غير الغازية مع التصور 3D - الفرعية ميكرون القرار باستخدام السنكروترون - X - أشعة التصوير المقطعي

Summary

استخدمنا السنكروترون التصوير المقطعي بالأشعة السينية في الإشعاع السنكروترون مرفق الأوروبي (ESRF) لغير جراحية إنتاج مجموعات بيانات 3D تصوير الشعاعي الطبقي مع دقة بكسل من 0.7μm. حجم باستخدام تقديم البرامج ، وهذا يسمح للتعمير الهياكل الداخلية في حالتها الطبيعية ، دون القطع الأثرية التي تنتجها sectioning النسيجية.

Abstract

ولا يعرف سوى القليل عن التنظيم الداخلي للالمفصليات الصغيرة مع العديد من أحجام الجسم أقل من 1 ملم. أسباب ذلك هي صغيرة الحجم وإهاب الثابت الذي يجعل من الصعب استخدام بروتوكولات الأنسجة الكلاسيكية. بالإضافة إلى ذلك ، sectioning النسيجي يدمر العينة وبالتالي لا يمكن استخدامها للمواد فريدة من نوعها. ومن هنا ، وهي طريقة غير المدمرة أمر مرغوب فيه والذي يسمح لعرضها داخل عينات صغيرة من دون الحاجة إلى sectioning.

استخدمنا السنكروترون التصوير المقطعي بالأشعة السينية في الإشعاع السنكروترون مرفق الأوروبي (ESRF) في غرونوبل (فرنسا) لغير جراحية إنتاج مجموعات بيانات 3D تصوير الشعاعي الطبقي مع دقة بكسل من 0.7μm. حجم باستخدام تقديم البرامج ، وهذا يسمح لنا لإعادة التنظيم الداخلي في حالته الطبيعية من دون القطع التي تنتجها sectioning النسيجية. ويمكن استخدام هذه الكمية موعد لالتشكل ، والمعالم ، أو لتصور أفلام الرسوم المتحركة لفهم بنية أجزاء الجسم الخفية واتباع نظم الجهاز كاملة أو أنسجة من خلال العينات.

Protocol

الحيوانات المستخدمة في هذه الدراسة

وقد أخذت عينات من oribatid بكرية التوالد سوس Archegozetes longisetosus (Acari ، Oribatida) من ثقافة مختبرنا. ثقافة تنمو على الجص باريس / مزيج الفحم (09:01) في جرار بلاستيكية ، في الظلام ثابتة عند 20-23 درجة مئوية مع ما يقرب من 90 ٪ من الرطوبة الجوية.

نموذج إعداد

1. وقد أخذت عينات من الثقافة ، وتنظيفها بفرشاة الجميلة وضعت في خليط من الإيثانول 06:03:01 80 ٪ ، 35 ٪ الفورمالدهيد وحمض الخليك بنسبة 100 ٪ لمدة 24 ساعة.
2. بعد ذلك ، كانت العينات المجففة في سلسلة متدرجة من الايثانول 70 ٪ ، 75 ٪ ، 80 ٪ ، 85 ٪ ، 90 ٪ ، 95 ٪ ، و 100 ٪ مع 3 تغييرات في كل التركيز ، و 10 دقيقة بين الخطوات.
3. أخيرا ، وضعت نماذج جديدة في نقطة الإيثانول بنسبة 100 ٪ بين عشية وضحاها والحرجة المجففة في CO ₂ (CPD 020 ، Balzers). كانت تعلق العينات المجففة لغيض من الدبابيس البلاستيكية (1.2 سم طويلة ؛ 3.0 مليمتر في القطر).

السنكروترون التصوير المقطعي بالأشعة السينية

أجري التصوير المقطعي بالأشعة السينية في ID19 beamline (ESRF ، غرينوبل ، فرنسا ، والتجربة SC - 2127).

1. وقد شنت هذه العينات في صاحب العينة وتعديلها لمكانة مركزية في شعاع.
2. تم قياس عينات من الطاقة مع 20.5 كيلو. سجلت الأشعة مع CCD تبريد (ESRF FReLoN الكاميرا) مع مجموعة 14 بت دينامية ، 2048 × 2048 بكسل وحجم البكسل الفعالة 0.7 ميكرون. وسجلت أكثر من 1500 إسقاطات تناوب 180 ° العينة مع الوقت تعرض ليالي 0.35 لكل التوقعات. وكشف عن المسافة إلى عينة 20 ملم.

باستخدام مسافة معينة بين العينة وكشف التصوير تمكن الفرق من المواد مع انخفاض معاملات توهين الأشعة السينية (Cloetens ، وآخرون 1996) ، والتي ستنتج في المقابل عدم كفاية الامتصاص التصوير (حيث يقع مباشرة أمام نموذج للكاشف ). معظم الأمور هي كائنات بيولوجية المرحلة ، التي تتألف من مواد ذات امتصاص منخفض و / أو الاختلافات صغيرة فقط من حيث العدد الذري (بيتز ، وآخرون ، 2007). ومع ذلك ، المرحلة المعززة يتطلب التصوير المقطعي التماسك العالية المكاني لشعاع الأشعة السينية متجانسة. لذلك ، هو أكثر ملاءمة من الإشعاع السنكروتروني سطح المكتب والماسحات الضوئية لهذا النوع من القياسات.

تحليل البيانات

1. تحولت الصور الشعاعية الناتجة 2D إلى 3D فوكسل بيانات (8 بت رمادية القيم) مع خوارزمية الإسقاط الخلفي تصفيتها (Cloetens ، وآخرون ، 1997)
2. وقد تم تحليل البيانات فوكسل مع ماكس VGStudio البرمجيات 1.2.1. (الرسومات وحدة التخزين ، هايدلبرغ ، ألمانيا).
3. أزيلت غراي القيم من الخلفية من الرسم البياني لرؤية - 3D.
4. واستخدمت محددة مسبقا الكاميرا مسارات لتوليد الرسوم المتحركة التناوب والطائرات لقطة متحركة.
5. ولدت والمعرفة لمتابعة مسار الكاميرا الجهاز الهضمي أ. longisetosus.

Discussion

في هذا العرض ، وركزنا على التصور 3D للتشريح الداخلية لالمفصلية الدقيقة chelicerate. الأشعة السينية القياسات السنكروترون تسمح بكسل القرار من أسفل إلى 0.3μm ، اعتمادا على حجم العينة. هنا ، لقد أظهرنا البيانات مع 0.7μm بكسل القرار. عموما ، يمكن السنكروترون التصوير المقطعي بالأشعة السينية أن...