النمذجة في المختبر لترسب الدهون في مرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي

Summary

توضح هذه المقالة استخدام خلايا HepG2 التي يسببها حمض الأوليك كنموذج لمرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي.

Abstract

ارتفع معدل انتشار مرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي (MASLD) بسبب التغيرات في الأنماط الاقتصادية ونمط الحياة ، مما أدى إلى تحديات صحية كبيرة. وقد درست التقارير السابقة إنشاء نماذج حيوانية وخلوية ل MASLD ، مع تسليط الضوء على الاختلافات بينهما. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج خلوي عن طريق تحفيز تراكم الدهون في MASLD. تم تحفيز خلايا HepG2 بحمض الأوليك غير المشبع بتركيزات مختلفة (0.125 mM ، 0.25 mM ، 0.5 mM ، 1 mM) لمحاكاة MASLD. تم تقييم فعالية النموذج باستخدام مقايسات مجموعة عد الخلايا -8 ، وتلطيخ Oil Red O ، وتحليل محتوى الدهون. تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء نموذج خلوي سهل التشغيل لخلايا MASLD. أظهرت نتائج فحوصات مجموعة عد الخلايا -8 أن بقاء خلايا HepG2 كان يعتمد على تركيز حمض الأوليك ، مع GI₅₀ من 1.875 mM. كانت صلاحية الخلية في مجموعات 0.5 mM و 1 mM أقل بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة (P < 0.05). علاوة على ذلك ، فحص تلطيخ الزيت الأحمر O وتحليل محتوى الدهون ترسب الدهون بتركيزات متفاوتة من حمض الأوليك (0.125 مللي مول ، 0.25 مللي مول ، 0.5 مللي مول ، 1 مللي مول) على خلايا HepG2. كان محتوى الدهون في مجموعات 0.25 mM و 0.5 mM و 1 mM أعلى بكثير من محتوى المجموعة الضابطة (P < 0.05). بالإضافة إلى ذلك ، كانت مستويات الدهون الثلاثية في مجموعات الزراعة العضوية أعلى بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة (P < 0.05).

Introduction

يشمل مرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي (MASLD) مجموعة من الحالات ، بما في ذلك التنكس الدهني البسيط ، والتهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH) ، وتليف الكبد ، وسرطان الخلايا الكبدية^{1،2،3،4،5،6} ، وكلها تعزى إلى عوامل أخرى غير تكوين الكحول⁷. MASLD هو مرض الكبد الأكثر انتشارا الناجم عن إصابة الكبد الأيضية ، حيث يؤثر على ما يقرب من ربع سكان العالم^8،9،10....

Protocol

ملاحظة: راجع جدول المواد للحصول على التفاصيل المتعلقة بجميع المواد والأدوات والكواشف المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. ثقافة الخلية

1. خلايا HepG2 المستزرعة في قوارير الثقافة التي تحتوي على وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) (يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني [FBS] ، و 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين). الحفاظ على قوارير الاستزراع عند 37 درجة مئوية في حاضنة CO₂ بنسبة 5٪.

2. تأثير حمض الأوليك على صلاحية الخلية كما تم قياسه بواسطة مجموعة عد الخلايا -8

1. قم بإذابة حجم معين من الزراعة العضوية في ثنائي ميثيل ....

النتائج

تأثير حمض الأوليك على صلاحية الخلية
تعرضت خلايا HepG2 لتركيزات متفاوتة من الزراعة العضوية (0 mM ، 0.125 mM ، 0.25 mM ، 0.5 mM ، 1 mM) ، مما أدى إلى انخفاض في معدلات بقاء الخلايا عند 0.125 mM و 0.25 mM و 0.5 mM و 1 mM مقارنة ب 0 mM. لوحظت دلالة إحصائية عند 0.5 mM (P < 0.05) و 1 mM (P < 0.05) عند مقارنتها ب 0 mM. تظهر نتائج.......

Discussion

MASLD هي متلازمة سريرية مرضية تتميز بترسب الدهون المفرط داخل الخلايا في خلايا الكبد بسبب عوامل تتجاوز الكحول وغيرها من العوامل الضارة بالكبد¹⁸. يرتبط MASLD بشكل معقد بإصابة الكبد بالإجهاد الأيضي المكتسب ، ولا سيما المرتبطة بمقاومة الأنسولين والقابلية الوراثية. لدراسة الأدوية وفح.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm filter	Millex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTA	Gibco	25200-056
0.45 µm filter	Millex
2 mL Crygenic Vials	CORNING	430659
25 cm2 Cell Culture Flask	CORNING	430639
6-well cell culture plate	CORNING	3516
96-well cell culture plate	CORNING	3599
Blood Count Plate	Shanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.	02270113
Cell Counting Kit-8 assays	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	CA1210-1000T
CO2 incubator	NUAIRE	NU-5710E
DMSO Dimethyl sulfoxide	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	D8371
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	8122691
Enzyme Labeling Equipment	Tecan	Spark
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	10099141
HepG2 cells line	Beijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)	221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instruction	Nanjing Jiacheng Bioengineering Institute	20170301
Inverted Microscope for Cell Culture	Leica	DMi1
Isopropanol	Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.	2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured Cells	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	G1262
Oleic acid	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A502071
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
SPSS 24.0		Statistics software