto, K., Wood, K. Product design: techniques in reverse engineering and new product development. , Pearson. (2001).
  45. Tariq, M., et al. Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway. Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).
  46. Rahimi, S., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells. Life Sci. 231, 116586(2019).
  47. Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract. J Vis Exp. (106), e53414(2015).
  48. Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration. J Vis Exp. (144), e58838(2019).
  49. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound healing assay. Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved