مزيج من جزء الأوعية الدموية اللحمية المعزولة ميكانيكيا وهيدروجيل الفيبرين: بروتوكول معالجة

Summary

يوفر الجزء الوعائي اللحمي المعزول ميكانيكيا (SVF) بالاشتراك مع هيدروجيل الفيبرين حاملا سهلا وفعالا للخلايا اللحمية المشتقة من الدهون القابلة للحياة لمختلف المؤشرات ، بما في ذلك هندسة الأنسجة و / أو أغراض التئام الجروح. هنا ، نقدم إعداد بنية هيدروجيل SVF (mSVF) - الفيبرين الميكانيكية للبحث الانتقالي والتطبيق السريري.

Abstract

اكتسبت الإمكانات التجديدية للخلايا اللحمية المشتقة من الدهون (ASCs) اهتماما كبيرا في الأبحاث التجديدية والانتقالية. في الماضي ، كان استخراج هذه الخلايا من الأنسجة الدهنية يتطلب عملية قائمة على الإنزيم متعدد الخطوات ، مما أدى إلى مزيج خلايا غير متجانسة يتكون من ACSs وخلايا أخرى ، والتي يطلق عليها مجتمعة الجزء الوعائي اللحمي (SVF). تعد بروتوكولات عزل SVF (mSVF) الميكانيكية التي تم إدخالها مؤخرا أقل استهلاكا للوقت وتتجاوز المخاوف التنظيمية. اقترحنا مؤخرا بروتوكولا يولد mSVF غنيا بالخلايا اللحمية بناء على مزيج من الاستحلاب والطرد المركزي. تتمثل إحدى المشكلات الحالية في تطبيق mSVF لتطبيق علاج الجروح في عدم وجود سقالة توفر الحماية من التلاعب الميكانيكي والجفاف. لقد ثبت أن الهلاميات المائية الفيبرينية هي عامل مساعد مفيد في نقل الخلايا لأغراض التئام الجروح في الماضي. في العمل هنا ، نحدد خطوات التحضير لبناء هيدروجيل mSVF-fibrin كنهج جديد للبحث الانتقالي والتطبيق السريري.

Introduction

على مدى السنوات القليلة الماضية ، برزت الجراحة التجميلية التجديدية كركيزة إضافية للجراحة التجميلية¹. تهدف الجراحة التجميلية التجديدية إلى استعادة الأنسجة التالفة عن طريق نقل العوامل القابلة للذوبان والخلايا والأنسجة التي تم حصادها من المريض لتعزيز استعادة الأنسجة بطريقة طفيفة التوغل². اكتسبت الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون (ASCs) الانتباه بسبب قدرتها على التمايز إلى سلالات متعددة من اللحمة المتوسطة ، مما يجعلها مرشحا واعدا لأبحاث الطب التجديدي³. يعرض ملف تعريف السيتوكين الخاص بهم تأثيرات وعائية ومثبطة للمناعة ومضادة للأكسدة

Protocol

وقد أجريت هذه الدراسة وفقا لإعلان هلسنكي. قدم جميع المتبرعين البالغين موافقة خطية مستنيرة للسماح بمزيد من استخدام عينات الأنسجة التي تم جمعها. يتبع البروتوكول المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات البحوث البشرية في مؤسستنا.

1. حصاد الأنسجة الدهنية

1. حصاد الأنسجة الدهنية عن طريق إجراء شفط الدهون القياسي في تقنية حصاد الدهون التقليدية الموصوفة في المنشورات السابقة^26,27. تأكد من استخدام محلول منتفخ يتكون من لاكتات الرنين العادي والإبينفرين بنسبة 1: 200000.
2. قم بإجراء عملية شفط الدهون باستخدام قنية شفط 4 مم ، تحت ضغط سلبي وا....

النتائج

مقايسة ريسازورين
قمنا أولا بفحص صلاحية الخلايا في المختبر لخلايا mSVF. لهذا الغرض ، أجرينا مقايسة صلاحية خلية resazurin في الأيام 0 و 3 و 7. يوضح الشكل 1 صلاحية الخلية في الأيام 0 و 3 و 7 من إجمالي أربع عينات. تعمل قيم اليوم 0 كخط أساس وتم تعيينها على أن.......

Discussion

يوفر العزل الميكانيكي ل SVF بديلا أنيقا للنهج الأنزيمي التقليدي ويوفر وصولا واسعا للتطبيق السريري²⁹. في الواقع ، mSVF ، كما هو مقترح في هذه المخطوطة ، هو بالفعل في الاستخدام السريري لعلاج الأنسجة الرخوة من الندوب أو كعامل مساعد للإجراءات التجميلية³⁰

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-Wellplate	Sarstedt	83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Biochemica	A1001.0010
50 mL-Falcon	Falcon	352070
Absorbent Towels, Two Pack	Halyard	89701
Alamar blue 25 mL	Invitrogen	DAL1025
Albumin, Bovine (BSA)	VWR	0332-500G
Biotek Cytation 5	Agilent		Cell Imaging Multimode Microplate Reader
CaCl2	Sigma-Aldrich	C5670-500G
Cryostat	Microtome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate	VWR	392-0416
DPBS	Gibco	14190-144
Epinephrin	Sigma-Aldrich	E4250
Fetal Bovine Serum	Biowest	S181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mg	Sigma-Aldrich	341576-100MG
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4
Formalin 4%	Formafix	1308069
FSC 22-Einbettmedium, blau	Biosystems	3801481S
Hematoxylin & Eosin Solution	Sigma-Aldrich	H3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL	B Braun	R5410-01
Mercedes Cannula 4mm	MicroAire	PAL-R404LL
NaCl 0.9%	Bbraun	570160
OCT Embedding Matrix 125 mL	CellPath	KMA-0100-00A
Paraformaldehyde	Fisher Scientific	10342243
PBS 1%	Sigma-Aldrich	P4474
PenStrep	Sigma-Aldrich	P4333-100ML
Petridish 150mm	Sarstedt	83.1803
Phalloidin-iFluor 488 Reagent	Abcam	ab176753
Sterile Syringe 20 mL Luer	HENKE-JECT	5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock	BD	10521
Thrombin from Human Plasma	Sigma-Aldrich	T6884-100UN
Tranexamic acid	Orpha Swiss	6837093
Tulipfilter 1.2	Lencion Surgical	ATLLLL
Tulipfilter 1.4	Lencion Surgical	ATLLLL