إنشاء نموذج زرع الجنين في المختبر

Summary

يصف هذا البروتوكول منهجيات إنشاء نموذج بسيط وفعال لزرع الجنين في المختبر لتقييم الجزيئات ذات الصلة التي تؤثر على عملية زرع الجنين.

Abstract

زرع الجنين هو الخطوة الأولى في تأسيس حمل ناجح. يعد النموذج المختبري لزرع الأجنة أمرا بالغ الأهمية للبحث البيولوجي الأساسي وتطوير الأدوية والفحص. تقدم هذه الورقة نموذجا بسيطا وسريعا وعالي الكفاءة في المختبر لزرع الجنين. في هذا البروتوكول ، نقدم أولا اكتساب الكيسة الأريمية للفأر وتحضير خلايا سرطان بطانة الرحم الغدي البشري (إيشيكاوا) للزرع ، تليها طريقة الزراعة المشتركة لأجنة الفئران وخلايا إيشيكاوا. أخيرا ، أجرينا دراسة لتقييم تأثير التركيزات المتفاوتة من 17-β-استراديول (E₂) والبروجسترون (P4) على معدلات التصاق الجنين بناء على هذا النموذج. كشفت النتائج التي توصلنا إليها أن التركيزات العالية من E₂ قللت بشكل كبير من التصاق الجنين ، في حين أن إضافة البروجسترون يمكن أن يعيد معدل الالتصاق. يوفر هذا النموذج منصة بسيطة وسريعة لتقييم وفحص الجزيئات المشاركة في عملية الالتصاق ، مثل السيتوكينات والأدوية وعوامل النسخ التي تتحكم في الزرع وتقبل بطانة الرحم.

Introduction

زرع الجنين ، الخطوة الأولى للحمل الناجح ، أمر بالغ الأهمية لفهم أساسه البيولوجي ومواجهة تحديات العقم. ومع ذلك ، فإن القيود الأخلاقية تفرض قيودا كبيرة في جمع عينات الأجنة السريرية البشرية ، مما يعيق البحث في التفاعلات المعقدة بين الأجنة البشرية وبطانة الرحم أثناء الحمل المبكر¹. إن الفهم العميق لهذه الآليات المعقدة أمر حيوي للنهوض بالبحوث البيولوجية الأساسية واكتشاف الأدوية والصحة الإنجابية.

استخدمت النماذج السابقة في المختبر نماذج الالتصاق حيث تمت زراعة الخلايا الظهارية البطانية البشرية أحادية الطبقة (RL95-2) ² مع بدائل جنينية ، مثل خلايا BeWo أو JAr أو Jeg-3 3^{المشيمية} .....

Protocol

تم إجراء مناولة الفئران والدراسات التجريبية بموجب البروتوكولات المعتمدة من قبل لجنة التابعة لمعهد شنغهاي للتقنيات الطبية الحيوية والصيدلانية. ضمان إجراءات السلامة: احرص دائما على ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) عند التعامل مع المواد الكيميائية أو المواد البيولوجية.

1. اقتناء أجنة الفئران

ملاحظة: يصف هذا القسم عملية الحصول على أجنة الفئران. تم الحفاظ على إناث الفئران البالغة (6-8 أسابيع ، الهجين C57BL / 6 و DBA / 2) في ظل الظروف البيئية القياسية من 12 ساعة خفيفة و 12 ساعة مظلمة عند 20-25 درجة مئوية ورطوبة 40-60٪ مع توفير الطعام والماء حسب الحاجة.

1. حقن إناث الفئران داخ....

النتائج

في عملية تقنيات الإنجاب المساعدة ، يعد فرط تحفيز المبيض الخاضع للرقابة (COH) خطوة حاسمة ، مما يؤدي إلى ارتفاع مستويات هرمون الاستروجين بشكل كبير لدى المرضى بأكثر من 10-20 مرة مقارنة بالدورات الطبيعية¹¹. بالنظر إلى هذا السياق ، سألنا عما إذا كانت تركيزات هرمون الاستروجين العالية في.......

Discussion

توفر بساطة وسرعة النموذج المختبري المقترح لزرع الجنين مزايا ملحوظة لفحص الأدوية في المراحل المبكرة والتطبيقات البحثية الأخرى. البروتوكول المباشر ، إلى جانب الطبيعة عالية الإنتاجية لخطوط خلايا إيشيكاوا ، يجعله مرشحا مثاليا للشاشات واسعة النطاق ، لا سيما في المراحل المبكرة من اكتشا?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development