A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف البروتوكول الحالي استخدام تقنية الترميز الشريطي للحمض النووي لمصادقة المواد الطبية النباتية ، والنبات الطبي Angelica sinensis (Oliv.) تم تحديد Diels كمثال.
تعتبر النباتات الطبية موارد قيمة على مستوى العالم وتستخدم في جميع أنحاء العالم للحفاظ على الصحة وعلاج الأمراض. ومع ذلك ، فإن وجود الغش يعيق تطورها. يسهل الترميز الشريطي للحمض النووي ، وهو تقنية لتحديد الأنواع من خلال مناطق الحمض النووي القياسية ، التعرف الفوري والدقيق على النباتات الطبية التقليدية. تستلزم عملية الترميز الشريطي للحمض النووي ست خطوات أساسية: 1) معالجة النباتات الطبية ، 2) استخراج الحمض النووي الكلي عالي الجودة من النباتات الطبية باستخدام طريقة عمود الطرد المركزي ، 3) تضخيم فاصل الحمض النووي الداخلي المنسوخ لمنطقة الحمض النووي المستهدفة 2 (ITS2) باستخدام بادئات عالمية للنباتات وإجراء تسلسل سانجر ، 4) الربط والمحاذاة للحصول على التسلسل المستهدف ، 5) مطابقة تسلسل الباركود مع مكتبة الباركود لتحديد الهوية ، 6) محاذاة التسلسل ، ومقارنة التباين غير المحدد وبين الأنواع ، وبناء شجرة الانضمام إلى الجيران النشوء والتطور. كما هو موضح في النتائج ، يمكن للبرايمر العالمي تضخيم المنطقة المستهدفة. توضح أداة البحث عن المحاذاة المحلية الأساسية (BLAST) أن النسبة المئوية المحددة كانت 100٪، وتوضح الشجرة المنضمة إلى الجار أن تسلسلات الربط تم تجميعها مع A. sinensis OR879715.1 clade، وقيمة دعم الكليد هي 100. يوفر هذا البروتوكول مرجعا لتطبيق تقنية الترميز الشريطي للحمض النووي كطريقة فعالة لتحديد النباتات الطبية والمواد المغلفة.
للنباتات الطبية مجموعة واسعة من التأثيرات الدوائية وهي مواد مهمة لعلاج الأمراض والوقاية منها. طلب السوق على النباتات الطبية في الأدوية العشبية والمنتجات الصيدلانية ضخم ولا يزال في ازدياد. مع تزايد سوق النباتات الطبية ، أعاقت مشكلة الغش نمو النباتات الطبية. حاليا ، يعاني غش النباتات الطبية من هذه الأسباب: 1) التشكل المماثل للنباتات الطبية يجعل من الصعب التعرف عليها واستخدامها بشكل صحيح1،2،3،4،5 ، 2) أدى الطلب المتزايد على النباتات الطبية إلى عدم كفاية العرض في السوق
1. تحضير العينة
عينة من جودة الحمض النووي
كان نطاق نسب امتصاص OD260 / OD280 1.80-1.84. كانت كمية الحمض النووي المقاسة بواسطة مقياس الطيف الضوئي لكل عينة أكبر من 100 نانوغرام / ميكرولتر (الجدول 3) ، مما يشير إلى جودة جيدة لاستخراج الحمض النووي للعينة. يشير هذا إلى أن ا?.......
تقنية التحديد الجزيئي أسهل في التعلم والإتقان من طرق تحديد الهوية التقليدية. يتغلب على قيود تحديد الأعشاب الطبية التقليدية ، حيث لا يتأثر بمرحلة نمو النبات ولا يعتمد على الحكم الذاتي أو تراكم الخبرات المتخصصة35. يتم الخلط بين الأنواع الأخرى و A. sinensis بسب.......
ويعلن المؤلفون أن البحث أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب محتمل في المصالح.
تم دعم هذا العمل من خلال تقديم مشروع دعم تمويل بدء البحث العلمي للشخص الموهوب لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (030040015).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
CTAB Rapid Plant Genomic DNA Extraction Kit | Shanghai Huiling Biotechnology Co. | NG411M | Suitable for rapid extraction of high quality genomic DNA from different tissues of a wide range of plants |
DL5000 DNA Marker | Nanjing vazyme Bio-technology Co. | MD102-02 | Ready-to-use product, take an appropriate amount of this product directly for electrophoresis when running the gel. |
Electrophoresis | Beijing Liuyi Biotechnology Co. | DYY-6C | Adopt touch screen design, can display set voltage, set current at the same time, parallel output |
Ethylenediaminetetraacetic acid | BeijingpsaitongBiotechnologyCo.,Ltd | E70015-100G | Nuclear Isolation Buffer formulation reagents. |
Goldview Nucleic Acid Gel Stain(10,000×) | Yisheng Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd | 10201ES03 | When using agarose gel electrophoresis to detect DNA, it binds to DNA and produces a strong fluorescent signal. |
High-Speed Tabletop Centrifuge | Changsha High-tech Industrial Development Zone Xiangyi Centrifuge Instrument Co. | H1650 | For fast and efficient separation of samples, this compact and lightweight centrifuge offers reliable safety |
High-Throughput Tissue Grinder | Shanghai Jingxin Industrial Development Co. | Tiss-48 | A high-frequency vibration instrument for grinding samples |
http://www.gpgenome.com/ | Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences | - | HerbGenomics database includes genome sequences, gene sets, organelle genomes, low coverage genome data and DNA barcode sequences. |
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ | U.S. National Library of Medicine | - | The National Center for Biotechnology Information advances science and health by providing access to biomedical and genomic information. |
Kylin-Bell | Haimen Qilinbel Instrument Manufacturing Co. | VORTEX-5 | Rapid mixing in the form of a high-speed vortex, mixing speed, uniformity, thoroughness |
LifeTouch | Hangzhou BORI Technology Co. | TC-96/G/H(b)B | Adoption of advanced thermoelectric refrigeration technology and newly created TAS technology to enhance its overall performance |
Multi-functional Gel Image Analysis System | Southwest Operation Center of Shanghai Tianneng Life Science Co. | Tanon-Mini Space 2000 | Performs rapid gene amplification experiments with a gradient function for mapping amplification conditions and a gradient temperature range of up to 30°C |
NaCl | Beijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd. | S8210-100 | Nuclear Isolation Buffer formulation reagents. |
Nanodrop One | Genes Ltd. | ND ONE | Quantify DNA, RNA and protein samples in seconds with just 1-2 µL of sample |
Polyvinyl pyrrolidone | Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | S30268-500g | Nuclear Isolation Buffer formulation reagents. |
Snowflake Ice Maker | Shanghai Zhixin Experimental Instrument Technology Co. | ZX-60X | Adopting rotary extrusion ice making method, fast ice making speed and high efficiency of ice production |
Stainless Steel Beads for Tissue Homogenizer | Beyotime Biotechnology. | F6623 | Equipment for grinding and mixing of tissue and other samples by vibration |
Tris Acetate-EDTA buffer | Beyotime Biotech Inc | ST716 | TAE is a commonly used buffer for DNA electrophoresis, frequently employed in agarose gel electrophoresis. |
Tris-HCl | Beijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd. | T8230 | Nuclear Isolation Buffer formulation reagents. |
Water bath Kettle | Shanghai Senxin Experimental Instrument Co. | DK-8D | Precise thermostat and temperature regulation, accurate and reliable temperature control |
β-mercaptoethanol | Shanghai Eon Chemical Technology Co. | R054186-100ml | Nuclear Isolation Buffer formulation reagents. |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved