A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

توضح هذه المقالة استخدام خلايا HepG2 التي يسببها حمض الأوليك كنموذج لمرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي.

Abstract

ارتفع معدل انتشار مرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي (MASLD) بسبب التغيرات في الأنماط الاقتصادية ونمط الحياة ، مما أدى إلى تحديات صحية كبيرة. وقد درست التقارير السابقة إنشاء نماذج حيوانية وخلوية ل MASLD ، مع تسليط الضوء على الاختلافات بينهما. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج خلوي عن طريق تحفيز تراكم الدهون في MASLD. تم تحفيز خلايا HepG2 بحمض الأوليك غير المشبع بتركيزات مختلفة (0.125 mM ، 0.25 mM ، 0.5 mM ، 1 mM) لمحاكاة MASLD. تم تقييم فعالية النموذج باستخدام مقايسات مجموعة عد الخلايا -8 ، وتلطيخ Oil Red O ، وتحليل محتوى الدهون. تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء نموذج خلوي سهل التشغيل لخلايا MASLD. أظهرت نتائج فحوصات مجموعة عد الخلايا -8 أن بقاء خلايا HepG2 كان يعتمد على تركيز حمض الأوليك ، مع GI50 من 1.875 mM. كانت صلاحية الخلية في مجموعات 0.5 mM و 1 mM أقل بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة (P < 0.05). علاوة على ذلك ، فحص تلطيخ الزيت الأحمر O وتحليل محتوى الدهون ترسب الدهون بتركيزات متفاوتة من حمض الأوليك (0.125 مللي مول ، 0.25 مللي مول ، 0.5 مللي مول ، 1 مللي مول) على خلايا HepG2. كان محتوى الدهون في مجموعات 0.25 mM و 0.5 mM و 1 mM أعلى بكثير من محتوى المجموعة الضابطة (P < 0.05). بالإضافة إلى ذلك ، كانت مستويات الدهون الثلاثية في مجموعات الزراعة العضوية أعلى بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة (P < 0.05).

Introduction

يشمل مرض الكبد الدهني المرتبط بالخلل الأيضي (MASLD) مجموعة من الحالات ، بما في ذلك التنكس الدهني البسيط ، والتهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH) ، وتليف الكبد ، وسرطان الخلايا الكبدية1،2،3،4،5،6 ، وكلها تعزى إلى عوامل أخرى غير تكوين الكحول7. MASLD هو مرض الكبد الأكثر انتشارا الناجم عن إصابة الكبد الأيضية ، حيث يؤثر على ما يقرب من ربع سكان العالم8،9،10....

Protocol

ملاحظة: راجع جدول المواد للحصول على التفاصيل المتعلقة بجميع المواد والأدوات والكواشف المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. ثقافة الخلية

  1. خلايا HepG2 المستزرعة في قوارير الثقافة التي تحتوي على وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) (يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني [FBS] ، و 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين). الحفاظ على قوارير الاستزراع عند 37 درجة مئوية في حاضنة CO2 بنسبة 5٪.

2. تأثير حمض الأوليك على صلاحية الخلية كما تم قياسه بواسطة مجموعة عد الخلايا -8

  1. قم بإذابة حجم معين من الزراعة العضوية في ثنائي ميثيل ....

النتائج

تأثير حمض الأوليك على صلاحية الخلية
تعرضت خلايا HepG2 لتركيزات متفاوتة من الزراعة العضوية (0 mM ، 0.125 mM ، 0.25 mM ، 0.5 mM ، 1 mM) ، مما أدى إلى انخفاض في معدلات بقاء الخلايا عند 0.125 mM و 0.25 mM و 0.5 mM و 1 mM مقارنة ب 0 mM. لوحظت دلالة إحصائية عند 0.5 mM (P < 0.05) و 1 mM (P < 0.05) عند مقارنتها ب 0 mM. تظهر نتائج.......

Discussion

MASLD هي متلازمة سريرية مرضية تتميز بترسب الدهون المفرط داخل الخلايا في خلايا الكبد بسبب عوامل تتجاوز الكحول وغيرها من العوامل الضارة بالكبد18. يرتبط MASLD بشكل معقد بإصابة الكبد بالإجهاد الأيضي المكتسب ، ولا سيما المرتبطة بمقاومة الأنسولين والقابلية الوراثية. لدراسة الأدوية وفح.......

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

Acknowledgements

تم منح الدراسة الحالية من قبل "دراسة حول القضايا الرئيسية للتأثير العلاجي ل Koumiss على الأمراض الإقليمية للطب المنغولي" في عام 2018 المشروع المدعوم لبرنامج العلوم والتكنولوجيا التابع لقسم العلوم والتكنولوجيا في منطقة منغوليا الداخلية ذاتية الحكم.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 µm filterMillex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTAGibco25200-056
0.45 µm filterMillex
2 mL Crygenic VialsCORNING430659
25 cm2 Cell Culture FlaskCORNING430639
6-well cell culture plateCORNING3516
96-well cell culture plateCORNING3599
Blood Count PlateShanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.02270113
Cell Counting Kit-8 assaysBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd. CA1210-1000T
CO2 incubatorNUAIRENU-5710E
 DMSO Dimethyl sulfoxide Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd. D8371
Dulbecco's Modified Eagle MediumGibco8122691
Enzyme Labeling EquipmentTecanSpark
Fetal Bovine Serum, QualifiedGibco10099141
HepG2 cells lineBeijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instructionNanjing Jiacheng Bioengineering Institute20170301
Inverted Microscope for Cell CultureLeicaDMi1 
IsopropanolTianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured CellsBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd. G1262
Oleic acid Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A502071
Penicillin StreptomycinGibco15140122
SPSS 24.0Statistics software

References

  1. Alisi, A., Feldstein, A. E., Villani, A., Raponi, M. Pediatric nonalcoholic fatty liver disease: a multidisciplinary approach. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 9 (3), 152-161 (2012).
  2. Anania, C., Perla, F. M., Olivero, F., Pacifico, L., Chiesa, C.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 209

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved