JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف البروتوكول الحالي طريقة للإعطاء داخل الأنف لمجاميع α-synuclein. توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة حول انتشار α سينوكلين من الغشاء المخاطي الشمي إلى البصلة الشمية في مرض باركنسون.

Abstract

مرض باركنسون (PD) هو اضطراب تنكسي عصبي يتميز بوجود أجسام ليوي ، وهي عبارة عن مجاميع من α-سينوكلين (α-Syn). في الآونة الأخيرة ، تم اقتراح تطور المرض وتطوره من خلال الانتشار الشبيه بالبريون لمجاميع α-Syn من البصلة الشمية (OB) أو النواة الظهرية للعصب المبهم. على الرغم من أن أصل مجاميع α-Syn في OB لا يزال غير واضح ، فقد تم اقتراح انتشارها من الغشاء المخاطي الشمي مؤخرا. لقد أظهرنا سابقا أن الإعطاء داخل الأنف لمجاميع α-Syn في نموذج الفأر تسبب في علم أمراض α-Syn في OB للفئران. في هذه الدراسة ، نقدم طريقة للإعطاء داخل الأنف لمجاميع α-Syn التي تسببت في علم أمراض α-Syn في OB للفئران. تعد الإدارة داخل الأنف لمجاميع α-Syn طريقة بسيطة للغاية ومباشرة ، ونعتقد أنها ستكون أداة مفيدة في البحث لتوضيح أصل علم أمراض α-Syn في OB ومسار انتشار α-Syn من خلال نظام حاسة الشم.

Introduction

مرض باركنسون (PD) ، الذي يتميز بأعراض حركية مثل بطء الحركة ، والرعشة أثناء الراحة ، وتصلب العضلات ، هو ثاني أكثر الاضطرابات التنكسية العصبيةشيوعا 1. يظهر مرض باركنسون أيضا أعراضا غير حركية ، بما في ذلك ضعف حاسة الشم ، والضعف الإدراكي ، والاكتئاب ، والهلوسة ، والإمساك ، وانخفاض ضغط الدم الانتصابي. السمات المميزة المرضية هي موت الخلايا الدوبامينية في المادة السوداء ووجود مجاميع α-سينوكلين (α-Syn) ، تسمى أجسام ليوي2.

وتجدر الإشارة إلى أن α-Syn هو بروتين مكون من 140 حمض أميني موجود على شكل مونومر قابل للذوبان (أو رباعي) في ظل الظروف العادية. ومع ذلك ، في ظل ظروف غير طبيعية ، يتم تحويل المونومر القابل للذوبان إلى مجاميع غير قابلة للذوبان عالية الوزن الجزيئي ، بما في ذلك القلة والألياف. يقال إن انتقال α-Syn إلى أوليغومرات وألياف يشارك في السمية الخلوية3.

اقترحت الدراسات الحديثة الانتشار الشبيه بالبريون لمجاميع α-Syn بين الخلايا العصبية. بناء على العديد من فحوصات ما بعد الوفاة ، اقترح Braak et al. في عام 2003 الفرضية القائلة بأن أمراض جسم ليوي تنتشر تدريجيا في الدماغ بطريقة نمطية إلى حد ما (فرضية براك)4،5. في عام 2008 ، كشف فحص ما بعد الوفاة للمرضى الذين يعانون من مرض باركنسون الذين خضعوا لعمليات زرع الدماغ المتوسط للجنين عن أجسام ليوي في الخلايا العصبية الدوبامين المشتقة من أنسجة الجنين6،7. اقترحت هذه الدراسات أن مجاميع α-Syn يمكن أن تنتشر من الدماغ المصاب إلى الطعوم ، مما يدعم فرضية براك.

بعد هذه الملاحظات ، أعادت التجارب التي تنطوي على ثقافات الخلايا العصبية الأولية والحقن داخل المخ لمجاميع α-Syn في الفئران إنتاج انتشار مجاميع شبيهة بجسم ليوي ، مما يوفر مزيدا من الأدلة على انتشار α-Syn بطريقة تشبه البريون8،9.

براك وآخرون أظهر أن علم أمراض جسم ليوي في مرض باركنسون يبدأ في البصلة الشمية (OB) و / أو النواة الظهرية للعصب المبهم (dmX)4. بناء على فرضية براك ، أبلغت العديد من الدراسات عن إعطاء مجاميع α-Syn أو مستخلصات أجسام ليوي من أدمغة باركنسون في OB والجهاز الهضمي لحيوانات التجارب10،11،12. في عام 2018 ، أظهرت دراسة أن إعطاء مجاميع α-Syn في OB للفئران البرية أدى إلى انتشار أمراض α-Syn على طول المسار الشمي ، مما أدى إلى خلل في حاسة الشم13. لقد قمنا سابقا بتلقيح مجاميع α-Syn في OB للفئران المعدلة وراثيا α-Syn ووجدنا أن هذا أدى إلى ضمور الحصين وضعف الذاكرة14.

في عام 2022 ، قمنا بتلقيح مجاميع α-Syn في OB من marmosets ، وهي رئيسيات صغيرة غير بشرية. أدى ذلك إلى انتشار علم الأمراض α-Syn على طول المسار الشمي ، وضمور OB ، ونقص التمثيل الغذائي للجلوكوز الدماغيعلى نطاق واسع 10.

ومع ذلك ، إذا حدث انتشار مجاميع α-Syn من OB ، فإن سؤالا مهما: ما هي الآلية التي تظهر بها مجاميع α-Syn في البداية؟ أبلغ سايتو وآخرون سابقا عن وجود جثث ليوي في الغشاء المخاطي للأنف15. تم الكشف عن وجود مجاميع α-Syn في الغشاء المخاطي للأنف للمرضى الذين يعانون من مرض باركنسون وضمور الجهاز المتعدد (MSA) باستخدام تحليل التحويل الناجم عن الارتعاش في الوقت الفعلي (RT-QUIC)16. والجدير بالذكر أن تحليل عينات الغشاء المخاطي للأنف من المرضى الذين يعانون من اضطراب سلوك النوم في حركة العين السريعة (RBD) ، والذي يعتبر مرحلة بادرية من مرض باركنسون ، كشف عن زيادة في مستويات α-Syn17. اقترحت هذه الدراسة أن علم أمراض α-Syn قد يكون موجودا في الغشاء المخاطي للأنف حتى من المرحلة البادرية من مرض باركنسون.

في حين أن هذه النتائج تشير إلى مسار محتمل من الغشاء المخاطي للأنف إلى OB ، إلا أن هناك أدلة تجريبية محدودة تدعم هذا السيناريو. لمعالجة هذه الفجوة ، قمنا بإعطاء مجاميع α-Syn في تجويف أنف الفئران وحققنا في انتشار أمراض α-Syn من الغشاء المخاطي للأنف إلى OB. أظهر نهجنا التجريبي أن إعطاء جرعة واحدة داخل الأنف من مجاميع α-Syn في الفئران البرية يسببت في علم أمراض α-Syn في OB ، مما يوفر دليلا تجريبيا على مسار الانتشار من الغشاء المخاطي للأنف إلى OB.

Protocol

تم استخدام الفئران الذكور C57BL / 6J بعمر شهرين لهذه الدراسة. تم تنفيذ جميع الإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية الوطنية. منحت لجنة أبحاث بجامعة كيوتو الموافقة الأخلاقية والإذن لهذه الدراسة (MedKyo 23،544).

1. إعطاء ألياف α-Syn مسبقة التشكيل داخل الأنف

  1. تحضير محلول ألياف الماوس α-Syn في PBS (4 مجم / مل) وفقا للطرق المبلغ عنهاسابقا 11. لف الأنبوب بغشاء شفاف لمنع التلوث.
  2. Sonicate 200 ميكرولتر من محلول الألياف α-Syn لتوليد ألياف مسبقة التشكيل α-Syn (PFFs) باستخدام سونيكاتير من نوع حمام مائي (جدول المواد). املأ الحمام بالموجات فوق الصوتية بالماء وأضف مكعبات الثلج لتبرد حتى 4 درجات مئوية للصوتنة. ألياف صوتية لما مجموعه 5 دقائق مع كل دورة تتكون من 30 ثانية من الصوتنة متبوعة بفاصل 30 ثانية (ما مجموعه خمس دورات).
    ملاحظة: استخدم معدات الحماية الشخصية مثل القفازات التي تستخدم لمرة واحدة والقناع ونظارات السلامة لمنع التعرض ل α-Syn.
  3. قم بإعداد ماصة P10 (جدول المواد) برأس ماصة سعة 10 ميكرولتر. تخدير كل فأر باستخدام مزيج من ميديتوميدين هيدروكلوريد وميدازولام وبوتورفانول (MMB) عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP). احتوى عامل التخدير المركب MMB على ميدازولام (0.3 مجم / كغ) وميديتوميدين (4 مجم / كغ) وطرطرات بوتورفانول (5 مجم / كغ). يستخدم 0.005 مل / جم عن طريق حقن المثقال الاصطناعي عند خلط الميدازولام (1 مجم / مل) 0.3 مل ، ميديتوميدين (5 مجم / مل) 0.8 مل ، طرطرات بوتورفانول (5 مجم / مل) 1 مل ، والمحلول الملحي 2.9 مل.
  4. انتظر لمدة 10 دقائق للتأكد من أن الفئران قد تم تخديرها تماما. يمكن تأكيد التخدير المناسب إذا كان الفأر في حالة استلقاء جانبي ولا يمكنه تصحيح نفسه. بمجرد التخدير ، ضعي مرهم العين باستخدام قضيب قطني معقم لمنع جفاف العينين.
    ملاحظة: بدون تخدير ، عند إعطاء جرعات الأنف ، يصعب إبقاء الفئران ضعيفة وإعطاء محلول α-Syn بشكل صحيح أثناء عطس الفئران. لهذه الأسباب ، كان التخدير ضروريا.
  5. ضع الفأر المخدر في وضع الاستلقاء. ضع منشفة ورقية أو مادة مماثلة تحت الجسم ، مما يضمن إمالة الرأس لأسفل قليلا (الشكل 1 أ ، ب). يمنع هذا الوضع محلول α-Syn المعطى من التدفق بسرعة إلى الرئتين أو المريء ، مما يسهل الاحتفاظ به في تجويف الأنف. تظهر الخياشيم في الشكل 1 ج.
  6. اسحب 1 ميكرولتر من محلول α-Syn (4 ملغ/مل) في ماصة P10 وضع طرف الماصة بالقرب من أنف الماوس. قم بتشكيل قطرة مستديرة ببطء واحتفظ بها في نهاية طرف الماصة (الشكل 1D ، السهم الأحمر). يتم إجراء الإعطاء داخل الأنف لفتحة الأنف أحادية الجانب ، واستخدام الجانب المقابل كجانب تحكم.
  7. اجعل القطرة قريبة من جانب واحد من أنف الفأر واسمح للفأر باستنشاقه بشكل طبيعي. راقب الاستنشاق وانتظر لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة (الشكل 1E).
  8. كرر الخطوات 1.6.-1.7. حتى يتم إعطاء حجم إجمالي قدره 20 ميكرولتر من محلول α-Syn. بعد كل الإجراءات ، تخلص من القفازات وامسح مقعدا بمنظفات تجارية إذا كان السطح ملوثا ب α-Syn
    ملاحظة: يجب إجراء الإجراء بأكمله في خزانة أمان لمنع استنشاق ألياف α-Syn من قبل الموظفين الذين يقومون بالإجراء. أظهر تقرير سابق أن حجم 25 ميكرولتر هو الأكثر كفاءة لإعطاء الأدوية من الأنف إلى الدماغ18. نستخدم حجما مشابها قدره 20 ميكرولتر في هذه الدراسة. نستخدم أيضا نفس تركيز PFFs مثل ذلك للحقن في OB في التقرير السابق10 ، وهو قريب من 400 ميكرومتر (5.6 مجم / مل) من PFFs19.
  9. يدير أتيباميزول (3 ملغ/كغ؛ جدول المواد) عن طريق حقن IPP لعكس ميديتوميدين وتسهيل الشفاء. يستخدم 0.005 مل / جم عن طريق حقن IPS عند خلط أتيبامزول (5 مجم / مل) 0.6 مل ومحلول ملحي 4.4 مل.
    ملاحظة: توفير التسكين لأنه ليس من المفهوم تماما مدى الإجهاد الذي سيكون عليه إعطاء α-Syn داخل الأنف.
  10. لا تترك الفأر دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. بعد الشفاء التام ، أعد الماوس إلى القفص.

2. إعداد العينة

  1. التضحية بالفئران المعالجة في 1 و 3 و 6 و 12 شهرا بعد إعطاء ألياف α-Syn مسبقة التشكيل داخل الأنف.
    1. ضع الفئران في صندوق الحث ، وقم بإعطاء سيفوفلوران (>6.5٪) واستمر حتى تحدث السكتة التنفسية لمدة > 60 ثانية. قم بإزالة الفئران وإجراء عملية استئصال سريعة عن طريق شق الأذين الأيمن لضمان القتل الرحيم.
  2. أدخل إبرة 25G (جدول المواد) في قمة القلب. قم ببث الماوس عند 4 مل / دقيقة مع 15 مل من PBS ثم 15 مل من 4٪ PFA في PBS.
  3. اقطع الرأس بالمقص وقم بعمل شق 2 سم في فروة الرأس بمشرط. شق عظم الجمجمة بالمقص في الجانب الجانبي من الأسفل إلى الأنف (الشكل 2 أ ، ب). للحصول على OBs ، قم بإزالة عظم الجمجمة تماما على OBs (الشكل 2 ب ، الدائرة الصفراء).
  4. اقلب الرأس ، واقطع أعصاب الدماغ ، ثم قم بإزالة الدماغ بعناية باستخدام ملقط (الشكل 2 ج ، د). احصل على الدماغ مع OBs السليمة (الشكل 2 ه). للحصول على OBs السليمة ، قم بقطع الأعصاب الشمية بعناية باستخدام ملقط حيث تلتصق OBs بعظم الجمجمة (الشكل 2D ، الدائرة الصفراء).
  5. ضع عينات الدماغ في 4٪ PFA في PBS طوال الليل عند 4 درجات مئوية. لا تترك عينات الدماغ لأكثر من 24 ساعة.
    ملاحظة: سيؤدي التثبيت المفرط إلى تقليل التلوين الكيميائي المناعي. إذا كان التخزين طويل الأجل مطلوبا ، فاحتفظ بعينات الدماغ في 70٪ من الإيثانول أو PBS الذي يحتوي على 0.1٪ أزيد الصوديوم للحفاظ على العقم.

3. تلطيخ كيميائي مناعي ل OB

  1. قم ببارافين العينات باستخدام معالج الأنسجة الأوتوماتيكي (جدول المواد) كما هو موضح أدناه.
    1. اغمر في 70٪ إيثانول لمدة 120 دقيقة ، متبوعا بالغمر في 100٪ إيثانول لمدة 8 مرات لمدة 60 دقيقة. ثم اغمر في 100٪ زيلين لمدة 3 مرات لمدة 120 دقيقة.
    2. اغمر في البارافين عند 60 درجة مئوية لمدة 120 دقيقة متبوعا بالانغماس في البارافين عند 60 درجة مئوية لمدة 240 دقيقة.
  2. قم بتضمين العينات في البارافين كما هو موضح أدناه.
    1. قم بتضمين العينات في البارافين عند 60 درجة مئوية مع مركز تضمين الأنسجة المعياري (جدول المواد). قم بتبريدهم على الجليد.
  3. قطع العينات إلى أقسام بسمك 8 ميكرومتر باستخدام ميكروتوم (جدول المواد)18.
  4. قم بإجراء إزالة البارافين كما هو موضح أدناه.
    1. اغمر في 100٪ زيلين لمدة 2x لمدة 5 دقائق ، متبوعا بغمر في 100٪ من الإيثانول لمدة 2x لمدة 3 دقائق.
    2. اغمر في 70٪ إيثانول لمدة 3 دقائق. يغسل في PBS لمدة 3 دقائق.
  5. إجراء استرجاع المستضد كما هو موضح أدناه.
    1. اغمر في حمض الفورميك 100٪ لمدة 15 دقيقة. اشطفه في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) لمدة دقيقتين.
    2. الأوتوكلاف عند 120 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. دعها تبرد بشكل طبيعي.
  6. اغمر في 1٪ بيروكسيد الهيدروجين في الميثانول لمدة 10 دقائق. يغسل في PBS لمدة 5 دقائق.
  7. أضف 500 ميكرولتر من الحليب الخالي من الدسم بنسبة 5٪ في PBS على الشرائح واحتضنها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  8. ضع 500 ميكرولتر من الجسم المضاد α-Syn المضاد للفسفرة (p-α-Syn ، 1/10000) في PBS على الشرائح واحتضنها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. اغسل 2x باستخدام PBS لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  9. احتضان مع بوليمر بيروكسيداز مناعي عالمي ، مضاد للأرانب (جدول المواد) لمدة 1 ساعة عند 25 درجة مئوية. اغسل 2x باستخدام PBS لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  10. قم بالتطوير باستخدام مجموعة تلطيخ 3,3 'diaminobenzidine (DAB) (جدول المواد) لمدة 5 دقائق وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  11. اغمر في محلول الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة (جدول المواد). قم بإزالة اللون في الماء الجاري لمدة 10 دقائق.
  12. قم بإجراء التركيب كما هو موضح أدناه.
    1. اغمر في 70٪ إيثانول لمدة 5 دقائق. اغمر في 100٪ من الإيثانول لمدة 2x لمدة 5 دقائق.
    2. اغمر في 100٪ زيلين لمدة 2x لمدة 5 دقائق. قم بالتركيب باستخدام وسيط تضمين (جدول المواد). ضع 100 ميكرولتر من وسط التضمين على الشرائح وقم بتغطيتها بغطاء زجاجي.
  13. احصل على الصور باستخدام مجهر متعدد الإمكانات بتكبير 20x و 40x (جدول المواد).

النتائج

يوضح الشكل 3 عدة أمثلة على مجاميع α-Syn في OB. في هذه الدراسة ، قمنا بإعطاء مجاميع α-Syn في فتحة الأنف أحادية الجانب. يتم فصل تجويف الأنف عن طريق الحاجز الأنفي ، ويقوم كل OB بعرض الخلايا العصبية الحسية الشمية على كل تجويف أنفي على حدة. لذلك ، يمكن استخدام OB على الج...

Discussion

في دراسة سابقة ، أدى إعطاء مجاميع α-Syn في تجويف الأنف لقرود المكاك إلى موت خلايا الدوبامين وترسب الحديد في المادة السوداء ، على الرغم من عدم ملاحظة مجاميع α-Syn21. تم الإبلاغ عن الإدارة اليومية لمجاميع A53T البشرية α-Syn في تجويف الأنف لفئران محفز البريون α-Syn المعد?...

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

تم دعم جميع التجارب من قبل Rie Hikawa. نتقدم بالشكر إلى ياسوكو ماتسوزاوا على الأعمال الورقية. تم دعم هذه الدراسة من قبل JSPS KAKENHI (M.S., NO. JP19K23779 و JP20K16493 و JP20H00663).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
All-in-One Fluorescence Microscope BZ-X710KEYENCEN/AAll-in-One microscope
Ampicillin Sodium SaltNacalai tesque02739-32
Bioruptor IISonicbioBR2006AWater bath type sonicator.
Butorphanol tartrateMeiji Seika PharmaWAK-52850
Cellulose tubeMISUMIUC20-32-100
DeepWellMaximizerTAITECMBR-022UPShaker
DynaCompetent Cells Zip BL21(DE3)BioDynamics Laboratory Inc.DS255Competent cell
EntellanSigma-Aldrich107961Rapid mounting medium for microscopy
Graefe Extra Fine Forceps Curved SerratedFST11152-10 forceps
Hardened Fine ScissorsFST14090-09scissors
Histofine Simple stain mouse MAX-PO (R)Nichirei Bioscience414341Universal Immuno-peroxidase Polymer, anti-Rabbit
ImageJ ver 1.52pNANAhttps://imagej.net/
innova4200New Brunswick scientific9105085Incubator shaker
Isopropyl-β-D-thiogalactopyranosideNacalai tesque19742-94
LB broth, LennoxNacalai tesque20066-24
Leica EG 1150 HLeica14 0388 86 108Modular Tissue Embedding Center
Leica TP 1020Leica14 0422 85108Automatic Tissue Processor 
MedetomidineFuji Film135-17473
Microm HM325 Rotary MicrotomeThermo Scientific902100
MidazolamMaruishi Seiyaku4987-211-76210-0
New hematoxylin Type GMuto65-9197-38Hematoxylin solution
Normal winged needle for vein D type, 25GTERUMONN2332R25G needle
Optima TLX UltracentrifugeBeckman Couler8043-30-1197Ultracentrifuge
P10 pipetteGilsonFA10002P
ParaffinLeica39601095
paraformaldehydeNacalai tesque30525-89-4
Peroxidase Stain DAB KitNacalai tesque25985-50
Pirece BCA Protein Assay KitsThermo Scientific23225BCA assay
pRK172Addgene#134504Plasmid
Q-Sepharose Fast Flow. cytiva17051001Ion exchange resin

References

  1. Tysnes, O. B., Storstein, A. Epidemiology of Parkinson's disease. J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).
  2. Goedert, M. Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases. Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).
  3. Conway, K. A., et al. Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).
  4. Braak, H., et al. Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease. Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).
  5. Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen. J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).
  6. Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. Nat Med. 14 (5), 504-506 (2008).
  7. Li, J. Y., et al. Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation. Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).
  8. Luk, K. C., et al. Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338, 949-953 (2012).
  9. Desplats, P., et al. Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).
  10. Sawamura, M., et al. Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb. Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).
  11. Uemura, N., et al. Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve. Mol Neurodegener. 13 (1), 21 (2018).
  12. Rey, N. L., et al. Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease. J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).
  13. Rey, N. L., et al. Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term. Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).
  14. Uemura, N., et al. α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice. Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).
  15. Saito, Y., et al. Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders. Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).
  16. De Luca, C. M. G., et al. Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy. Transl Neurodegener. 8, 24 (2019).
  17. Stefani, A., et al. Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder. Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).
  18. Ucciferri, C. C., et al. Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis. J Vis Exp. (204), e65738 (2024).
  19. Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain. Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).
  20. Sawamura, M., et al. Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs. Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440 (2023).
  21. Guo, J. J., et al. Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis. Cell Death Dis. 12 (1), 81 (2021).
  22. Macdonald, J. A., et al. Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds. Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189 (2021).
  23. Abdelmotilib, H., et al. α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration. Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).
  24. Tarutani, A., et al. The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation. J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).
  25. Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. Animal model for prodromal Parkinson's disease. Int J Mol Sci. 21 (6), 1961 (2020).
  26. Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials. J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).
  27. Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces. Sci Rep. 8, 10788 (2018).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

213

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved