Affinity Chromatography Mediated Fibrinolytic Enzymes Purification from Crude Protein Extracts

قم بتصفية البروتينات الخام المستخرجة من أمعاء Sipunculus nudus من خلال غشاء مرشح 0.22 ميكرومتر. قم بتخزين هذه العينة في أربع درجات سلزية لاستخدامها لاحقا. قم بتعبئة عمود كروماتوغرافيا تقارب مصفوفة أغاروز أرجينين عن طريق تحميل وسط مصفوفة أغاروز أرجينين في عمود كروماتوغرافي فارغ سعة خمسة ملليلترات.

وبالمثل ، قم بتحميل عمود كروماتوغرافيا تقارب مصفوفة الأغاروز ليسين عن طريق تحميل وسط مصفوفة الأغاروز ليسين في عمود كروماتوغرافي فارغ. وازن أعمدة كروماتوغرافيا التقارب مع الماء المقطر المزدوج متبوعا بمحلول ثلاثي هيدروكلوريد. قم بتحميل عينة البروتين المفلترة على العمود المتوازن مسبقا.

اغسل العمود بخمسة مجلدات من محلول 0.02-molar tris hydrochloride قبل استنشاقه بمحلول كلوريد الصوديوم 0.15-0.25-0.35-0.45-0.55 و 0.65-molar ، على التوالي. بمجرد ظهور قمة الشطف في شطف كلوريد الصوديوم 0.15 مولار ، اجمع الكسور في أنابيب سعة خمسة ملليلترات. ركز عينة الشطف باستخدام مرشح طرد مركزي فائق ثلاثي كيلودالتون وقم بتخزين هذه العينة عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لاستخدامها لاحقا.

عندما تم تحميل محلول البروتين على عمود تقارب مصفوفة أغاروز الأرجينين ، ظهرت ذروة التدفق من حوالي 40 إلى 66 دقيقة. في مرحلة الشطف المتدرج ، بلغ الشطف مع كلوريد الصوديوم 0.15 مولار ذروته من حوالي 94 إلى 110 دقيقة. عندما تم تحميل محلول البروتين إلى عمود تقارب مصفوفة الأغاروز ليسين ، ظهرت ذروة التدفق من حوالي 38 إلى 60 دقيقة.

في مرحلة الشطف المتدرج ، بلغ الشطف مع كلوريد الصوديوم 0.15 مولار ذروته من 80 إلى 86 دقيقة.