ابدأ بوضع فأر ذكر تم قتله رحيما من سبعة إلى ثمانية أسابيع على سطح مقعد نظيف. قطع جلد البطن من الماوس مع مقص نحو أسفل البطن. استئصال الأنسجة الدهنية من الفخذين الداخليين.
ضع الأنسجة المستأصلة في أنبوب C على ثلج يحتوي على 2.5 ملليلتر من خليط إنزيم من الإنزيمات D و R و A و 2.35 ملليلتر من DMEM / F12 بدون FBS أو المضادات الحيوية. باستخدام المقص ، قم بتقطيع الأنسجة الدهنية إلى قطع بحجم ملليمترين مربعين تقريبا. أغلق غطاء الأنبوب C بإحكام واقلب الأنبوب.
قم بتوصيل الأنبوب بغلاف جهاز تفكك الأنسجة وهضم العينات عند 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. بعد ذلك ، قم بتسخين وسائط DMEM / F12 التي تحتوي على FBS والمضادات الحيوية إلى 37 درجة مئوية. بعد الحضانة ، قم بإزالة الأنبوب C من مفكك الأنسجة وتوقف عن الهضم عن طريق إضافة خمسة ملليلتر من DMEM / F12 مع FBS والمضادات الحيوية.
ماصة بلطف أربع مرات. أجهزة الطرد المركزي التعليق عند 700 غرام لمدة 10 دقائق عند 20 درجة مئوية. دون إزعاج لوحة الخلايا ، استنشق بعناية طاف .
أعد تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من DMEM / F12 التي تحتوي على FBS والمضادات الحيوية ، وماصة بلطف خمس مرات. قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية قطرها 70 ميكرون موضوعة على أنبوب سعة 50 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي المرشح في 250 غرام لمدة خمس دقائق.
أعد تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني. قبل الطلاء ، الطرد المركزي تعليق الخلية في 500 غرام لمدة خمس دقائق. تخلص من المادة الطافية.
أعد تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من DMEM / F12 التي تحتوي على FBS والمضادات الحيوية. تخلط عن طريق سحب التعليق برفق ، 10 مرات. لوحة 10 ملليلتر من التعليق على طبق مغلف بالكولاجين 10 سم.
ضع الطبق في حاضنة زراعة الخلايا. نضح الوسط وغسل الخلايا ثلاث مرات مع ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني لكل غسلة. أضف 10 ملليلتر من DMEM / F12 التي تحتوي على FBS والمضادات الحيوية واحتضانها.
أظهر تلطيخ الزيت الأحمر O الخلايا الشحمية المحملة بالدهون بعد سبعة أيام من إحداث تمايز الخلايا الشحمية. تم تأكيد درجة التمايز الكامل من خلال تحليل تعبير mRNA لمنظمات تكوين الدهون. تسبب Rosiglitazone في تأثير يعتمد على الجرعة على مستويات التعبير عن جينات محددة للدهون البنية مثل Ucp1 و Ppargc1a.
ومع ذلك ، بالنسبة ل Fabp4 ، فإن التأثير مشبع بتركيز 0.1 ميكرومول روزيجليتازون. يمكن استخدام الخلايا الشحمية المتمايزة لمختلف التحليلات الوظيفية والميكانيكية مثل تحليل معدل استهلاك الأكسجين والترسيب المناعي للكروماتين.
