JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تصف هذه المخطوطة الإجراءات والاحتياطات التشغيلية للتحقيق في الآليات المسببة للأمراض الشائعة المحتملة التي تربط بين متلازمة شوغرن الأولية والسرطان الغدي الرئوي من خلال تحليل المعلوماتية الحيوية والتحقق التجريبي.

Abstract

تهدف هذه الدراسة إلى استكشاف الآليات المسببة للأمراض الشائعة المحتملة التي تربط بين متلازمة شوغرن الأولية (pSS) والسرطان الغدي الرئوي (LUAD) من خلال تحليل المعلوماتية الحيوية والتحقق التجريبي. تم استرداد الجينات ذات الصلة المرتبطة ب pSS و LUAD من قاعدة بيانات Gene Expression Omnibus (GEO) وقاعدة بيانات Genecard. بعد ذلك ، تم فحص الجينات المعبر عنها تفاضليا (DEGs) المرتبطة ب pSS و LUAD على أنها pSS-LUAD-DEGs. تم إجراء تحليلات تخصيب موسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG) وعلم الوجود الجيني (GO) لتوضيح الوظائف البيولوجية المهمة ل pSS-LUAD-DEGs. تم تحديد الأهداف الأساسية من خلال إنشاء شبكة التفاعل بين البروتين والبروتين (PPI) ، وتقييم دقة تشخيص الجينات المحورية من خلال تحليلات منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC). في هذه الدراسة ، عملت الفئران NOD / Ltj كنماذج حيوانية pSS وتم تحفيزها بالجسيمات 2.5 (PM2.5) لتوليد تفاعل التهابي. تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qPCR) ، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ، والنشاف الغربي للتحقق من تجربة البيولوجيا الجزيئية ذات الصلة. تشير النتائج التي تم الكشف عنها من خلال تحليلات التخصيب KEGG و GO إلى أن الالتهاب يلعب دورا مهما في الربط بين pSS و LUAD. تم تحديد IL6 و CCNA2 و JAK2 و IL1B و ASPM و CCNB2 و NUSAP1 و CEP55 كأهداف رئيسية ل pSS-LUAD. أظهرت الفئران BALB / c وفئران NOD / Ltj تعبيرا محسنا عن السيتوكينات الالتهابية IL-6 و IL-1β في أنسجة الرئة بعد 21 يوما من التحفيز باستخدام PM2.5 ، مما أدى إلى تنشيط مسار إشارات JAK2 / STAT3 وتنظيم التعبير عن الجينات المرتبطة بالورم CCNA2 و CCNB2 و CEP55 ، مع ظهور فئران NOD / Ltj تغييرات أكثر وضوحا من الفئران BALB / c. يوضح هذا البروتوكول أن التسرطن الناجم عن البيئة المكروية الالتهابية الرئوية قد يكون سببا رئيسيا لارتفاع معدل الإصابة ب LUAD في مرضى pSS. بالإضافة إلى ذلك ، قد تساعد الآليات المتعلقة بالحجب في منع حدوث LUAD في مرضى pSS.

Introduction

متلازمة شوغرن الأولية (pSS) هي مرض مناعي ذاتي يتميز بتسلل الخلايا الليمفاوية للغدد الخارجية ويؤدي إلى الأعراض السريرية لجفاف العين (جفاف الفم) وجفاف الفم (جفاف الفم)1،2. عادة ما يكون pSS مصحوبا أيضا بمظاهر داخلية خارج الغدة ، بما في ذلك فرط الغلوبولينفي الدم 3 ، ومرض الرئة الخلالي4 ، والحماض الأنبوبيالكلوي 5 ، والتلف العصبي6 ، وقلة الصفيحات7 ، والتي تشكل العوامل التنبؤية السلبية الرئيسية. في السنوات الأخيرة ، أظهرت مجموعة من الدراسات أن pSS مصحوبا بشكل عام بزيادة انتشار السرطان ، بما في ذلك الأورام الخبيثة الدموية والأورام الصلبة8،9،10. سرطان الرئة هو أحد أكثر أنواع السرطان المرتبطة ب pSS شيوعا ، وخاصة سرطان الرئة الغدي (LUAD) 11.

بشكل جماعي ، اقترح مزيد من التحقيقات أن pSS مع LUAD قد يكون له بعض التسبب في المرض المشترك الأساسي. وفقا لمعرفتنا الحالية ، لا توجد دراسات خاصة حتى الآن تشرح الآليات المشتركة بين المرضين. في الآونة الأخيرة ، يوفر تحليل المعلوماتية الحيوية إمكانية محتملة لنا للكشف عن آليات المرض المشتركة المحتملة عبر الأنواع12،13،14. للكشف عن الآليات الأساسية بشكل أكبر ، يتم استخدام تحليل المعلوماتية الحيوية لتحليل الأهداف المشتركة ومسارات الإشارات بين pSS و LUAD ، ويتم إنشاء نماذج حيوانية لاحقا للتحقق التجريبي. قد يساعد الكشف عن هذه الآليات في توفير قاعدة أدلة للوقاية السريرية من LUAD في مرضى pSS.

استخدمت هذه الدراسة قواعد بيانات GEO و Genecard لاسترداد الجينات ذات الصلة المرتبطة ب pSS و LUAD. بعد ذلك ، تم فحص DEGs المرتبطة ب pSS و LUAD على أنها pSS-LUAD-DEGs. أجرينا تحليلات تخصيب KEGG و GO لتوضيح الوظائف البيولوجية المهمة ل pSS-LUAD-DEGs. تم استخدام بناء شبكة PPI لتحديد الأهداف الأساسية ، وقمنا بتقييم دقة تشخيص الجينات المحورية من خلال تحليلات منحنى ROC. استخدمنا الفئران NOD / Ltj كنماذج حيوانية pSS محفزة بالجسيمات 2.5 (PM2.5) لتوليد تفاعل التهابي. تم إجراء QPCR و ELISA و Western Blotting للتحقق من الدراسة تجريبيا. بشكل عام ، تشير النتائج هنا إلى أن التسرطن الناجم عن البيئة المكروية الالتهابية الرئوية قد يكون سببا حاسما لارتفاع معدل الإصابة ب LUAD في مرضى pSS. كما يقترح أن حدوث LUAD في مرضى pSS يمكن منعه عن طريق الآليات المتعلقة بالانسداد.

Protocol

تم إيواء التجارب في منشأة في مستشفى الصداقة الصيني الياباني ، حيث تلبي ظروف السكن بيئة تغذية بما يتماشى مع المعايير الوطنية للصين ، متطلبات المختبر للبيئة ومرافق الإسكان (GB14925-2010). امتثلت جميع إجراءات وتجارب رعاية لإرشادات ARRIVE واستندت إلى مبادئ 3R (التخفيض والاستبدال والصقل) ، والالتزام بالمبادئ التوجيهية للقانون الوطني لرعاية في الصين. تم شراء الفئران BALB / c من شركة SPF (بكين) للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، وتم شراء الفئران NOD / Ltj من شركة Huafukang (Beijing) Biotechnology Co.، Ltd.

1. تحليل المعلوماتية الحيوية

  1. إعداد مجموعات البيانات
    1. افتح قاعدة بيانات Gene Expression Omnibus (GEO) (www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)15 ، واستخدم متلازمة Sjögren الأولية والسرطان الغدي الرئوي ككلمات رئيسية للبحث في ملفات تعريف التعبير الجيني. ثم انقر فوق النتائج في قاعدة بيانات GEO DataSets وحدد Homo sapiens في Top Organisms. حدد مجموعة البيانات ذات الاهتمام وقم بتنزيلها جنبا إلى جنب مع معلومات النظام الأساسي المقابلة لها.
    2. افتح قاعدة بيانات Genecard (https://www.genecards.org/) 16 ، واستخدم pمتلازمة Sjögren وسرطان الرئة الغدي ككلمات رئيسية للحصول على جينات pSS و LUAD. قم بتنزيل جداول البيانات الخاصة بجينات المرض.
  2. تحديد DEGs المشتركة بين pSS و LUAD
    1. قم بتنزيل وفتح برنامج R (https://cran.r-project.org/)17. قم بتثبيت حزمة GEOquery R وحزمة stringr R وحزمة ggplot2 R وحزمة reshape2 R وحزمة limma R في برنامج R.
    2. تحديد وتصور الجينات المعبر عنها تفاضليا (DEGs) في مجموعات بيانات GEO المختلفة (GSE84844 و GSE51092 و GSE32863 و GSE75037) باستخدام برنامج R ، ثم مقارنة وتحليل التعبير الجيني بين مجموعات البيانات هذه. ضع في اعتبارك الجينات ذات القيمة P المعدلة < 0.05 وتغيير الطية (FC) > 1.2 أو < 0.83 كDEGs.
    3. حدد الجينات ذات مستوى التعبير أكبر من أو يساوي 20 المتعلقة ب pSS و LUAD من قاعدة بيانات بطاقة الجينات.
    4. دمج DEGs المقترنة ب pSS و DEGs المقترنة ب LUAD من كل من قاعدة بيانات GEO وقاعدة بيانات بطاقة الجينات.
    5. قم بتثبيت حزمة VennDiagram وتحميلها في R للحصول على DEGs المقترنة ب pSS و LUAD (pSS-LUAD-DEGs) وتصورها.
  3. موسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG) تحليل مسار التخصيب
    1. أدخل Metascape (https://metascape.org/) 18. انقر فوق تحديد ملف وقم بتحميل ملف تنسيق .xlsx الخاص ب pSS-LUAD-DEGs. حدد H. sapiens في المدخلات كأنواع. وبالمثل ، حدد H. sapiens في التحليل كأنواع.
    2. انقر فوق التحليل المخصص. انقر فوق Enrichment وحدد مسار KEGG. انقر على تحليل الإثراء، ثم انقر على صفحة تقرير التحليل عند اكتمال تحليل الإثراء.
    3. انقر فوق الكل في ملف مضغوط واحد لتنزيل النتيجة. قم بالوصول إلى ملف _ FINAL_GO.csv في مجلد التنزيل Enrichment_GO لعرض النتيجة.
    4. أستخدم الحزمة ggplot2 لتنفيذ برنامج مرئيات KEGG في R.
  4. تحليل تخصيب الأنطولوجيا الجينية (GO)
    1. تثبيت clusterProfiler وحزمة enrichplot وتحميلها في R.
    2. قم باستيراد قائمة تنسيق النص ل pSS-LUAD-DEGs إلى R.
    3. قم بتشغيل clusterProfiler وحزم enrichplot لتحليل إثراء GO وتصور النتائج. حدد الدلالة الإحصائية في التحليل عند قيمة P المعدلة < 0.05.
  5. بناء شبكة التفاعل بين البروتين والبروتين (PPI) وتحليل الوحدة
    1. أدخل قاعدة بيانات استرجاع الجينات المتفاعلة (STRING) (http://string-db.org/)19. انقر فوق استعراض وتحميل ملف pSS-LUAD-DEGs. حدد الإنسان العاقل في الكائنات الحية، ثم انقر على بحث.
    2. انقر على متابعة. بمجرد توفر النتائج ، انقر فوق الإعدادات. ضمن الإعدادات الأساسية > الحد الأدنى لدرجة التفاعل المطلوبة، حدد ثقة عالية (0.700). ضع علامة في إخفاء العقد غير المتصلة في الشبكة في الإعدادات المتقدمة، ثم انقر على تحديث.
    3. انقر فوق التصدير في شريط العنوان لتنزيل نص علاقة PPI بتنسيق TSV.
    4. قم بتنزيل وتشغيل برنامج Cytoscape 3.7.1 (https://cytoscape.org/)20. انقر فوق ملف > استيراد شبكة > من ملف لاستيراد ملف تنسيق TSV لإنشاء شبكة PPI.
    5. استخدم أداة Network Analyzer لتحليل المعلمات الطوبولوجية في الشبكة. قم بتحسين حجم العقدة ولونها عبر شريط النمط في لوحة التحكم اليسرى.
    6. في شريط القائمة، حدد أدوات > تحليل الشبكة. في لوحة الجدول ، انقر فوق درجة لفرز المكونات حسب الدرجة بترتيب تنازلي. خذ أفضل 20 جينا بدرجات أعلى كجينات محورية.
    7. قم بتثبيت وتحميل حزم igraph و ggplot2 في R لتصور جينات المحور حسب الدرجة.
  6. تحديد الجينات المحورية والتحقق من صحتها
    1. قم بتثبيت وتحميل حزمة pROC في R.
    2. قم باستيراد قائمة تنسيق النص لجينات المركز إلى R.
    3. رسم منحنيات خاصية تشغيل المستقبل (ROC) لجينات المحور وحساب المساحة الواقعة تحت قيم منحنى ROC (AUC).
      ملاحظة: ارجع إلى ملف الترميز التكميلي 1 للحصول على شفرة R لتصفية DEGs.

2. التحقق التجريبي

ملاحظة: ارجع إلى جدول المواد للحصول على تفاصيل حول المواد والكواشف والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول.

  1. تحضير
    1. قم بإطعام 12 فأرة BALB / c البالغة من العمر تسعة أسابيع و 12 فأرة NOD / Ltj البالغة من العمر تسعة أسابيع بشكل تكيفي لمدة أسبوع واحد.
    2. استخدم جدول أرقام عشوائي لتخصيص 12 فأرة BALB / c تبلغ من العمر تسعة أسابيع بالتساوي في مجموعة التحكم الفارغة ومجموعة PM2.5. وبالمثل ، قم بتقسيم 12 فأرة من أنثى NOD / Ltj البالغة من العمر تسعة أسابيع بالتساوي إلى مجموعة pSS ومجموعة pSS-PM2.5.
  2. تحضير معلق الجسيمات 2.5 (PM2.5)
    ملاحظة: يمكن أن يؤدي PM2.5 إلى حدوث وتطور LUAD المرتبط بالالتهاب في طراز الفأر21. تم تحفيز الفئران BALB / c والفئران NOD / Ltj بواسطة PM2.5 لتطوير تغييرات مرتبطة بالالتهاب. وفقا للطريقة التي وصفها Piao et al.22 ، تم تحضير تركيز معلق PM2.5 عند 1 مجم / مل.
    1. قم بوزن أغشية ألياف الكوارتز PM2.5 ، وقم بتقطيعها إلى قطع بحجم 2 سم × 2 سم ، واغمرها في دورق يحتوي على كمية مناسبة من الماء منزوع الأيونات.
    2. أغلق الدورق وصوتيه في جهاز صوتي للحمام المائي عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في كل مرة. كرر هذه العملية 3 مرات حتى تذوب الجزيئات تماما.
    3. قم بتصفية السائل الموجود في الدورق من خلال 16 طبقة من الشاش الطبي المعقم ، ثم اعصر أي رطوبة متبقية من الشاش.
    4. ضع المرشح على طبق مسطح وقم بتجميده في كتل ثلجية في فريزر -20 درجة مئوية. بعد ذلك ، استخدم أداة التجفيف بالتجميد (-52 درجة مئوية ، 0.1 ملي بار ، 48 ساعة) لتجفيف كتل الجليد من الترشيح وجمع جزيئات المسحوق.
    5. قم بإذابة جزيئات المسحوق جيدا في محلول ملحي لتحضير معلق PM2.5 بتركيز 1 مجم / مل. صب معلق PM2.5 في زجاجة زجاجية ، وضعه في معقم عالي الضغط ، وقم بتطبيق ضغط ودرجة حرارة عالية (15 دقيقة عند 121 درجة مئوية ، 15 رطل لكل بوصة مربعة) للتعقيم.
    6. أداء التحريض بالموجات فوق الصوتية (200 واط ، 10 ثوان من التحريض ، 10 ثوان من الراحة ، لمدة 3 دورات). بعد العلاج ، قم بتخزينه في ثلاجة 4 درجات مئوية لاستخدامه لاحقا.
  3. إنشاء نموذج الماوس PM2.5
    ملاحظة: تم إعطاء مجموعة PM2.5 ومجموعة pSS-PM2.5 معلق PM2.5 عن طريق تنقيط القصبة الهوائية مرة كل 3 أيام لمدة 28 يوما ، مع كل جرعة 0.1 مل. تم إعطاء المجموعة الضابطة الفارغة ومجموعة pSS محلول ملحي فسيولوجي عن طريق التنقيط الرغامي مرة كل 3 أيام لمدة 28 يوما ، مع كل جرعة 0.1 مل.
    1. حقن خليط الكيتامين (100 ملغم/كجم) والزيلازين (10 ملغ/كجم) في الفأر. تأكد من المستوى الجراحي للتخدير عن طريق التحقق من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم وضمان استرخاء العضلات تماما. راقب باستمرار ردود الفعل والتنفس والاستجابة الشاملة لضمان الحفاظ على التخدير الكافي طوال العملية حتى اكتمال جميع الخطوات.
    2. ضع الفأر على مقبض الصغير بحيث يكون بطنه متجها لأعلى ، ورأسه مرفوعا ، وذيله منخفضا بزاوية 45 درجة. استخدم خيطا رفيعا للالتفاف حول القواطع العلوية للماوس ، وسحبها لأعلى ، وقم بتثبيت الخيط على برغي على حامل ، مما يضمن التعرض الكامل لتجويف فم الفأر.
    3. افتح مصباح الضوء البارد وسلط الضوء على جلد رقبة الفأر. استخدم الملقط لسحب لسان الفأر ، وكشف المزمار بالكامل. لاحظ داخل تجويف فم الفأر بقعة فتح وإغلاق متكررة للضوء ، مما يشير إلى موضع فتحة مجرى الهواء للفأر.
    4. أدخل الإبرة الوريدية 18 جيجا في القصبة الهوائية للفأر ، واسحب قلب الإبرة ، ثم ضع خيط القطن في الطرف الخارجي للإبرة الوريدية ، وتأكد من النجاح عند مراقبة الخيط القطني الذي يتحرك مع حركات صدر الماوس.
    5. استنشق 0.2 مل من الهواء أولا باستخدام حقنة سعة 1 مل ، ثم استنشق 0.1 مل من تعليق PM2.5 ، متبوعا بشفط 0.2 مل أخرى من الهواء. حقن الخليط من خلال الإبرة الوريدية 18 جم في القصبة الهوائية.
    6. اسحب الإبرة الوريدية الساكنة 18 جراما. قم بتأمين حامل في وضع مستقيم وقم بتدويره في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة 30 مرة لتوزيع نظام التعليق PM2.5 بالتساوي في رئتي الماوس. ثم مد رقبة الماوس بشكل مستقيم وضعه على جانبه لمنع الاختناق.
  4. جمع العينات
    ملاحظة: اجمع العيناتفي اليوم 29 من التجربة لتحليلات البيولوجيا الجزيئية اللاحقة.
    1. تحقق من اتصال نظام القتل الرحيم وقم بتشغيل طاقة وحدة التحكم. افتح صمام الأسطوانة لثاني أكسيد الكربون (CO2).
      ملاحظة: لا تملأ غرفة القتل الرحيم مسبقا قبل وضع بالداخل.
    2. ضع الفئران في الغرفة وقم بنقع ثاني أكسيد الكربون2 بنسبة 30٪ -70٪ من حجم الغرفة في الدقيقة. قم بتعريض الفئران لثاني أكسيد الكربون2 لمدة 5 دقائق ، مع التأكد من أنها غير قادرة على الحركة ، ولا تتنفس ، ولديها اتساع حدقة العين. قم بإيقاف تشغيل صمام أسطوانة ثاني أكسيد الكربون2 وراقب لمدة 5 دقائق إضافية لتأكيد الوفاة.
    3. ضع الفأر القتل الرحيم في وضع ضعيف على لوح تشريح نظيف. كشف القصبة الهوائية والقلب والرئتين.
    4. استخدم المقص والملقط لإزالة الجلد والعضلات التي تغطي المناطق البطنية والصدرية والرقبة. استخدم المقص والملقط لعمل شقوق على طول حواف الأضلاع على جانبي تجويف الصدر لكشف التجويف الصدري الذي يحتوي على القلب والرئتين. بعد ذلك ، قم بقص الترقوة لإنشاء فتحة واسعة بما يكفي لفحص فصوص الرئة اليمنى واليسرى بدقة.
    5. استئصال عضلات الرقبة الممتدة من القص والأضلاع إلى الفك. أدخل مقصا أسفل الحافة الأمامية للأضلاع وقم بعمل شقوق على كلا الجانبين لإزالة الجزء العظمي الذي يغطي القصبة الهوائية.
    6. أمسك القصبة الهوائية بالقرب من الفك بالملقط وقم بعمل شق عرضي كامل باستخدام مقص يوضع فوق الملقط.
    7. اسحب القصبة الهوائية برفق باستخدام ملقط ، وقطع وصلات الأنسجة البطنية بالمقص حتى تتم إزالة الأنسجة الصدرية بالكامل من الجسم.
    8. ضع الرئتين بشكل مسطح على طاولة العمل. اشطف بقايا سطح أنسجة الرئة بالمحلول الملحي ، وجففها بورق الترشيح ، ثم ضعها في أنابيب التبريد ، واحفظها في -80 درجة مئوية.
  5. تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qPCR)
    1. قم بطحن أنسجة الرئة إلى مسحوق باستخدام ملاط يحتوي على النيتروجين السائل.
    2. قم بوزن 20 مجم من الأنسجة الأرضية باستخدام ميزان دقيق ، وامزجها مع 750 ميكرولتر من Buffer RL في أنبوب طرد مركزي ، واخلطها جيدا باستخدام خلاط دوامة ، واتركها في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 3 دقائق. بعد ذلك ، قم بجهاز الطرد المركزي عند 14,000 × جم لمدة 5 دقائق في RT واجمع المادة الطافية.
    3. ضع العمود المصغر لمرشح الحمض النووي الجيني (gDNA) في أنبوب تجميع سعة 2 مل. انقل المادة الطافية إلى العمود الصغير لمرشح gDNA وجهاز الطرد المركزي عند 14,000 × جم لمدة دقيقتين في RT.
    4. تجاهل العمود المصغر لمرشح gDNA. أضف حجما متساويا من 70٪ من الإيثانول إلى المرشح واخلطه عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل 5 مرات.
    5. ضع عمود الحمض النووي الريبي المصغر في أنبوب تجميع سعة 2 مل. انقل 750 ميكرولتر من الخليط إلى العمود المصغر للحمض النووي الريبي وجهاز الطرد المركزي عند 12,000 × جم لمدة دقيقة واحدة في RT.
    6. تخلص من المرشح وضع عمود الحمض النووي الريبي الصغير مرة أخرى في أنبوب التجميع سعة 2 مل. أضف 500 ميكرولتر من Buffer RW1 إلى العمود المصغر للحمض النووي الريبي وجهاز الطرد المركزي عند 12,000 × جم لمدة دقيقة واحدة عند RT.
    7. تخلص من المرشح وضع عمود الحمض النووي الريبي الصغير مرة أخرى في أنبوب التجميع سعة 2 مل. أضف 500 ميكرولتر من Buffer RW2 إلى العمود المصغر للحمض النووي الريبي. جهاز طرد مركزي عند 12,000 × جم لمدة 1 دقيقة في RT. كرر هذه الخطوة مرة أخرى.
    8. تخلص من المرشح وضع عمود الحمض النووي الريبي الصغير مرة أخرى في أنبوب التجميع سعة 2 مل. جهاز طرد مركزي عند 12,000 × جم لمدة دقيقتين في RT.
    9. انقل العمود المصغر للحمض النووي الريبي إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل ، وأضف 100 ميكرولتر من الماء الخالي من RNase إلى مركز غشاء العمود ، واحتضنه عند RT لمدة دقيقتين. ثم ، جهاز الطرد المركزي عند 12,000 × جم لمدة 1 دقيقة في RT. تخلص من العمود المصغر للحمض النووي الريبي وقم بتخزين محلول الحمض النووي الريبي عند -80 درجة مئوية.
    10. خذ 2 ميكرولتر من محلول الحمض النووي الريبي وقم بقياسه باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop وفقا لدليل المعدات لتحديد تركيزه وجودته.
      ملاحظة: اختارت الدراسة نسب 260/280 و 260/230 لمراقبة جودة الحمض النووي الريبي.
    11. قم بإعداد محلول الحمض النووي الريبي عن طريق إضافة المكونات التالية بالتتابع إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق: 1 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي ، 4 ميكرولتر من MgCl2 (25 ملي مو) ، 2 ميكرولتر من النسخ العكسي 10x عازلة ، 2 ميكرولتر من خليط dNTP (10 ملي مولار) ، 0.5 ميكرولتر من مثبط الريبونوكلياز المؤتلف ، 15 وحدة من النسخ العكسي ، 0.5 ميكروغرام من أوليغو (dT) 15 التمهيدي ، وأضف الماء الخالي من النوكلياز إلى 20 ميكرولتر. امزج المحتويات برفق لتجميع كل السائل في قاع الأنبوب.
      ملاحظة: يجب تحضير حلول الكوكتيل لضمان تخليق (كدنا) بشكل أكثر اتساقا وقياس الحمض النووي الريبي.
    12. قم بنسخ محلول 20 ميكرولتر من الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي (كدنا) عن طريق احتضانه عند 42 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، وتغيير طبيعته عند 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ، ثم تبريده إلى 4 درجات مئوية ، متبوعا بالتخزين عند -20 درجة مئوية.
    13. امزج واخلط جيدا 6.4 ميكرولتر من الماء المقطر ، و 10 ميكرولتر من مزيج SYBR Green في الوقت الفعلي PCR الرئيسي ، و 2 ميكرولتر من محلول (كدنا) الذي تم الحصول عليه ، و 0.8 ميكرولتر من التمهيدي الأمامي (10 ميكرومتر) ، و 0.8 ميكرولتر من التمهيدي العكسي (10 ميكرومتر) (الجدول 1) لإعداد نظام التفاعل.
    14. قم بتشغيل التفاعل على أداة تفاعل البوليميراز المتسلسل للحصول على قيم عتبة الدورة (CT) للجينات المستهدفة والجينات المرجعية.
      1. اضبط التمسخ الأولي على 95 درجة مئوية لمدة 60 ثانية في بداية كل دورة PCR.
      2. خلال دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، قم بإجراء التمسخ عند 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية ، والتلدين عند 60 درجة مئوية لمدة 15 ثانية ، والتمديد عند 72 درجة مئوية لمدة 45 ثانية ، وجمع البيانات أثناء خطوة التمديد. إجراء ما مجموعه 40 دورة PCR.
      3. بعد الانتهاء من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، قم بإجراء تحليل منحنى الذوبان تلقائيا باستخدام أداة PCR.
        ملاحظة: إذا أظهر منحنى الذوبان ذروة مزدوجة أو شكل ذروة غير منتظم ، فهذا يشير إلى أنه قد تكون هناك مشكلة في التجربة.
    15. حدد مستويات التعبير النسبية لكل جين مستهدف باستخدام طريقة 2-ΔΔCT ، متبوعة بمزيد من التحليل الإحصائي. استخدم قائمة الصيغ التالية لطريقة 2-ΔΔCT:
      ΔCT (اختبار) = CT (الهدف ، الاختبار) - CT (المرجع ، الاختبار)
      ΔCT (المعاير) = CT (الهدف ، المعاير) - CT (المرجع ، المعاير)
      ΔΔCT = ΔCT (اختبار) -ΔCT (معاير)
      2-ΔΔCT = تغيير الطية في التعبير الجيني

اسم الجينالتسلسل (5 إلى 3)
الماوس CCNA2 للأمامCCCAGAAGTAGCAGAGTTTGTG
عكس الماوس CCNA2TTGTCCCGTGACTGTGTAGAG
الماوس ASPM إلى الأمامCTTATTCAGGCTATGTGGAGGA
عكس ASPM للماوسCCAGGCTTGAATCTTGCAG
الماوس CCNB2 إلى الأمامTTGAAATTTGAGTTGGGTCGAC
عكس الماوس CCNB2CTGTTCAACATCAACCTCCC
الماوس NUSAP1 إلى الأمامCTCCCTCAAGTACAGTGACC
عكس الماوس NUSAP1TTTAACAACTTGGTTGCCCTC
الماوس CEP55 إلى الأمامCCGCCAGAATATGCAGCATCAAC
عكس الماوس CEP55AGTGGGAATGGCTGCTCTGTGA

الجدول 1: التسلسلات الأولية ل PCR الكمي في الوقت الفعلي.

  1. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
    ملاحظة: وفقا لتعليمات مجموعة ELISA ، قم بموازنة مجموعة ELISA مع RT ، وقم بإعداد مخزن مؤقت للغسيل ، وقم بتخفيف المعيار. قم بتخفيف 90 ميكرولتر من الجسم المضاد البيوتينيل المركز مع 8910 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتخفيف الأجسام المضادة البيوتينيل لتحضير محلول عمل للأجسام المضادة الحيوية (1: 100) مسبقا. وبالمثل ، قم بتخفيف 90 ميكرولتر من إنزيم مترافق مركز مع 8910 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتخفيف الإنزيم المترافق لتحضير محلول عمل مترافق للإنزيم (1: 100) مسبقا.
    1. طحن أنسجة الرئة إلى مسحوق باستخدام ملاط يحتوي على النيتروجين السائل.
    2. قم بوزن 50 مجم من أنسجة الرئة باستخدام ميزان دقيق ، واجمعها مع 1 مل من PBS في أنبوب طحن ، وطحنها جيدا على الثلج.
    3. الطرد المركزي الخليط عند 4 درجات مئوية ، 3000 × جم لمدة 5 دقائق ، واجمع المادة الطافية كعينة.
    4. ضع 100 ميكرولتر من العينة / المعيار بتركيزات مختلفة في الآبار الخاصة بلوحة ELISA ، وقم بتغطية آبار التفاعل بغشاء مانع للتسرب لاصق ، واحتضنه في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة.
    5. استخدم غسالة لوحة أوتوماتيكية لغسل لوحة ELISA 4 مرات ، مع حقن 350 ميكرولتر من محلول الغسيل في كل مرة بفاصل 30 ثانية بين الحقن والشفط.
    6. أضف 100 ميكرولتر من محلول عمل الأجسام المضادة الحيوية لكل بئر ، وأغلق الآبار بغشاء مانع للتسرب لاصق ، واحتضنه في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. بعد ذلك ، اغسل لوحة ELISA 4 مرات باتباع الإجراء الموضح سابقا.
    7. أضف 100 ميكرولتر من محلول العمل المترافق بالإنزيم لكل بئر ، وأغلق الآبار بغشاء مانع للتسرب لاصق ، واحتضن في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، اغسل لوحة ELISA 4 مرات باتباع الإجراء الموضح سابقا.
    8. أضف 100 ميكرولتر من العامل اللوني لكل بئر ، واحميها من الضوء ، واحتضانها في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 10-20 دقيقة. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول التوقف لكل بئر ، واخلطه جيدا ، وقم بقياس الكثافة الضوئية على الفور عند قيم 450 نانومتر (OD450).
      ملاحظة: يتم استخدام ماصة ذات 8 قنوات لإضافة محلول عمل الجسم المضاد البيوتينيل، ومحلول العمل المترافق بالإنزيم، ومحلول التوقف، مما يسمح بإكمال الإضافة بسرعة وتجنب الأخطاء المحتملة.
    9. قم بإنشاء منحنى قياسي باستخدام برنامج CurveExpert (http:// curveexpert.webhop.net/) لحساب تركيز المواد المستهدفة في كل عينة بئر.
  2. النشاف الغربي
    1. قم بإعداد محلول مقايسة الترسيب المناعي المشع (RIPA) عن طريق خلط المخزن المؤقت لتحلل RIPA ، وفلوريد فينيل ميثان سولفونيل (PMSF) ، ومثبط الفوسفاتيز بنسبة 100: 1: 1 ووضعه على الجليد.
    2. طحن أنسجة الرئة إلى مسحوق باستخدام ملاط يحتوي على النيتروجين السائل.
    3. قم بوزن 20 مجم من أنسجة الرئة بدقة باستخدام ميزان دقيق وأضفه إلى 250 ميكرولتر من محلول RIPA المختلط.
    4. احتضان الخليط على الجليد لمدة 20 دقيقة ، ثم قم بالطرد المركزي عند 12,000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، واجمع المادة الطافية كعينة.
    5. قم بإعداد حل عمل BCA عن طريق خلط الكاشف A والكاشف B من مجموعة BCA بنسبة 50: 1.
      1. تخفيف المعيار لتحضير المحاليل القياسية المخففة بتركيزات 0 و 0.025 و 0.05 و 0.1 و 0.2 و 0.3 و 0.4 و 0.5 مجم / مل. أضف 20 ميكرولتر من كل محلول قياسي وأخذ عينة في آبار منفصلة من صفيحة 96 بئرا واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
      2. قم بقياس الامتصاص عند 490 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. قم بتركيب المنحنى القياسي باستخدام تركيزات وامتصاص المحاليل القياسية ، واحسب تركيز العينة23. اضبط تركيزات العينة على نفس المستوى باستخدام محلول RIPA المختلط.
    6. امزج المادة الطافية للبروتين مع مخزن مؤقت للتحميل 5x بنسبة 4: 1 في أنبوب الطرد المركزي. يغلي في حمام معدني لمدة 5 دقائق ، ثم يقوم بالطرد المركزي على حرارة 12,000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية وجمع المادة الطافية.
    7. قم بإجراء فصل البروتين باستخدام الرحلان الكهربائي لجل دوديسيل كبريتات الصوديوم - بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) ونقل البروتينات إلى غشاء فلوريد البولي فينيلدين (PVDF) كهربائيا. قم بسد غشاء PVDF بحليب خالي الدسم بنسبة 5٪ في RT لمدة 1 ساعة.
    8. احتضان غشاء PVDF بالجسم المضاد الأولي (المخفف 1: 1000) عند 4 درجات مئوية لمدة 12 ساعة ، متبوعا بالغسيل ثلاث مرات باستخدام TBST لمدة 10 دقائق لكل منهما ، ثم احتضان بجسم مضاد ثانوي (مخفف 1: 5000) عند RT لمدة ساعتين.
    9. اكتشف النطاقات المستهدفة باستخدام نظام مقايسة مناعية للتلألؤ الكهربي أوتوماتيكي بالكامل وقم بإجراء تحليل كمي باستخدام البرنامج المدمج.
  3. التحليل الإحصائي
    1. استخدام البرامج المناسبة للتحليل الإحصائي.
    2. اعرض البيانات التجريبية كمتوسط ± الانحراف المعياري.
    3. تحديد الأهمية باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA).
    4. ضع في اعتبارك P < 0.05 على أنه ذو دلالة إحصائية.

النتائج

تم تحديد ما مجموعه 3290 DEGs من 23348 جينا في GSE84884 (pSS) ، بما في ذلك 2659 جينا منظما و 631 جينا خاضعا للتنظيم (الشكل 1 أ). بالنسبة إلى GSE51092 (pSS) ، تم تحديد ما مجموعه 3290 DEGs من الجينات البالغ عددها 11409 ، بما في ذلك 667 جينا منظما و 587 جينا خاضعا للتنظيم (الشكل 1 ب)....

Discussion

على الرغم من أن pSS يعتبر مرضا يتميز في المقام الأول بغزو الغدد الخارجية ، إلا أنه لا يمكن تجاهل تلف الغدد الخارجية24. تمثل الرئتان عضوا مستهدفا ل pSS ، وإصابة الرئة هي مظهر شائع خارج الغدة ل pSS ، وعادة ما تنطوي على تسلل الخلايا الليمفاوية للغشاء المخاطي للقصبات ا...

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذه الدراسة من قبل تمويل البحوث السريرية للمستشفيات الوطنية عالية المستوى (2023-NHLHCRF-BQ-01) ومشروع الشباب لمستشفى الصداقة الصيني الياباني (رقم 2020-1-QN-8).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
3-Color Prestained Protein MarkerEpizymeWJ103Western Blot
Antibody Dilution BufferEpizymePS119Western Blot
BCA Protein Quantification KitEpizymeZJ101Western Blot
Cytoscape 3.7.1 softwareNational Institute of General Medical Sciences (NIGMS), National Institutes of Health (NIH)Version 3.7.1.Open-source software for biological network analysis and visualization
ECL Luminous FluidEpizymeSQ203Western Blot
Electrophoresis BufferEpizymePS105SWestern Blot
GraphPad Prism 10.0GraphPadVersion 10.0Data analysis
HRP-conjugated Goat anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014)abclonalAS014Western Blot
JAK2 AntibodyCell Signaling Technology3230TWestern Blot
Mouse IL-1β ELISA KitBeijing 4A Biotech Co., LtdCME0015ELISA
Mouse IL-6 ELISA KitBeijing 4A Biotech Co., LtdCME0006ELISA
Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×)EpizymeGRF102Western Blot
Phospho-JAK2 (Tyr1007/1008) AntibodyCell Signaling Technology3776SWestern Blot
Phospho-STAT3 (Tyr705) AntibodyCell Signaling Technology9145SWestern Blot
Protease Inhibitor Cocktail (100×)EpizymeGRF101Western Blot
Protein Free Rapid Blocking Buffer (5×)EpizymePS108Western Blot
PVDF membraneMilliporeIPVH00010Western Blot
R softwareR Foundation for Statistical ComputingNot ApplicableStatistical analysis software and programming language used for data analysis, visualization, and machine learning applications
Radio Immunoprecipitation AssayEpizymePC101Western Blot
Reverse Transcription SystemPromegaA3500PCR
SDS-PAGEEpizymeLK303Western Blot
SDS-PAGE Protein Loading Buffer (5×)EpizymeLT103Western Blot
STAT3 AntibodyCell Signaling Technology9139SWestern Blot
SYBR Green Realtime PCR Master MixTOYOBOQPK-201PCR
TBST (10×)EpizymePS103Western Blot
Western Blot Transfer Buffer (10×)EpizymePS109Western Blot
β-Actin AntibodyabclonalAC026Western Blot

References

  1. Thorlacius, G. E., Bjork, A., Wahren-Herlenius, M. Genetics and epigenetics of primary sjogren syndrome: Implications for future therapies. Nat Rev Rheumatol. 19 (5), 288-306 (2023).
  2. Bjordal, O., Norheim, K. B., Rodahl, E., Jonsson, R., Omdal, R. Primary Sjogren's syndrome and the eye. Surv Ophthalmol. 65 (2), 119-132 (2020).
  3. Zhong, H., et al. Hyperglobulinemia predicts increased risk of mortality in primary Sjogren's syndrome: Based on a Chinese multicentre registry. Mod Rheumatol. 34 (1), 137-143 (2023).
  4. Lin, W., et al. Interstitial lung disease in primary Sjogren's syndrome. BMC Pulm Med. 22 (1), 73 (2022).
  5. Aiyegbusi, O., et al. Renal disease in primary Sjogren's syndrome. Rheumatol Ther. 8 (1), 63-80 (2021).
  6. Liampas, A., et al. Primary sjogren syndrome-related peripheral neuropathy: A systematic review and meta-analysis. Eur J Neurol. 30 (1), 255-265 (2023).
  7. Wu, J., et al. Clinical and laboratory features of primary Sjogren's syndrome complicated with mild to severe thrombocytopenia. Ann Transl Med. 10 (6), 300 (2022).
  8. Zhong, H., et al. Primary Sjogren's syndrome is associated with increased risk of malignancies besides lymphoma: A systematic review and meta-analysis. Autoimmun Rev. 21 (5), 103084 (2022).
  9. Goulabchand, R., et al. Cancer incidence in primary Sjogren's syndrome: Data from the French hospitalization database. Autoimmun Rev. 20 (12), 102987 (2021).
  10. Witkowski Durand Viel, P., et al. Chronological interplay, clinical features, and treatments among patients with cancer and primary Sjogren's syndrome. Cancer Immunol Immunother. 72 (12), 4309-4322 (2023).
  11. Xu, Y., et al. The prevalence and clinical characteristics of primary Sjogren's syndrome patients with lung cancer: An analysis of ten cases in China and literature review. Thorac Cancer. 6 (4), 475-479 (2015).
  12. Shi, L., Du, X., Li, J., Zhang, G. Bioinformatics and systems biology approach to identify the pathogenetic link between psoriasis and cardiovascular disease. Clin Cosmet Investig Dermatol. 16, 2283-2295 (2023).
  13. Xu, R., Ma, L. L., Cui, S., Chen, L., Xu, H. Bioinformatics and systems biology approach to identify the pathogenetic link between heart failure and sarcopenia. Arq Bras Cardiol. 120 (10), e20220874 (2023).
  14. Lv, Y., et al. Bioinformatics and systems biology approach to identify the pathogenetic link of long COVID and myalgic encephalomyelitis/chronic fatigue syndrome. Front Immunol. 13, 952987 (2022).
  15. Barrett, T., et al. Ncbi geo: Archive for functional genomics data sets--update. Nucleic Acids Res. 41 (database issue), D991-D995 (2013).
  16. Stelzer, G., et al. The GeneCards suite: From gene data mining to disease genome sequence analyses. Curr Protoc Bioinformatics. 54, 1.30.1-1.30.33 (2016).
  17. Liu, S., et al. Three differential expression analysis methods for RNA sequencing: limma, EdgeR, DESeq2. J Vis Exp. 175, e62528 (2021).
  18. Zhou, Y., et al. Metascape provides a biologist-oriented resource for the analysis of systems-level datasets. Nat Commun. 10 (1), 1523 (2019).
  19. Szklarczyk, D., et al. The string database in 2023: Protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  20. Shannon, P., et al. Cytoscape: A software environment for integrated models of biomolecular interaction networks. Genome Res. 13 (11), 2498-2504 (2003).
  21. Hill, W., et al. Lung adenocarcinoma promotion by air pollutants. Nature. 616 (7955), 159-167 (2023).
  22. Piao, C. H., et al. PM2.5 exposure regulates th1/th2/th17 cytokine production through NF-κβ signaling in combined allergic rhinitis and asthma syndrome. Int Immunopharmacol. 119, 110254 (2023).
  23. Desjardins, P., Hansen, J. B., Allen, M. Microvolume protein concentration determination using the nanodrop 2000c spectrophotometer. J Vis Exp. 33, e1610 (2009).
  24. Luo, J., et al. Distinct clinical phenotypes of primary Sjogren's syndrome differ by onset age: A retrospective study of 742 cases and review of the literature. Clin Exp Rheumatol. 40 (12), 2373-2380 (2022).
  25. Luppi, F., et al. Lung complications of Sjogren syndrome. Eur Respir Rev. 29 (157), (2020).
  26. Berardicurti, O., et al. Interstitial lung disease and pulmonary damage in primary Sjogren's syndrome: A systematic review and meta-analysis. J Clin Med. 12 (7), 2586 (2023).
  27. Roca, F., et al. Interstitial lung disease in primary Sjogren's syndrome. Autoimmun Rev. 16 (1), 48-54 (2017).
  28. Fisher, D. A., et al. Diagnosis and treatment of lung cancer in the setting of interstitial lung disease. Radiol Clin North Am. 60 (6), 993-1002 (2022).
  29. Okudela, K., et al. Implications of thyroid transcription factor-1 gene methylation in carcinogenesis of interstitial pneumonia-related non-terminal respiratory unit lung adenocarcinoma. Int J Clin Exp Pathol. 15 (3), 120-130 (2022).
  30. Sekine, A., et al. Disease activity of lung cancer at the time of acute exacerbation of interstitial lung disease during cytotoxic chemotherapy. Thorac Cancer. 13 (17), 2443-2449 (2022).
  31. Glaviano, A., et al. PI3K/AKT/mTOR signaling transduction pathway and targeted therapies in cancer. Mol Cancer. 22 (1), 138 (2023).
  32. Ediriweera, M. K., Tennekoon, K. H., Samarakoon, S. R. Role of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in ovarian cancer: Biological and therapeutic significance. Semin Cancer Biol. 59, 147-160 (2019).
  33. Hoxhaj, G., Manning, B. D. The PI3K-AKT network at the interface of oncogenic signalling and cancer metabolism. Nat Rev Cancer. 20 (2), 74-88 (2020).
  34. Liu, R., et al. PI3K/AKT pathway as a key link modulates the multidrug resistance of cancers. Cell Death Dis. 11 (9), 797 (2020).
  35. Manogaran, P., Beeraka, N. M., Paulraj, R. S., Sathiyachandran, P., Thammaiappa, M. Impediment of cancer by dietary plant-derived alkaloids through oxidative stress: Implications of PI3K/AKT pathway in apoptosis, autophagy, and ferroptosis. Curr Top Med Chem. 23 (10), 860-877 (2023).
  36. Acosta-Martinez, M., Cabail, M. Z. The PI3K/AKT pathway in meta-inflammation. Int J Mol Sci. 23 (23), 15330 (2022).
  37. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma Drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462 (2021).
  38. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-κβ and PI3K/AKT pathways. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6634837 (2021).
  39. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of Rhizoma Drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Des Devel Ther. 16, 1743-1766 (2022).
  40. Yao, C., Narumiya, S. Prostaglandin-cytokine crosstalk in chronic inflammation. Br J Pharmacol. 176 (3), 337-354 (2019).
  41. Liu, P., et al. NOD-like receptor signaling in inflammation-associated cancers: From functions to targeted therapies. Phytomedicine. 64, 152925 (2019).
  42. Damasceno, L. E. A., et al. PKM2 promotes Th17 cell differentiation and autoimmune inflammation by fine-tuning stat3 activation. J Exp Med. 217 (10), e20190613 (2020).
  43. Banerjee, S., Biehl, A., Gadina, M., Hasni, S., Schwartz, D. M. JAK-STAT signaling as a target for inflammatory and autoimmune diseases: Current and future prospects. Drugs. 77 (5), 521-546 (2017).
  44. Jiramongkol, Y., Lam, E. W. FOXO transcription factor family in cancer and metastasis. Cancer Metastasis Rev. 39 (3), 681-709 (2020).
  45. Tong, X., et al. Targeting cell death pathways for cancer therapy: Recent developments in necroptosis, pyroptosis, ferroptosis, and cuproptosis research. J Hematol Oncol. 15 (1), 174 (2022).
  46. Ou, H. L., et al. Cellular senescence in cancer: From mechanisms to detection. Mol Oncol. 15 (10), 2634-2671 (2021).
  47. Felten, R., et al. Interleukin 6 receptor inhibition in primary Sjogren syndrome: A multicentre double-blind randomised placebo-controlled trial. Ann Rheum Dis. 80 (3), 329-338 (2021).
  48. Bardsen, K., et al. Interleukin-1-related activity and hypocretin-1 in cerebrospinal fluid contribute to fatigue in primary Sjogren's syndrome. J Neuroinflammation. 16 (1), 102 (2019).
  49. Barrera, M. J., et al. Tofacitinib counteracts il-6 overexpression induced by deficient autophagy: Implications in Sjogren's syndrome. Rheumatology (Oxford). 60 (4), 1951-1962 (2021).
  50. Liu, H., Zhou, Q., Xu, X., Du, Y., Wu, J. ASPM and TROAP gene expression as potential malignant tumor markers. Ann Transl Med. 10 (10), 586 (2022).
  51. Qian, X., et al. CCNB2 overexpression is a poor prognostic biomarker in Chinese NSCLC patients. Biomed Pharmacother. 74, 222-227 (2015).
  52. Mo, M. L., et al. Use of serum circulating CCNB2 in cancer surveillance. Int J Biol Markers. 25 (4), 236-242 (2010).
  53. Li, L., et al. NuSAP is degraded by APC/C-Cdh1 and its overexpression results in mitotic arrest dependent of its microtubules' affinity. Cell Signal. 19 (10), 2046-2055 (2007).
  54. Fabbro, M., et al. Cdk1/Erk2- and Plk1-dependent phosphorylation of a centrosome protein, cep55, is required for its recruitment to midbody and cytokinesis. Dev Cell. 9 (4), 477-488 (2005).
  55. Jeffery, J., Sinha, D., Srihari, S., Kalimutho, M., Khanna, K. K. Beyond cytokinesis: The emerging roles of CEP55 in tumorigenesis. Oncogene. 35 (6), 683-690 (2016).
  56. Feng, Z., et al. Overexpression of abnormal spindle-like microcephaly-associated (ASPM) increases tumor aggressiveness and predicts poor outcome in patients with lung adenocarcinoma. Transl Cancer Res. 10 (2), 983-997 (2021).
  57. Zheng, H., et al. Comprehensive pan-cancer analysis reveals NuSAP1 is a novel predictive biomarker for prognosis and immunotherapy response. Int J Biol Sci. 19 (14), 4689-4708 (2023).
  58. Verstappen, G. M., Pringle, S., Bootsma, H., Kroese, F. G. M. Epithelial-immune cell interplay in primary sjogren syndrome salivary gland pathogenesis. Nat Rev Rheumatol. 17 (6), 333-348 (2021).
  59. El Rayes, T., et al. Lung inflammation promotes metastasis through neutrophil protease-mediated degradation of Tsp-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (52), 16000-16005 (2015).
  60. Zhao, L., et al. PM2.5 and serum metabolome and insulin resistance, potential mediation by the gut microbiome: A population-based panel study of older adults in china. Environ Health Perspect. 130 (2), 27007 (2022).
  61. Li, J., et al. PM2.5 exposure perturbs lung microbiome and its metabolic profile in mice. Sci Total Environ. 721, 137432 (2020).
  62. Liao, J. H., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of artemisinin in treating primary sjogren's syndrome. BMC Immunol. 25 (1), 16 (2024).
  63. Hu, Q., et al. JAK/STAT pathway: Extracellular signals, diseases, immunity, and therapeutic regimens. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1110765 (2023).
  64. Xue, C., et al. Evolving cognition of the JAK-STAT signaling pathway: Autoimmune disorders and cancer. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 204 (2023).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

KEGG GO JAK2 STAT3 PM2 5 QPCR ELISA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved