وأود أن أشكر كريستوفر ايفانز ودارين بيرك من مركز لدراسة سلوك الحيوان من التكاملية (CISAB).

جاكي التنين عقدت السحالي جاكي (A. muricatus) في مناخ تسيطر عليها مرافق أسيرا. وقد شيدت من العبوات الزجاجية مرابي حيوانات ملفقة قياس 60 سم 3. وشغل أيضا مع مرفقاته الركيزة الرملية في سيدني ، وأوراق الشجر الأصلية ، والعلياء الخشبية الطبيعية. وضعت العبوات على رأس عربات المنقولة التي سمحت لتوضع المواد في منتصف كافة أجهزة العرض. السحالي وضعت تحت 14L : 10D دورة الصيف الخفيفة خلال ظروف المحاكاة ، وقدمت مع كل من مصابيح الحرارة (125W) والأشعة فوق البنفسجية الكافية (UV) الإضاءة (300W) خلال النصف ساعة الاولى من النهار. كما قدمت السحالي بالماء يتضمن الرياضة تقليل والصراصير تتغذى (Achetus الداجن) غبار بالفيتامينات خلال جلسات غير التجريبية ، وبشكل روتيني للتحرك كالديدان الطفيليات باستخدام جرعات مخففة من آيفرمكتين. معدات مستعملة للقراءة وتستخدم ثلاث منصات تشغيل الفيديو لعرضها المثير (انظر الشكل 1). منصة مركزية تتألف من إيماك (شركة ابل كمبيوتر) التي تحتوي على محفزات نقطة. أجهزة الحفر إضافيتين تتألف من إيماك مع الجرح الأخير برو HD لعرض الحوافز التي تحتوي على محفزات التشغيل (أي اللافقاريات). يتم إرسال إشارة رقمية متطورة لتحويل الفيديو الرقمية (كانوب © GT ADVC110 ، ملبورن ، استراليا فيكتوريا) لالرقمية إلى تناظرية تحويل لتشغيل الفيديو وعرضها على Trintron سوني (سوني كوربوريشن ، Shinagawa ، طوكيو اليابان) رصد (السلسلة رقم PVM-14M2A/PVM-14L2/PVM-14N5A). هي التي شنت (نموذج رقم MV650i) كانون كاميرا رقمية مع زووم بصري 22X (المدفع ، وشركة اليابان) مباشرة فوق منطقة الاختبار والسجلات استجابات لمثيرات مباشرة إلى (سوني كوربوريشن ، Shinagawa ، طوكيو اليابان) مسجل فيديو كاسيت سوني ( رقم تسلسلي SLV - EZ717AS). وترسل الصور المسجلة على لون عدسة الكاميرا (NEC ، الرقم المسلسل 1892 ، كاناغاوا ، اليابان). في 7.5 ثانية من بدء عرض النقاط ، يتم إرسال علامة الصوت ولدت إلكترونيا لADVC110 ® كانوب والسجلات على VHS. يتم ضبط تشغيل الفيديو لPAL - DV قياسية (5:1 ضغط ، والقرار 575 خطوط أفقية ، و 25 إطارات S - 1). عشوائي دوت Kinematograms (RDKs) يمكن تطويرها باستخدام RDKs VPixx V1.79 (VPixx V1.79 ، VPixx تكنولوجيز 2002). منبهات التصميم مع حقل × 30 درجة 20 ، وملء مع 200 نقاط ، مع كل نقطة قياس 5 × 5 بكسل. بناء المحفزات نقطة مع ثماني الاختلافات في سرعة جنبا إلى جنب مع ثمانية مستويات التماسك والاتجاهين ، وتوليد 128 محفزات مختلفة. وقد صممت المعلمات في درجات السرعة في الثانية (درجة / ثانية). اختلافات السرعة 0.5 ، 2.5 ، 5 ، 10 ، 20 ، 40 ، 80 ، و 160 درجة / ثانية. وكانت النسب المئوية التماسك 0 ، 2.5 ، 5 ، 10 ، 20 ، 40 ، 80 ، و 100 ٪ في حركة الاتجاه إما لليسار أو اليمين. تصدير كل تسلسل كملف JPEG - B الحركة. ومع ذلك ، يمكنك تصميم RDKs الذي مجموعة من الميزات. كل تسلسل ما مجموعه 15 ليالي في المدة. تسلسل يبدأ مع 2.5 ق 0 ٪ من التماسك المتطابقة مع محاكمة المتغير السرعة. هذه الفترة تبدأ المحاكمة الحالية. ويعقب ذلك من خلال 5 ثوان من التباين في تركيبة السرعة والتماسك. تم الانتهاء من تسلسل بنسبة 7.5 ٪ ليالي من 100 في الاتجاه المناسب. استيراد كافة JPEG - B تسلسل الحركة وتحريرها في نهائي أبل برو HD مقطوفة (شركة أبل كومبيوتر). إضافة علامة الصوت في كل فاصل زمني. هذه العلامة هي المسموعة فقط VHS ، ويستخدم كأساس جديلة عندما احرز السلوك عند تغيير في العرض تحدث التحفيز. تصدر كل من متواليات 128 والسينما Final Cut Pro و. المعززات الأولية -- Mealworms الموضوعات مكان على جدول التعزيز عشوائية من خمس محاكمات لكل محاكمة كتلة (16 تجربة) أثناء التجربة. المعززات الأولية mealworms (Tenebrio molitor). المعززات الثانوية -- اللافقريات المتحركة المعززات الثانوية أن تكون مقترنة مع معزز الابتدائي. إنشاء المعززات ذات مغزى من الناحية البيولوجية ، مثل ثلاثة أنواع من الرسوم المتحركة اللافقاريات : 1) لعبة الكريكيت ، 2) سوس ، والعنكبوت 3). إنشاء الرسوم المتحركة باستخدام الخفيفه v8.3 (ديرة ، وشركة سان انطونيو ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 15 ق في الطول ، مع ليالي 7.5 الأولي الخلفية لا يزال ، وتليها ليالي 7.5 من اللافقاريات التي تظهر على الشاشة المناسبة. بوtograph خلفية للغطاء النباتي الطبيعي لاستيراد JPEG كما في مقطع ايه. تصدير كل فرد في تسلسل تسلسل الصور JPEG (375 إطارات) ، وضغط في ملف الفيلم باستخدام Final قص برو HD لعرض الفيديو. تصميم 50 مقاطع فريدة لمنع التعود على تكييف نموذج. العام الداخلي الموضوعات في الفترة ما بين المراقبين الذين يعاينون. عشوائية تقديم المحفزات RDK لكل موضوع. تظهر المنبهات في كتل من 16 تجربة على مدى ثمانية أيام. كل محاكمة هو 15 ثانية مع فترات متفاوتة intertrial 30-60 ثانية. الجزء المحاكمة في كل فاصل زمني 2.5 ق 0 ٪ من التماسك تعكس سرعة الاختبار ، و 5 ليالي لاختبار السرعة والتماسك ، وتليها ليالي 7.5 من 100 ٪ في الاتجاه المناسب المتطابقة مع السرعة. خلال الفترة الحرجة 5 ق هذا ، هناك حاجة للرد الموضوعات. سجل تدابير تعتمد على التوجه نحو اليسار أو اليمين رصد والكمون للرد. لا تستخدم سوى خمس تجارب عشوائية مع معزز الابتدائي وتعزيز كل محاكمة مع اللافقارية المتحركة. عند الانتهاء من كل محاكمة كتلة ، وإزالة العبوات الموضوع من منطقة الاختبار ، وإدخال آخر ضميمة.

<ol>
	<li>Burghardt, G. M., Gans, C., Tinkle, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+processes+in+reptiles.">Learning processes in reptiles.</a> Biology of the reptilia. 7, 555-681 (1977).</li><li>VPixx, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Instruction Manual. VPixx Techniologies Inc. , 96 (2002).</li></ol>

وأيد التمويل من قبل جائزة CISAB عليا وقسم علم النفس من جامعة ماكواري ، ومجلس البحوث الأسترالية. وقد أجريت بحوث في إطار المبادئ التوجيهية الأخلاقية من جامعة ماكواري جنة الأخلاقيات الحيوانية (2003/014) ، ونيو ساوث ويلز الحدائق الوطنية والحياة البرية الخدمات (S11024) في استراليا.

اختبار القدرات الحسية في الأنواع سحلية كانت صعبة ، وكان الى حد كبير على حد سواء عملية شاقة ومضنية. هذه الصعوبات تنبع من العثور على معزز الصحيح أو وضع بروتوكول وظيفية. هنا ، أنشأت بروتوكول الناجحة التي لاختبار التصور الحركة في السحالي. قد يكون هذا الإجراء ينطبق أيضا في اختبار الخ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>iMac</td>
<td>Computer</td>
<td>Apple Computers, Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Three systems</td>
</tr>
<tr>
<td>Canopus&#174;</td>
<td>Digital-to-analog converter</td>
<td>Canopus&#174;</td>
<td>ADVC110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sony Trintron</td>
<td>Colour viewfinder</td>
<td>Sony Corporation</td>
<td>PVM-14M2A, PVM-14L2, PVM-14N5A</td>
<td>Three monitors</td>
</tr>
<tr>
<td>Canon</td>
<td>Digital camcorder</td>
<td>Cannon Inc.</td>
<td>MV650i</td>
<td>Records behavior</td>
</tr>
<tr>
<td>NEC</td>
<td>Colour viewfinder</td>
<td>NEC</td>
<td>1892</td>
<td>View responses</td>
</tr>
<tr>
<td>Sony VCR</td>
<td>VHS recorder</td>
<td>Sony Corporation</td>
<td>SLV-EZ717AS</td>
<td>Record behavior to VHS</td>
</tr>
<tr>
<td>VHS tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Generic VHS</td>
<td>Recording media</td>
</tr>
<tr>
<td>VPixx</td>
<td>Software program</td>
<td>VPixx Technologies, Inc.</td>
<td>v1.79</td>
<td>To create RDKs</td>
</tr>
<tr>
<td>Final Cut Pro</td>
<td>Software program</td>
<td>Apple Computer, Inc.</td>
<td>HD</td>
<td>To create playback sequences</td>
</tr>
<tr>
<td>Lightwave&#174; 3D</td>
<td>Software program</td>
<td>NewTek Inc.</td>
<td>v8.3</td>
<td>To create secondary reinforcers</td>
</tr>
<tr>
<td>Mealworm</td>
<td>Tenebrio molitor</td>
<td>Pisces Enterprises LTD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Primary reinforcer</td>
</tr>
<tr>
<td>Cricket</td>
<td>Achetus domesticus</td>
<td>Pisces Enterprises LTD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Food for husbandry</td>
</tr>
<tr>
<td>Terrariums</td>
<td>Glass</td>
<td>Crystal Palace Aquariums</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Enclosure material for lizards (60 x 60 x 60 cm)</td>
</tr>
<tr>
<td>Globes</td>
<td>Spotone</td>
<td>Phillips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>125W, Heat lamps for lizards</td>
</tr>
<tr>
<td>Ultraviolet globes</td>
<td>Ultra-Vitalux</td>
<td>Osram</td>
<td>&nbsp;</td>
<td> 300W, UV lamps for lizards</td>
</tr>
<tr>
<td>Herptivite</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rep-Cal Research Labs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vitamins: beta carotene, calcium, and vitamin D3</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

testing visual sensitivity to the speed and direction of motion in lizards

اختبار حساسية بصرية في أي الأنواع يوفر المعلومات الأساسية المتعلقة السلوك ، والتطور ، والبيئة. ومع ذلك ، واختبار ميزات محددة من النظام البصري تقديم المزيد من الأدلة التجريبية لتطبيقات وظيفية. التحقيق في النظام الحسي يوفر معلومات حول التعلم الحسية ، والقدرة ، والقدرة على الذاكرة ، ويضع الأساس في السلوك المعروف الذي لقياس الانحرافات (Burghardt ، 1977). ومع ذلك ، خلافا للأنظمة الثدييات أو الطيور ، واختبار للتعلم والذاكرة في أنواع الزواحف أمرا صعبا. وعلاوة على ذلك ، وذلك باستخدام نموذج استثابي كإجراء النفسية قدرة حسية صعبة كما هو بالمثل. تاريخيا ، وقد استجابت أنواع الزواحف سيئة للمحاكمات بسبب تكييف القضايا المتصلة الفيزيولوجيا ، والتحفيز ، والتمثيل الغذائي ، والخصائص البيولوجية الأساسية. هنا ، تدل على وجود نموذج استثابي استخدام نموذج الرواية سحلية الأنواع ، التنين جاكي (Amphibolurus muricatus) وتصف كيفية اختبار حساسية هامشية للسرعة والخصائص البارزة الحركة. يستخدم هذا الأسلوب نهجا مبتكرا لتقييم التعلم والقدرات الحسية في السحالي. أنا توظيف استخدام عشوائي دوت kinematograms (RDKs) لقياس الحساسية للسرعة ، والتلاعب في مستوى قوة الإشارة عن طريق تغيير نسبة من النقاط تتحرك في اتجاه متماسك. RDKs لا تمثل حافزا ذات مغزى من الناحية البيولوجية ، ويشارك في النظام البصري ، وأداة الكلاسيكية النفسية المستخدمة لقياس الحساسية لدى البشر والحيوانات الأخرى. هنا ، ليتم عرضها RDKs السحالي باستخدام ثلاثة أنظمة تشغيل الفيديو. السحالي هي لتحديد الاتجاه (إلى اليسار أو اليمين) في النقاط التي يرون أن تتحرك. ويتعزز اختيار الاتجاه المناسب بواسطة المحفزات فريسة هامة بيولوجيا ، محاكاة عن طريق الكمبيوتر المتحركة اللافقاريات.

Watch this Scientific Journal Video about Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards at JoVE.com

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

اختبار حساسية بصرية في السحالي باستخدام نموذج تكييف هواء فعال التي توظف تشغيل الفيديو العشوائي دوت kinematograms واللافقاريات الحاسوب ولدت.

اختبار الحساسية البصرية للسرعة واتجاه الحركة في السحالي

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

testing-visual-sensitivity-to-speed-direction-motion

Research

JoVE Journal

Biology

11.4K Views.  Macquarie University. اختبار حساسية بصرية في السحالي باستخدام نموذج تكييف هواء فعال التي توظف تشغيل الفيديو العشوائي دوت kinematograms واللافقاريات الحاسوب ولدت.

Video: Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When an uninfected aphid feeds on an infected plant it contracts the virus through the plant phloem. Once ingested, the virus must pass from the insect gut to the hemolymph (the insect  blood ) and then must pass through the salivary gland, in order to be transmitted back to a new plant. An aphid may take up different viruses when munching on a plant, however only a small fraction will pass through the gut and salivary gland, the two main barriers for transmission to infect more plants. In the lab, we use physalis plants to study PLRV transmission. In this host, symptoms are characterized by stunting and interveinal chlorosis (yellowing of the leaves between the veins with the veins remaining green). The video that we present demonstrates a method for performing aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut is preventing viral transmission.
The video that we present demonstrates a method for performing Aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut or salivary gland is preventing viral transmission.

Aphids are effective transmitters of plant viruses. Aphid microinjection of virus, the procedure we will show you today, is a technique allowing researchers to inject virus directly into the hemocoel of the aphid, bypassing the gut, one of the 2 major barriers for virus transmission in a circulative manner. The same technique is also used to inject dsRNA for RNAi.

اختبار الحواجز الفسيولوجية لانتقال الفيروس عن طريق Microinjection في المن

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible circuitry. In addition, this area's unique ability to generate new neurons throughout an organism's lifetime makes it an attractive system for developmental and regenerative biologists alike. Such interest necessitates a means for a quick, yet reliable assessment of olfactory function. Many tests of olfactory ability are complex, variable or not specifically designed for mice. Also, some tests are sensitive to memory deficits as well as defects in olfactory abilities, confounding obtained results.
Here, we describe a simple battery of tests designed to identify defects in olfactory sensitivity and preference. First, an initial general health assessment allows for the identification of animals suitable for further testing. Second, mice are exposed to various dilutions of scents to ascertain whether there is a threshold difference. Third, mice are presented with various scents, both attractive and aversive, that allow for the assessment of olfactory preference. These simple studies should make the initial characterization of olfactory behavior accessible for labs of varied resources and expertise.

Fundamental, yet unique properties of the rodent olfactory system have led to its increasing study among biologists. A relatively simple assessment of its function is then also needed. Here we describe sensitive tests for the characterization of mouse olfactory sensitivity and preference.

السلوكية اختبار الشم في الماوس الكبار

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment are open and allow cations to flow steadily inwards across the membrane, depolarizing the cell. Light exposure triggers the closure of the CNG channels, blocks the inward cation current flow, and thus results in cell hyperpolarization. Based on the polarity of photoreceptors, a suction recording method was developed in 1970s that, unlike the classic patch-clamp technique, does not require penetrating the plasma membrane 1. Drawing the outer segment into a tightly-fitting glass pipette filled with extracellular solution allows recording the current changes in individual cells upon test-flash exposure. However, this well-established "outer-segment-in (OS-in)" suction recording is not suitable for mouse cone recordings, because of the low percentage of cones in the mouse retina (3%) and the difficulties in identifying the cone outer segments. Recently, an inner-segment-in (IS-in) recording configuration was developed to draw the inner segment/nuclear region of the photoreceptor into the recording pipette 2,3. In this video, we will show how to record from individual mouse cone photoresponses using single-cell suction electrode.

We will show how to record flash responses from single mouse cones using a suction electrode.

تسجيلات شفط وحيدة الخلية المستقبلة من المخروط ماوس

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Using the optokinetic response to study visual function of zebrafish

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the visual functions of larval zebrafish1-5. Nevertheless, the standard protocol for larval fish is not yet readily applicable in adult zabrafish. Here, we introduce how to measure the OKR of adult zebrafish with our simple custom-built apparatus using a new protocol which is established in our lab. Both our apparatus and step-by-step procedure of OKR in adult zebrafish are illustrated in this video. In addition, the measurements of the larval OKR, as well as the optomotor response (OMR) test of adult zebrafish, are also demonstrated in this video. This OKR assay of adult zebrafish in our experiment may last for up to 4 hours. Such OKR test applied in adult fish will benefit to visual function investigation more efficiently when the adult fish vision system is manipulated.
Su-Qi Zou and Wu Yin contributed equally to this paper.

Optokinetic response has been widely used to assess the visual functions of larval zebrafish. Nevertheless, the standard protocol for larval fish is not yet readily applicable in adults1-5. Here, we introduce how to measure the OKR of adult zebrafish using a new protocol which is established in our lab.

باستخدام optokinetic استجابة لدراسة وظيفة البصرية من الزرد

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the ...

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function to maintain glucose homeostasis during developmental larval stages 1,2. Studies on largely post-mitotic adult flies have revealed perturbation of glucose homeostasis as the result of genetic ablation of insulin-like peptide (ILP) producing cells (IPCs) 3. Thus, adult fruit flies hold great promise as a suitable genetic model system for metabolic disorders including type II diabetes. To further develop the fruit fly system, comparable physiological assays used to measure glucose tolerance and insulin sensitivity in mammals must be established. To this end, we have recently described a novel procedure for measuring oral glucose tolerance response in the adult fly and demonstrated the importance of adult IPCs in maintaining glucose homeostasis 4,5. Here, we have modified a previously described procedure for insulin injection 6 and combined it with a novel hemolymph extraction method to measure peripheral insulin sensitivity in the adult fly. Uniquely, our protocol allows direct physiological measurements of the adult fly's ability to dispose of a peripheral glucose load upon insulin injection, a methodology that makes it feasible to characterize insulin signaling mutants and potential interventions affecting glucose tolerance and insulin sensitivity in the adult fly.

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Conserved insulin signaling pathways found in the fruit fly Drosophila melanogaster make this organism a potential tool for modeling metabolic disorders including type II diabetes. To this end, it is critical to establish physiological assays to effectively measure systemic insulin action in peripheral glucose disposal in the adult fly.

حقن الانسولين واستخراج الدملمف لقياس حساسية الانسولين في الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a novel Drosophila circadian output, called the temperature preference rhythm (TPR), in which the preferred temperature in flies rises during the day and falls during the night 3. Surprisingly, the TPR and locomotor activity are controlled through distinct circadian neurons3. Drosophila locomotor activity is a well&#160;known circadian behavioral output and has provided strong contributions to the discovery of many conserved mammalian circadian clock genes and mechanisms4. Therefore, understanding TPR will lead to the identification of hitherto unknown molecular and cellular circadian mechanisms. Here, we describe how to perform and analyze the TPR assay. This technique not only allows for dissecting the molecular and neural mechanisms of TPR, but also provides new insights into the fundamental mechanisms of the brain functions that integrate different environmental signals and regulate animal behaviors. Furthermore, our recently published data suggest that the fly TPR shares features with the mammalian BTR3. Drosophila are ectotherms, in which the body temperature is typically behaviorally regulated. Therefore, TPR is a strategy used to generate a rhythmic body temperature in these flies5-8. We believe that further exploration of Drosophila TPR will facilitate the characterization of the mechanisms underlying body temperature control in animals.

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

We recently identified a novel Drosophila circadian output, temperature preference rhythm (TPR), in which the preferred temperature in flies rises during the day and falls during the night. TPR is regulated independently from another circadian output, locomotor activity. Here&#160;we describe the design and analysis of TPR in Drosophila.

تصميم وتحليل سلوك تفضيل درجة الحرارة وإيقاعها Circadian في Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

التحقق من صحة نموذج الفأر لعرقلة ينك مجمعات بطريقة خلية محددة

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex signaling mechanisms underlying filopodial initiation, elongation and subsequent stabilization or retraction, it is crucial to determine the spatio-temporal protein activity in these dynamic structures. To analyze protein function in filopodia, we recently developed a semi-automated tracking algorithm that adapts to filopodial shape-changes, thus allowing parallel analysis of protrusion dynamics and relative protein concentration along the whole filopodial length. Here, we present a detailed step-by-step protocol for optimized cell handling, image acquisition and software analysis. We further provide instructions for the use of optional features during image analysis and data representation, as well as troubleshooting guidelines for all critical steps along the way. Finally, we also include a comparison of the described image analysis software with other programs available for filopodia quantification. Together, the presented protocol provides a framework for accurate analysis of protein dynamics in filopodial protrusions using image analysis software.

We present a software solution for semi-automated tracking of relative protein concentration along the length of dynamic cellular protrusions.

واجهة المستخدم الرسومية لتتبع بمساعدة برنامج تركيز البروتين في النتوءات الخلوية الديناميكية

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function critically in cell motility and signaling. Since cilia are incapable of synthesizing their own protein, nearly 200 unique ciliary proteins need to be trafficked between the cytosol and primary cilia. However, it is still a technical challenge to map three-dimensional (3D) locations of transport pathways for these proteins in live primary cilia due to the limitations of currently existing techniques. To conquer the challenge, recently we have developed and employed a high-speed virtual 3D super-resolution microscopy, termed single-point edge-excitation sub-diffraction (SPEED) microscopy, to determine the 3D spatial location of transport pathways for both cytosolic and membrane proteins in primary cilia of live cells. In this article, we will demonstrate the detailed setup of SPEED microscopy, the preparation of cells expressing fluorescence-protein-labeled ciliary proteins, the real-time single-molecule tracking of individual proteins in live cilium and the achievement of 3D spatial probability density maps of transport routes for ciliary proteins.

Recently we mapped the three-dimensional (3D) spatial locations of transport routes for various proteins translocating inside primary cilia in live cells. Here this paper details the experimental setup, the process of biological samples and the data analyses for the 3D super-resolution fluorescence imaging approach newly applied in live primary cilia.

تطبيق القرار فائقة السرعة سرعة الفحص المجهري في هدب الأولية الحية

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such as Zika, dengue and malaria. Assays for rapid, high-throughput analyses of unformulated novel chemistries against mosquito larvae and adults are presented. We describe protocols for single point-dose and dose response assays to evaluate the toxicity of small molecule chemistries to the Aedes aegypti vector of Zika, dengue and yellow fever,&#160;the malaria vector, Anopheles gambiae and the northern house mosquito, Culex quinquefasciatus, on contact and via ingestion. As an example, we evaluated the toxicity of amitriptyline, a small molecule antagonist of G protein-coupled receptors, via larval, adult topical and adult blood-feeding assay. The protocols provide a starting point to investigate insecticide potential. Results are discussed in the context of additional experiments to explore product applications and mechanisms for delivery.

Protocols are described for assessing the toxicity of chemistries to immature and adult mosquitoes for development as new classes of larvicides, adulticides and endectocides. The protocols enable high-throughput testing of multiple chemistries at single-point dose and subsequent evaluation via dose response assay to determine toxicity on contact or via ingestion.

بروتوكولات لاختبار السمية لرواية كيمياء مبيدات الحشرات للبعوض

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...