نموذج الفئران لإعادة تشكيل القلب الأيمن وعدم انتظام ضربات القلب باستخدام ربط الشريان الرئوي

Summary

يتميز قصور القلب الأيمن (RHF) بتمدد القلب الأيمن وتضخمه ، مما يؤدي إلى خلل في البطين والأذين. تصاحب الحالات القلبية الرئوية المرتبطة ب RHF زيادة خطر الإصابة بعدم انتظام ضربات القلب. توضح هذه المقالة نموذجا موحدا ل RHF الناجم عن ربط الشريان الرئوي المرتبط بعدم انتظام ضربات القلب البطيني والأذيني.

Abstract

يمكن أن تؤدي الحالات السريرية ، بما في ذلك مرض الانسداد الرئوي المزمن أو ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي (PAH) ، إلى زيادة ضغط البطين الأيمن المزمن وفشل القلب الأيمن التدريجي (RHF). يمكن التعرف على RHF عن طريق تضخم القلب الأيمن والتمدد المرتبط بوظيفة عضلة القلب غير الطبيعية التي تؤثر على RV والأذين الأيمن (RA). لقد أظهرنا مؤخرا أن RHF الشديد يصاحبه زيادة خطر الإصابة بالتهاب الأذين والتليف الأذيني والرجفان الأذيني (AF) ، وهو النوع الأكثر شيوعا من عدم انتظام ضربات القلب (CA). أظهرت الدراسات الحديثة أن التهاب RV و RA يلعب دورا مهما في عدم انتظام ضربات القلب في CA ، بما في ذلك AF. ومع ذلك ، فإن تأثير الالتهاب في تطور CA و AF في RHF غير موصوف بشكل سيئ.

النماذج التجريبية ل RHF مطلوبة لفهم العلاقة بين التهاب عضلة القلب الأيمن و CA بشكل أفضل. نموذج الفئران لارتفاع ضغط الدم الرئوي الناجم عن أحادي كروتالين (MCT) (PH) راسخ لإثارة RHF. ومع ذلك ، فإن MCT يؤدي إلى سمية رئوية شديدة والتهاب رئوي. ومن ثم ، فإن RHF الناجم عن MCT لا يساعد في التمييز بين ما إذا كان التهاب عضلة القلب اللاحق ينشأ من RHF في حد ذاته أو الإشارات الالتهابية المنتشرة التي تفرزها الرئة المصابة.

في هذه المقالة ، تم استخدام طريقة ميكانيكية تتضمن ربط جذع الشريان الرئوي (PAB) لإثارة عدم انتظام ضربات القلب في الجانب الأيمن. يتكون PAB من إجراء خياطة دائمة لجذع الشريان الرئوي لمدة 3 أسابيع. مثل هذا النهج يولد زيادة الضغط الأيمن. في D21 بعد PAB ، ينتج عن الخيط تضخم RV و RA. يصاحب RHF الناجم عن PAB أيضا قابلية لعدم انتظام ضربات القلب البطيني والأذيني ، بما في ذلك الرجفان الأذيني.

Introduction

يتميز قصور القلب الأيمن (RHF) بتضخم البطين الأيمن (RV) والأذيني (RA) وتمدد ، مما يؤدي إلى خلل في القلب في الجانب الأيمن استجابة للحمل الزائد المزمن لضغط RV بسبب انقباض الشرايين الرئوية (PA) ¹. وبالتالي ، فإن الظروف التي تثير تضييق السلطة الفلسطينية يمكن أن تكون مسؤولة عن زيادة خطر RHF^1،2،3،4. كشفت البيانات السريرية أن RHF هو السبب الرئيسي للدخول إلى المستشفى (56٪) لدى المرضى الذين يعانون من ارتفاع ضغط الدم PA (PAH) ². أظهرت الدراسات السريرية أنه بغض النظر عن سبب ارتفاع ضغط الدم الرئوي الخثاري (PH) والهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات ، غالبا ما يتأثر المرضى ب RHF ويكونون أكثر عرضة بنسبة 20٪ للإصابة بعدم انتظام ضربات القلب بما في ذلك عدم انتظام ضربات القلب فوق البطيني والرجفان الأذيني (AF) ^2،5،6.

لفهم العلاقة بين الهيدروكربوت الهيدروكربلور العطري (PAH) و RHF بشكل أفضل ، تم استخدام الدراسات التي أجريت على ، بما في ذلك نموذج جرعة واحدة من أحادي الكروتالين (MCT) ، لإثارة التهاب الرئة الحاد و RHF^7،8. لاحظنا مؤخرا أن RHF الناجم عن MCT كان مرتبطا بالتهاب التهاب المفاصل الروماتويدي و^{AF 9}. ومع ذلك ، نظرا لأهمية الالتهاب الرئوي الناجم عن MCT والسيتوكينات المنتشرة ، كان من الصعب وصف ما إذا كان التهاب التهاب المفاصل الروماتويدي الناجم عن MCT هو نتيجة ل RHF⁹ فقط. ومن ثم ، كان هناك حاجة إلى نموذج جديد لعدم انتظام ضربات القلب الناجم عن RHF لدراسة الحالة الالتهابية لالتهاب التهاب المفاصل الروماتويدي.

تم استخدام النموذج التجريبي لنطاقات جذع PA (PAB) في أنواع حيوانية مختلفة لتقليد أمراض PA الانسدادية ولدراسة إعادة تشكيل القلب المرضية المرتبطة بها التي تؤثر على الجانب الأيمن من القلب¹⁰. تم الإبلاغ عن PAB كطريقة فعالة للحث على خلل وظيفي صحيح في RV وفشله في دراسات مختلفة تحاكي الحمل الزائد RV^{10،11،12،13،14،15،16}. من الناحية الفنية ، PAB هو وضع خياطة دائمة على جذع PA ، مما يؤدي إلى انخفاض ميكانيكي لقطر جذع^{PA 10}. يولد PAB زيادة الضغط الزائد على RV¹⁰. أولا ، كتكيف تعويضي للزيادة المفاجئة في الحمل اللاحق ل RV ، يتم توسيع تجويف RV ، مما يؤدي إلى تضخم RV المزمن^10،13. يؤثر تمدد RV وتضخمه على الصمامات ثلاثية الشرف ، والتي تصبح متسربة¹³. بتعبير أدق ، فإن التمدد الواضح ل RV جنبا إلى جنب مع الحمل اللاحق العالي ل RV له تأثير في تمتد حلقة الصمام ثلاثي الشرف الموجودة بين RV و RA^13،17. بسبب الانسداد غير الكامل للصمام ، سيتم توجيه جزء من الدم المخرج من عربة سكن متنقلة أثناء الانقباض نحو تجويف RA¹⁷. يمكن ملاحظة تسرب الصمام ثلاثي الشرف من خلال تخطيط صدى القلب ويسمى قلس الصمام ثلاثي^{الشرف 17}. بعد ذلك ، يتلقى التهاب المفاصل الروماتويدي ارتفاع ضغط الدم بشكل غير لائق ، مما يساهم في زيادة تمدد التهاب المفاصل الروماتويدي وتضخم¹³. يصاحب إعادة تشكيل RV و RA المزمنة تفاعلات التهابية موضعية لعضلة القلب تؤدي إلى تليف RV و RA وفقدان الوظيفة^9،13. يتميز التليف القلبي بتطور مناطق الجهد المنخفض التي تكون أقل انقباضا وأكثر عرضة لإثارة دوائر حظر التوصيل وإعادة الدخول المشاركة في تطور عدم انتظام ضربات القلب ، بما في ذلك الرجفان البطيني و AF^18،19.

تكمن أصالة هذه الورقة في استخدام طريقة موحدة لإعادة تشكيل القلب الأيمن الناجم عن PAB لإثارة ودراسة تحريض عدم انتظام ضربات القلب في 3 أسابيع بعد PAB. المزايا الرئيسية لهذا النهج الجراحي هي: أ) التحكم المباشر في تقليل قطر جذع PA و ii) تجنب التهاب القلب للتركيز على التهاب عضلة القلب الناجم عن RHF لدراسة عدم انتظام ضربات القلب ، بما في ذلك AF.

يتضمن النهج الموصوف هنا إجراء جراحيا دقيقا لإنشاء PAB ، وتقييم زيادة الحمل اللاحق ل RV ، وتخطيط صدى القلب لمراقبة إعادة التشكيل الهيكلي والوظيفي لعضلة القلب الناجمة عن PAB ، ودراسة الفيزيولوجيا الكهربية لتقييم التعرض لعدم انتظام ضربات القلب ، بما في ذلك AF.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الموضحة أدناه من قبل لجنة الأخلاقيات في معهد مونتريال للقلب (أرقام البروتوكول: 2021-2938-2021-47-01 و 2024-3412-2024-48-01) واتبعت بدقة إرشادات المجلس الكندي لرعاية (CCAC). تم استخدام ذكور فئران الويستار (225-275 جم) التي تتراوح أعمارها بين 6-8 أسابيع في الإجراءات. تم إيواء جميع في مرفق رعاية التابع لمعهد مونتريال للقلب ، مع حرية الوصول إلى الماء والغذاء.

1. التحضير قبل الجراحة

1. تعقيم جميع الأدوات والمواد الجراحية قبل الجراحة باستخدام الأوتوكلاف من البخار المشبع عالي الضغط عند درجات حرارة تتراوح بين 121 درجة مئوية و 134 درجة مئوية تحت 15-30 رطل لكل بوصة مربعة لمدة 30-40 دقيقة متبوعة بدورة تجفيف مدتها 25 دقيقة.
2. تحضير جميع كميات الأدوية المطلوبة للجراحة. استخدم نهجا مسكنا متعدد الوسائط يتضمن بوبرينورفين (0.05 ملغم/كغ) وكيتوبروفين (5 ملغم/كغ) يحقن تحت الجلد قبل 30 دقيقة من الجراحة ويكرر بعد 6 ساعات (بوبرينورفين) و 24 ساعة بعد الجراحة (بوبرينورفين وكيتوبروفين). بالإضافة إلى ذلك ، قم بإجراء تسكين موضعي في موقع الشق (ليدوكائين 5 مجم / مل).
3. قم بإجراء تخطيط صدى القلب عبر الصدر قبل الجراحة (انظر الإجراء التفصيلي لتخطيط صدى القلب عبر الصدر في الخطوات 6.1-6.13) لتحديد قطر PA وتحديد إبرة القياس المناسبة التي سيتم استخدامها كرصاص لتوليد الانخفاض المتوقع بنسبة 60٪ من قطر PA أثناء PAB.
   ملاحظة: في هذه الورقة ، تم استخدام ذكور فئران ويستار التي يتراوح وزنها بين 225 و 275 جم ، وكان استخدام إبرة 19 جراما مناسبا لتوليد مثل هذا التخفيض بنسبة 60٪ من قطر PA.
4. قم بإعداد إبرة 19 جم (أو العيار المناسب كما هو محدد في الخطوة 1.3) سيتم استخدامها كرصاص (انظر أدناه: الخطوتين 4.18 و 4.19) للحصول على انقباض جذع PA الأمثل ، مما يؤدي إلى إعادة تشكيل شديدة لقلب الفئران. باستخدام ملقط ، ثني 19 جم إلى 90-110 درجة (الشكل 1 أ).
   ملاحظة: ثني 19 G يسهل أنا) الوضع بالقرب من جذع PA و ii) تطبيق الربط أثناء الإجراء. يتم استخدام 19 G كرصاص سيتم تثبيت الخيط حوله لتقليل قطر PA إلى 1.0 مم (تخفيض بنسبة 60٪ للفئران التي تزن 225-275 جم) ، مما يؤدي إلى زيادة ضغط RV المسؤولة عن إعادة تشكيل RV الشديدة في 3 أسابيع.

2. تحريض التخدير وإعداد

ملاحظة: تم إجراء التحليلات على ذكور فئران الويستار (225-275 جم) الذين تتراوح أعمارهم بين 6-8 أسابيع. استخدم وسادة تدفئة خلال جميع خطوات الإجراءات التالية للحفاظ على درجة حرارة جسم حوالي 37 درجة مئوية. ضع مسبارا مستقيميا لمراقبة درجة حرارة الجسم.

1. تخدير بالأيزوفلوران المستنشق باستمرار 3٪ و 100٪ أكسجين 2-3 لتر / دقيقة.
2. ضع جل ترطيب العين لحماية القرنية من الجفاف.
3. تحقق من مستوى التخدير باستخدام منعكس قرصة إصبع القدم.

3. التنبيب

ملاحظة: تم إجراء التنبيب كما هو موضح^{سابقا 20}.

1. انقل إلى محطة تنبيب مائلة في وضع ضعيف. أمسك الجرذ من القواطع العلوية باستخدام حلقة من الخيط للحفاظ على الجسم في وضع معلق عند 45 درجة للحصول على تصور أفضل للحلق.
2. قم بتوجيه مصدر ضوء مرن إلى سطح الرقبة لنقل الضوء عبر منطقة البلعوم المزمارية.
3. مد اللسان باستخدام قطعة قطن وثبته على الفك العلوي باستخدام ملعقة وزن منحنية كخافض للسان.
4. تصور القصبة الهوائية والأحبال الصوتية.
5. استخدم قسطرة وعائية 16 جم لإجراء التنبيب. استخدم القسطرة كأنبوب للقصبة الهوائية ، وقم بتخفيف الإبرة ذات الطرف المشطوف لاستخدامها كمدخل.
6. قم بدفع الأنبوب الرغامي (قسطرة وعائية 16 جم) المثبت على المدخل (إبرة طرف مشطوف) إلى القصبة الهوائية ، وبمجرد وضعه ، قم بإزالة المدخل (الشكل 1 ب).
7. تأكد من الموضع الصحيح للأنبوب من خلال مراقبة نمط التنفس الطبيعي (حوالي 80 نفسا / دقيقة للفئران التي تزن 225 جراما وحوالي 70 نفسا / دقيقة للفئران التي تزن 275 جم) ووجود رذاذ على سطح الملعقة المعدنية (أو المرآة الصغيرة) عند وضعها على شفة محور القنية.
8. بمجرد تنبيبه بشكل صحيح ، انقل بسرعة إلى محطة الجراحة فوق وسادة تسخين حرارية.
9. اضبط حجم المد والجزر لجهاز التنفس الصناعي ومعدلاته وفقا لوزن جسم الفئران. تتلقى الفئران التي يبلغ وزنها حوالي 225-275 جم حجم مد وجزر يتراوح بين 2.0 و 2.5 مل و 70-80 نفسا / دقيقة باستخدام جهاز التنفس الصناعي.
10. قم بتوصيل أنبوب القصبة الهوائية بجهاز التنفس الصناعي لبدء التهوية الميكانيكية. ضع طرف التدفق الخارجي لجهاز التنفس الصناعي في أسطوانة ماء. تشير فقاعات الهواء الخارجة من التدفق بعد كل تنفس إلى التنبيب الناجح.
11. بمجرد تثبيت التنفس الثابت ، قم بتأمين الأنبوب الرغامي بشريط جراحي وقم بتثبيت مسبار المستقيم على طول الذيل لمراقبة درجة حرارة الجسم.

الشكل 1: الأدوات الرئيسية المطلوبة لإعداد الإجراء الجراحي المجهري ل PAB. (أ) إبرة معدلة 19 جم تستخدم كرصاص للحصول على قطر 1 مم من جذع PA بعد PAB. (ب) الأدوات الرغامية المستخدمة أو التنبيب الناجح للفئران. 1. تستخدم الملعقة كخافض للسان على الفئران المخدرة لفضح القصبة الهوائية. 2. تعمل القسطرة 16G كأنبوب داخل القصبة الهوائية بعد تخفيف طرف قلمها. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

4. جراحة PAB (الشكل 2)

ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الإجراءات وفقا لتقنيات الجراحة المعقمة الصارمة.

1. احلق الجانب الأيسر من الصدر باستخدام مقص الشعر وكريم مزيل الشعر وقم بإعداد الجلد باستخدام 2٪ كلورهيكسيدين متبوعا بمقشر كحولي 70٪ (يتكرر ثلاث مرات).
2. شل حركة الأطراف الأمامية في وضع مفتوح بشريط طبي ، مع الحرص على عدم الإفراط في تمديد الأطراف لتجنب التأثير على التنفس.
3. اسحب الطرف الخلفي الأيمن لأسفل قليلا وثبته على طول الذيل.
4. قم بتمديد وتجميع الطرف الخلفي الأيسر وتثبيته على الجانب الأيمن من لتوليد وضع جانبي يمين طفيف ، مما يؤدي إلى تعريض الجانب الأيسر من الصدر.
5. استخدم قفازات معقمة في هذه الخطوة للجزء المتبقي من الجراحة.
6. ضع ستارة معقمة فوق وقم بعمل شق جلدي بطول 2-3 سم على الجانب الأيسر من الصدر ، بدءا من حوالي 2 سم فوق عملية الخنجري وموجها قطريا نحو قاعدة الطرف الأمامي الأيسر للفئران.
7. تحت الجلد ، افصل عضلات الصدر لاحقا (الصدرية الصغرى والكبرى) وحركها جانبا عن طريق التشريح الحاد باستخدام مقص دائري. استخدم المباعدات المغناطيسية لتثبيت العضلات ، للسماح بالتصور الصحيح للقفص الصدري الموجود تحته.
8. قم بإزالة نفخ الرئتين عن طريق إزالة أنبوب التدفق الخارجي (المتصل بجهاز التنفس الصناعي) من أسطوانة الماء (انظر الخطوة 3.10). تؤدي إزالة أنبوب التدفق من الماء إلى خفض الضغط إلى الرئتين ، مما يؤدي إلى إزالة تضخم الفصوص.
9. قم بإجراء بضع الصدر على الجانب الأيسر باستخدام ملقط تشريح منحني. اثقب ثقب صغير في منتصف الخط الترقوي للعضلة الواقعة بين^{الأضلاع 3 و 4}.
10. أدخل الملقط المنحني في الفتحة وحركها على طول الجدار الداخلي الأيسر للعضلة بين الضلعين لرفع جدار الصدر الأيسر قليلا وتجنب لمس الرئتين أثناء قطع العضلات.
11. استخدم الملقط الذي تم إدخاله كدليل وقم بعمل شق طولي على الأضلاع على حوالي 1 سم باستخدام مقص القزحية. حافظ على جدار الصدر الأيسر مرفوعا وتعامل مع المقص بحذر لتجنب إتلاف فصوص الرئة اليسرى تحتها مباشرة.
12. قم بتوسيع الشق الوربي إلى 1-2 سم على يسار باستخدام مقص دائري.
13. أعد وضع الضاعرات أسفل الأضلاع لإبقاء الجرح مفتوحا.
14. راقب الجزء السفلي من الغدة الصعترية وجزء من الفص الأيسر من الرئة.
15. ادفع الغدة الصعترية والرئتين جانبا عند هذا المستوى ، نظرا للمساحة الكبيرة التي تشغلها هذه الأعضاء. افصل فصوص الغدة الصعترية باستخدام تشريح حاد بالملقط وأمسك الرئة على الجانب الأيسر باستخدام شاش مبلل. بعد ذلك ، قم بكشف الجزء العلوي من القلب والأذين الأيسر (LA) وكذلك الجذع الرئوي والقوس الأبهري.
16. قم بتشريح الطبقة الرقيقة من التامور التي تغطي القلب في هذه المنطقة بعناية، جنبا إلى جنب مع أي أنسجة دهنية متصلة، للمساعدة في تحديد الجزء الذي لا يزال الشريان الأورطي والجذع الرئوي متصلين به. قم بتشريح التامور بأقل قدر ممكن وتجنب لمس الغشاء الجنبي.
17. أدخل الملقط المنحني في وضع مغلق في الفراغ بين زائدة LA والجذع الرئوي ، في منتصف الجزء المرئي من الوعاء ، للوصول إلى الجانب الآخر من الوعاء (الشكل 2 أ).
    تنبيه: تجنب العمل بالقرب من جذر الأبهر في القلب لمنع خطر تمزق الأوعية الدموية والنزيف.
18. تصور طرف الملقط من خلال الغشاء الملتحمة في الجمجمة إلى الجذع الرئوي. استخدم الملقط الثاني لتشريح الطرف وثقب الغشاء بعناية لإنشاء فتحة صغيرة. ثم يتم فتح الملقط المنحني الموضوع تحت الجذع الرئوي قليلا من أجل الإمساك بخيط حريري 5-0. اسحب الملقط لجلب الخيط من جانب إلى آخر من الجذع الرئوي (الشكل 2 ب ، ج).
19. أداء انقباض الجذع الرئوي. أولا ، تدرب على عقدة مزدوجة فضفاضة من الحرير 5-0 بالقرب من الشريان. أدخل إبرة 19 جم على طول الوعاء وتحت الخيط. اربط هذه العقدة الأولى وثبتها بعقدة ثانية بسيطة قبل إزالة 19 جم (الشكل 2 د).
    تنبيه: اعمل بسرعة وحذر لتقليل مدة الانسداد الكامل للجذع الرئوي.
20. قم بإجراء عقدة بسيطة أخيرة وقطع خيط الحرير المتبقي 5-0 حوالي 0.5-1 سم من العقدة (الشكل 2 د).
21. أعد وضع فصوص الغدة الصعترية وقم بإزالة مباعدات الصدر.
22. أعد تضخيم الرئتين عن طريق الضغط على تدفق جهاز التنفس الصناعي لمدة 2 ثانية.
23. أغلق القفص الصدري عن طريق أداء نمط غرزة متقاطعة بخيط خياطة اصطناعي قابل للامتصاص 5-0.
24. ضع بضع قطرات من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ على منطقة الجرح واضغط على كل جانب من جدار الصدر لإزالة فقاعات الهواء وإعادة الضغط السلبي الصدري.
25. أعد وضع عضلات الصدر وامسح المحلول الملحي المتبقي بشاش معقم.
26. استخدم حقنة لوضع كتلة رذاذ من الليدوكائين على سطح الجرح والمنطقة المحيطة به.
27. أغلق الجلد باستخدام خيط خياطة اصطناعي قابل للامتصاص 5-0 بإبرة بنمط تحت الجلد المستمر.
    ملاحظة: تتلقى الفئران الشامية نفس الإجراء بدون الخطوتين 4.18 و 4.19.

الشكل 2: إجراء PAB والتحقق من صحة خياطة الحرير 5.0 مقابل المشابك المعدنية. تصوير الفوتوغرافي للعزل والربط خطوة بخطوة لجذع PA ، يوضح (أ) عرض وعزل جذع PA ، (ب) وضع الخيط (5.0 حرير) حول جذع PA ، (C) ربط PA (PAB) (باستخدام إبرة 19 G كرصاص) ؛ (د) التحقق من حركة القلب والحمل الزائد لجذر PA و RV بعد PAB ؛ (ه) مقارنة بين PAB الذي يتم إجراؤه باستخدام خياطة الحرير مقابل مشبك معدني ؛ و (F) التحقق من صحة اختيار خياطة الحرير ل PAB لإنشاء قطر أكثر قابلية للتكرار يبلغ 1 مم حول جذع PA. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

5. التعافي بعد الجراحة

1. قم بإزالة الأيزوفلوران مع الحفاظ على الجرذ تحت التهوية الميكانيكية مع تدفق الأكسجين فقط. اقلب الجرذ على جانبه الأيمن أو البطني لتسهيل التنفس.
2. حقن حجم 0.9٪ محلول ملحي تحت الجلد في منطقة الرقبة الظهرية لتعزيز استعادة السوائل (محسوبة على أنها 10 مل / كجم / ساعة من التخدير).
3. بمجرد تأكيد التنفس المستقل ، قم بإزالة الأنبوب الرغامي بسلاسة.
4. لاحظ عندما يبدأ الجرذ في التحرك من تلقاء نفسه ونقل من وسادة التدفئة إلى قفص معقم جديد للتعافي. توفير الماء والطعام الرطب حسب الحركة.
5. خلال فترة ما بعد الجراحة (4-6 ساعات) ، ضع القفص فوق وسادة تدفئة (نصف القفص) للمساعدة في الحفاظ على درجة حرارة الجسم ومراقبة عن كثب.
6. إدارة أي علامات للألم أو صعوبة التنفس أو السلوك غير الطبيعي على الفور.
7. في رعاية ما بعد الجراحة, 6 ساعات بعد الجراحة, حقن جرعة ثانية من 0.05 ملغ/كغ البوبرينورفين. في اليوم التالي, 24 ساعة بعد الجراحة, حقن جرعة ثالثة من 0.05 ملغ/كغ بوبرينورفين وجرعة ثانية من 5 ملغ/كغ كيتوبروفين.
8. راقب الفئران حتى شفائها الصحي التام.

6. تخطيط صدى القلب عبر الصدر

ملاحظة: تظهر هذه الورقة البيانات التي تم الحصول عليها في اليوم الحادي والعشرين بعد الجراحة ، عندما تعرضت الفئران لتخطيط صدى القلب عبر الصدر. ومع ذلك ، اعتمادا على أهداف البحث ومتطلبات تصميم الدراسة ، يمكن للباحثين تحديد نقاط زمنية أخرى لتخطيط صدى القلب عبر الصدر قبل وبعد PAB.

1. إجراء تخطيط صدى القلب عبر الصدر قبل الجراحة لتحديد قطر PA واختيار إبرة القياس المناسبة المستخدمة كرصاص لتوليد الانخفاض المتوقع بنسبة 60٪ من قطر PA أثناء PAB.
   ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام ذكور فئران الويستار التي يتراوح وزنها بين 225 و 275 جم وكان استخدام إبرة 19 جراما مناسبا لتوليد مثل هذا التخفيض بنسبة 60٪ من قطر PA.
2. قم بوزن وتخدير الفئران باستخدام الأيزوفلوران المستنشق باستمرار (3٪ و 2 لتر / دقيقة O₂).
3. قم بإجراء تخطيط صدى القلب عبر الصدر على كل باستخدام مسبار قطاع 12S / متعدد العناصر (4.5-11.5 ميجاهرتز) ونظام الحصول على الصور.
4. استخدم رسم الخرائط الملونة في عرض ثنائي الأبعاد (2D) ذو المحور القصير عن طريق وضع مسبار 12S على مستوى الصمام الأبهري. انقر فوق الزر Color Doppler في جهاز الصدى لتصور نمط تدفق الدم الذي يعبر منطقة ربط الشريان الرئوي (PAB) في الجذع الرئوي.
5. قم بإجراء دوبلر الموجة المستمرة (CW) عن طريق عبور PAB مسترشدا برسم خرائط الألوان في عرض المحور القصير 2D Parasternal لتسجيل خصائص تدفق الدم الذي يعبر منطقة PAB ، بما في ذلك سرعة الذروة (سم / ثانية) وتدرج متوسط الضغط (مم زئبق). للحصول على منحنيات دوبلر ، اضبط حجم العينة على مستوى ربط الشريان الرئوي.
6. قم بتطبيق عرض قمي ثنائي الأبعاد مكون من 4 غرف عن طريق وضع مسبار 12S على مستوى قمة القلب لإثبات تضخم RA و RV بعد الجراحة وتحديد البعد الأفقي RA في نهاية الانقباض القلبي (RADs) معبرا عنه بالمليمترات (مم).
7. قم بتطبيق رسم خرائط الألوان في عرض 2D قمي مكون من 4 غرف للكشف عن قلس ثلاثي الشرف بسبب PAB من خلال الحصول على حلقات سينمائية على جهاز الصدى.
8. قم بإجراء تخطيط صدى القلب M-Mode في عرض قمي مكون من 4 غرف عن طريق عبور اقتران الحلقة ثلاثية الشرف والجدار الجانبي RV لدراسة الرحلة الانقباضية المستوية ثلاثية الشرف (TAPSE) معبرا عنها بالمليمتر.
9. استخدم تصوير دوبلر الأنسجة (TDI) في العرض القمي المكون من 4 غرف على مستوى اقتران الحلقة ثلاثية الشرف والجدار الجانبي RV لقياس الانقباض الانقباضي للجدار الجانبي RV (Sr) معبرا عنه بالسنتيمتر في الثانية (سم / ثانية) لتقييم الأداء الانقباضي RV.
10. سجل التدفق الانبساطي عبر الصمام ثلاثي الشرف (TTF) باستخدام دوبلر الموجة النبضية في العرض القمي المكون من 4 غرف لدراسة الخصائص الانبساطي RV ، بما في ذلك سرعة الذروة في موجة الملء المبكر (E) ، وموجة التعبئة الأذينية (A) ، ونسبة E / A في TTF.
11. قم بإجراء تخطيط صدى القلب M-Mode في عرض المحور الطويل القصي على مستوى الصمام الأبهري لقياس مسار تدفق RV في نهاية الانبساط القلبي (RVOT ، معبرا عنه بالمليمترات) وبعد الأذين الأيسر في نهاية الانقباض القلبي (LADs ، معبرا عنه بالمليمترات).
12. إجراء تخطيط صدى القلب 2D M-Mode في عرض المحور القصير شبه القصي على مستوى العضلات الحليمية لتقييم أبعاد LV في نهاية الانقباض والانبساط (LVDs و LVDd) ؛ وسمك الجدار الأمامي LV عند الانبساط النهائي (LVAWd) ، وكلها معبرا عنها بالمليمترات.
13. قم بإجراء وضع 2D M في عرض شبه قصيري المحور لتحديد التقصير الجزئي LV (LVFS ، معبرا عنه في النسبة المئوية) وكسر طرد LV (LVEF ، معبرا عنه في النسبة المئوية).

7. دراسة الفيزيولوجيا الكهربية (الشكل 3)

1. الحفاظ على الفئران تحت التخدير بعد تخطيط صدى القلب في الجسم الحي لدراسة الفيزيولوجيا الكهربية عبر المريء في الجسم الحي (EPS).
2. أدخل أقطاب تخطيط القلب تحت جلد الفئران (1 بالقرب من الطرف الأمامي الأيسر ، و 1 بالقرب من الطرف الخلفي الأيمن ، و 1 بالقرب من الطرف الخلفي الأيسر).
3. أدخل برفق قسطرة 4F رباعية الأقطاب بمسافة بين الأقطاب تبلغ 5 مم في المريء (الشكل 3 أ).
4. اضبط موضع القسطرة عبر المريء بالقرب من RA عن طريق التحديد الدقيق لوقت تطابق الموجة P ، التي تمثل تقلصات أذينية على مخطط كهربية القلب السطحي ، مع الموجة P التي تم الحصول عليها باستخدام مخطط كهربية القلب الخاص بقسطرة المريء عبر المريء (الشكل 3 أ ، ب).
5. حدد عتبة التحفيز لكل. هذه العتبة هي الحد الأدنى للجهد الذي يؤثر عنده المحفز بشكل مباشر على معدل ضربات القلب.
6. قم بتقييم ثغرة التركيز البؤري التلقائي عن طريق تطبيق اندفاع جهد يعادل 4 أضعاف جهد العتبة باتباع بروتوكول مكون من 3 مجموعات من 12 رشقة تحفيز ، كل منها يستمر 3 ثوان عند 50 هرتز ، متبوعا بثانيتين من الراحة (1 دقيقة / مجموعة). بين كل مجموعة ، كان لدى الفئران فترة راحة مدتها دقيقة^{واحدة 9،13،21}.
7. تحديد وتحديد حدوث تسرع النظم القلبي بعد كل انفجار ، بما في ذلك الرجفان الأذيني أو الرفرفة الأذينية.
   ملاحظة: يعرف الضبط البؤري التلقائي بأنه نبضات أذينية غير منتظمة وفائقة السرعة (>800 نبضة في الدقيقة). يعرف الرفرفة الأذينية على أنها إيقاع أذيني منتظم ولكنه سريع مرتبط بغياب الموجة P أو وجود نمط منتظم من موجات P المتعددة بين فترات R متتالية بانتظام. يتم النظر فقط في نوبات عدم انتظام ضربات القلب التي تستمر لأكثر من 1 ثانية.
8. تجنب مقاطعة النوبات المستمرة من الرجفان الأذيني أو الرفرفة الأذينية عن طريق إيقاف المجموعة التالية من المحفزات إذا لم يتم استرداد إيقاع الجيوب الأنفية من تلقاء نفسه خلال فترة الراحة بين تحفيزين متتاليين.

الشكل 3: رسم توضيحي لنبضات القلب أثناء الراحة والموضع المناسب لقسطرة المريء لدراسة الفيزيولوجيا الكهربية في الجسم الحي . (أ) مخطط كهربية القلب التمثيلي لنبضتين متتاليتين في حالة الراحة يظهران الموجة P ، والفاصل الزمني للعلاقات الدائمة ، ومركب QRS ، وفاصل QT ، والفاصل الزمني R-R. (ب) تخطيطي لقسم طولي من القلب (1) والمريء (2) حيث يتم إدخال قسطرة رباعية الأقطاب (3) لتحفيز واكتساب مخطط كهربية القلب الأذيني. (ج) إشارات تخطيط كهربية القلب التمثيلية التي توضح الموضع المفضل للقسطرة عبر المريء عندما تتزامن الإشارة الأذينية (الخط الأحمر) من مخطط كهربية القلب السطحي (الآثار العلوية) مع الإشارة الأذينية لقسطرة مخطط كهربية القلب (الآثار السفلية). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

8. تحليل تخطيط القلب

ملاحظة: تم إجراء تسجيلات وتحفيز تخطيط القلب باستخدام برنامج اقتناء مخطط كهربية القلب. تم إجراء التحليلات باستخدام برنامج تحليل تخطيط القلب (الشكل 3 أ).

1. قم بقياس مدة الموجة P المقابلة للتقلص الأذيني معبرا عنه بالمللي ثانية (مللي ثانية).
2. حدد الفاصل الزمني PR (معبرا عنه بالمللي ثانية) المقابل لمدة التوصيل الكهربائي عبر العقدة الأذينية البطينية (AV).
3. أبلغ عن مدة مركب QRS (معبرا عنه بالمللي ثانية) المقابلة لإزالة الاستقطاب البطيني.
4. تقييم فاصل QT (معبرا عنه بالمللي ثانية) مما يعكس المدة الإجمالية لإزالة الاستقطاب البطيني وإعادة الاستقطاب.
5. تحديد فاصل RR (معبرا عنه بالمللي ثانية) مع الإشارة إلى المدة بين نبضتين متتاليتين وتحديد معدل ضربات القلب.

9. التحليلات النسيجية

1. القتل الرحيم للفئران عن طريق التخدير تحت التخدير الأيزوفلوران (5٪ ، 2 لتر / دقيقة_{O 2}) في اليوم 21 بعد PAB.
2. عزل التهاب المفاصل الروماتويدي و LA لتحليل إعادة تشكيل الأنسجة الأذينية المرتبطة أو غير المرتبطة ب RHF وعدم انتظام ضربات القلب.
3. قم بإجراء مقطع عرضي من القلوب المستعصصة حديثا ، على بعد 5 مم من القمة ، لتقييم إعادة تشكيل البطين المرتبط أو غير المرتبط ب RHF وعدم انتظام ضربات القلب.
4. قم بإصلاح عينات عضلة القلب في الفورمالين وصمة عار الشرائح النسيجية باستخدام محلول ماسون ثلاثي الألوان²² لتحديد سمك جدار البطين والتمدد والتليف الأذيني في D21 بعد PAB.

10. التحليلات الإحصائية

1. تقييم طبيعية التوزيعات عن طريق اختبار Shapiro-Wilk. قارن البيانات الموزعة بشكل طبيعي باستخدام اختبار t الخاص بالطالب.
2. إذا كانت البيانات عبارة عن توزيع غير معلمي ، فقم بإجراء اختبار مان ويتني. قم بتحليل المتغيرات الفئوية مثل الحث على الرجفان البؤري التلقائي باستخدام اختبار فيشر الدقيق.
3. عبر عن النتائج كمتوسط ± الخطأ المعياري للمتوسط (S.E.M.). ضع في اعتبارك الاختلافات ذات الدلالة الإحصائية عند قيم P ثنائية الذيل < 0.05.

النتائج

التأكيد البصري للربط المناسب لجذع PA أثناء الجراحة
أثناء إجراء PAB ، يكون مؤشر الوضع الجيد للخياطة هو زيادة فورية لضغط الدم والتوسع الفوري لعربة سكن متنقلة وجذر جذع PA عند التقاطع مع عربة سكن متنقلة. يجب ألا تتحرك الخيط لضمان زيادة الضغط المستمر والدائم لمدة 3 أسا...

Discussion

الأداء الناجح ل PAB هو الجزء الأكثر أهمية في هذا البروتوكول. من المهم التمييز بشكل صحيح بين الشريان الأورطي وجذع PA. يجب أن يتم عزل السلطة الفلسطينية بدقة لتجنب التمزق والنزيف والوفاة أثناء العملية. يجب إجراء تطبيق الخيط حول سلك 19G بسرعة ويتبعه الإزالة الفورية للرصاص ، لتجن...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chlorine Injection USB (100 ml)	Baxter	JB1302P	Solution used for drugs (analgesic and anti-inflammatory) dilution and for preparing saline water syringes dedicated to rehydrating the animal after the surgery
19 G x 1 1/2 PrecisionGlide Needle	BD	305187	Needle modified (bent and blunted) to be used as a spacer during for the partial constriction of the pulmonary trunk
2" x 2" Non Woven Non-Sterile Ritmed Gauze Sponge, 4-Ply	AMD-Ritmed	A2101-CH	Gauze sponges used to absorb blood from the wound or to gently push organs (ex: thymus) aside.
4" x 4" Non Woven Non-Sterile Ritmed Gauze Sponge, 4-Ply (x200)	AMD-Ritmed	A2100-CH	Gauze sponges used to absorb blood from the wound or to gently push organs (ex: thymus) aside.
5-0 Vicryl Violet Suture RB-1 1/2 Circle Needle 17mm 27"	Ethicon	J303H	Synthetic absorbable sterile surgical suture with a taperpoint needle used for muscle and skin wounds closure.
Anafen (100 mg/mL)	Merial Canada, Inc.	1938126	Diluted injectable solution of ketoprofen administered as a nonsteroidal anti-inflammatory, analgesic and antipyretic drug.
AutoClip System	FST	12020-00	Can be used to close the skin wound. Includes a clip applier, wound clips (9 mm) and a clip remover.
Dumont #5/45 Forceps	FST	11251-35	Dumoxel forceps with tips angled at 45°. Used to tighten the knots around the spacer placed on the pulmonary trunk.
Fine Scissors - Sharp	FST	14060-10	Stainless steel iris scissors dedicated to intercostal muscles incision and suture cutting.
Forane (Isoflurane) 100 mL	Baxter Canada	BAXCA2L9100	Inhalation anesthetic used for rodents during their PAB surgery.
IV Catheter 16 G x 1.77 " (Straight)	BD Insyte	381257	Catheter used as an endotracheal tube with its metal stylet blunted.
Light  LED 130 F - DrMach	Eickemeyer	M130300	LED wall mounted light.
Magnetic Fixator Retraction System: Base plate	FST	18200-50	Metal plate on which the associated fixtures are installed. It is placed around the heating plate.
Magnetic Fixator Retraction System: Elastomer (2 m Roll)	FST	18200-07	Used to attach the retractors to the fixators.
Magnetic Fixator Retraction System: Fixators	FST	18200-02	Movable anchors that can be placed on the base plate.
Magnetic Fixator Retraction System: Retractors	FST	18200-11	Retractors allowing to maintain the surgical wound with the desired opening
Metzenbaum Scissors (Curved)	FST	14017-14	Stainless steel blunt scissors used for blunt dissection of the skin and muscles.
Micro-Adson Forceps	FST	11018-12	Stainless steel serrated forceps used to grasp skin and other tissues.
Oster Golden A5 2-Speed Clipper	Oster Professional	34264416949	Pet grooming clipper used to prepare the surgical field. Since it's meant to be used with large animals, the user needs to be careful with rats.
Rodent heating plate or warming system	Custom made	N/A	Plate connected to a unit equipped with a LED screen displaying the temperature detected by the rectal probe as well as the target temperature.
Rodent Ventilator Model 683	Harvard Apparatus	74240-2	Mechanical ventilator used for small laboratory animals (max 5 kg).
Semken Forceps with Serrations (Curved)	FST	11009-13	Stainless steel forceps used for tissue dissection.
Semken Forceps with Serrations (Straight)	FST	11008-13	Stainless steel forceps used for tissue dissection.
Silky Fresh Hair removal Cream	Veet	62200825036	Hair removal product used to prepare the surgical site after shaving.
Soluprep	3M	103.26	Bottled antiseptic solution tinted with 2% chlorhexidine and 70 % alcohol 225 mL.
Stainless steel spatula 195 mm	Heathrow Scientific	HS15907	Spatula used as a tongue depressor during rat intubation.
Stereomicroscope System SZ61TR	Olympus	88-126	Microscope equipped with binoculars and a built-in camera allowing for video filming.
Sterile Sodium Chloride 0.9% Irrigation Bottle (60 mL)	Saline H2O	25-6048SA-L	Solution used to keep the wound moist throughout the surgery.
Surgical Scissors - Sharp-Blunt (Straight)	FST	14001-12	Stainless steel scissors used to make the initial skin incision.
Suture 5-0 Silk No Needle	Henry Schein	102-6344	Silk thread used to do the constriction of the pulmonary trunk
Systane Ointment	Alcon	2444062	Eyes lubricant providing a temporary relief of burning and irritation caused by the dryness of the eyes during surgery.
SZ2-STU2 stereomicroscope stand	Olympus	N1198900	The arm attached to the base provides a great freedom of movement to the microscope head.
Tissue forceps - 1X2 Teeth	FST	11021-15	Stainless steel forceps allowing to grasp, hold and manipulate tissues (skin and muscles).
Transpore Surgical Tape	3M	1527-1	Medical tape used to immobilized the rats' forelimbs and hindlimbs.
Vetbond Tissue Adhesive (3 mL)	3M	1469SB	Surgical glue that can be applied in small amounts on the skin It can be used as a complement to subcutaneous sutures.
Vetergesic Multidose (0.3 mg/mL) 10 mL	Ceva Canada	2342510	Diluted injectable solution of buprenorphine administered as an analgesic drug.
Veterinary anesthesia evaporator Tec 4	Dispomed	34001 Iso	Enables vaporization of isoflurane and concentration at 0–5%.