قياسات الصلابة الدقيقة على الأسنان والعظم السنخي في نماذج أمراض الفم القوارض

Summary

الصلابة الدقيقة هي خاصية ميكانيكية ومعلمة إعلامية لتقييم الفيزيولوجيا المرضية للأنسجة الصلبة. هنا ، نوضح بروتوكولا موحدا (تحضير العينات ، والتلميع ، والسطح المسطح ، ومواقع المسافة البادئة) لتحليل الصلابة الدقيقة في الأسنان والعظام السنخية في نماذج أمراض الفم القوارض ، وهي تسمم الأسنان بالفلور ، وارتشاف عظام اللثة الناجم عن الأربطة.

Abstract

يتم تقييم الخاصية الميكانيكية ، الصلابة الدقيقة ، في مينا الأسنان ، العاج ، والعظام في نماذج أمراض الفم ، بما في ذلك تسمم الأسنان بالفلور والتهاب دواعم السن. يوفر التصوير المقطعي المحوسب الدقيق (μCT) معلومات التصوير 3D (الحجم والكثافة المعدنية) والمسح المجهري الإلكتروني (SEM) ينتج صورا مجهرية (منشور المينا وقناة ثغرة العظام). بالتكامل مع التحليل الهيكلي بواسطة μCT و SEM ، تعد الصلابة الدقيقة واحدة من المعلمات الإعلامية لتقييم كيفية تغيير التغييرات الهيكلية للخصائص الميكانيكية. على الرغم من كونها معلمة مفيدة ، إلا أن الدراسات حول الصلابة الدقيقة للعظام السنخية في أمراض الفم محدودة. حتى الآن ، تم الإبلاغ عن طرق قياس الصلابة الدقيقة المتباينة. نظرا لأن قيم الصلابة الدقيقة تختلف اعتمادا على تحضير العينة (التلميع والسطح المستوي) ومواقع المسافة البادئة ، يمكن أن تسبب البروتوكولات المتنوعة تناقضات بين الدراسات. يعد توحيد بروتوكول الصلابة الدقيقة أمرا ضروريا للتقييم المتسق والدقيق في نماذج أمراض الفم. في هذه الدراسة ، نوضح بروتوكولا موحدا لتحليل الصلابة الدقيقة في الأسنان والعظام السنخية. العينات المستخدمة هي كما يلي: بالنسبة لنموذج التسمم بالفلور السني ، تم جمع القواطع من الفئران المعالجة بالمياه المحتوية على الفلورايد / بدونها لمدة 6 أسابيع. بالنسبة لنموذج ارتشاف عظم اللثة الناجم عن الرباط (L-PBR) ، تم جمع العظام السنخية مع ارتشاف عظم اللثة من الفئران المربوطة^{على ضرس} الفك العلوي 2. في 2 أسابيع بعد الربط ، تم جمع الفك العلوي. تم تحليل صلابة فيكرز في هذه العينات وفقا للبروتوكول الموحد. يوفر البروتوكول مواد وطرق مفصلة لتضمين الراتنج والتلميع التسلسلي ومواقع المسافة البادئة للقواطع والسنخية. على حد علمنا ، هذا هو أول بروتوكول صلابة دقيقة موحد لتقييم الخواص الميكانيكية للأسنان والعظام السنخية في نماذج أمراض الفم القوارض.

Introduction

الصلابة هي إحدى الخصائص الميكانيكية (على سبيل المثال ، المرونة والصلابة والمرونة اللزوجة وسلوك الكسر) وتستخدم بشكل شائع لتوصيف القدرة على مقاومة تشوه الانضغاط وكسر منطقة محلية من المادة. اختبار صلابة المسافة البادئة الثابتة هو الطريقة الأكثر استخداما ، بما في ذلك صلابة فيكرز وصلابة Knoop¹. يتم تنفيذ اختبار صلابة فيكرز عن طريق الضغط على مسافة بادئة من الماس في السطح تحت حمل اختبار ثابت. المسافة البادئة على شكل هرم ، مع قاعدة مربعة وزاوية 136 درجة بين الوجوه المتقابلة. يتم قياس طول كلا القطرين المتكونين على سطح الاختبار ، ويتم استخدام المتوسط لحساب الصلابة ، والتي يتم تحديدها من خلال النسبة F / A (حيث F هي القوة و A هي مساحة سطح المسافة البادئة). عادة ما يتم التعبير عن رقم صلابة فيكرز الدقيقة (HV = F / A) بالكيلوجرام قوة (kgf) لكل مسافة بادئة^{مم 2} ، مع 1 HV ≈ 0.1891 F / d² (N / mm²). تتكون صلابة Knoop أيضا من مسافة بادئة هرمية مربعة من الماس تتكون من زاويتين متقابلتين غير متساويتين. رقم صلابة Knoop (HK) يساوي نسبة الحمل المطبق إلى منطقة التلامس المتوقعة. تصنف اختبارات الصلابة إلى اختبارات المسافة البادئة الدقيقة (الصلابة الدقيقة) واختبارات المسافة البادئة الكلية ، اعتمادا على القوة المطبقة على مادة الاختبار. عادة ما تستخدم اختبارات المسافة البادئة الدقيقة الأحمال في النطاق 0.01-2 نيوتن (حوالي 1-203 gf) ؛ وفي الوقت نفسه ، تستخدم اختبارات المسافة البادئة الكلية أكثر من 10 N (10119 gf) ¹.

لتقييم ميزات الأنسجة الصلبة للأسنان في أمراض الفم ، بما في ذلك الأسنان والعظام السنخية ، يتم استخدام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق (μCT) والمجهر الإلكتروني الماسح (SEM) للتحليل الهيكلي. يوفر μCT معلومات التصوير ثلاثية الأبعاد (الحجم والكثافة المعدنية)² ، وينتج SEM صورا مجهرية (منشور المينا وفجوة عظمية قنوية)³. استكمالا للتحليل الهيكلي بواسطة μCT و SEM ، تعد الصلابة الدقيقة واحدة من المعلمات المفيدة لتقييم كيفية تغيير التغييرات الهيكلية للخصائص الميكانيكية للأسنان والعظام السنخية في أمراض الفم ، على سبيل المثال ، تشوه المينا وارتشاف العظام اللثوية. قيمة صلابة فيكرز الدقيقة للمينا البشرية (HV = 283-374) أعلى بحوالي 4 إلى 5 مرات من قيمة العاج (HV = 53-63) ^4,5. في نماذج تسمم الأسنان بالفلور القوارض ، تنخفض صلابة المينا الدقيقة بشكل كبير في قواطع الفئران المعالجة بالفلورايد (HV = 136) مقارنة بمينا التحكم (HV = 334) ^6,7. هذا يشير إلى أن المينا المفلورة أكثر ليونة وأضعف مع محتوى معدني أقل ومحتوى بروتين أعلى من الموجود في المينا غير المفلورة. يستخدم الصلابة الدقيقة لتقييم الخواص الميكانيكية للعظام. فحصت العديد من الدراسات السابقة السلوك الميكانيكي للعظام البشرية من مواقع تشريحية مختلفة ، بما في ذلك الصلابة الدقيقة للعظام^{الطويلة 8،9،10}. أظهر متوسط الصلابة الدقيقة لعظم الفخذ المفلور البشري انخفاضا كبيرا (HV = 222.4) مقارنة بعظم الفخذ غير المفلور (HV = 294.4)¹¹. على الرغم من كونها معلمة مفيدة ، إلا أن هناك ندرة في الأدبيات التي تصف الصلابة الدقيقة (إما فيكرز¹² أو Knoop ^13,14) للعظام السنخية في أمراض الفم.

حتى الآن ، تم الإبلاغ عن طرق قياس الصلابة الدقيقة المتباينة. نظرا لأن قيم الصلابة الدقيقة تختلف^{بمقدار 15} اعتمادا على تحضير العينة (التلميع والسطح المستوي) وموقع المسافة البادئة ، يمكن أن تسبب البروتوكولات المتنوعة تناقضات بين الدراسات. يعد توحيد بروتوكول اختبار الصلابة الدقيقة أمرا ضروريا للتقييم المتسق والدقيق في نماذج أمراض الفم. في هذه الدراسة ، نوضح بروتوكولا موحدا لتحليل الصلابة الدقيقة في الأسنان والعظام السنخية في نموذج تسمم الأسنان بالفلور في الفئران ونموذج ارتشاف العظام اللثوية.

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح الخاصة باستخدام الفقارية المعتمدة من قبل لجنة استخدام رعاية المؤسسية (IACUC) في جامعة أوغوستا وفي جامعة نوفا ساوث إيسترن المعتمدة من قبل جمعية تقييم واعتماد رعاية المختبر الدولية (AAALAC). لاحظ أن الدكتور سوزوكي كان يعمل في جامعة أوغوستا حيث تم الانتهاء من تجارب تسمم الأسنان بالفلور على الفئران.

1. استخراج قواطع الفك السفلي في نموذج تسمم الأسنان بالفلور الفأر

1. تغذية الوجبات الغذائية الخالية من الفلورايد إلى الفئران C57BL / 6 (5 أسابيع من العمر ، ذكر) من 1 أسبوع قبل الفلورايد حتى إنهاء العلاج بالفلورايد.
2. تحضير ماء الفلورايد عن طريق إضافة NaF في الماء المقطر متبوعا بالترشيح الفراغي باستخدام مرشح 0.2 ميكرومتر. أعط ماء الفلورايد مثل NaF (0 جزء في المليون و 125 جزء في المليون ؛ N = 5 / مجموعة) ad libitum لمدة 6 أسابيع. استبدال ماء الفلورايد مع دفعة طازجة كل 2 أيام.
3. بعد 6 أسابيع من معالجة مياه الفلورايد ، القتل الرحيم للحيوانات مع CO₂ تليها قطع الرأس.
4. استخراج الفك السفلي hemi مع القاطعة من كل ماوس. لجمع الفك السفلي النصفي مع القاطعة ، وقطع العضلات حول الفك السفلي دون استخدام القوة المفرطة.
5. ضع الفك السفلي النصفي في برنامج تلفزيوني واحتفظ به عند 4 درجات مئوية حتى تحليل μ-CT (اختياري). افصل القاطعة عن الفك السفلي باستخدام مشرط (# 15) ومقص دون إتلاف أو كسر العينة.
6. اغسل القاطعة المعزولة باستخدام PBS وقم بإجراء الجفاف عن طريق غمرها في زيادة قوة الكحول (70٪ و 100٪ إيثانول) لمدة 2-3 ساعات.
   ملاحظة: إذا لم تكن الأنسجة (مثل اللب) مجففة بما فيه الكفاية ، فمن المحتمل أن يتم تثبيط التشريب بالراتنج ومن المحتمل أن يكون التقييم اللاحق غير كاف.
7. بعد الجفاف بالإيثانول ، قم بتضمين القاطعة أفقيا في الراتنج. تابع إلى الخطوة 3.

2. استخراج العظام السنخية الفكية في نموذج ارتشاف عظم اللثة الناجم عن الرباط الفأر (L-PBR)

1. تطبيق 0.8 مل من الكيتامين (100 ملغ/مل) + 0.1 مل من الزيلازين (100 ملغ/مل) + 9.1 مل من PBS داخل الصفاق (i.p.) لدى الفأر (C57BL/6، 8-12 أسبوعا، ذكر) كمخدر. الجرعة هي 0.01 مل / غرام (الوزن). ضع مرهم العيون على كلتا العينين لمنع الجفاف تحت التخدير.
2. ضع الماوس المخدر على وسادة التدفئة لمدة 5-10 دقائق. تقييم الاستجابات لقرصات الذيل / أصابع القدم وسلامة منعكس العين. تأكد من أن الماوس لا يستجيب للمنبهات الضارة وأن المنعكس غائب.
3. ضع الماوس على طاولة العلاج واترك الفم مفتوحا عن طريق خيط حرير رباط 5-0 مربوط بعمود مغناطيسي على طاولة العلاج.
4. تحت المجهر الجراحي ، قم بلف الرباط (خياطة الحرير المضفر 6-0) حول جانب واحد من الضرس الثاني الفكي العلوي (طبقة واحدة) باستخدام حوامل إبرة دقيقة. قلل الفروق الفردية في التحليل باستخدام جانب واحد كجانب علاجي والجانب الآخر كعنصر تحكم.
5. ربط الرباط وجعل عقدة على الجانب الحنك. بعد عمل عقدة ، قم بقطع الرباط المتبقي بأقصر ما يمكن حتى لا يتداخل الرباط المفرط مع المضغ أو الأكل. هذا مهم للتأكد من أن الرباط لن يرتخي عن طريق المضغ خلال فترة المراقبة اللاحقة.
   ملاحظة: لا تترك دون مراقبة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. لا تعيد الذي خضع لعملية جراحية إلى شركة أخرى حتى يتعافى تماما. الحفاظ على ظروف معقمة أثناء البقاء على قيد الحياة.
6. تغذية النظام الغذائي والماء للفئران ad libitum لمدة 2 أسابيع. بعد أسبوعين من الربط ، القتل الرحيم للفئران باستخدام CO₂ متبوعا بقطع الرأس.
7. استخراج كلا الجانبين الفك العلوي (جانب الرباط وجانب التحكم) مع الأضراس من كل فأر. لجمع الفك العلوي مع الأضراس ، وقطع العضلات والعظام حول الفك العلوي باستخدام مقص دون استخدام القوة المفرطة. ضع كل فك سكي في برنامج تلفزيوني واحتفظ به عند 4 درجات مئوية حتى تحليل μCT (اختياري).
8. افصل العظم السنخي بالأضراس (من^{1 إلى 3 الثالثة}) عن الفك العلوي باستخدام مشرط (# 15) ومقص دون إتلاف أو كسر العينة.
9. اغسل العظم السنخي المعزول باستخدام برنامج تلفزيوني ثم قم بتجفيفه وإزالة الشحوم عن طريق الغمر في زيادة قوة الكحول (70٪ و 100٪ إيثانول) لمدة 2-3 ساعات.
   ملاحظة: إذا لم تكن الأنسجة (مثل اللب والعظام) مجففة بما فيه الكفاية ، فمن المحتمل أن يتم تثبيط التشريب بالراتنج ومن المحتمل أن يكون التقييم اللاحق غير كاف.
10. بعد الجفاف مع الإيثانول ، قم بتضمين العظم السنخي أفقيا في الراتنج. تابع إلى الخطوة 3.
11. اختياري: قم بإجراء تقييم μCT قبل اختبار الصلابة الدقيقة.
    1. قبل اختبار الصلابة الدقيقة ، قم بإجراء تحليل هيكلي غير مدمر (على سبيل المثال ، μCT) باستخدام نفس العينة لاختبار الصلابة الدقيقة كتقييم تكميلي (الشكل 1). يمكن أن تدعم المعلومات الهيكلية (صورة 3D ، الكثافة المعدنية ، الحجم) بواسطة μCT تقييم الخواص الميكانيكية للعينة والجودة التي قد تؤثر على نتائج الصلابة الدقيقة.

الشكل 1: صور μCT التمثيلية للمينا في السيطرة وقواطع الفئران المعالجة بالفلورايد. (أ) صورة سهمية تمثيلية μCT لقواطع الفك السفلي. (B-D) μCT الصور الإكليلية لقواطع التحكم (NaF 0 جزء في المليون). (E-G) μCT صور إكليلية للقواطع المعالجة ب NaF (125 جزء في المليون). تظهر الكثافة المعدنية التمثيلية للمينا (EMD) (جم / سم³). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

3. تضمين العينات في الراتنج

1. تابع من الخطوة 1.7 (نموذج التسمم بالفلور السني) أو الخطوة 2.10 (نموذج L-PBR).
2. قم بتغطية السطح الداخلي لكوب التثبيت (1 بوصة) بطبقة رقيقة من الفازلين. امزج الراتنج (راتنج تضمين الإعداد البارد) وفقا للتعليمات. صب الراتنج والمصلب في الكوب البلاستيكي المرفق بنسبة حجم 15: 2 واخلطه بعناية باستخدام ملعقة خشبية لمدة دقيقتين على الأقل. تجنب فقاعات الهواء.
3. ضع القاطعة المجففة والمنزوعة الشحوم (الشكل 2 أ) أو العظم السنخي مع الأضراس (الشكل 2 ب) موجهة أفقيا وموازية لقاع كوب التثبيت (1 عينة لكل كوب).
4. صب الراتنج المختلط (ما يكفي من الراتنج ، حوالي 1.5 مل) في كوب التثبيت لتغطية العينة بالكامل. تجنب إضافة المزيد من الراتنج أكثر من اللازم ، لأن الراتنج الزائد سيعيق عملية التلميع (الشكل 2 ج ، د). ضع كوب التثبيت الذي يحتوي على عينة على طبق ساخن عند 50 درجة مئوية لمدة 8 ساعات على الأقل لتعزيز بلمرة الراتنج. يساهم هذا الإجراء في الاحتفاظ بالعينة في وضع مستقر.
   ملاحظة: اعتمادا على حجم العينة ، اضبط كمية الراتنج لتغطية العينة بالكامل. لا تملأ الكثير من الراتنج ، وإلا فستكون هناك حاجة إلى مزيد من الوقت لإزالة الراتنج غير الضروري.
5. بعد المعالجة ، قم بإزالة الراتنج الذي يحتوي على العينة من كوب التثبيت. قم بإزالة النتوءات وترتيب مستوى العينة والمستوى الجانبي المقابل على أنهما متوازيان ومسطحان باستخدام مطحنة تلميع متقدم مع ورق جلخ خشن مقاوم للماء (Grit 60 / P60 و 120 / P120) تحت فيضان المياه. حافظ على ارتفاع العينة إلى حوالي 3 مم للعظم القاطع والسنخية (الشكل 2E ، F).
   ملاحظة: عندما يتم تحليل العينة بواسطة SEM بعد قياس الصلابة الدقيقة ، يجب أن يكون سمك العينة حوالي 3 مم حتى لا تتأثر مراقبة SEM اللاحقة. يصعب التعامل مع العينات الأصغر باستخدام المطحنة. بالنسبة للعينات المخصصة للصلابة الدقيقة فقط ، يمكن أن يزيد ارتفاع العينة إلى حوالي 10-20 مم.
6. قم بقص الشكل الخارجي لعمل كتلة راتنجية صلبة مستطيلة وزوايا مستديرة (تقريبا ، العرض 30 مم ، الطول 10 مم للقواطع (الشكل 2G) والعرض 10 مم ، الطول 5 مم ، للعظم السنخي (الشكل 2H)) باستخدام منشار تقسيم دقيق.
7. بمجرد اكتمال تصحيح الشكل الخام ، قم بإزالة الحطام والجزيئات من كتلة الراتنج باستخدام منظف بالموجات فوق الصوتية (حوالي 1 دقيقة). تابع إلى الخطوة 4.

الشكل 2: تدفق عملية تضمين وتلميع الراتنج. أ: قاطعة مجففة ومنزوعة الشحوم. ب: العظم السنخي المجفف والمنزوع الشحوم في L-PBR. (ج، د) القواطع والعظام السنخية مغمورة في الراتنج. (ه، واو) عن طريق قطع الراتنج ، يكون من الأسهل تلميع سطح الأنسجة المستهدف. (ز ، ح) زوايا الراتنج مدورة لعملية التلميع. الاختصارات: L-PBR = ارتشاف عظم اللثة الناجم عن الرباط. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

4. تلميع العينات

ملاحظة: يتم تلميع العينات يدويا باستخدام أوراق كاشطة مقاومة للماء (من الخام إلى الأدق) على مطحنة تلميع متقدمة تحت فيضان المياه.

1. ضع ورقة كاشطة خشنة مقاومة للماء (Grit 600 / P1200) على المطحنة. ضع كتلة الراتينج المشذبة والنظيفة (من الخطوة 3.7) على الورق الكاشطة الخام المقاوم للماء.
2. أثناء صب الماء ، أمسك كتلة الراتنج وقم بتلميع سطح تقييم العينة على المطحنة الملمع (السرعة 1-10 × جم). في هذا الوقت ، احرص على إمساك كتلة الراتنج بحيث يكون سطح التقييم موازيا للأرض. للحفاظ على سطح التقييم سليما ، تحقق من السطح بالعين المجردة أو تحت المجهر.
   ملاحظة: لاحظ أن المطحنة تدور في اتجاه عقارب الساعة ، ويمكن أن يؤدي الضغط المنتظم إلى سطح لا مثيل له. للحصول على سطح متوازي ، حافظ على سرعة دوران الطائرة الشراعية ثابتة واضغط على العينة بعناية لبضع ثوان ، ثم قم بتدوير العينة 180 درجة للضغط لنفس الفترة الزمنية. قد يزيل الورق الكاشطة الخام ليس فقط الراتنج ولكن أيضا العينة.
3. قم بتغيير الورق الكاشطة إلى Grit 800 / P2400 وضع كتلة الراتنج عليه. كرر الخطوة 4.2.
4. إزالة الحطام والجزيئات من كتلة الراتنج باستخدام منظف بالموجات فوق الصوتية (حوالي 1 دقيقة).
   ملاحظة: قبل المتابعة ، يوصى باستخدام منظف بالموجات فوق الصوتية لإزالة أي حطام سطحي لمنع الانسداد.
5. بعد ذلك ، قم بإجراء التلميع التسلسلي باستخدام أوراق كاشطة أدق ؛ ترتيب التلميع هو 12 ميكرومتر ، 9 ميكرومتر ، 3 ميكرومتر ، 1 ميكرومتر و 0.3 ميكرومتر.
6. ضع فيلم لف (12 ميكرومتر) على طاولة مطحنة التلميع دون دوران وضع كتلة الراتنج على فيلم اللف.
   ملاحظة: في هذه التجربة ، تكون طاولة المطحنة مناسبة للحصول على حالة سطح مستو تحت فيضان المياه. بدلا من ذلك ، يمكن أيضا استخدام مرآة مستوية كبيرة (أو مرآة مماثلة) توفر التوازي.
7. تحت التبريد بالماء ، قم بتلميع سطح تقييم العينة بعناية على فيلم اللف يدويا. حرك العينة رأسيا وأفقيا وقطريا لنفس عدد الثواني تحت حقن الماء بضربات من 2 إلى 3 سم (1 بوصة). عندما يتم إجراء عملية التلميع بشكل صحيح ، ستلتصق عينة الراتنج بفيلم اللف.
8. قم بإزالة الحطام والجسيمات كما في الخطوة 4.4. قم بتغيير الورق الكاشطة إلى الحجم التالي وفقا لترتيب التلميع التسلسلي (من 12 ميكرومتر إلى 0.3 ميكرومتر) وضع كتلة الراتنج عليه.
9. أثناء صب الماء ، أمسك كتلة الراتنج وقم بتلميع سطح العينة بعناية على فيلم اللف يدويا. قم بإزالة الحطام والجسيمات كما في الخطوة 4.4.
10. كرر الخطوات 4.5 - 4.8 لإكمال التلميع النهائي (0.3 ميكرومتر). بعد الانتهاء من التلميع النهائي (0.3 ميكرومتر) ، يجب أن يكون للعينة سطح نهائي مرآة (الشكل 3 أ).
11. نظف سطح العينة بالإيثانول (100٪) لإزالة الشحوم والجفاف وتخزين كتل الراتنج في درجة حرارة الغرفة حتى اختبار الصلابة الدقيقة. أثناء التخزين ، تجنب الرطوبة الزائدة والغبار. تابع إلى الخطوة 5.

5. اختبار فيكرز للصلابة الدقيقة

ملاحظة: يتم إجراء المسافة البادئة لعينة سطح تشطيب المرآة باستخدام جهاز اختبار الصلابة الدقيقة. يتم إجراء الاختبار بحمولة 25 جم لمدة 10 ثوان مع طرف فيكرز.

1. اختبار فيكرز للصلابة الدقيقة للقواطع (نموذج تسمم الأسنان بالفلور)
   ملاحظة: يمكن تقسيم المينا إلى ثلاث طبقات من الخارج (جانب تجويف الفم) إلى الداخل (جانب اللب) ؛ وهي الطبقة السطحية والطبقة الوسطى والطبقة العميقة (تقاطع العاج والمينا ، DEJ) (الشكل 3 ب)¹⁶. في هذا البروتوكول ، يتم اختبار ثلاث طبقات من المينا.
   1. اضبط قوة التحميل على 25 جم ومدة التحميل على 10 ثوان. ضع كتلة الراتنج على المسرح.
   2. مسافة بادئة 6 نقاط في كل طبقة مينا (سطحية ومتوسطة و DEJ) وعاج في كل منطقة (عنق الرحم والوسط والطرف ؛ الشكل 3 ب).
   3. قياس طول القطرين (d1 و d2 ؛ الشكل 3 ب) لحساب قيمة صلابة فيكرز الدقيقة (HV; الشكل 4).
2. اختبار فيكرز للصلابة الدقيقة للعظم السنخي (نموذج L-PPR)
   1. اضبط قوة التحميل على 25 جم ومدة التحميل على 10 ثوان. ضع كتلة الراتنج على المسرح.
   2. مسافة بادئة 3-6 نقاط في كل جانب متوسط وبعيد من العظم السنخي من القمة السنخية. المسافة البادئة للعظام السنخية بين 1^ش و 2^{الضرس الثاني} (مربع أبيض) ، و 2^{الضرس الثاني} و 3.
      ملاحظة: في هذا البروتوكول ، تم تقييم 6 نقاط في كل جانب متوسط وبعيد (إجمالي 12 نقطة) للعظم الضابط (السليم) ، وتم تقييم 3 نقاط في كل جانب (إجمالي 6 نقاط) ل L-PBR. يعتمد عدد نقاط المسافة البادئة على ظروف الآفة (على سبيل المثال ، الكثير من فقدان العظام يحد من منطقة المسافة البادئة).

الشكل 3: تقييم مناطق الصلابة الدقيقة في قاطعة الفك السفلي. (أ) عينة سطح تشطيب المرآة التي تحتوي على قاطعة الفك السفلي. (ب) المسافات البادئة في كل منطقة؛ عنق الرحم والوسط والطرف (NaF 0 جزء في المليون). (ج) ثلاث طبقات من المينا؛ من DEJ ، المينا الداخلية والوسطى والخارجية. الاختصارات: D = العاج ، E = المينا ، DEJ = تقاطع مينا العاج يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 4: صلابة فيكرز الدقيقة للمينا المعالجة ب NaF أو بدونه. تم تقييم الصلابة الدقيقة للعاج وثلاث طبقات مينا في كل منطقة ، منطقة عنق الرحم ، الوسطى ، والطرف. (أ-ج) التحكم و (D-F) NaF (125 جزء في المليون) العلاج. يتم تقديم البيانات كمتوسط ± SD. تم تقييم الاختلافات ذات الدلالة الدلالة إحصائية بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Tukey اللاحق. تم اعتبار قيم p < 0.05 ذات دلالة إحصائية. ** p < 0.005 ، *** p < 0.0005 ، ****p < 0.0001 الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

النتائج

نموذج تسمم الأسنان بالفلور: يوضح الشكل 1 صورا تمثيلية μCT للقواطع في السيطرة والفئران المعالجة بالفلورايد. في المجموعة الضابطة (الشكل 1B-D) ، أظهرت منطقة عنق الرحم كثافة معدنية أقل للمينا (EMD) تبلغ 1.188 جم / سم³ (الشكل 1B) مقارنة بالوس...

Discussion

يتم إجراء الصلابة الدقيقة لتقييم الخواص الميكانيكية للأنسجة الصلبة مثل الأسنان والعظام. حتى الآن ، تم الإبلاغ عن طرق قياس الصلابة الدقيقة المتباينة. من المحتمل أن تكون معظم معلومات القياس ، وخاصة مستحضرات العينات ومواقع المسافة البادئة غير كافية. ركزت هذه الدراسة على بروتوكول الصلابة ال...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Braided Silk Suture 6-0	Teleflex
Canica Small Animal Surgery System	Kent Scientific Corporation	SURGI 5001
CarbiMet PSA 120/P120	Buehler	30080120
CarbiMet PSA 60/P60	Buehler	36080060
CarbiMet PSA 600/P1200	Buehler	36080600
Castroviejo Micro Needle hilder	F.S.T	12060-01
Epofix cold setting embeding Resin	Electron Microscopey Science	CAT-1237
Fisherbrand 112xx Series Advanced Ultrasonic Cleaner	Fisher Brand	FB11201
Fluoride-free Rodent diet	Bio Serv	F1515	AIN-76A, 1/2" Pellets
in-vivo microCT Skyscan 1176	Bruker
Isomet 1000 Precison saw	Buehler	MA112180
Lapping film 0.3µm	Maruto instrument co, LTD. Japan	26-4203	Alternative  A3-0.3 SHT, 3M USA
Lapping film 1µm	Maruto instrument co, LTD. Japan	26-4206	Alternative A3-1 SHT, 3M USA
Lapping film 12µm	Maruto instrument co, LTD. Japan	26-4211	Alternative A3-12 SHT, 3M USA
Lapping film 3µm	Maruto instrument co, LTD. Japan	26-4204	Alternative A3-3 SHT, 3M USA
Lapping film 9µm	Maruto instrument co, LTD. Japan	26-4201	Alternative A3-9 SHT, 3M USA
Leica wild microscope	Leica	LEIC M690
Metaserv 2000 Variable speed Grinder polisher	Buehler	No: 557-MG1-1160
MicroCut PSA 1200/P2500	Buehler	36081200
MicroCut PSA P4000	Buehler	36084000
Microhardness tester, ALPHA-MHT-1000Z	PACE Technologies
SamplKups  1 inch	Buehler	No: 209178
Sodium Fluoride	Fisher Scientific	S299-100
West cott Stitch Scissor	JEDMED	Cat. #25-1180
ZooMed Repti Thern Undertank heater (U.T.H)	Zoo Med Laboratories, Inc.	RH-4