A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يقدم هذا البروتوكول طريقة لدراسة الديناميكيات الخلوية باستخدام تقنية بسيطة للثقافة في المختبر . يوفر فرصة للباحثين والمعلمين في أسماك الزرد لدراسة العمليات الخلوية ، مثل تلك المتعلقة بتوازن العظام وبيولوجيا الخلية الأساسية ، من خلال تصور النوى الفلورية والخلايا المبرمج داخل المقاييس.
توفر قشور أسماك الزرد مجموعة متنوعة من المزايا للاستخدام في المختبرات القياسية لأغراض التدريس والبحث. يتم جمع المقاييس بسهولة دون الحاجة إلى القتل الرحيم ، وتتجدد في غضون أسبوعين ، وتكون شفافة وصغيرة ، مما يسمح بعرضها باستخدام مجهر قياسي. تعتبر قشور أسماك الزرد مفيدة بشكل خاص في البيئات التعليمية ، لأنها توفر فرصة فريدة للطلاب للمشاركة في خبرات التعلم العملي ، لا سيما في فهم الديناميكيات الخلوية وطرق الزراعة في المختبر . الهدف الرئيسي من هذا البروتوكول هو وصف طريقة لجمع وصيانة قشور الزرد في الاستزراع لاستخدامها في مجموعة متنوعة من الدراسات البيولوجية باستخدام معدات المختبرات الأساسية. بالإضافة إلى ذلك ، يوضح البروتوكول بالتفصيل استخدامها في فهم توازن العظام من خلال فحص نشاط خلايا العظام المشاركة في ارتشاف العظام وترسوبها. يتضمن أيضا بروتوكولات إضافية للتقنيات العامة ، مثل تصور النوى والخلايا المبرمجة. ينتج عن بروتوكول الزراعة في المختبر نتائج موثوقة مع الحد الأدنى من الكواشف والمعدات. تناقش هذه المقالة فوائد استخدام المزارع المختبرية لمقاييس أسماك الزرد لتعزيز البحث العلمي وتحدد الموارد اللازمة لدعم دمجها في البيئات التعليمية.
في السنوات الأخيرة ، برزت أسماك الزرد (Danio rerio) ككائن حي نموذجي قيم في مختلف المجالات العلمية ، بما في ذلك علم الوراثة وعلم الأحياء التنموي وعلم السموم1،2،3. أسماك الزرد هي أسماك مياه عذبة استوائية صغيرة موطنها أنهار جنوب شرقآسيا 4. لقد أصبحوا كائنا نموذجيا شائعا في علم الأحياء نظرا لسهولة صيانتها وصغر حجمها ودورتها الإنجابية السريعة والأجنة الشفافة1. هذا يسمح بمراقبة تطورها الداخلي بسهولة ، مما يجعلها مثالية لدراسة العمليات البيولوجية المختلفة في علم الأحياء التنموي. تشترك أسماك ال....
تتبع جميع البروتوكولات الموضحة هنا إرشادات المجلس الكندي لرعاية وتمت الموافقة عليها سنويا من قبل لجنة رعاية بجامعة سانت ماري / جامعة ماونت سانت فنسنت بموجب البروتوكول رقم 20-14 و 21-12. قبل تنفيذ هذا البروتوكول ، يجب على المستخدمين التأكد من اتباع الإرشادات الفيدرالية والإقليمية بشأن استخدام في البحث أوالتدريس 23. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير الكواشف لثقافة المقياس
في الآونة الأخيرة ، تم استخدام بروتوكول الاستزراع المصغر هذا لدراسة توازن العظام11. يمكن أن تعيش المقاييس في وسط الثقافة لمدة يومين على الأقل. تم تحليل أعداد الخلايا المبرمجة في كل يوم من أيام الاستزراع ، بحد أقصى ثلاثة أيام ، عن طريق حساب الخلايا المصنفة. أظ?.......
قشور أسماك الزرد هي نموذج يسهل الوصول إليه في المختبر لدراسة مجموعة متنوعة من العمليات البيولوجية المختلفة التي يمكن الحفاظ عليها لمدة تصل إلى يومين باستخدام طريقة الاستزراع وحاضنة لمحاكاة بيئتها الطبيعية11. تحتوي المقاييس على توزيع منتظم ومتناسب للخ.......
ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
يشكر المؤلفون موظفي المنشأة المائية بجامعة ماونت سانت فنسنت وجميع أعضاء مختبر فرانز أوديندال لتنمية العظام على توفير الرعاية اللازمة للأسماك. شكر خاص لأليشا ماكنيل وكيلي أ. ماكليلان وشيرين جرادي للمساعدة في تحسين بعض البروتوكولات. تم دعم هذا البحث بتمويل من وكالة الفضاء الكندية (CSA) [19HLSRM01] ومجلس أبحاث العلوم الطبيعية والهندسة الكندي (NSERC).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.2 mL tubes | n/a | n/a | |
37% HCl | EMD | HX0603-4 | For pH stabilization and prepration of PRS |
Concave slide | n/a | n/a | |
DAPI | Vectashield | H-1200 | For cell nuclei visualization |
Diazonium salt (Fast Blue B) | Sigma | D9805 | For AP substrate solution |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) powder | Sigma | D5523 | For scale culture media |
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS222) | Sigma | E10521 | For preparation of 0.1% MS222 |
Fetal bovine serum | Sigma | F4135 | For scale culture media |
Fluorescence microscope | n/a | n/a | |
Glacial acetic acid | Fisher | A38 212 | For acetate buffer |
Glycerol | VWR | BDH1172-4LP | For 80% glycerol - storage scales |
HEPES | ThermoFisher | 15630106 | For scale culture media |
Hot plate | n/a | n/a | |
KCl | Sigma | P217-10 | For preparation of PBS |
Lysotracker | ThermoFisher | L7528 | For lysosomes visualization |
Maleic acid | Sigma | M0375 | For Tris-Maleate buffer |
Micropipette | n/a | n/a | |
N,N-dimethylformamide | Sigma | 319937 | For AP substrate solution |
N,N-dimethylformamide | Sigma | 319937 | For Enzyme Substrate Solution |
Na2HPO4 | EMD | SX0720-1 | For preparation of PBS |
NaCl | Sigma | S9888 | For preparation of PBS |
NaNO2 | Sigma | S-2252 | For 4% NaNO2 |
NaOH | Sigma | S5881 | For preparation of 4% PFA |
NaOH | Sigma | S5881 | For scale fixation and pH stabilization |
Napthol-AS-TR-phosphate | Sigma | N6125 | For AP substrate solution |
Napthol-AS-TR-phosphate | Sigma | N6125 | For Enzyme Substrate Solution |
Pararosaniline hydrochloride | Sigma | P3750 | For PRS |
Penicillin-streptomycin 5000 units penicillin and 5mg streptomyocin/ml | ThermoFisher | 15140122 | For scale culture media |
Personal protective equipment (PPE): disposable nitrile gloves, safety glasses/splash goggles and lab coat. | n/a | n/a | |
PFA | Sigma | P6148 | For scale fixation |
Sodium acetate | Sigma | S2889 | For acetate buffer |
Standard compound microscope | n/a | n/a | |
Stir plate | n/a | n/a | |
Tartaric acid | Sigma | T6521 | For Tartrate buffer |
Tris base | Roche | 03 118 142 001 | For Tris-Maleate buffer |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved