A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف البروتوكول الحالي استخدام تقنية الترميز الشريطي للحمض النووي لمصادقة المواد الطبية النباتية ، والنبات الطبي Angelica sinensis (Oliv.) تم تحديد Diels كمثال.

Abstract

تعتبر النباتات الطبية موارد قيمة على مستوى العالم وتستخدم في جميع أنحاء العالم للحفاظ على الصحة وعلاج الأمراض. ومع ذلك ، فإن وجود الغش يعيق تطورها. يسهل الترميز الشريطي للحمض النووي ، وهو تقنية لتحديد الأنواع من خلال مناطق الحمض النووي القياسية ، التعرف الفوري والدقيق على النباتات الطبية التقليدية. تستلزم عملية الترميز الشريطي للحمض النووي ست خطوات أساسية: 1) معالجة النباتات الطبية ، 2) استخراج الحمض النووي الكلي عالي الجودة من النباتات الطبية باستخدام طريقة عمود الطرد المركزي ، 3) تضخيم فاصل الحمض النووي الداخلي المنسوخ لمنطقة الحمض النووي المستهدفة 2 (ITS2) باستخدام بادئات عالمية للنباتات وإجراء تسلسل سانجر ، 4) الربط والمحاذاة للحصول على التسلسل المستهدف ، 5) مطابقة تسلسل الباركود مع مكتبة الباركود لتحديد الهوية ، 6) محاذاة التسلسل ، ومقارنة التباين غير المحدد وبين الأنواع ، وبناء شجرة الانضمام إلى الجيران النشوء والتطور. كما هو موضح في النتائج ، يمكن للبرايمر العالمي تضخيم المنطقة المستهدفة. توضح أداة البحث عن المحاذاة المحلية الأساسية (BLAST) أن النسبة المئوية المحددة كانت 100٪، وتوضح الشجرة المنضمة إلى الجار أن تسلسلات الربط تم تجميعها مع A. sinensis OR879715.1 clade، وقيمة دعم الكليد هي 100. يوفر هذا البروتوكول مرجعا لتطبيق تقنية الترميز الشريطي للحمض النووي كطريقة فعالة لتحديد النباتات الطبية والمواد المغلفة.

Introduction

للنباتات الطبية مجموعة واسعة من التأثيرات الدوائية وهي مواد مهمة لعلاج الأمراض والوقاية منها. طلب السوق على النباتات الطبية في الأدوية العشبية والمنتجات الصيدلانية ضخم ولا يزال في ازدياد. مع تزايد سوق النباتات الطبية ، أعاقت مشكلة الغش نمو النباتات الطبية. حاليا ، يعاني غش النباتات الطبية من هذه الأسباب: 1) التشكل المماثل للنباتات الطبية يجعل من الصعب التعرف عليها واستخدامها بشكل صحيح1،2،3،4،5 ، 2) أدى الطلب المتزايد على النباتات الطبية إلى عدم كفاية العرض في السوق

Protocol

1. تحضير العينة

  1. استخدمت الدراسة الحالية A . sinensis البالغ من العمر عامين مع درجة حرارة منخفضة وأشعة الشمس الطويلة على ارتفاع 2800 متر من مقاطعة مين بمقاطعة قانسو كمواد تجريبية. تم اختيار ثلاثة نباتات تم اختيار أكثر من ثلاثة جذور منها للتجريب. اشطف الجذور أولا بالماء المعقم ثم نظفها باستخدام بخاخ الكحول أو مسحات الكحول لمنع التلوث الذي قد يؤثر على دقة النتائج التجريبية. قطع الجذور إلى قطع أصغر من 5 مم باستخدام مشرط معقم وتخلط لمزيد من التحليل. (الشكل 2).
    ملاحظة: بدلا من ذلك ، ضع الجذور في النيتروجين السائل حتى تنضج ، مما يسهل كسرها اعتمادا على شكل النباتات الطبية وص....

النتائج

عينة من جودة الحمض النووي

كان نطاق نسب امتصاص OD260 / OD280 1.80-1.84. كانت كمية الحمض النووي المقاسة بواسطة مقياس الطيف الضوئي لكل عينة أكبر من 100 نانوغرام / ميكرولتر (الجدول 3) ، مما يشير إلى جودة جيدة لاستخراج الحمض النووي للعينة. يشير هذا إلى أن ا?.......

Discussion

تقنية التحديد الجزيئي أسهل في التعلم والإتقان من طرق تحديد الهوية التقليدية. يتغلب على قيود تحديد الأعشاب الطبية التقليدية ، حيث لا يتأثر بمرحلة نمو النبات ولا يعتمد على الحكم الذاتي أو تراكم الخبرات المتخصصة35. يتم الخلط بين الأنواع الأخرى و A. sinensis بسب.......

Disclosures

ويعلن المؤلفون أن البحث أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب محتمل في المصالح.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من خلال تقديم مشروع دعم تمويل بدء البحث العلمي للشخص الموهوب لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (030040015).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
CTAB Rapid Plant Genomic DNA Extraction KitShanghai Huiling Biotechnology Co.NG411MSuitable for rapid extraction of high quality genomic DNA from different tissues of a wide range of plants
DL5000 DNA MarkerNanjing vazyme Bio-technology Co.MD102-02Ready-to-use product, take an appropriate amount of this product directly for electrophoresis when running the gel.
ElectrophoresisBeijing Liuyi Biotechnology Co.DYY-6CAdopt touch screen design, can display set voltage, set current at the same time, parallel output
Ethylenediaminetetraacetic acidBeijingpsaitongBiotechnologyCo.,LtdE70015-100GNuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Goldview Nucleic Acid Gel Stain(10,000×)Yisheng Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd10201ES03When using agarose gel electrophoresis to detect DNA, it binds to DNA and produces a strong fluorescent signal.
High-Speed Tabletop CentrifugeChangsha High-tech Industrial Development Zone Xiangyi Centrifuge Instrument Co.H1650For fast and efficient separation of samples, this compact and lightweight centrifuge offers reliable safety
High-Throughput Tissue GrinderShanghai Jingxin Industrial Development Co.Tiss-48A high-frequency vibration instrument for grinding samples
http://www.gpgenome.com/Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences-HerbGenomics database includes genome sequences, gene sets, organelle genomes, low coverage genome data and DNA barcode sequences.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/U.S. National Library of Medicine-The National Center for Biotechnology Information advances science and health by providing access to biomedical and genomic information.
Kylin-BellHaimen Qilinbel Instrument Manufacturing Co.VORTEX-5Rapid mixing in the form of a high-speed vortex, mixing speed, uniformity, thoroughness
LifeTouchHangzhou BORI Technology Co.TC-96/G/H(b)BAdoption of advanced thermoelectric refrigeration technology and newly created TAS technology to enhance its overall performance
Multi-functional Gel Image Analysis SystemSouthwest Operation Center of Shanghai Tianneng Life Science Co.Tanon-Mini Space 2000Performs rapid gene amplification experiments with a gradient function for mapping amplification conditions and a gradient temperature range of up to 30°C
NaClBeijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd.S8210-100Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Nanodrop OneGenes Ltd.ND ONEQuantify DNA, RNA and protein samples in seconds with just 1-2 µL of sample
Polyvinyl pyrrolidoneShanghai yuanye Bio-Technology Co., LtdS30268-500gNuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Snowflake Ice MakerShanghai Zhixin Experimental Instrument Technology Co.ZX-60XAdopting rotary extrusion ice making method, fast ice making speed and high efficiency of ice production
Stainless Steel Beads for Tissue HomogenizerBeyotime Biotechnology. F6623Equipment for grinding and mixing of tissue and other samples by vibration
Tris Acetate-EDTA bufferBeyotime Biotech IncST716TAE is a commonly used buffer for DNA electrophoresis, frequently employed in agarose gel electrophoresis.
Tris-HClBeijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd.T8230Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Water bath KettleShanghai Senxin Experimental Instrument Co.DK-8DPrecise thermostat and temperature regulation, accurate and reliable temperature control
β-mercaptoethanolShanghai Eon Chemical Technology Co.R054186-100ml  Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

ITS2 BLAST Clade

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved