خنزير غينيا جولة نافذة غشاء الزرع للدراسات خارج الجسم الحي

Summary

يحدد هذا البروتوكول طريقة لزرع غشاء النافذة المستديرة من عظام خنزير غينيا الصدغية ، مما يوفر موردا قيما للدراسات خارج الجسم الحي .

Abstract

يمثل توصيل الدواء الفعال والأقل بضعا إلى الأذن الداخلية تحديا كبيرا. أصبح غشاء النافذة المستديرة (RWM) ، كونه أحد نقاط الدخول القليلة إلى الأذن الداخلية ، محورا حيويا للتحقيق. ومع ذلك ، نظرا لتعقيدات عزل RWM ، يظل فهمنا لحركيتها الدوائية محدودا. يتكون RWM من ثلاث طبقات متميزة: الظهارة الخارجية ، وطبقة النسيج الضام الأوسط ، والطبقة الظهارية الداخلية ، ولكل منها خصائص توصيل فريدة.

تستخدم النماذج الحالية للتحقيق في النقل عبر RWM نماذج حيوانية في الجسم الحي أو نماذج RWM خارج الجسم الحي تعتمد على مزارع الخلايا أو شظايا الغشاء. تعمل خنازير غينيا كنموذج قبل سريري معتمد لفحص الحرائك الدوائية داخل الأذن الداخلية وهي نموذج حيواني مهم للتطوير الانتقالي لمركبات التوصيل إلى القوقعة. في هذه الدراسة ، وصفنا نهجا لزرع خنزير غينيا RWM مع عظم القوقعة المحيط لتجارب توصيل الأدوية الموضوعة على الطاولة. تسمح هذه الطريقة بالحفاظ على بنية RWM الأصلية وقد توفر تمثيلا أكثر واقعية للحواجز أمام النقل من نماذج الطاولة الحالية.

Introduction

ظهرت فئات جديدة من العلاجات لعلاج فقدان السمع الحسي العصبي. إن ترجمة هذه العلاجات إلى المجموعات السريرية محدودة بطرق النقل الآمنة والفعالة إلى الأذن الداخلية. تعتمد الطرق الحالية للتسليم في الجسم الحي في الدراسات التي أجريت على إما على التكاثر في الأذن الداخلية أو الانتشار من خلال غشاء النافذة المستديرة (RWM) ، وهو حاجز غير عظمي يفصل مساحة الأذن الوسطى عن القوقعة¹.

يعتبر الحقن الجراحي والحقن المجهري في الأذن الداخلية غازيين ويمكن أن يشكلان مخاطر على وظيفة الأذن الداخلية المتبقية². لذلك ، يعد RWM طريقا مهما لتوصيل الأدوية المحلية ، وخنازير غينيا هي النموذج الحيواني الأساسي قبل السريري ....

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (GP18M226). تم استخدام خنازير غينيا Hartley albino (ذكورا وإناثا ، تزن 500-700 جم) في هذه الدراسة.

1. إعداد الإجراء وإعداده

1. تعقيم جميع الأدوات بأكسيد الإيثيلين قبل بدء التجربة.
2. القتل الرحيم للحيوانات وفقا للبروتوكول المعتمد مؤسسيا.
   ملاحظة: في الدراسة الحالية ، تم استخدام غرفة غير مشحونة مسبقا لإطلاق ثاني أكسيد الكربون بنسبة 100٪ (CO₂) من أسطوانة تجارية. تم استخدام مقيد مضمن لتنظيم تدفق الغاز ، والحفاظ عليه في حدود 30٪ إلى 70٪ من حجم الغرفة في الدقيقة وفقا لإرشادات AVMA^{لعام 2020 11}.
....

النتائج

كما هو موضح في الشكل 3 أ ، تسمح هذه الطريقة بزرع غشاء النافذة المستديرة لخنزير غينيا السليم بحلقة محيطة من العظم الصلب. يجب أن تكون RWM متصلة بالكامل بالحلقة العظمية محيطيا. لا ينبغي تقدير أي كسور في عظم القوقعة. بالمقارنة مع عينات النوافذ المستديرة البشرية ، لا يحتوي خنزير غ?.......

Discussion

في توصيل الدواء المحلي إلى الأذن ، يعد RWM هو الطريق الرئيسي لمرور العلاجات للوصول إلى الأذن الداخلية. هناك حاجة إلى نموذج دقيق وموثوق به على الطاولة لفهم آليات النقل والنفاذية بشكل أفضل عبر مركبات التسليم الجديدة ولتطوير الأدوية. في هذه الدراسة ، أثبتنا أن زراعة خنزير غينيا RWM هو إجراء ممك?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mm Diamond Ball Drill Bit	Anspach	1SD-G1
2 mm Diamond Ball Drill Bit	Anspach	2SD-G1
6 mm Diamond Ball Drill Bit	Anspach	6D-G1
ANSPACH EMAX 2 Plus System	Anspach	EMAX2PLUS	Any bone cutting drilling system will work
BD Eclipse Needle 27 G x 1/2 in. with detachable 1 mL BD Luer-Lok Syringe	Becton, Dickinson, and Co.	382903057894	Any 27-28 G needle
Gorilla Epoxy	Gorilla	4200101
Kwik-CAST	World Precision Instruments	KWIK-CAST