في هذه الدراسة ، استخدم نطاط النبات البني الصغير أو SBPHs التي تربى في شتلات الأرز. بمجرد أن تصبح الثقافات جاهزة ، ضع SBPHs المزروعة في أنبوب طرد مركزي وضعها في حمام جليدي لمدة 10 إلى 30 دقيقة. ثم ضع SBPH المجمد على شريحة زجاجية تحت مجهر ستيريو مع توجيه بطنه لأعلى واضبط التركيز على أرجله الستة.
قم بإعداد ملقطين عاليين الدقة بأطراف فائقة الدقة. باستخدام ملقط واحد ، اضغط لأسفل على جسم الحشرة لإبقائه في مكانه واسحب ساق واحدة بعناية مع الملقط الآخر. ثم اضغط برفق على صدر الحشرة ، مما يسمح للهيموليمف بالتدفق عبر الجرح.
لجمع الدملمف ، قم بإعداد ماصة صغيرة عن طريق وضع أنبوب شعري ميكرولتر واحد في لمبة الماصة. ضع الأنبوب الشعري بالقرب من جرح الحشرات ، ممسكا بمصباح ماصة micropipite. المس الطرف الشعري إلى الهيموليمف الذي ينضح واجمعه.
بمجرد وصول الأنبوب الشعري إلى خط المقياس المطلوب ، قم بسد الفتحة الصغيرة الموجودة على لمبة الماصة بإصبعك قليلا لإيقاف عملية الامتصاص. ثم تفريغ الهيموليمف الذي تم جمعه في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت PBS. تم تأكيد دقة جمع الدملمف عبر SDS-PAGE ، والذي أظهر محتوى بروتين مماثل في جميع عينات الدملمف الثلاث ، التي تم جمعها بشكل منفصل.
بالنسبة لليرقة ، كان تركيز البروتين الكلي حوالي 3.7 ملليغرام لكل ملليلتر. في الإناث والذكور البالغين SBPHs ، كانت تركيزات البروتين حوالي 3.5 و 3.6 ملليغرام لكل ملليلتر على التوالي ، ولم تظهر فرقا كبيرا بين العينات الثلاث. أظهر الدم اليرجي خلايا دموية يتراوح حجمها بين 20 و 20 نانومتر.
بالإضافة إلى ذلك ، كان تركيز الخلية قابلا للمقارنة في عينات الدم الليمفاوية الثلاث التي تم جمعها.
