مراقبة نسبة الجلوكوز في الدم في نسل الفأر بعد حقن المنوية داخل الهيولى

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء نموذج فأر لحقن المنوية داخل الهيولى (ICSI) - نقل الأجنة (ET) ، مما يسمح لنا بمراقبة التغيرات المرتبطة بالعمر في استقلاب الجلوكوز والتي قد تعزى إلى الحقن المجهري ، مما يوفر رؤى حول آثاره المحتملة طويلة المدى على التنمية البشرية.

Abstract

عمر الإنسان طويل إلى حد كبير ، في حين أن نماذج الفئران يمكن أن تحاكي عمر الإنسان بأكمله في فترة قصيرة نسبيا ، مع سنة واحدة من عمر الفأر تعادل تقريبا 40 سنة بشرية. حقن المنوية داخل الهيولى (ICSI) هو تقنية مساعدة على الإنجاب شائعة الاستخدام في الممارسة السريرية. ومع ذلك ، نظرا لظهورها الحديث نسبيا منذ حوالي 30 عاما ، فإن الآثار طويلة المدى لهذه التقنية على التنمية البشرية لا تزال غير واضحة. في هذه الدراسة ، أنشأنا الحقن المجهري جنبا إلى جنب مع طريقة نقل الأجنة (ET) باستخدام نموذج الفأر. أظهرت النتائج أن المنوية الطبيعية للفئران ، بعد الخضوع للزراعة في المختبر والحقن المجهري اللاحق ، أظهرت معدل إخصاب 89.57٪ ومعدل خليتين 87.38٪. بعد ET ، كان معدل ولادة النسل حوالي 42.50٪. علاوة على ذلك ، مع تقدم الفئران في العمر ، لوحظت تقلبات في مستويات استقلاب الجلوكوز ، والتي قد تكون مرتبطة بتطبيق تقنية الحقن المجهري. تشير هذه النتائج إلى أن تقنية الحقن المجهري للفأر توفر منصة قيمة لتقييم تأثير تشوهات المنوية على نمو الأجنة وآثارها طويلة المدى على صحة النسل ، لا سيما فيما يتعلق باستقلاب الجلوكوز. توفر هذه الدراسة رؤى مهمة لمزيد من البحث حول الآثار المحتملة لتقنية الحقن المجهري على التنمية البشرية ، مع التأكيد على ضرورة إجراء تحقيق متعمق في الآثار طويلة المدى لهذه التكنولوجيا.

Introduction

برزت قضايا الخصوبة كمحور رئيسي للقلق الطبي والاجتماعي ، خاصة في المجتمع الحديث حيث برزت معدلات الخصوبة المنخفضة وزيادة شدة انتشار العقم وشدته. توفر تقنية المساعدة على الإنجاب (ART) مجموعة واسعة من الاحتمالات لمواجهة هذه التحديات ، مع استخدام حقن المنوية داخل الهيولى (ICSI) بشكل شائع كتدخل علاجي.

منذ أن أبلغت باليرمو عن أول حمل ناجح تم تحقيقه من خلال حقن المنوية داخل الهيولى (ICSI) في عام 1992 ، أصبح الحقن المجهري أسلوبا محوريا في تقنيات المساعدة على الإنجاب (ART) ¹. ومع ذلك ، بالنظر إلى أن الحقن المجهري قد تم استخدامه في البيئات السريرية لمدة 30 عاما فقط ، وهي ف....

Protocol

يتبع بروتوكول الحقن المجهري الملقح بالذكاء الاصطناعي الموضح أدناه المبادئ التوجيهية وقد تمت الموافقة عليه من قبل المراجعة الأخلاقية للحيوان التابع لمعهد شنغهاي لأبحاث تنظيم الأسرة. إجراءات السلامة: ارتد دائما معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) عند التعامل مع المواد الكيميائية أو المواد البيولوجية. استخدام الشفاطات: قم بتنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على مواد كيميائية متطايرة أو توليد الهباء الجوي داخل غطاء دخان معتمد أو خزانة سلامة حيوية. استخدم إناث الفئران (سلالة B6D2F1 التي يبلغ عمرها 6-8 أسابيع) لإجراء الإباضة الزائدة.

1. الحقن المجهري في الفئران

1. الإباضة الفائقة للفئران
   ....

النتائج

في مختبرنا ، حققنا معدل إخصاب بنسبة 89.57٪ ومعدل خليتين بنسبة 87.38٪ باستخدام الحقن المجهري مع المنوية الذيلية البربخية في الفئران. يبلغ معدل ولادة النسل بعد ET حوالي 42.50٪. ومن اللافت للنظر أن جميع معدلات الإخصاب ومعدلات الخلية ومعدلات ولادة النسل قابلة للمقارنة مع المستويات .......

Discussion

دمجت هذه الدراسة تقنيات حقن المنوية داخل الهيولى (ICSI) ونقل الأجنة (ET) لتلخيص شامل لتكنولوجيا الإنجاب بمساعدة الإنسان (ART) وفحص تأثير الحقن المجهري بالاقتران مع ET على نمو النسل. أسفر تطبيق تقنية الحقن المجهري مع المنوية الطبيعية للفئران عن إخصاب مرتفع (86.76٪) ومعدلات خليتين (.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development