A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول منهجيات إنشاء نموذج بسيط وفعال لزرع الجنين في المختبر لتقييم الجزيئات ذات الصلة التي تؤثر على عملية زرع الجنين.
زرع الجنين هو الخطوة الأولى في تأسيس حمل ناجح. يعد النموذج المختبري لزرع الأجنة أمرا بالغ الأهمية للبحث البيولوجي الأساسي وتطوير الأدوية والفحص. تقدم هذه الورقة نموذجا بسيطا وسريعا وعالي الكفاءة في المختبر لزرع الجنين. في هذا البروتوكول ، نقدم أولا اكتساب الكيسة الأريمية للفأر وتحضير خلايا سرطان بطانة الرحم الغدي البشري (إيشيكاوا) للزرع ، تليها طريقة الزراعة المشتركة لأجنة الفئران وخلايا إيشيكاوا. أخيرا ، أجرينا دراسة لتقييم تأثير التركيزات المتفاوتة من 17-β-استراديول (E2) والبروجسترون (P4) على معدلات التصاق الجنين بناء على هذا النموذج. كشفت النتائج التي توصلنا إليها أن التركيزات العالية من E2 قللت بشكل كبير من التصاق الجنين ، في حين أن إضافة البروجسترون يمكن أن يعيد معدل الالتصاق. يوفر هذا النموذج منصة بسيطة وسريعة لتقييم وفحص الجزيئات المشاركة في عملية الالتصاق ، مثل السيتوكينات والأدوية وعوامل النسخ التي تتحكم في الزرع وتقبل بطانة الرحم.
زرع الجنين ، الخطوة الأولى للحمل الناجح ، أمر بالغ الأهمية لفهم أساسه البيولوجي ومواجهة تحديات العقم. ومع ذلك ، فإن القيود الأخلاقية تفرض قيودا كبيرة في جمع عينات الأجنة السريرية البشرية ، مما يعيق البحث في التفاعلات المعقدة بين الأجنة البشرية وبطانة الرحم أثناء الحمل المبكر1. إن الفهم العميق لهذه الآليات المعقدة أمر حيوي للنهوض بالبحوث البيولوجية الأساسية واكتشاف الأدوية والصحة الإنجابية.
استخدمت النماذج السابقة في المختبر نماذج الالتصاق حيث تمت زراعة الخلايا الظهارية البطانية البشرية أحادية الطبقة (RL95-2) 2 مع بدائل جنينية ، مثل خلايا BeWo أو JAr أو Jeg-3 3المشيمية .....
تم إجراء مناولة الفئران والدراسات التجريبية بموجب البروتوكولات المعتمدة من قبل لجنة التابعة لمعهد شنغهاي للتقنيات الطبية الحيوية والصيدلانية. ضمان إجراءات السلامة: احرص دائما على ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) عند التعامل مع المواد الكيميائية أو المواد البيولوجية.
1. اقتناء أجنة الفئران
ملاحظة: يصف هذا القسم عملية الحصول على أجنة الفئران. تم الحفاظ على إناث الفئران البالغة (6-8 أسابيع ، الهجين C57BL / 6 و DBA / 2) في ظل الظروف البيئية القياسية من 12 ساعة خفيفة و 12 ساعة مظلمة عند 20-25 درجة مئوية ورطوبة 40-60٪ مع توفير الطعام والماء حسب الحاجة.
في عملية تقنيات الإنجاب المساعدة ، يعد فرط تحفيز المبيض الخاضع للرقابة (COH) خطوة حاسمة ، مما يؤدي إلى ارتفاع مستويات هرمون الاستروجين بشكل كبير لدى المرضى بأكثر من 10-20 مرة مقارنة بالدورات الطبيعية11. بالنظر إلى هذا السياق ، سألنا عما إذا كانت تركيزات هرمون الاستروجين العالية في.......
توفر بساطة وسرعة النموذج المختبري المقترح لزرع الجنين مزايا ملحوظة لفحص الأدوية في المراحل المبكرة والتطبيقات البحثية الأخرى. البروتوكول المباشر ، إلى جانب الطبيعة عالية الإنتاجية لخطوط خلايا إيشيكاوا ، يجعله مرشحا مثاليا للشاشات واسعة النطاق ، لا سيما في المراحل المبكرة من اكتشا?.......
ليس لدى أصحاب البلاغ أي تضارب في المصالح المالية أو غيرها للإعلان عنه.
تم دعم دراساتنا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82171603) ، ومؤسسة لجنة الصحة البلدية في شنغهاي (202140341) ، ولجنة العلوم والتكنولوجيا في بلدية شنغهاي (23JC1403803) ، وبرنامج تعزيز الابتكار التابع ل NHC و Shanghai Key Labs ، SIBPT (RC2023-02).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
17-β-estradiol | SIGMA | 3301 | Most potent mammalian estrogenic hormone |
BD Falcon | BD | 353001 | Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile |
Biosafety Cabinet | ESCO | class ![]() | Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc |
CO2 Incubator | Thermo | 8000DH | Embryo culture |
Culture plate | Corning | 3506 | Cell culture |
DMEM/F12 | Gibco | 1133032 | DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 10099141 | Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin |
Gelatin | SIGMA | G9391 | Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture |
HCG | Nanjing Aibei | M2520 | Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL |
Hyaluronidase | SIGMA | V900833 | Reagent grade, powder |
KSOM | Merck | MR-020P-D | (1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL |
L-glutamine | Gibco | 25030081 | L-glutamine-200 mM (100x), liquid |
M2 | Merck | MR-015-D | EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red |
Mineral oil | SIGMA | M8410 | Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications |
Penicillin-Streptomycin, liquid | Gibco | 15140122 | 10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline |
PMSG | Nanjing Aibei | M2620 | Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL |
Progesterone | SIGMA | 5341 | Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle |
Sodium pyruvate | Gibco | 11360070 | Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose |
Stereomicroscope | Olympus | SZX7 | Embryo retrieval and observation of embryo development |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved