A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يقدم هذا البروتوكول طريقة لدراسة الديناميكيات الخلوية باستخدام تقنية بسيطة للثقافة في المختبر . يوفر فرصة للباحثين والمعلمين في أسماك الزرد لدراسة العمليات الخلوية ، مثل تلك المتعلقة بتوازن العظام وبيولوجيا الخلية الأساسية ، من خلال تصور النوى الفلورية والخلايا المبرمج داخل المقاييس.

Abstract

توفر قشور أسماك الزرد مجموعة متنوعة من المزايا للاستخدام في المختبرات القياسية لأغراض التدريس والبحث. يتم جمع المقاييس بسهولة دون الحاجة إلى القتل الرحيم ، وتتجدد في غضون أسبوعين ، وتكون شفافة وصغيرة ، مما يسمح بعرضها باستخدام مجهر قياسي. تعتبر قشور أسماك الزرد مفيدة بشكل خاص في البيئات التعليمية ، لأنها توفر فرصة فريدة للطلاب للمشاركة في خبرات التعلم العملي ، لا سيما في فهم الديناميكيات الخلوية وطرق الزراعة في المختبر . الهدف الرئيسي من هذا البروتوكول هو وصف طريقة لجمع وصيانة قشور الزرد في الاستزراع لاستخدامها في مجموعة متنوعة من الدراسات البيولوجية باستخدام معدات المختبرات الأساسية. بالإضافة إلى ذلك ، يوضح البروتوكول بالتفصيل استخدامها في فهم توازن العظام من خلال فحص نشاط خلايا العظام المشاركة في ارتشاف العظام وترسوبها. يتضمن أيضا بروتوكولات إضافية للتقنيات العامة ، مثل تصور النوى والخلايا المبرمجة. ينتج عن بروتوكول الزراعة في المختبر نتائج موثوقة مع الحد الأدنى من الكواشف والمعدات. تناقش هذه المقالة فوائد استخدام المزارع المختبرية لمقاييس أسماك الزرد لتعزيز البحث العلمي وتحدد الموارد اللازمة لدعم دمجها في البيئات التعليمية.

Introduction

في السنوات الأخيرة ، برزت أسماك الزرد (Danio rerio) ككائن حي نموذجي قيم في مختلف المجالات العلمية ، بما في ذلك علم الوراثة وعلم الأحياء التنموي وعلم السموم1،2،3. أسماك الزرد هي أسماك مياه عذبة استوائية صغيرة موطنها أنهار جنوب شرقآسيا 4. لقد أصبحوا كائنا نموذجيا شائعا في علم الأحياء نظرا لسهولة صيانتها وصغر حجمها ودورتها الإنجابية السريعة والأجنة الشفافة1. هذا يسمح بمراقبة تطورها الداخلي بسهولة ، مما يجعلها مثالية لدراسة العمليات البيولوجية المختلفة في علم الأحياء التنموي. تشترك أسماك ال....

Protocol

تتبع جميع البروتوكولات الموضحة هنا إرشادات المجلس الكندي لرعاية وتمت الموافقة عليها سنويا من قبل لجنة رعاية بجامعة سانت ماري / جامعة ماونت سانت فنسنت بموجب البروتوكول رقم 20-14 و 21-12. قبل تنفيذ هذا البروتوكول ، يجب على المستخدمين التأكد من اتباع الإرشادات الفيدرالية والإقليمية بشأن استخدام في البحث أوالتدريس 23. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير الكواشف لثقافة المقياس

  1. تحضير وسط DMEM مع HEPES (10 جم من مسحوق DMEM ، 5.95 جم من HEPES ، في 1 لتر من الماء المقطر أو dH2O ، درجة الحموضة: 6....

النتائج

في الآونة الأخيرة ، تم استخدام بروتوكول الاستزراع المصغر هذا لدراسة توازن العظام11. يمكن أن تعيش المقاييس في وسط الثقافة لمدة يومين على الأقل. تم تحليل أعداد الخلايا المبرمجة في كل يوم من أيام الاستزراع ، بحد أقصى ثلاثة أيام ، عن طريق حساب الخلايا المصنفة. أظ?.......

Discussion

قشور أسماك الزرد هي نموذج يسهل الوصول إليه في المختبر لدراسة مجموعة متنوعة من العمليات البيولوجية المختلفة التي يمكن الحفاظ عليها لمدة تصل إلى يومين باستخدام طريقة الاستزراع وحاضنة لمحاكاة بيئتها الطبيعية11. تحتوي المقاييس على توزيع منتظم ومتناسب للخ.......

Disclosures

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون موظفي المنشأة المائية بجامعة ماونت سانت فنسنت وجميع أعضاء مختبر فرانز أوديندال لتنمية العظام على توفير الرعاية اللازمة للأسماك. شكر خاص لأليشا ماكنيل وكيلي أ. ماكليلان وشيرين جرادي للمساعدة في تحسين بعض البروتوكولات. تم دعم هذا البحث بتمويل من وكالة الفضاء الكندية (CSA) [19HLSRM01] ومجلس أبحاث العلوم الطبيعية والهندسة الكندي (NSERC).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.2 mL tubesn/an/a
37% HCl EMDHX0603-4For pH stabilization and prepration of PRS
Concave sliden/an/a
DAPIVectashieldH-1200For cell nuclei visualization
Diazonium salt (Fast Blue B)SigmaD9805For AP substrate solution
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) powder Sigma D5523For scale culture media 
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS222) Sigma E10521For preparation of 0.1% MS222
Fetal bovine serum Sigma F4135For scale culture media 
Fluorescence microscopen/an/a
Glacial acetic acid Fisher A38 212For acetate buffer
GlycerolVWRBDH1172-4LPFor 80% glycerol - storage scales
HEPES ThermoFisher 15630106For scale culture media 
Hot platen/an/a
KCl SigmaP217-10For preparation of PBS
LysotrackerThermoFisherL7528For lysosomes  visualization
Maleic acidSigmaM0375For Tris-Maleate buffer 
Micropipetten/an/a
N,N-dimethylformamideSigma319937For AP substrate solution
N,N-dimethylformamide Sigma319937For Enzyme Substrate Solution
Na2HPO4 EMDSX0720-1For preparation of PBS
NaCl Sigma S9888For preparation of PBS
NaNO2SigmaS-2252For 4% NaNO2
NaOH SigmaS5881For preparation of 4% PFA
NaOH Sigma S5881For scale fixation and pH stabilization
Napthol-AS-TR-phosphateSigmaN6125For AP substrate solution
Napthol-AS-TR-phosphate SigmaN6125For Enzyme Substrate Solution
Pararosaniline hydrochloride SigmaP3750For PRS
Penicillin-streptomycin 5000 units penicillin and 5mg streptomyocin/mlThermoFisher 15140122For scale culture media 
Personal protective equipment (PPE): disposable nitrile gloves, safety glasses/splash goggles and lab coat.n/an/a
PFA Sigma P6148For scale fixation
Sodium acetate Sigma S2889For acetate buffer
Standard compound microscopen/an/a
Stir platen/an/a
Tartaric acidSigmaT6521For Tartrate buffer
Tris baseRoche03 118 142 001For Tris-Maleate buffer 

References

  1. Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. . Zebrafish. , (2002).
  2. Linney, E., Upchurch, L., Donerly, S. Zebrafish as a neurotoxicological model. Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 709-718 (2004).
  3. Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE215

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved