A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول منهجيات إنشاء نموذج بسيط وفعال لزرع الجنين في المختبر لتقييم الجزيئات ذات الصلة التي تؤثر على عملية زرع الجنين.

Abstract

زرع الجنين هو الخطوة الأولى في تأسيس حمل ناجح. يعد النموذج المختبري لزرع الأجنة أمرا بالغ الأهمية للبحث البيولوجي الأساسي وتطوير الأدوية والفحص. تقدم هذه الورقة نموذجا بسيطا وسريعا وعالي الكفاءة في المختبر لزرع الجنين. في هذا البروتوكول ، نقدم أولا اكتساب الكيسة الأريمية للفأر وتحضير خلايا سرطان بطانة الرحم الغدي البشري (إيشيكاوا) للزرع ، تليها طريقة الزراعة المشتركة لأجنة الفئران وخلايا إيشيكاوا. أخيرا ، أجرينا دراسة لتقييم تأثير التركيزات المتفاوتة من 17-β-استراديول (E2) والبروجسترون (P4) على معدلات التصاق الجنين بناء على هذا النموذج. كشفت النتائج التي توصلنا إليها أن التركيزات العالية من E2 قللت بشكل كبير من التصاق الجنين ، في حين أن إضافة البروجسترون يمكن أن يعيد معدل الالتصاق. يوفر هذا النموذج منصة بسيطة وسريعة لتقييم وفحص الجزيئات المشاركة في عملية الالتصاق ، مثل السيتوكينات والأدوية وعوامل النسخ التي تتحكم في الزرع وتقبل بطانة الرحم.

Introduction

زرع الجنين ، الخطوة الأولى للحمل الناجح ، أمر بالغ الأهمية لفهم أساسه البيولوجي ومواجهة تحديات العقم. ومع ذلك ، فإن القيود الأخلاقية تفرض قيودا كبيرة في جمع عينات الأجنة السريرية البشرية ، مما يعيق البحث في التفاعلات المعقدة بين الأجنة البشرية وبطانة الرحم أثناء الحمل المبكر1. إن الفهم العميق لهذه الآليات المعقدة أمر حيوي للنهوض بالبحوث البيولوجية الأساسية واكتشاف الأدوية والصحة الإنجابية.

استخدمت النماذج السابقة في المختبر نماذج الالتصاق حيث تمت زراعة الخلايا الظهارية البطانية البشرية أحادية الطبقة (RL95-2) 2 مع بدائل جنينية ، مثل خلايا BeWo أو JAr أو Jeg-3 3المشيمية .....

Protocol

تم إجراء مناولة الفئران والدراسات التجريبية بموجب البروتوكولات المعتمدة من قبل لجنة التابعة لمعهد شنغهاي للتقنيات الطبية الحيوية والصيدلانية. ضمان إجراءات السلامة: احرص دائما على ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) عند التعامل مع المواد الكيميائية أو المواد البيولوجية.

1. اقتناء أجنة الفئران

ملاحظة: يصف هذا القسم عملية الحصول على أجنة الفئران. تم الحفاظ على إناث الفئران البالغة (6-8 أسابيع ، الهجين C57BL / 6 و DBA / 2) في ظل الظروف البيئية القياسية من 12 ساعة خفيفة و 12 ساعة مظلمة عند 20-25 درجة مئوية ورطوبة 40-60٪ مع توفير الطعام والماء حسب الحاجة.

  1. حقن إناث الفئران داخ....

النتائج

في عملية تقنيات الإنجاب المساعدة ، يعد فرط تحفيز المبيض الخاضع للرقابة (COH) خطوة حاسمة ، مما يؤدي إلى ارتفاع مستويات هرمون الاستروجين بشكل كبير لدى المرضى بأكثر من 10-20 مرة مقارنة بالدورات الطبيعية11. بالنظر إلى هذا السياق ، سألنا عما إذا كانت تركيزات هرمون الاستروجين العالية في.......

Discussion

توفر بساطة وسرعة النموذج المختبري المقترح لزرع الجنين مزايا ملحوظة لفحص الأدوية في المراحل المبكرة والتطبيقات البحثية الأخرى. البروتوكول المباشر ، إلى جانب الطبيعة عالية الإنتاجية لخطوط خلايا إيشيكاوا ، يجعله مرشحا مثاليا للشاشات واسعة النطاق ، لا سيما في المراحل المبكرة من اكتشا?.......

Disclosures

ليس لدى أصحاب البلاغ أي تضارب في المصالح المالية أو غيرها للإعلان عنه.

Acknowledgements

تم دعم دراساتنا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82171603) ، ومؤسسة لجنة الصحة البلدية في شنغهاي (202140341) ، ولجنة العلوم والتكنولوجيا في بلدية شنغهاي (23JC1403803) ، وبرنامج تعزيز الابتكار التابع ل NHC و Shanghai Key Labs ، SIBPT (RC2023-02).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
17-β-estradiolSIGMA3301Most potent mammalian estrogenic hormone
BD FalconBD353001Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety CabinetESCOclass figure-materials-487BSCAseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 IncubatorThermo8000DHEmbryo culture
Culture plateCorning3506Cell culture
DMEM/F12Gibco1133032DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine SerumGibco10099141Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
GelatinSIGMAG9391Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCGNanjing AibeiM2520Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase SIGMAV900833Reagent grade, powder 
KSOMMerckMR-020P-D(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamineGibco25030081L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2MerckMR-015-DEmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil SIGMAM8410Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquidGibco1514012210,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSGNanjing AibeiM2620Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
ProgesteroneSIGMA5341Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvateGibco11360070Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
StereomicroscopeOlympusSZX7Embryo retrieval and observation of embryo development

References

  1. Hannan, N. J., Paiva, P., Dimitriadis, E., Salamonsen, L. A. Models for study of human embryo implantation: choice of cell lines. Biol Reprod. 82 (2), 235-245 (2010).
  2. Li, H. Y., et al.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

17

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved